分子生物学第五章分子生物学研究法(上)

分子生物学

第五章分子生物学研究法（上）——DNA、RNA及蛋白质操作技术

第三节RNA操作技术

第四节SNP的理论与应用

第五节基因克隆技术

第六节蛋白质组与蛋白质组学技术

夏玉琼

2013-10-10

RNA操作技术

cDNA文库的构建

基因文库的筛选

SNP的理论与应用

基因克隆技术

蛋白质与蛋白质组学技术

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cDNA文库的构建

切割位点

用四碱基特异性的限制性内切酶部分消化

DNA 片段，有的仍有切割位点

质粒DNA

将DNA 克隆进质粒DNA

细菌克隆每个细菌都带有不同片段的DNA

细菌转化

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cDNA文库的构建

cDNA的长度

0.5-8 kb

载体：质粒载体和噬菌体类载体

完整的cDNA文库包含大于5*105的独立克

隆

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RNA操作技术

cDNA文库的构建

基因文库的筛选

SNP的理论与应用

基因克隆技术

蛋白质与蛋白质组学技术

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基因文库的筛选

含义

通过某种特殊方法从基因文库中鉴定出含有所

需重组DNA分子的特定克隆的过程

筛选方法

核酸杂交法

PCR筛选法免疫筛选法

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核酸杂交法

培养基上的菌落

盖上硝酸纤维素膜

移去硝酸纤维素膜

裂解、中和去除细菌蛋白

DNA 印迹

32P 标记探针

杂交

放射自显影图像

挑出阳性克隆保存母板

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PCR筛选法

需获得基因特异性引物

将整个基因文库保存在多孔培养板上

用设计好的基因探针对每个孔PCR筛选，挑出

阳性的孔

对阳性的孔再稀释到次级多孔板中PCR筛选重复稀释重复筛选直到与目的基因对应的单个克隆

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免疫筛选法

文库铺于E.coli 形成噬菌斑

转移到硝酸纤维素膜

吸收λ噬菌体中表达的外源蛋白保存原板，加入一抗筛选膜上的噬菌斑印迹

洗去未结合的抗体加入酶偶联的二抗加底物显色

从保存板上挑出

阳性噬菌斑

一抗：第一抗体，识别目标蛋白二抗：抗体的抗体，能增强信号，增加该方法的灵活性

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RNA操作技术

SNP的理论与应用

SNP概述

SNP的检测技术

SNP的应用

基因克隆技术

蛋白质与蛋白质组学技术

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SNP概述

single nucleotide polymorphism,pronounced “snips”

单核苷酸多态性

基因组DNA序列中由于单个核苷酸的突变而

引起的多态性，发生频率1%或更高

例如：某些人的染色体上的某个位置为A，而另外一些人的同样位置是T，染色体DNA同一位置上的每个碱基类型叫做一个

等位位点继RFLP和SSR之后的

第三代遗传标记

遗传标记：在遗传分析上用作标记的基因

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第一代遗传标记：RFLP

RFLP标记是发展最早的DNA标记技术。RFLP是指基因型之间限制性片段长度的差异，这种差异是由限制性酶切位点上碱基的插入、

缺失、重排或点突变所引起的。

RFLP可以测定种群内、种群间不同水平的物

种在污染环境下抗性分化进化水平上的差异。RFLP技术可用于在不同环境中微生物多样性的研究。

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第二代遗传标记：SSR （微卫星标记）

SSR simple sequence repeats/ STR short

tandem repeats/micro-satallites

均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列，

由2～6个核苷酸的串联重复片段构成

重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并

且数量丰富

微卫星位点通常通过PCR扩增，扩增产物通过电泳分析并根据大小分离等位基因进行检测。

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SNP的类型

一个SNP表示某个位点一个核苷酸的变化

C G

T A

转换2/3

C A

A C

颠换1/3

CH 3

自发

脱氨基作用甲基化胞嘧啶残基C

胸腺嘧啶残基T

CpG 中C 最易发生该突变

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单倍型

一个人类个体大约携带300-1000万个SNP 单倍型：位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点

相邻SNP的等位位点倾向于以一个整体遗传给后代

A G G

染色体A 染色体A’

SNP1SNP2

T G

染色体A 染色体A’

