食品微生物检测实验室质量控制规范
食品微生物检测实验室质量控制规范
1 范围
本标准规定了食品微生物检测实验室的管理要求、技术要求、过程控制要求、结果的质量保证/操作的质量保证以及检测报告。
本标准适用于食品微生物检测实验室的质量控制，对食品微生物检测实验室进行认可的机构可参照执行本标准。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本准则的引用而成为本准则的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版不适用于本准则，然而，鼓励根据本准则达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本准则。
CNAL AC23-2003 idt ISO/IEC 15189:食品微生物检测实验室认可准则
GB 19489-2004 实验室生物安全通用要求
GB/T15481—2000/ISO/IEC17025:1999 检测和校准实验室能力的通用要求EA—04/10 Accreditation for microbiological laboratories
FAO Food and nutrition papers—1991 Manuals of food quality
control-12.Quality assurance in the food control microbiological laboratory
USDA FSIS Microbiological Laboratory Guideline chp36（3rd ,1998）
3 术语和定义
3.1 食品微生物检测实验室 food microbiological laboratory
以质量管理、卫生以及监控HACCP计划的有效性进行评价为目的，进行检测、鉴定或描述食品中致病微生物存在与否的实验室。实验室可以提供其检查范围内的咨询性和技术性服务，包括结果解释和为进一步适当检查提供建议以及相应的措施。
3.2 校准 calibration
在特定条件下，采取一系列步骤建立测量仪器、测量系统，标准物质或参考菌株
表现值与标准规定的对应数值之间的关系。
3.3 标准参考菌株 certified reference material
具有认证的标准物质，其中一个或更多特征值有一个被认证的程序，这个程序建立了准确表达物质特性的可追溯性，同时每个被鉴定值都有一个一定置信区间的不确定度。
3.4 测定限度 limit of determination
用于定量的微生物检测——在所用方法的试验条件下所测定的在一个限定变化范围内估算的微生物最低数量。
3.5 检测限度 limit of detection
用于定性的微生物检测——在数量上无法准确统计的可检测的最低微生物数量。
3.6 阴性偏差 negative deviation
在参考方法得出一个阳性结果时，而另一个方法却得出阴性结果。当真实结果被证明是阳性时，这种偏离便是一个假阴性。
3.7 阳性偏差 positive deviation
在参考方法得出一个阴性结果时，而另一个方法却得出阳性结果。当真实结果被证明是阴性时，这种偏差便是一个假阳性。
3.8 参考培养物 reference cultures
参考菌株、参考原株和工作菌株的统称。
3.9 参考菌株 reference strains
至少按其特征进行分类和描述，最好按来源进行描述定义到属或种水平的菌株。
3.10 参考方法 reference method
为了测定与预期在准确度和精确性上同量的一个或多个特征值的方法，即清晰确切的描述必要条件和程序的精确的调查方法。因此通常用于验证同一测定的其它方法的准确度，尤其是描述标准物质。一般是国内或国际标准。
3.11 参考原株 reference stocks
由实验室获得或由供应商提供的参考原株在实验室经过一代转接后的同种菌株。
3.12 相对真实度 relative trueness
使用被认可的参考方法得到的数据与用估计方法的结果的等同程度。
3.13 重复性 repeatability
在同一实验室内相同的测定条件下相同方法的连续测定结果的接近程度。
3.14 再现性 reproducibility
在不同实验室的变化的测定条件下进行的相同方法的测定结果的接近程度。3.15 敏感性 sensitivity
在假定检查中正确分配的阳性培养物或菌落总数的份数。
3.16 特异性specificity
在假定检查中正确分配的阴性培养或菌落总数的份数。
3.17 工作菌株working culture
由参考原株转接后获得的同种菌株。
3.18 测量准确度 accuracy of measurement
测量结果与被测量值之间的一致性程序。
3.19 检验examination
旨在确定某一属性的值或特性的一组操作。
注：在某些学科（如微生物学）中，一项检验是多个试验、观察或测量的总体活动。
3.20 实验室能力laboratory capability
进行相应检验所需的物质、环境和信息资源，以及人员、技术和专业知识。注：实验室能力的评审可包括先前参加的实验室间比对、外部质量评审计划或检验程序确认试验的结果，或全部上述内容的结果，以证实测量的不确定度、检出限量等。
3.21 实验室负责人laboratory director
有能力对实验室负责并经授权的一个或多个人。
注1：在本准则中所指的一个或多个人统称为实验室负责人。
注2：有关的资格和培训应遵循国家、地区和当地的规定。
3.22 实验室管理层 laboratory management
在实验室负责人领导下管理实验室活动的人员。
3.23 原始样品 primary sample
从一个系统中最初取出的一个或多个部分，准备送检或实验室收到并准备进行检验的样品。
3.24 委托实验室 referral laboratory
接受样品进行补充或确认检验程序和报告的外部实验室。
3.25 溯源性 traceability
通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。
4 管理要求
4.1 组织和管理
4.1.1食品微生物检测实验室或其组织的一部分 (以下简称实验室)应具有明确的法律地位。
4.1.2 实验室有责任使其检测活动既符合本标准的要求，又满足客户、官方管理机构或提供承认的组织的需要。
4.1.3 实验室的管理体系应覆盖实验室在其固定场所、远离固定场所的其它地点和有关的临时或可移动的场所进行的所有工作。
4.1.4 若实验室是不从事检测活动的组织的一部分，应明确实验室中参与或影响原始样品检验的人员的责任，不应因经济的或***的因素(例如诱惑)而影响检验。
4.1.5 实验室管理层负责质量管理体系的设计、实施、维持及改进，包括：
a) 有管理和技术人员，他们拥有所需的权力和资源，以便能够履行其职责，确定是否出现偏离质量体系或偏离检测工作程序的情况，并采取措施预防或尽可能减少这类偏离；
b) 有措施确保其管理部门和工作人员免受任何可能影响其工作质量的来自内部或外部的商业、财政和其它方面的不正当的压力及影响；
c) 有政策和程序确保客户的机密信息和所有权得到保护，包括电子储存和传输结果的保护程序(见附录D)；
d) 有政策和程序以避免涉及任何会降低其在能力、公正性、判断力或工作诚实性方面的可信度的活动；
e) 确定实验室的组织和管理结构、其在母体组织中的位置，以及质量管理、技
术工作和支持服务之间的关系；
f) 规定所有从事影响检测质量的管理、执行或验证工作的人员的责任、权力和相互关系；
g) 由熟悉方法、程序、检测目的、检测结果评价的人员对检测人员(包括被培训人员)实施充分的监督；
h) 有对技术工作和所需资源供应全面负责的技术管理者，以保证所要求的实验室工作质量；
i) 指定一名工作人员担任质量负责人(无论如何称谓)，无论有何其他职务和责任，均应有明确的责任和权力确保质量体系在任何时候均能得以贯彻和执行；质量负责人应与对实验室方针或资源做决策的最高管理层有直接联系；
j) 指定关键管理人员的代理人，但需认识到在一些小型实验室里可能会有某一个人同时承担多项职责的情况，对每一项职责指定一个代理人不太现实。
4.2 质量管理体系
4.2.1 实验室应建立、实施并保持与其工作范围相适应的质量体系，并将其政策、方针、过程、计划、程序和指导书等制定成文件，以确保检测质量。应把体系文件传达至所有相关人员，让他们理解并执行。
4.2.2 质量管理体系应包括（但不限于）内部质量控制，以及参加有组织的实验室间的比对活动，如外部质量评审计划。
4.2.3 质量管理体系的方针和目标，在质量手册中予以规定；总体目标应在质量方针声明中予以文件化，该方针应简洁易懂，并便于有关人员及时获得，至少包括以下内容：
a）实验室拟提供的服务范围；
b）实验室管理层对实验室服务标准的声明；
c）质量管理体系的目标；
d）要求所有与检验活动有关的人员熟悉相关的质量文件，并始终贯彻执行这些政策和程序。
e）实验室对良好职业行为、检验工作质量，以及遵守质量管理体系的承诺。f）实验室管理层对遵守本准则的承诺。
4.2.4 质量手册应对质量管理体系及其所用文件的架构进行描述。应该包括或指明含技术程序在内的支持性程序；应概述质量管理体系文件的架构。质量手册中还应规定技术管理层及质量主管的权力和职责，包括确保遵循本准则的责任。应指导所有人员使用和应用质量手册和所有参考文件，并实施这些要求。应由实验室管理层指定专门负责质量管理的人员，在权力和职责下保持质量手册的现行有效。
实验室质量手册的目录可包括以下内容：
a）引言；
b）实验室概述，其法律地位、资源以及主要职责；
c）质量方针和质量目标；
d）人员的教育与培训；
e）质量体系；
f）文件控制；
g）合同评审；
h）设施和环境条件；
