细胞房注意事项和管理

细胞房注意事项与管理

一、常规操作

1、穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套,可脱在门外的衣帽架上。

2、穿着专用拖鞋。先在入室间换下自己的鞋子,穿着绿色拖鞋进入缓冲间;再在缓冲间换红色拖鞋。尽量避免在缓冲间走动、停留。

３、细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。

4. 离开细胞房前,要保证不使用的仪器及时关闭并拔下插头(离心机、水浴锅、日光灯),超净台开启紫外灯照射2h后关闭。

二、值日生工作职责

1、每周值日生时间从周一开始,至周日结束。

2、值日周开始时需做的事情:配制消毒用的７5%的酒精,制作酒精棉球,给细胞房内添加足够的9５％工业乙醇供酒精灯使用。

＊ 75％的酒精可用750ｍl９5%的酒精加去离子水至950ｍl配制而成。

3、值日周内每天需做的事情:开大紫外灯消毒细胞房15-3０miｎ后才能投入一天的使用,晚上开启紫外灯灭菌,第二天及时关闭;检查灭菌物品的储备情况,以便及时补充;及时安排人员清洗回收培养器皿;检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况;至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋;检查培养箱内水量就是否足够。

4. 值日周结束前需完成的事情:星期五全方位打扫细胞房。包括拖地,擦桌子、柜子、清洁与整理抽屉,擦超净台、冰箱及桌上的仪器,给水浴锅加水或换水,洗细胞房专用的实验服与拖鞋,紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液就是否需要更换(一个月更换一次)！

5. 每２周清洁一次培养箱:先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内,对于比较敏感的细胞可以暂存于其她细胞房的培养箱;将培养箱内的不锈钢板取出,包括4块横板与左右2块立着的架子,用酒精棉球清洁钢板与培养箱内壁;打开培养箱清洁内壁时动作要迅速,避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入,缩短过滤器的寿命;用紫外灯照射培养箱内部15min,手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。

２０１4、6、９

１. 从培养箱取放物品前,用酒精清洁双手(或手套),尽量缩短开门时间与减少开门次数。

* 培养箱中的空气就是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱,容易造成污染。

2、培养瓶皿放入培养箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精挥发后再放入,以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。

3、 2-3人共用一层培养箱,按预定位置摆放培养器皿,方便查找,以免长时间敞开培养箱。普通培养中的细胞,若非实验需要,每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次,2人以上共用的细胞,可约好时间一起观察。

* 频繁将细胞拿出观察,容易给培养箱造成污染,同时也会影响细胞生长条件的恒定。

超净台操作规则

1、超净台使用前用紫外灯照射１5分钟灭菌,使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒,所有物品放入超净台前均应用酒精喷拭表面消毒。

2、点燃酒精灯前需检查瓶中酒精就是否足够,液面应占瓶高１/3-２/3。

* 消毒用75%的酒精,酒精灯用95%的酒精,向喷壶或灯内添加酒精时请留意。酒精与酒精棉球由值日生负责补给,发现细胞房内存放量不足时请及时通知值日生。

3、超净台中应摆放废液杯与废品杯各一只,用于实验时暂时存放废弃物,实验结束后废液杯内垃圾要随即清理带走,废液杯冲洗、于入室间晾干备用。

4、可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等,放入装有清水的塑料桶中浸泡,桶内需有足量的清水以没过浸泡物品。

* 可回收器皿初步涮洗后再放入清水内,保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满,避免营养物质在培养瓶或血清管中过多残留而滋生微生物。

回收器皿洗涤程序:洗洁精洗净,清水冲十次以上去除洗涤剂残留;烘干;泡酸缸48h,尽量沥干后取出,清水冲洗10次,纯水冲洗3次,超纯水３次;烘干/晾干;报纸/牛皮纸／锡箔纸包装,高压湿热灭菌12１℃,2０miｎ;放入细胞房备用。

1、显微镜使用前,用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。

2、离开细胞房时或较长时间不需使用时,及时关上电源,延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。

培养液、试剂等相关操作规则

1、从冰箱取放物品动作要迅速,关门时要检查门就是否关好。按类别存放试剂。

2、血清按一定量分装,分装好的血清长时间保存于-20℃,使用前取出需要的量4℃预解冻。按需解冻,避免反复冻融。

＊从－２0℃取用血清者需在表格上做好登记,方便在不够时及时领取,以免耽误实验进程。

3. 原则上解冻好的血清应全部配成含血清的培养基备用,若有剩余,则暂存于４℃并尽快使用。尽量不要使用她人开过的血清,以免交叉污染。