i）仪器，试剂和/或相关消耗品的管理；
j）检验程序的验证；
k）安全规范（见GB19489-2004）；
l）环境方面（如运输，消耗品，废弃物，它们是h）和i）项的补充，但不尽相同）；
m）研究和开发（如适用）；
n）检验程序列表；
o）申请程序，原始样品，实验室样品的采集和处理；
p）内部审核；
q）质量控制（包括实验室间比对）；
r）实验室信息系统（见附录D）；
s）对投诉的补救措施和处理；
t）与委托实验室和供应商的交流及相关活动；
u）结果的质量保证；
v）结果的报告。
4.2.5 实验室管理层应建立并施行一个计划，用于定期监控和证实仪器、试剂及分析系统经过适当校准并处于正常功能状态；还应有一套记录在案的预防性维护及校准（见附录D）文件，其内容至少应遵循制造商的建议。
4.3 文件控制
4.3.1 实验室应建立并保持有关程序，对构成质量文件的所有文件和信息（包括政策声明、教科书、程序、说明、校准表及其来源、图表、海报、公告、备忘录、软件、图片、计划书和外源性文件如法规、标准或检验程序等）进行控制。
应遵循国家、地区和当地有关文件保留的规定，将每一份受控的文件制作一份以适当的纸张或非纸张媒介备份存档以备日后参考，并由实验室负责人规定其保存期限。
4.3.2 所有发给实验室人员的质量体系文件，在发布之前均需由授权人员审核并批准使用。需建立总目录或相应的文件控制程序，以标明现行修改状态和质量体系内的文件发布情况，并应随时可得，以避免使用失效和/或作废文件。
4.3.3 采用的程序须确保：
a）向实验室人员发布的作为质量管理体系组成部分的所有文件，在发布前得到授权人员的审核和批准；
b）维持一个对现行版本的有效性及其发布情况进行确认的清单，也称作文件控制记录；
c）在相应场所，只使用现行的、经过授权的文件版本；
d）必要时，定期对文件进行评审、修订、并经授权人员批准；
e）无效或已废止文件应及时从所有使用地点撤掉，或确保不被误用；
f）存留或归档的已废止文件，应进行适当标注，以防止误用；
g）如果实验室的文件控制制度允许在文件再版之前对文件进行手写修改，则应确定修改的程序和权限。修改之处应有清晰的标注、草签并注明日期。修订的文件应尽快正式重新发布；
h）应制定程序描述如何更改和控制保存在计算机系统中的文件。
4.3.4 所有与质量管理体系有关的文件均应能唯一识别，包括：
a）标题；
b）版本或当前版本的修订日期或修订号，或以上全部内容；
c）页码和总页面（如适用）；
d）发行机构；
e）来源的标识。
4.4 质量和技术记录
4.4.1 实验室应建立并实施一套对质量及技术记录进行识别、采集、索引、查取、存放、维护以及安全处理的程序。质量记录须包括内部审核和管理评审、纠正和预防措施记录。
4.4.2 所有记录均应清晰明确，便于检索。应符合国家、地区或当地法规的要求，提供一个适宜的环境，以适当的形式进行存放，保证安全和保密，避免损毁、破坏、丢失、被人盗用或未授权的接触，实验室应有程序保护和备份以电子形式储存的记录，以防止未经授权的侵入和修改(见附录D)。
4.4.3 实验室应制定相关的政策，明确规定与质量管理体系相关的各种记录及其保存期限，且应该保存检验结果。保存期限应根据检验的性质或每个记录的特殊情况而定。
这些记录包括，但不局限于：
a) 检验申请表；
b) 检验结果和报告；
c) 仪器打印出的结果；
d) 检验程序；
e) 实验室工作记录簿/记录单；
f) 查阅记录；
g) 校准函数和换算因子；
h) 质量控制记录；
i) 投诉及所采取的措施；
j) 内部及外部审核记录；
k) 外部质量评审记录/实验室间的比对；
l) 质量改进记录；
m) 仪器维护记录，包括内部及外部的校准记录；
n) 批次记录文档，供应品的证书，包装插页；
o) 差错/事故记录及应对措施；
p) 人员培训及能力记录；
q) 检测人员和审核人员的标示或签名。
4.5 客户服务
4.5.1 实验室应积极主动与客户或其代表协作和沟通，就选择何种检验及服务提供建议，包括检验重复的次数、所需的样品类型、检测手段、检测项目等;在确保其它客户机密的前提下，实验室允许客户到实验室观察与其工作有关的操作。
4.5.2实验室有义务完成职责范围内的食品微生物检测工作，将客户要求以外所检出的食源性致病微生物结果报告相关上级部门，必要时通知客户。
4.6 投诉处理
实验室应有相应的政策和程序，解决来自客户的投诉或其它反馈意见；记录并保存所有投诉、调查以及实验室采取的纠正措施。鼓励实验室从其服务对象那里获取正面和负面的反馈信息，推荐以系统化的方式（如，进行调查）进行。
4.7 不合格检测工作的控制
4.7.1 当发现检验过程的任何方面有不符合所制定的程序，或不符合质量管理体系的要求或不符合申请检验的客户的要求时，实验室管理层应有相应的政策和程序可以实施，以确保：
a) 指定专人负责解决问题；
b) 明确规定应采取的措施；
c) 如有必要可终止检验，停发报告；
d) 立即采取纠正措施；
e) 若已报出了不符合的检验结果，必要情况下应收回或予以适当标识；
f) 明确规定授权恢复检验操作者的责任；
g) 记录每一个不符合项并保存证明文件，实验室管理层应定期评审这些记录，
以发现趋势并采取预防措施。
注：不符合的检验或操作活动可以出现在不同的方面，同时有不同的识别方法，包括客户的投诉、质量控制提示、设备校准、消耗品检查、工作人员的意见、报告和证书的检查、实验室管理层的评审以及内部和外部审核等。
4.7.2 如果确定不符合的检验会再次出现，或对实验室自身制定的质量手册中的政策程序有疑问时，应立即采取相关程序来识别、记录和消除出现问题的根本原因。
4.7.3 实验室应制定并实施有关程序，规定存在不符合项时如何发出结果，包括对这些结果的审核。这些事件应予以记录。
4.8 纠正措施
4.8.1 纠正措施程序应包括一个抽查过程以确定问题产生的根本原因或潜在原因。某些情况下会发展为预防措施。纠正措施应与问题的严重性及其带来的风险的大小相适应。
4.8.2 调查问题后采取了相应纠正措施，如需对操作程序进行改动时，实验室管理层应将这些改动形成文件并执行。
4.8.3 实验室管理层应负责监控每一纠正措施所产生的结果，以确定这些措施是否有效地解决所识别出的问题。
4.8.4 如果识别出的不符合项或偏离对实验室与其本身的相关政策、程序或质量管理体系的符合性产生怀疑时，则实验室管理人员应保证依据内部审核的规定对相应方面的活动进行审核。纠正措施的结果应提交实验室管理评审。
4.8.5 实验室应对纠正措施进行监控，以确保所采取的纠正措施是有效的。
4.9 预防措施
4.9.1 应确定不符合项的潜在来源和所需的改进，无论是技术方面的还是相关的质量体系方面。如需采取预防措施，应制定、执行和监控这些措施计划，以减少类似不符合项发生的可能性并借机改进。
4.9.2 预防措施程序应包括启动措施和应用控制，以确保其有效性。除对操作程序进行评审之外，预防措施还可能涉及数据分析，包括趋势和风险分析以及外部质量保证。
注：预防措施是事先主动识别改进可能性的过程，而不是对已发现的问题或投诉的反应。
4.10 内部审核
4.10.1 应根据质量管理体系的规定对体系的所有管理及技术要素进行定期的内部审核，以证实体系运作持续符合质量管理体系的要求。内部审核应包含体系的所有要素，尤其是对食品微生物检测有重要影响的方面。
4.10.2 应由质量主管或所指定的有资格的人员负责对审核进行正式的策划、组织并实施。员工不得审核自身的工作。应明确内部审核的程序并形成文件，其中包括审核类型、频次、方法学以及所需相关文件。如果发现有不足或有待改进之处，实验室应采取适当的纠正或预防措施，并将这些措施形成文件，经讨论后在约定的时间内实施。
正常情况下，应每12个月对质量体系的主要要素进行一次内部审核。
4.10.3 内部审核的结果应提交实验室管理层进行评审。
4.11 管理评审
4.11.1 实验室管理层应对实验室质量管理体系及实验室全部的食品微生物检测活动进行评审，包括检测及咨询工作，以确保在食品微生物检测工作中保持稳定的服务质量，并及时进行必要的变动或改进。评审的结果应列入一个含有目标、目的和措施的计划中。管理评审的典型周期为每项12个月一次。
4.11.2 管理评审应考虑但不局限于以下几方面：
a) 上次管理评审的执行情况；
b) 所采取的纠正措施的状况和所需预防措施；
c) 管理或监督人员的报告；
d) 近期内部审核的结果；
e) 外部机构的评审；
f) 外部质量评估和其它形式的实验室间比对试验的结果；
g) 承担的工作量及类型的变化；
h) 反馈信息，包括来自客户的投诉和其它相关信息；
i) 用于监测实验室检测质量的指示系统；
j) 不符合项；
k) 周转时间监控；
l) 持续改进过程的结果；
m) 对供应商的评价。
在建立质量体系期间，建议评审间隔应尽量短些，以保证在发现该质量管理体系或其它活动有需要改进之处时，及早采取应对措施，至少每年进行一次内审。
4.11.3 应尽可能地监控并客观评价实验室在进行食品微生物检测工作时所提供的服务质量和适宜性。
4.11.4 管理评审结果以及应采取的措施均应记录归档，同时应将评审结果及评审决定向实验室人员通报。实验室管理层应确保将这些措施在适当的约定时间内公布。
5、技术要求
5.1 试剂和培养基（等同 EA-04/10 7）
5.1.1 试剂（等同 EA-04/10 7.1）
5.1.1.1 实验室有对试剂进行检查、接受/拒收和贮存的程序和标准，保证涉及到的试剂质量适用于检验。实验室人员应该在起初和保存期限内，使用可以溯源至认可的国家或国际的阴性和阳性标准菌株，检查对食品微生物检验起决定性作用的每一批试剂的适用性，在确定这些物品达到标准规格，或已达到相应的规程中所规定的标准之前，不得使用，并记录归档。
5.1.1.2应建立一套供货清单控制系统，该系统中应该包括全部相关试剂、质控材料以及校准品的批号、实验室接收日期以及这些材料投入使用的日期。所有这些质量记录应在实验室管理评审中提供。
5.1.1.3实验室应对影响检验质量的重要试剂供应方、供应品以及服务情况进行评价，并且保存这些评价记录和经核准的清单。
5.1.2 培养基（等同 EA-04/10 7.2）
5.1.2.1检查实验室内制备的培养基、稀释剂和其它悬浮液的性质是否合适，可参照以下几项进行：
a) 目标微生物的恢复或生活力的维持；
b) 非目标微生物的抑制；
c) 生化（区别的和诊断的）性质；
d) 理化性质（例如pH，体积）。
5.1.2.2原料（包括商业脱水配料和单独配料）要储存在合适的条件下，例如低温、干燥和避光。所有的容器，尤其是那些用于培养基脱水的容器，需高度密封。结块或颜色发生改变的脱水培养基不能使用。除非实验方法有特殊要求，试验用水需经蒸馏、去离子的或反转渗透处理。
5.1.2.3 要确定和验证合适的储存条件下预制培养基的保存时间。
5.1.3 即用型培养基（等同 EA-04/10 7.3）
5.1.3.1 在使用前需验证所有准备使用的或部分完成的培养基（包括稀释剂和其它悬浮液）的有效性，应估算目标微生物的复苏或存活能力，或全面定量评估对非目标微生物的抑制程度；使用客观的标准对其品质（例如物理和生化性质）进行评审。
5.1.3.2 作为培养基确认的一部分，要求实验室使用人员充分了解制造商所提供的产品质量说明书，其中至少应包括以下几方面：
a) 培养基的名称和组成成份，包括一些添加剂；
b) 保存期限和可接受的使用标准；
c) 储存条件；
d) 样品等级/层次；
e) 无菌检查；
f) 检查正在使用的目标和非目标控制微生物的生长状态（应用它们的培养收藏标准）以及可接受的标准；
g) 物理检查和可接受的实用标准；
h) 说明书的出版日期。
5.1.3.3应鉴定每一批培养基，需证明所接收的每批培养基满足质量要求，制造商应确保实验室人员能及时接到其关于质量规格的任何改变的通知。
5.1.3.4 如果培养基制造商被权威质量系统认可，则实验室应根据详细说明书对其产品有效性的符合度进行检查。在其他情况下，必须对接收的培养基进行足够
的检查。
5.1.4 贴标签（等同 EA-04/10 7.4）
实验室要确保所有的试剂（包括储存溶液）、培养基、稀释剂和其它的悬浮液都贴上标签，标明其适用性、特性、浓度、储存条件、准备日期、有效期和（或）推荐的储存时期。负责微生物检验准备的试验人员可以从记录中确认。
5.2 人员（等同 EA-04/10 2）
5.2.1 必须由具有微生物专业或相近专业学历的且丰富经验的人员来操作或指导微生物检验。实验员应具有实验室认可的相关工作经历，这样才能在无人指导或被确认在有工作经验人员的指导下履行食源微生物检验工作。某些国家规定也许忽视本文所提到的要求。
5.2.2 如果实验室检验结果报告中包含评价和说明，那么报告签发人必须具有相当的工作经验和专业知识，如法规的和技术的要求以及其他可接受标准。
5.2.3 实验室的管理程序应保证所有人员接受适当的操作设备和检验技术方面的培训，其中包括符合微生物检验标准要求的基本技能培训，如倒平板，菌落计数，无菌操作等。只有具备独立完成的能力或在适当的指导下，才允许实验室人员对样品进行检验。应随时评估实验人员在检验中所表现的能力，必要时对其进行再培训。当一种方法并不属于常规方法时，在检验开始前确认微生物检验人员的技能是十分必要的。应建立标准的检验能力评估时间间隔，并形成文件。检验结果中对鉴定和确认微生物的解释，应与检验人员的检验分析过程相关联。
5.2.4 在某些情况下，能力的确认应与一种特定技术和设备相关而不是方法。5.3设施和环境条件（等同 EA-04/10 3）
5.3.1 设施（等同 EA-04/10 3.1）
5.3.1.1 典型的实验室应有检验设施（专用于微生物检验和相关活动）及辅助设施（大门、走廊、管理区、样品室、洗手间、储存室、文档室等）。检验设备需要特殊的环境条件。
依据所开展检验的不同微生物等级，实验室应对授权进入的人员采取严格限制措施。在措施得到有效执行的地方，工作人员应被告知以下内容：
a) 特定区域的特定用途；
b) 特定工作区域的限制措施；
c) 采取这些限制措施的原因；
d) 合理的控制水平。
5.3.1.2 根据检验的类型，实验室的规划布局应将交叉污染的风险降低到最小。为达到这一目标可采取一定的措施，如：
a) 实验室的建设应以“无回路”为宗旨（GB/T19489-2004）；
b) 操作时应按照固有的程序并采取预处理措施以保证检验样品的完整性（比如使用密封容器）；
c) 在时间和空间上有效隔离各种检验活动。
5.3.1.3 应规划设置以下操作的隔离区或指定区：
a) 样品接收和储存区；
b) 样品前处理（如应在被隔离的区域处理极易被污染的粉状产品）区；
c) 样品的微生物检验区（包含无菌室和培养区）；
d) 参考菌株的保藏区；
e) 培养基和器材准备区，包括灭菌；
f) 无菌条件评估区；
g) 净化区。
洗涤（净化后）区可以与经过预处理可防止气溶胶转移而影响微生物生长的其他实验室区域共用。分隔实验室的要求应建立在具体检验活动（如检验种类和数目等）的基础上。
为避免偶然发生的交叉污染，实验室的仪器不应频繁移动。在分子生物学实验室，专用吸管、吸管头、离心管、试管等应限定在某个工作区域（低度—中度—高度DNA工作环境）。
5.3.1.5 应保证工作区的洁净和整齐。所需空间应与分析处理所需空间及实验室内部整体布局相称。实验室空间应符合GB 19489-2004的规定。
5.3.1.6 通过自然条件或换气装置或使用空调，使工作室保持良好的通风和适当的温度。使用空调时，应根据不同的工作种类检查、维修和更换合适的过滤设备。
5.3.1.7 减少污染可通过但不仅限于以下途径：
a) 表面光滑的墙、天花板、地面和桌椅（光滑程度应取决于对其清洁的难易程度）。不推荐使用瓷砖覆盖座椅表面；
b) 地面、墙壁、天花板连接处应有弧度；
c) 当进行检验时，窗和门的张开程度应降低到最小；
d) 遮阳板应安装到室外，如果无法在室外安装，应保证能够方便地清洗遮阳板；
e) 除非密闭包装，液体运输管不应在工作区上方穿过;
f) 换气系统中应有空气过滤装置；
g) 独立的洗手池，机械化控制效果更好；
h) 器具橱吊与天花板检无缝隙；
i) 无粗糙而裸露的木块；
j) 固定设备和室内装置的木质表面应密闭包裹；
k) 储存设施和设备的安放应易于清洗；
l) 除非检验需要，严禁将家具、文件及其他物品放在实验室中。
理想的天花板应具有光滑的表面并附带充足的照明。如果无法实现（悬垂的天花板和吊灯），实验室应有书面材料证明已控制了任何导致卫生的风险，同时具备有效的防治污染的措施，如清洗表面和检查程序。
5.3.1.8 实验员应该清楚潜在的发生污染的检测区域，并证明他们已经采取措施预防污染的发生。
5.3.2 环境监测（等同 EA-04/10 3.2）
5.3.2.1 实验室环境监测系统的设计应科学合理，比如，空气沉降板的使用和表面擦洗。设计可接受的背景菌落计数，并且有文件化的程序来处理背景菌落总数超标情况。分析数据以控制污染发生在一定水平内。
5.3.3 卫生（等同 EA-04/10 3.3）
5.3.3.1 制定文件化的清洗实验室固定设备、装置及表面等的程序（或作业指导书），所制定的程序应考虑到环境监测的影响和污染发生的几率。应有发生泄漏时的处理方案。
5.3.3.2 采取以下措施，防止灰尘的累积
a) 提供足够的储存空间；
b）尽量避免在实验室进行文件处理；
c）禁止把植物和个人物品带入实验室工作区域。
5.3.3.3 根据所检验的微生物危害等级的不同，在实验室内应穿着配套的隔离服（如果需要，应保护头发、胡须、手和鞋等），离开工作区域时脱下防护服。这在分子生物学实验室和危害等级II级以上实验室显得尤其重要，比如从高浓度DNA工作区转移到低浓度DNA工作区时，也许会造成交叉污染。在多数实验室一件实验服足够使用。
5.3.3.4 应准备足够数量的洗手设施。
5.4 设备（等同 EA-04/10 6）
作为质量体系的一部分，实验室应依据相应的程序文件对实验室仪器设备进行维护、校准、性能测试（见附录B）。
5.4.1 维护（等同 EA-04/10
6.1）
5.4.1.1 实验室基本设备的维护应根据使用频率定期进行。保存具体记录。设备维护及间隔时间在附录B给出。
5.4.1.2 避免起因于仪器的交叉污染，注意事项如下：
a) 适当的时候对所使用的仪器设备进行清洗和灭菌；
b) 适当的时候对重复使用的玻璃器具进行清洁和灭菌；
c) 理想的情况是，实验室应有处理污染物的专用高压灭菌锅。然而，使用灭菌锅的前提是分别对消毒物品和灭菌物品等进行预处理，同时按文件化的方案记录高压灭菌锅的性能状况。
5.4.1.3 以下仪器设备需要清洁、维修、损坏检查、常规检查甚至灭菌加以维护：
a) 常规保养的设备:滤器、玻璃和塑料容器（瓶子、试管）、玻璃或塑料制成的带盖培养皿、采样工具、镍/铬/铂及可处理塑料制成的接种针或接种环；
b) 水浴锅、培养箱、生物安全柜、高压灭菌锅、均质器、电冰箱等；
c) 测定体积的设备：吸液管、自动分液器、微量移液器；
d) 测量设备:温度计、计时器、天平、酸度计、菌落计数器。
5.4.2 校准和性能确认（等同 EA-04/10
6.2）
5.4.2.1 实验室必须制订直接影响检验结果的仪器设备的校准和性能测试方案。
根据经验和实际需要，确定仪器校准和性能测试的频率，其间隔时间应比设备规定的最短检查时间要短。需要强制性定期检定的仪器和设备，经符合资质的计量部门校准后方可使用。对于常用的贵重仪器和设备，在使用前应加以检查，使用后要记录，应定期维护以保证保证以器和设备处于良好的工作状态。附录B列出了不同仪器和设备所需校准时间间隔和典型性能检查的范例。
5.4.2.2 温度测量设备
a) 温度直接影响分析结果或对设备的正确性能来说是至关重要的，如安装在培养箱和高压灭菌锅上的液体玻璃温度计、热电偶适应器和铂电阻温度计；
b) 如需校准设备，则应遵循国家或国际有关的温度标准，精确度在允许范围内，被证明符合国家或国际生产规定者才可以工作，例如储藏用电冰箱、制冰机、培养箱及水浴锅这类精确性可以在允许的温度范围内变动的设备。必须对此类设备进行性能测试。
5.4.2.3 培养箱、水浴锅和干燥箱
应确定并记录培养箱、水浴锅、干热灭菌箱及保温室的温度的稳定性、温度分布的均匀性和达到平衡状态时所需时间，尤其要注意其是否在正常使用（如多个带盖培养皿之间的位置、空间、高度）。每次经过修理和校正后，都应检查和记录最初验证设备时所记录的各参数的稳定性。实验室应监控这类设备的运行温度，并保存记录。
5.4.2.4 高压灭菌锅，包括培养基制备仪
下面大致列出了有关校准、确定和监控运行的一般性方法。然而，高压灭菌锅所进行的数量检验及相应项目，如能适应高压灭菌锅的内外变化，这也就提供了同等的质量保证。
a) 高压灭菌锅必须具备指定的时间和温度允许范围。压力仪不能只适于一个压力量程。用来控制和监督工作循环的感应器需要进行校准并对其计时器进行性能测试；
b) 最初的测定包括实际应用中每个工作循环和每一种装载状态时的性能研究（空间热分布测试）。在经过大型维修或校正（如更换温度调节的探测仪或程序器，调整安装位置及工作循环）后，或对培养基的质量控制检验结果表明需要时，
应当重复前述性能测试过程。必须安装足够的温度感应器（如在充满水或培养基的容器中）以指示不同位置的不同温度。至于培养基制备仪，一般认为安装使用两个感应器（一个靠近控制探测仪，另一个位于远离控制探测仪处）是适当的，除此之外，没有更加合适的方法。应确认和考虑温度上升和下降的适宜性及灭菌时间；
c) 在确认和重新确认的过程中，应提供基于加热分布图的清晰明了的操作说明。制定接受/拒绝的标准和高压灭菌锅的使用记录，包括每个循环的温度和时间；
d) 通过下列措施之一进行监控：应用热电偶和记录仪打印输出图表；直接观察最高的温度值和当时的时间。
除直接监控高压灭菌锅的温度外，还应使用化学或生物指示剂检查每个灭菌和消毒循环的效力。高压灭菌锅的记录带和指示条带只能说明一项工作已经进行，而不能证明完成了一个可以接受的循环。
5.4.2.5 测重仪和天平
测重仪和天平应按国家规定及其使用目的在一定时间内进行校准。
5.4.2.6 测定体积的设备
a）在微生物实验室中经常会用到测定体积的设备，如自动分液器，分液器/稀释器，机械性的手动移液管和多功能移液管等。实验室应该对测定体积的设备进行最初的确证，之后定期检查以保证仪器按要求正常使用。对于具有一定性能范围的玻璃器皿，确证工作就不是必须的。应检查仪器设备的指定体积的准确度而不是固定体积（如在体积可变设备的不同设置），也应测定重复使用的精确度。b）对于单独使用的多功能体积测定仪器，实验室应要求供应商提供一份相应的质量认可系统。经过初步的实用性确认后，建议随时对其进行准确度检查。如果公司无法提供质量认可系统，实验室应对设备的适用性进行检验。
5.4.2.7 其它设备
定期检验传导计、氧气表、pH计和其它类似仪器的性能，或在使用前对其进行性能检验。在合适的条件下储存检验用缓冲液，并且标记有效期。
如果湿度对于检验结果很重要，则要根据国内或国际标准对湿度计进行校准。定时器，包括高压消毒锅的定时器，须使用一个已经过校准的定时器或国内时间
信号来进行确证。
若检验步骤中使用离心机，应该评估离心力是否对检验有决定性作用，如果答案是肯定的，则需要校准离心机。
5.5 参考菌株和参考培养物（等同 EA-04/10 8）
5.5.1 参考菌株（等同 EA-04/10 8.1）
参考菌株和认可的参考菌株提供了基本的微生物检验溯源，例如：
a) 证明结果的准确性；
b) 校准仪器设备；
c) 监测实验室运转；
d) 证实方法的有效性；
e) 能够对方法进行比较。
如果可能，在合适的培养基中应使用标准物质。
5.5.2 参考培养物（等同 EA-04/10 8.2）
5.5.2.1 需要通过参考培养物来确定培养基（包括检验试剂盒）的可接收的性能、验证检验方法和评估实验操作过程，例如，确认检验试剂盒性能和方法有效性时，可溯源性是必要的。为了证明可追溯性，实验室必须使用直接从那些现存的被认可的国内或国外保存机构那里获得的参考菌株。
5.5.2.2 将参考菌株传代培养，以提供参考原株，纯度和生化检查应同时进行。建议使用深度冰冻或冻干法储存分装的参考原株。参考原株继代培养便是日常微生物检验所需工作菌株（见附录A）。一旦参考原株被解冻，不可重新冷冻和再次使用。
5.5.2.3 工作菌株不应传代，否则需要有一个标准方法或实验室提供档案证明其在任何相关性质上没有改变。工作菌株不能继代培养以代替参考菌株。参考菌株的商业衍生物仅可以用作工作菌株。
6、过程控制要求
6.1 合同评审
6.1.1 如果实验室签订了提供实验室服务的合同，应建立和维持合同评审程序。如果这些评审的政策和程序导致检验或合同的安排发生了改变，则应确保：
微生物学期末考试复习资料
一、名词解释 1细菌乙醇发酵与酵母菌乙醇发酵 酵母菌乙醇发酵，在厌氧和偏酸（pH3.5-4.5）的条件下，通过糖酵解（EMP）途径将葡萄糖降解为2分子丙酮酸，丙酮酸再在丙酮酸脱羧酶作用下生成乙醛，乙醛在乙醇脱氢酶的作用下还原成乙醇，1分子葡萄糖产生2分子乙醇、2分子二氧化碳和净产生2分子ATP。 细菌乙醇发酵，细菌即可利用EMP途径也可利用ED途径进行乙醇发酵，经ED途径发酵产生乙醇的过程与酵母菌通过EMP途径生产乙醇不同，故称细菌乙醇发酵。1分子葡萄糖经ED途径进行乙醇发酵，生成2分子乙醇和2分子二氧化碳，净产生1分子ATP。 2菌落与菌苔 菌落，生长在固体培养基上，通常来源于一个细胞、肉眼可见的微生物细胞群体叫做菌落。菌苔，当菌体培养基表面密集生长时，多个菌落相互连接成一片，称菌苔。 3原生质体与原生质球 原生质体指人工条件下用溶菌酶除尽原有的细胞壁，或用青霉素抑制细胞壁的合成后，所剩下的仅由细胞膜包裹着的细胞，一般由革兰氏阳性细菌形成。 原生质球指用同样的方法处理，仍有部分细胞壁物质未除去所剩下的部分，一般由革兰氏阴性细菌所形成。 4温和噬菌体与烈性噬菌体 温和噬菌体，有些噬菌体感染细菌后并不增殖，也不裂解细菌，这种噬菌体称为温和噬菌体烈性噬菌体，能在寄主细菌细胞内增殖，产生大量噬菌体并引起细菌裂解的噬菌体称为烈性噬菌体。 5选择性培养基与鉴别培养基 选择性培养基，是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对某种化合物的敏感性不同而设计的一类培养基。利用这种培养基可以将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。 鉴别培养基，是根据微生物的代谢特点在普通培养基中加入某种试剂或化学药品，通过培养后的显色反应区别不同微生物的培养基。 6连续培养与分批培养 连续培养，在培养容器中不断补充新鲜营养物质，并不断地以同样速度排除培养物，使培养系统中细菌数量和营养状态保持恒定，这就是连续培养法 分批培养，将少量单细胞纯培养物接种到恒定容器新鲜培养基中，在适宜条件下培养，定时取样测定细菌数量。培养基一次加入，不补充，不更换。 7恒化培养法与恒浊培养法 恒化培养法，通过控制某种限制性营养物质的浓度调节微生物的生长速度及其细胞密度，使装置内营养物质浓度恒定的培养方法 恒浊培养法，根据培养液细胞密度调节培养液流入的速度，使装置内细胞密度保持恒定的培养方法 8随机培养法与同步培养法 同步培养法，使被研究的微生物群体处于相同生长阶段的培养方法 随机培养法，在一般培养中，微生物各个体细胞处于不同的生长阶段的培养方法 9碱基转换与颠换 碱基转换，DNA链中嘌呤被另外一个嘌呤，或嘧啶被另一个嘧啶所置换，叫做转换 颠换，DNA链中嘌呤被另外一个嘧啶，或者嘧啶被另外一个嘌呤所置换，叫做颠换。 10 转化与转导 转化，是受体菌直接吸收来自供体菌的DNA片段，通过交换将其整合到自己的基因组中，
临床微生物SOP-室内质量控制管理程序1教学教材
临床微生物SOP-室内质量控制管理程序 1.目的： 规范微生物实验室管理程序，确保临床报告的质量。 2.适用范围： 微生物实验室的所有检验项目。 3.职责： 实验室检验人员均必须熟知并遵守本程序。 4.程序： 4.1 分析前质量管理 4.1.1 检验申请单临床医生应按照《微生物检测项目申请程序》申请临床微生物检测。口头申请追加样本检验项目，必须在样本有效期内申请，并补正式的检验申请单。 4.1.2 生成微生物检验标本标签护士应在核对医嘱、病人信息和检验申请信息后，按照《微生物标本检验标签程序》生成申请单和微生物检验项目标签，并将微生物检验项目标签正确贴于容器上。 4.1.3 标本的采集手册实验室应制定样本采集手册，指导正确采集和处理样本。 4.1.4 样本采集和运输样本采集人员应按照《采样前病人识别程序》确认病人，按照《标本采集、运输程序》采集样本，并在规定的时间和温度范围内，使用指定的运输培养基，安全运送到微生物室。 4.1.5 样本的接收样本接收人员应严格按照《标本接收、识别程序》《标本拒收程序》对标本接收或拒收，并记录。 4.1.6 微生物检验标本信息输入微生物实验室接种实验室岗位检验人员严格按照《微生物标本信息输入程序》录入、核对病人信息和标本信息等质料。 4.1.7 样本储存微生物实验室接种岗位检验人员按照《微生物标本检验前储存程序》正确储存未能及时处理的标本。已经检验的样本应在保证性质稳定的条件下，将样本以适当的方式保留到规定时间内，以便能在出具结果报告后可以复查，
或做补充检验。 4.2 分析中质量管理 4.2.1 试剂的质量控制 4.2.1.1 所有试剂用于检测标本前，必须做质控以评估质量并记录质控结果，只 有质控合格才可以使用。下列试剂每进一批新批号或货号要求用阴、阳性标准菌 株或质控菌株评估其质量（表2-1）。 触酶、氧化酶、凝固酶、β-内酰胺酶、Optochin、X、V 和XV 纸片； 细菌鉴定系统使用的每一种鉴定卡及相关试剂； 表2-1 常用实验试剂质量控制 试剂阳性对照阴性对照监测频率 氧化酶铜绿假单胞菌A TCC27853 大肠埃希菌A TCC25922 每次新配制时及使用中每个工作日 触酶金黄色葡萄球菌A TCC25923 A群链球菌A TCC19615 每次新配制时及使用中每个工作日 靛基质大肠埃希菌A TCC25922 肺炎克雷伯菌A TCC13883 1%蛋白胨水及靛基质试剂:每次新配制 时及使用中每个月1次直接用于检测病人标本有内标准的抗原试验如：金黄色葡萄球菌乳胶凝集试 剂（每天或每次做质控）； 抗血清（至少每半年用阴、阳性质控菌株做质控）； 革兰染液（每周一次用阴、阳性质控片做质控）； 抗酸染液（每次使用要求用阴、阳性质控片做质控）； 自制试剂（每配制一批新试剂做质控）。 4.2.1.2 平行试验新批号试剂使用前必须用老试剂或参考材料平行试验。 4.2.1.3 无厂家商特别说明时，不同批号的试剂不可混用。 4.2.1.4 缺陷或失控试剂只能用于培训员工业务能力，否则报废处理。培训试剂 应明显标记“仅培训使用”，并与检验试剂分开放置。 4.2.2 培养基的质量控制 4.2.2.1 购买的有质量保证标准的培养基实验室应保存制造商所遵循的质量保 证标准，以及每批号产品完成无菌试验、生长试验、生化试验及质量控制性能的 合格证明等文件；无质量保证标准的培养基，每批号和（或）每次购买的产品应 检测相应的性能，包括生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验（适用时）、 生化反应（适用时）等。
微生物实验室现场检查
微生物实验室要求 微生物检验实验室操作技术要求 第一节实验室管理制度 一、实验室管理制度 1 ．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2 ．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验 室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3 ．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、 检修 , 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4 ．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告； 药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5 ．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开 实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6 ．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告， 造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。 二、仪器配备、管理使用制度 1 ．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位 pH 计、高速离心机。 2 ．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经 计量部门检定合格方能使用。 3 ．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。
最新医学微生物期末考试
登陆QQ邮箱，对比重点是否有出路 1、败血症：病原菌侵入血流，并在其中生长繁殖，同时，产生毒素，引起严重中毒症状。 2、病原微生物：对人类和动物、植物具有致病性的微生物称病原微生物。 3、潜伏感染：宿主与致病菌在相互作用过程中暂时处于平衡状态，病菌潜伏在病灶内或某些特殊组织中，一般不出现在血液、分泌物或排泄物中，一旦机体抵抗力下降，潜伏致病菌大量繁殖，即可使疾病复发。 4、菌群失调：是指在原微生境或其他有菌微生境内正常微生物群发生的定量和定性的异常变化。这种变化主要是量的变化，故也称比例失调。 5、消毒：杀灭物体上的病原微生物，但不一定能杀死芽胞的方法 6、无菌操作：防止微生物进入人体或其他物体的操作方法。 7、条件致病微生物：某些微生物在正常情况下不致病，但在正常菌群当其菌群失调、定位转移、宿主转换或宿主抵抗力的严重降低时，可引起疾病，称条件致病菌。 8、显性感染：当机体抗感染的免疫力较弱，或侵入的致病菌数 量较多、毒力较强，以致机体的组织细胞受到不同程度的损害，生理功能也发生改变，并出现一系列的临床症状和体症。 9、菌落：单个细菌经培养后分裂繁殖成的一堆肉眼可见的细菌集团 10、毒血症：致病菌侵入宿主体内后，只在机体局部生长繁殖，病菌不进入 血循环，但其产生的外毒素入血。外毒素经血到达易感的组织和细胞，引起特殊的毒性症状。 11、半数感染量：表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。 12、灭菌：杀灭物体上所有微生物，包括病原微生物、非病原微生物和芽胞的方法。 13、微生物：自然界中一些个体微小、结构简单、肉眼直接看不到 的微小生物。 14、CPE：即致细胞病变效应，是指病毒感染引起的、光学显微镜下可见的受感染组织细胞的形态学改变。 15、侵袭力：是指致病菌突破机体的防御功能，在体内定居、繁殖和扩散的能力。 与细菌的表面结构和产生的胞外酶有关 16、肥达试验：系用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌的H抗原，与不同稀释度的待检血清作定量凝集试验，根据抗体的含量和动态变化以辅助临床诊断伤寒、副伤寒的一种血清学试验。 17、菌群失调症：是指在原微生境或其他有菌微生境内正常微生物群发生的定量和定性的异常变化。这种变化主要是量的变化，故也称比例失调。 18、结核菌素试验：属于迟发型超敏反应，用结核菌素试剂做皮肤试验，感染过结核分枝杆菌或接种过卡介苗者一般都出现阳性反应 19、慢发病毒感染：病毒或致病因子感染后，经过很长的潜伏期，有的可达数年或数十年之久，以后出现慢性进行性疾病，直至死亡。如HIV的艾滋病和麻疹病毒的亚急性脑。。 20、溶原性转换：是指当噬菌体感染细菌时，宿主菌染色体中获得了噬菌体的DNA片段，使其成为溶原状态时而使细菌获得新的性状。 1、简述破伤风梭菌的致病机制及防治原则。 感染条件：伤口需形成厌氧微环境，伤口窄而深（如刺伤），伴有泥土或异物感染;大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺血；同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染。
食品微生物检测实验室要求
自来水水池至少有两个，工作台，药品试剂柜，超净工作台（无菌室），灭菌锅，培养箱，冰箱，干燥箱，电子天平，显微镜，平皿，试管，三角瓶等玻璃器皿。这些都是必备基本设备，只要能摆放的下就可以。 一、微生物实验室设计 微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。 二、微生物实验室基本要求（一）准备室 准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。（二）洗涤室 洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。 （三）灭菌室 灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。（四）无菌室 无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。在一般环境的空气中，
由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。1. 无菌室的设置 无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点： （1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。 （2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都挂对拉的窗扇。（4）无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上（即离工作台最远的位置），最好为双层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启，以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。 2. 无菌室内设备和用具 （1）无菌室内的工作台，不论是什么材质、用途的，都要求表面光滑和台面水平。 （2）在内室和外室各安装一个紫外灯（多为30W）。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方，离地面2m，外室的紫外线灯可
微生物学教程-周德庆第三版-期末复习资料
微生物学教程-周德庆第三版-期末复习资料
1.曲颈瓶实验巴斯德否认了自然发生学说 2.微生物发展的五个时期：史前期（朦胧阶段）；初创期（形态描述阶段），列文虎克---微生物的先驱者；奠基期（生理水平研究阶段），巴斯德---微生物学奠基人（显微镜的发现），科赫--细菌学奠基人；发展期（生化水平研究阶段）布赫纳---生物化学奠基人；成熟期(分子生物学水平研究阶段) 3.巴斯德的成果：①彻底否定了自然发生说②证实发酵由微生物引起③发明了狂犬病毒减毒疫④苗制备方法⑤发明巴氏消毒法 4.微生物有哪五大共性？其中最基本的是哪一个？为什么？①.体积小，面积大；②.吸收多，转化快；③.生长旺，繁殖快；④.适应强，易变异；⑤.分布广，种类多。其中，体积小面积大最基本，因为一个小体积大面积系统，必然有一个巨大的营养物质吸收面、代谢废物的排泄面和环境信息的交换面，并由此而产生其余 4 个共性 5.细菌的三个形态杆菌，球菌，螺旋菌 6.细菌的一般构造：细胞壁，细胞膜，细胞质，核区。特殊构造：鞭毛，菌毛，性菌毛，糖被（微荚膜，荚膜），芽孢 7.细菌的细胞壁的功能：①固定细胞外形和提高机械强度，保护细胞免受外力的损伤；②为细胞生长、分裂和鞭毛运动所必需；③阻拦酶蛋白或抗生素等有害物质进入细胞；④赋予细菌特有的抗原性和致病性(如内毒素)，并与细菌对抗生素和噬菌体的敏感性密切相关。 8.肽聚糖由肽和聚糖，肽聚糖单体构成，①、四肽尾，由四个氨基酸分子按L 型与D型交替方式连接而成，接在N-乙酰胞壁酸上。②、双糖单位：N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸通过β-1,4糖苷键连接，溶菌酶水解此键。③、肽桥：甘氨酸五肽，肽桥变化甚多，由此形成了“肽聚糖的多样性”） 9.磷壁酸是革兰氏阳性菌的特有成分，（主要成分是甘油磷酸或核糖醇磷酸），是噬菌体的特异性吸附受体； 10.外膜是革兰氏阴性菌的特有结构（位于壁的最外层，成分：脂多糖LPS（类脂A：是革兰氏阴性菌致病物质内毒素的物质基础，是许多噬菌体在细胞表面的吸附受体；核心多糖；O-特异侧链）；磷脂和若干外膜蛋 11.假肽聚糖的β-1,3-糖苷键被水解。 12.缺壁细胞：实验室中形成：自发缺壁突变：L型细菌 人工方法去壁：彻底除尽（原生质体） 部分去除（球状体） 自然界长期进化中形成：支原体 13.试述革兰氏染色的机制 程序染液 G+ G- 初染结晶紫紫色紫色 媒染碘液蓝紫色蓝紫色 脱色乙醇95% 蓝紫色无色 水洗 H2O 蓝紫色无色 复染番红蓝紫色红色 14.PHB：聚羟基丁酸酯，细胞内含物之一，具有贮藏能量，碳源及降低细胞内渗透压作用。 15.鞭毛分为L环，P环，S-M环，C环。 16.何谓“拴菌”试验？他的创新思维在何处？
药品微生物实验室质量管理指导原则
9203药品微生物实验室质量管理指导原则药品微生物实验室质量管理指导原则用于指导药品微生物检验实验室的质量控制。涉及生物安全的操作，应符合相应国家、行业、地方的标准和规定等。 药品微生物的检验结果受很多因素的影响，如样品中微生物可能分布不均匀、微生物检验方法的误差较大等。因此，在药品微生物检验中，为保证检验结果的可靠性，必须使用经验证的检测方法并严格按照药品微生物实验室质量管理指导原则要求进行检验。 药品微生物实验室质量管理指导原则包括以下几个方面：人员、培养基、试剂、菌种、设施和环境条件、设备、样品、检验方法、污染废弃物处理、检测结果质量保证和检测过程质量控制结果有效性的保证、实验记录、结果的判断和检测报告、文件等。 人员 微生物实验室应设置质量负责人、技术管理者、检验人员、生物安全责任人、生物安全监督员、菌种管理员及相关设备和材料管理员等岗位，可通过一人多岗设置。 从事药品微生物试验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的教育背景。 检验人员必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的和结果评价。微生物实验室的管理者其专业技能和经验水平应与他们的职责范围相符，如：管理技能、实验室安全、试验安排、预算、实验研究、实验结果的评估和数据偏差的调查、技术报告书写等。 实验人员上岗前应依据所在岗位和职责接受相应的培训，在确认他们可以承担某一试验前，他们不能独立从事该项微生物试验。应保证所有人员在上岗前接受培训内容包括胜任工作所必需的设备操作、微生物检验技术等方面的培训，如无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、菌种的转种、传代和保藏、洁净区域的微生物监测、微生物检查方法和鉴定基本技术等，经考核合格后方可上岗。 实验人员应经过实验室生物安全方面的培训，熟悉生物安全操作知识和消毒
食品卫生微生物检验实验室操作技术(doc 10)
食品卫生微生物检验实验室操作技术(doc 10)
3．严禁用口直接吸取药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液，病原体溅出容器外时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方有离开现场。 4．工作完毕，两手用清水肥皂洗净，必要时可用新洁尔灭、过氧乙酸泡手，然后用水冲洗，工作服应经常清洗，保持整洁，必要时高压消毒。 5．实验完毕，即时清理现场和实验用具，对染菌带毒物品，进行消毒灭菌处理。 6．每日下班，尤其节假日前后认真检查水、暖气、电和正在使用的仪器设备，关好门窗，方可离去。 六、环境条件要求 1. 实验室内要经常保持清洁卫生，每天上下班应进行清扫整理，桌柜等表面应每天用消毒液擦拭，保持无尘，杜绝污染。 2. 实验室应井然有序，不得存放实验室外及个人物品、仪器等，实验室用品要摆放合理，并有固定位置。 3. 随时保持实验室卫生，不得乱扔纸屑等杂物，测试用过的废弃物要倒在固定的箱筒内，并及时处理。 4. 实验室应具有优良的采光条件和照明设备。 5. 实验室工作台面应保持水平和无渗漏，墙壁和地面应当光滑和容易清洗。 6. 实验室布局要合理，一般实验室应有准备间和无菌室，无菌室应有良好的通风条件，如安装空调设备及过滤设备，无菌室内空气测试应基本达到无菌。 7. 严禁利用实验室作会议室及其他文娱活动和学习场所。第二节实验室技术操作要求 一、无菌操作要求 食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
【微生物学期末考试题库】经典题目判断题
2020届微生物学期末考试经典题目 题库整理 判断题 1.内毒素是G-菌的外壁物质。( √ ) 2.抗生素的抗微生物效果一般低于消毒剂和防腐剂。( × ) 3.血球计数板可以检测酵母培养液中所有酵母细胞个数，而平板倾注法只能测定活细胞个 数。( √ ) 4.在细菌生长曲线中，稳定期的细胞数目处于稳定，是因为此期细胞不再增殖。( × ) 5.做固体培养基常加2%琼脂作凝固剂，做半固体培养基时，琼脂加入量通常是1%。( × ) 6.稀释平板测数时，细菌、放线菌、真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在10-100个的 稀释度进行计数。( × ) 7.细菌中紫外线引起的突变是由于相邻鸟嘌呤分子彼此结合而形成二聚体的突变。( × ) 8.大肠杆菌和枯草芽孢杆菌属于单细胞生物，唾液链球菌和金黄色葡萄球菌属于多细胞生 物。( × ) 9.自发突变是指那些实验室中由于加入诱变剂所发生的突变。( × ) 10.内生菌根的真菌可进入根的皮层间隙和细胞内部，在根外较少，不形成菌套。( √ ) 11.英国科学家罗伯特?虎克在观察标本中观察到了一段线状的细菌。( × ) 12.所有的微生物都能利用氨态氮作为氮源。( × ) 13.发酵是微生物以无机物作为最终的电子受体的生物氧化过程。( × ) 14.蓝细菌是好氧细菌，通过糖酵解过程，利用光能产生它们的糖类。( × ) 15.固氮酶只有在严格厌氧条件下才有活性，所以固氮菌均为厌氧菌。( × ) 16.Hfr菌株与F-菌株接合后会使F-菌株转性变为F+菌株。( × ) 17.Parastism是指一种微生物生活在另一生物体表面或体内并对后者产生危害作用的现象。 ( × ) 18.大肠杆菌存在与否常作为判断水源是否被粪便污染的一个重要指标。在鉴定该菌时V.P (V oges Proskauer)实验和M.R (Methyl Red)实验结果应该是，前者为阳性，后者为阴性。 ( × ) 19.在培养根瘤菌时常加1/200000的结晶紫抑制G+细菌的生长。( √ ) 20.所有的原核微生物都具有鞭毛。( × ) 21.真菌中除环状质粒外还有线状质粒存在。( √ ) 22.在没有高压蒸汽灭菌设备情况下，不可能进行培养基质的彻底灭菌。( × ) 23.烟草花叶病毒的2130个壳粒反向缠绕成杆状病毒粒子。( × ) 24.促进扩散是微生物吸收营养物质的主要机制，通过特异性载体蛋白可将营养物质进行逆 浓度梯度运行。( × )
检验科微生物室室内质量控制流程
检验科微生物室室内质量控制流程 一、实验室仪器设备的性能维护 微生物室常用仪器设备主要包括：细菌培养箱、细菌鉴定及药敏测试仪、显微镜、高压灭菌器、冰箱、水浴箱等。这些仪器设备的质量维护对于检验结果的质量保证至关重要。性能维护方法及维护频率参照制造商提供的使用手册进行。如使用手册中未详细注明或实验室自身无法完成，由生产厂家协助解决，每年至少一次。 二、培养基的质量控制 要求对培养基进行两方面的质量控制：无菌试验以及已知菌生长试验。无菌试验一般为随机抽样3-5%，在35℃条件下培养48h，每批培养基至少进行一次无菌试验；已知菌生长试验的前提条件是实验室有足够的已知菌储备，其中包括标准菌株(如ATCC或NCTC标准菌株)及经过准确鉴定的临床分离菌。如果条件允许，提倡使用标准菌株。已知菌生长试验应明确预期结果。每批培养基至少进行一次已知菌生长试验。三、细菌染色的质量控制 在临床细菌学检查过程中，革兰染色和抗酸染色使用频率最高。 1．革兰染色IQC要求：利用标准菌株(金黄色葡萄球菌ATCC25923及大肠埃希菌ATCC25922)或其他已知的革兰阳性菌及革兰阴性菌至少每周进行一次质量验证。 2．抗酸染色：利用已知的抗酸杆菌(AFB)阳性涂片每周或在更新炭酸复红染液时至少进行一次质量验证。 四、细菌鉴定或鉴别常用试验的质量控制 细菌鉴定或鉴别试验的IQC就是利用已知菌或标准菌株(如ATCC或NCTC标准菌株)进行鉴定或鉴别试验相关影响因素的质量监控。应用频率较高的试验IQC每周至少一次，频率较低的试验IQC随标本一同进行。五、微生物药物敏感试验的质量控制 临床常用抗微生物药物敏感试验包括一般β-内酰胺酶测试、超广谱β-内酰胺酶(ELBLs)测试、纸片扩散法药敏试验以及定量药敏试验(即MICs测定法)。 1．一般β-内酰胺酶测试的质量控制：至少每周一次。质控菌株可使用临床分离的已知菌株，但最好使用标准菌株，如淋病奈瑟菌ATCC31426(β-内酰胺酶阳性绿脓杆菌ATCC27853)和淋病奈瑟菌ATCC43069(β-内酰胺酶阴性或金黄色葡萄球菌ATCC25923)。 2．ESBLs测试的质量控制：美国临床实验室标准化协会(CLSI：原NCCLS)目前仅提供了肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌ESBLs的测试标准。其测试标准参照最新的CLSI文件。质量控制随临床测试菌株一同进行。 3．纸片扩散法及MIC测定法药敏试验的质量控制：质控试验条件、质控菌株选择及质控允许范围参照最新的CLSI规定。频率为每周至少一次。 4．某些耐药菌检测的质量控制：一些耐药菌株如高水平氨基糖苷类耐药的肠球菌、苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌以及万古霉素耐药的肠球菌等的IQC具体方法、质
食品微生物检测实验
实验一食品中细菌总数的检验 一、实验目的要求 1、了解细菌总数检验的意义。 2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法 3、掌握国标法测定菌落总数的方法和技能 4、熟练无菌操作技术。 二、原理 菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材（清洗、烘干、包扎、灭菌） 规格名称数量用途 1、500ml广口瓶1个稀释样品 2、500ml三角瓶1个配制生理盐水 3、250ml三角瓶2个配制营养琼脂 4、18×180mm试管3支稀释样品 5、1ml移液管 5 支 6、直径为90mm平皿10套倒营养平板 7、250ml量筒1支 8、玻璃珠：直径约5mm （二）应灭菌、消毒的器材 剪刀1把不锈钢药匙1把称量纸：适量 酒精消毒的器材：吸耳球1个，滴管胶头4只，开瓶器
（三）应制备的培养基 培养基总量所用容器 1、0.85%NaCl生理盐水1瓶300ml/瓶500ml三角瓶 2、平板计数琼脂（PCA）培养基：2瓶100ml/瓶250ml三角瓶 四、实验内容 （一）、基本操作过程： 样品称量→→样品稀释→→倾注平皿→→培养48小时→→计数报告。 （二）、样品的稀释（样品的处理） 样品：袋装乳粉 外包装消毒→→无菌称样品25g→→加无菌生理盐水→→加盖振荡摇均匀 1、用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，用无菌剪刀开封取样。称取检样25g，放入装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶子中，然后用225mL温热的灭菌生理盐水徐徐加入（先加入少量生理盐水将乳粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结团），采用振摇法（用力快速振摇50次,振幅不小于40cm）振摇均匀，即为1:10的稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。 2、用1ml灭菌吸管，吸取1∶10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1∶100稀释液。 3、另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用另一支1ml灭菌吸管。 4、根据对检样污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的稀释液1ml于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。 5、用1ml生理盐水作空白对照试验，做2个平皿。 注意： ①吸管尖端不要触及瓶口或试管口外部，也不得触及管内稀释液。 ②吸管插入检样液内取样稀释时，插入深度要达2.5cm以上,调整时应使管尖与容器内壁紧贴。 ③进行稀释时，应使吸管内的液体沿管壁小心流加入，以免增加检液。 ④每递增稀释一次，即换用一支1ml灭菌吸管。
微生物学期末考试试题答案
1.细菌特殊构造包括、、、等。（本题2分） 2.溶源性细胞在正常情况下有大约10 -5 细胞会发生现象，这是由于少数溶源细胞中的变成了的缘故。（本题分） 3.营养物质可以通过、、和四种方式进入细胞。（本题2分） 4.控制有害微生物措施中杀灭的方法有和，常用和方法，抑制的方法有和。（本题3分） 5.证明遗传物质的基础是核酸的三个著名的实验为、、。（本题分） 6.微生物基因重组的方式包括、_____、_____和。（本题2分） 1.纯培养是其中（）的培养物。 A.只有一种微生物 B.只有细菌生长所需的一种营养物 C.除主要微生物外只有一种微生物 D.没有代谢废物 2.实验室常用的培养细菌的培养基是（）。 $ A. 马铃薯培养基 B. 牛肉膏蛋白胨培养基 C.高氏一号培养基 D.麦芽汁培养基 3.己糖单磷酸支路和ED途径是进行（）替换的一个机制。 A.微生物中DNA合成 B.光合生物中的光合作用 C.某些种类微生物中的能量代谢 D.化学渗透作用 4.微生物代谢中，硝酸盐和硫酸盐可作为电子受体是在（）。 A.无酶时 B.无ATP时 C. 有细胞色素时 D. 无氧时 5.由于控制微生物的目的，灭菌一词指的是（）。 A.除去病原微生物 B.降低微生物的数量 ? C.消灭所有的生物 D.只消灭体表的微生物 6.紫外线辐射主要作用于微生物的（）。 A. 核酸 B.酶类 C. 糖类 D.细胞壁 7.青霉素族的抗生素主要用于抗（）。 A.病毒 B.真菌 C.革兰氏阴性菌 D.革兰氏阳性菌 8.所有下述特征皆适合质粒，除了（）之外。 A.它们是自我复制的DNA环 B.它们有10～50个基因 C.它们是细菌存活所必需的成分 D.它们是接合所必需的成分 9.接合时F因子进入受体细胞，受体细胞（）。 A.经历裂解 B.快速繁殖 C.变成供体细胞 D.发育出线粒体 — 10.研究不同微生物群落及其环境之间的关系的是（）。 A.微生物进化 B.微生物生态学 C.微生物生理学 D.微生物生物化学 四、判断题（每小题1分，共10小题10分）
【实验室管理】食品微生物检测实验室操作要求
食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，那么，对食品微生物检测实验室操作要求有哪些？ 无菌操作要求 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 无菌间使用要求 1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5～0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%～3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W 紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在
紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法 1.灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 （2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 2.装放（1）干热灭菌器：装放物品不可过挤且不能接触箱的四壁。 （2）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。 3.设备检查 （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。 （2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。 （3）对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。 4.灭菌处理
医学微生物学期末考试卷二
医学微生物学考模拟考试试卷二 一、名词解释（每题3分，共15分） 1. Sterilization: 2. Lysogenic phage / Temperate phage: 3. Weil-Felix reaction： 4. Envelope: 5. Interferon(IFN): 二、填空（每空0.5分，共15分） 1. 细菌的生长方式是繁殖，繁殖速度为每代，繁殖过程包括、、、，的细菌最典型。 2. 金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌生物学性状的主要区别点为：①，②， ③，④，⑤，⑥。 3. 幽门螺杆菌呈或，营养要求较高，需在微需氧条件下才能生长，即、 和，形成菌落。幽门螺杆菌生化反应不活泼，不分解，但、、。幽门螺杆菌的致病与、毒素有关，在慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡患者的胃粘膜检出率较高。 4. 大肠杆菌有O、H、K三种抗原，O抗原是脂多糖最外层的，刺激机体后主要产生类抗体；H抗原位于细菌的上，刺激机体后主要产生类抗体；K抗原位于O抗原外层，与细菌的有关。 三、最佳选择题（每题1分，共30分） 1、下列描述中，不属于所有微生物的共同特点是：（） A：体积微小；B：结构简单；C：种类繁多；D：可无致病性；E：严格活细胞内生长繁殖。 2、与细菌耐药性有关的遗传物质是：（） A：普通菌毛；B：性菌毛；C：细菌染色体；D：质粒；E：毒性噬菌体。 3、条件致病菌的条件是：（） A：正常菌群耐药性改变；B：正常菌群遗传性状改变；C：肠蠕动减慢使细菌增多； D：长期使用广谱抗生素；E：各种原因造成的免疫功能亢进。 4、下列生物制品，何种易引起Ⅰ型超敏反应：（） A：丙种球蛋白；B：胎盘球蛋白；C：抗毒素；D：白细胞介素；E：干扰素。 5、下列各组中均属专性厌氧菌的是：（） A：破伤风杆菌、肉毒杆菌、结核杆菌；B：产气荚膜杆菌、乳酸杆菌、流感嗜血杆菌； C：产气荚膜杆菌、肉毒杆菌、脆弱类杆菌；D：破伤风杆菌、炭疽杆菌；变形杆菌； E：肉毒杆菌、破伤风杆菌、白喉杆菌。
检验科微生物室室内质量控制流程
通辽市医院微生物室上岗、轮岗考核 页脚内容1检验科微生物室室内质量控制流程 一、实验室仪器设备的性能维护 微生物室常用仪器设备主要包括：细菌培养箱、细菌鉴定及药敏测试仪、显微镜、高压灭菌器、冰箱、水浴箱等。这些仪器设备的质量维护对于检验结果的质量保证至关重要。性能维护方法及维护频率参照制造商提供的使用手册进行。如使用手册中未详细注明或实验室自身无法完成，由生产厂家协助解决，每年至少一次。 二、培养基的质量控制 要求对培养基进行两方面的质量控制：无菌试验以及已知菌生长试验。无菌试验一般为随机抽样3-5%，在35℃条件下培养48h，每批培养基至少进行一次无菌试验；已知菌生长试验的前提条件是实验室有足够的已知菌储备，其中包括标准菌株(如ATCC 或NCTC标准菌株)及经过准确鉴定的临床分离菌。如果条件允许，提倡使用标准菌株。已知菌生长试验应明确预期结果。每批培养基至少进行一次已知菌生长试验。三、细菌染色的质量控制 在临床细菌学检查过程中，革兰染色和抗酸染色使用频率最高。 1．革兰染色IQC 要求：利用标准菌株(金黄色葡萄球菌ATCC25923及大肠埃希菌ATCC25922)或其他已知的革兰阳性菌及革兰阴性菌至少每周进行一次质量验证。 2．抗酸染色：利用已知的抗酸杆菌(AFB)阳性涂片每周或在更新炭酸复红染液时至少进行一次质量验证。 四、细菌鉴定或鉴别常用试验的质量控制 细菌鉴定或鉴别试验的IQC就是利用已知菌或标准菌株(如ATCC或NCTC标准菌株)进行鉴定或鉴别试验相关影响因素的质量监控。应用频率较高的试验IQC每周至少一次，频率较低的试验IQC随标本一同进行。五、微生物药物敏感试验的质量控制 临床常用抗微生物药物敏感试验包括一般β-内酰胺酶测试、超广谱β-内酰胺酶(ELBLs)测试、纸片扩散法药敏试验以及定量药敏试验(即MICs测定法)。 1．一般β-内酰胺酶测试的质量控制：至少每周一次。质控菌株可使用临床分离的已知菌株，但最好使用标准菌株，如淋病奈瑟菌ATCC31426(β-内酰胺酶阳性绿脓杆菌ATCC27853)和淋病奈瑟菌ATCC43069(β-内酰胺酶阴性或金黄色葡萄球菌ATCC25923)。 2．ESBLs测试的质量控制：美国临床实验室标准化协会(CLSI：原NCCLS)目前仅提供了肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌ESBLs的测试标准。其测试标准参照最新的CLSI文件。质量控制随临床测试菌株一同进行。 3．纸片扩散法及MIC测定法药敏试验的质量控制：质控试验条件、质控菌株选择及质控允许范围参照最新的CLSI规定。频率为每周至少一次。 4．某些耐药菌检测的质量控制：一些耐药菌株如高水平氨基糖苷类耐药的肠球菌、苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌以及万古霉素耐药的肠球菌等的IQC具体方法、质控菌株及质控预期结果参见最新的CLSI规定。质量控制随临床测试菌株一同进行。
注射剂生产过程中微生物的质量风险控制
【摘要】注射剂是一种直接进入人体血液循环而发生作用的药品，为此要严格控制注射液微生物污染。因此本文从注射剂选择适应的灭菌参数、f0值灭菌应用、灭菌效果验证方面进行探究注射剂生产过程中微生物的质量风险控制,以此保障灭菌过程均匀完善，提高注射液的安全性、稳定性、有效性。在探究后总结，注射剂生产过程中微生物的质量风险控制主要还是保证生产过程中应用适当的灭菌工艺，并且严格执行gmp管理，以此保障良好的无菌生产体系，这就要求注射液在生产的各个环节应采取有效措施严格控制微生物污染，确保无菌安全，避免微生物风险，在生产过程中尽可能的完全灭菌，以此保证注射液产品的无菌安全。 【关键词】注射剂；生产过程；微生物；质量风险控制 注射剂是一种直接进入人体血液循环而发生作用的药品，为此要严格控制注射液微生物污染，就显得尤为重要。因此全部生产过程中的灭菌成为保障该注射液药品质量安全的关键工序，同时灭菌过程均匀完善程度直接关系到注射液的安全性、稳定性、有效性[1]。 1注射剂选择适应的灭菌参数 要根据药物的理化性质、稳定性和生物学特性及临床用药的顺应性来保证制剂无菌水平。一般湿热灭菌条件采用121℃×15min、121℃×30min、116℃×40min的程序，以此必须保证邪君后的微生物存活率≤10-6，即没100万个注射剂中存活微生物不得超过1个，以此保证灭菌后制剂的无菌保证水平。 注射剂生产过程中，为保证灭菌效果，应在密闭的制剂灭菌容器内，进行加压高温灭菌，若压力和灭菌时间不当，则不能有效杀死所有芽孢和细菌繁殖体。对于含糖类注射剂和氨基酸类营养性注射液，高温灭菌条件会影响药物产生不稳定性，因此注射剂选择适应的灭菌参数时，要保障高温灭菌的安全性，也要保障注射剂的稳定性，以此能够即可有效去除微生物，确保药剂治疗的稳定性。若灭菌方式方法不当，灭菌温度低、灭菌时间短，达不到灭菌目的；灭菌温度高、时间长，注射剂会产生杂质。因此，要正确选择适当的灭菌温度，保证注射剂质量[2]。 2 f0值灭菌应用 f0值是灭菌周期验证中所应用的术语。高温高压灭菌程序中，121℃下的等效灭菌时间，是标准灭菌时间，是一个可靠的灭菌参数。f0值的计算直接作用于生产灭菌过程的设计和灭菌效果。通常包装材料性能等因素会引起不同的升温速度，包括容器大小、形状及热穿透系数；灭菌产品溶液的粘稠度和容器的填充量；容器在灭菌器中的数量和分布。溶蚀由于f0值会随上述因素温度变化而呈现出的指数也不同，也就是说温度即使有很小的差别也会影响f0值，由此测定灭菌物的实际温度有利于灭菌器和灭菌技术的验证。 3灭菌效果验证 为控制注射剂生产过程中微生物的质量风险，必须进行全效可行的灭菌效果验证，高温高压灭菌时，需要对灭菌器的空载、满载分布进行试验、热穿透试验、生物指标试剂挑战试验，同时，再采用蒸汽灭菌生物指示剂进行验证。 3.1空载、满载分布试验空载、满载分布试验是为了检查灭菌器内腔的热分布情况，检查灭菌器内腔是否有冷点，达不到高温高压灭菌的目的。试验中，将温度探头均匀分布在灭菌器内腔各处，再进行灭菌操作，操作过程中，记录各个温度点[3]。 3.2热穿透试验热穿透试验是在热分布基础之上，确定灭菌器内腔中的“最低温度点”，检查该点f0值是否在无菌保证值之上。试验中，按照注射液的工艺灭菌温度进行操作，检测出“最低温度点”，将此点与注射液接触，监测其温度，记录数据作为热穿透试验数据。 3.3生物指示剂试验生物指示剂能够有效确认监控的灭菌效果。根据热分布试验和热穿透试验的结果，通过生物指示剂试验，对灭菌器内腔中的“最低温度点”进行验证，以此检查确认灭菌效果。通过灭菌器内腔中的“最低温度点”进行灭菌，灭菌后再进行无菌过滤，
如何控制微生物实验室的质量
如何控制微生物实验室的质量 2015-07-24嘉峪检测网嘉峪检测网 一、质量控制相关定义 质量控制：满足质量要求的操作技术和活动。 质量保证：为了满足实验室质量要求，制定相应的计划，实施证明（记录）所进行的一系列的系统活动 外部质量控制：通过互相校准和/或检验对实验室的操作和结果所进行的控制内部质量控制：实验室内部采取的以对比分析、跟踪以及相关方法，对实验室工作的连续性控制计划。 质量手册：是描述质量系统元素的文件或文件的集合。 二、实验室要求 按国家实验室认可的概念，是指一个能够承担法律责任的实体。这里所指的是实验室（微检室）内建立的质量管理的保证体系。人员、房屋设备满足检测工作需要。 1、人员要求 实验室人员的分类：管理人员、技术人员、技术支持人员等。
相应岗位的人员，应具备相应的技术能力，相应的技术能力证明（证书及证件）。微生物检验室因有相应技术能力的人负责室内的技术工作。并设立质量监督员。 2、房屋条件要求 房屋要求：具有适宜、足够宽敞、通风有良好的照明。 房屋内墙面及地等应采用易于清洁的材料，保持房间清洁。 房间的设置，以其开展的工作内容加以分用，设立专用房间。 房间的大小还应根据从事实验人员的进入数量上加以考虑。 3、环境设施要求 专用房间的温湿度控制与记录（样品存放室） 特殊环境的微生物指标控制与记录（无菌室等） 专用工作室的标准操作规程和定期的检测校准程序。（洁净室等） 特殊环境中的专用设施质量控制应符合有关要求（净化工作台） 三、设备控制和程序 微生物检验常用需监控的设备和仪器： 1培养箱（生化培养箱或CO2培养箱等）、干燥箱、高压灭菌锅、净化工作台、pH计、冰箱，（低温冰箱或冷柜）温度计、紫外灯、显微镜、离心机、天平、。2小计量容器 3微生物测定仪器、微生物检定仪器、空气采样器、酶标仪专用等。