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SNP在基因组中的位置

基因编码区cSNP

比例小，占1/5

同义cSNP（不影响翻译蛋白质）

非同义cSNP（影响蛋白质功能），导致生物性

状改变，影响大

基因调控区

pSNP

影响基因表达量，影响大

基因随机非编码区

rSNP

影响不大

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RNA操作技术

SNP的理论与应用

SNP概述

SNP的检测技术

SNP的应用

基因克隆技术

蛋白质与蛋白质组学技术

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SNP的检测技术

DNA测序法检测新的SNP

基因分型

利用数据库中已有SNP进行特定人群的序列和发生

频率的研究

检测技术

基因芯片技术

Taqman技术

分子信标技术焦磷酸测序法

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待测基因样品经PCR扩增并标记

探针固定探针DNA探针与目的

基因杂交

通过显色信号的分布

判断样本信息

通量SNP分析方法

第五章-分子生物学常用技术-习题

第五章常用分子生物学技术的原理及其应用习题（引自网络精品课程）一、选择题（一）A型题 1 ．分子杂交实验不能用于 A ．单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 B ．双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 C ．单链 RNA 分子之间的杂交 D ．单链 DNA 分子之间的杂交 E ．抗原与抗体分子之间的杂交 2 ．关于探针叙述错误的是 A ．带有特殊标记 B ．具有特定序列 C ．必须是双链的核酸片段 D ．可以是基因组 DNA 片段 E ．可以是抗体 3 ．下列哪种物质不能用作探针 A ． DNA 片段 B ． cDNA C ．蛋白质 D ．氨基酸 E ． RNA 片段 4 ．印迹技术可以分为 A ． DNA 印迹 B ． RNA 印迹 C ．蛋白质印迹 D ．斑点印迹 E ．以上都对 5 ． PCR 实验延伸温度一般是 A ．90 ℃ B ．72 ℃ C ．80 ℃ D ．95 ℃ E ．60 ℃ 6 ． Western blot 中的探针是 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．抗体 E ．双链 DNA 7 ． Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是 A ．基本原理不同 B ．无需进行限制性内切酶消化 C ．探针必须是 RNA D ．探针必须是 DNA E ．靠毛细作用进行转移 8 ．可以不经电泳分离而直接点样在 NC 膜上进行杂交分析的是 A ．斑点印迹 B ．原位杂交 C ． RNA 印迹 D ． DNA 芯片技术 E ． DNA 印迹 9 ．下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．蛋白质 E ．双链 DNA 10 ． RT-PCR 中不涉及的是 A ．探针 B ． cDNA C ．逆转录酶 D ． RNA E ． dNTP 11 ．关于 PCR 的基本成分叙述错误的是 A ．特异性引物 B ．耐热性 DNA 聚合酶 C ． dNTP D ．含有 Zn 2+ 的缓冲液 E ．模板 12 ． DNA 链末端合成终止法不需要 A ． ddNTP B ． dNTP C ．引物标记 D ． DNA 聚合酶 E ．模板 13 ． cDNA 文库构建不需要 A ．提取 mRNA B ．限制性内切酶裂解 mRNA C ．逆转录合成 cDNA D ．将 cDNA 克隆入质粒或噬菌体 E ．重组载体转化宿主细胞 14 ．标签蛋白沉淀是 A ．研究蛋白质相互作用的技术 B ．基于亲和色谱原理 C ．常用标签是 GST D ．也可以是 6 组氨酸标签 E ．以上都对 15 ．研究蛋白质与 DNA 在染色质环境下相互作用的技术是 A ．标签蛋白沉淀 B ．酵母双杂交 C ．凝胶迁移变动实验 D ．染色质免疫沉淀法 E ．噬菌体显示筛选系统 16 ．动物整体克隆技术又称为

2016年电子科技大学613分子生物学真题

电子科技大学 2016年攻读硕士学位研究生入学考试试题考试科目：613 分子生物学注：所有答案必须写在答题纸上，写在试卷或草稿纸上均无效。一、名词解释（30分，每题3分） 1、冈崎片段 2、氨酰tRNA 3、多顺反子mRNA 4、BLAST 5、DNA复性 6、反密码子 7、增强子8、CpG岛 9、外显子10、移码突变二、填空题（30分，每空1分） 1、大肠杆菌染色体的分子质量大约是2.5X109 Da，核苷酸的平均分子质量是330 Da，两个邻近核苷酸对之间的距离是0.34 nm，可推算大肠杆菌染色体分子大约长nm。 2、DNA甲基化后将基因的转录。 3、从Bacillus globigii里分离出来的第2种限制性内切酶应命名为。 4、某双链DNA分子中，A的含量为15%，则C的含量是。 5、大肠杆菌基因组大小4.6x106 bp，用限制性内切酶Eco RI (GAA TTC) 对其基因组进行酶切消化，理论上可以产生个DNA片段。 6、RNA生物合成中，RNA聚合酶的活性需要模板，原料是。 7、是一类具有催化活性的RNA分子。 8、能形成DNA—RNA杂交分子的生物合成过程有、，形成的分子基础是。 9、克隆来自人基因组约500kb长的DNA片段，最佳载体是。 10、PCR全称，通过多次重复、和三个过程，在体外获得大量目的DNA片段。典型的PCR反应体系包括、、、、缓冲液和Mg2+等物质。 11、体内DNA复制一般以为引物，复制方向，催化引物合成的酶称为。 12、癌基因可分为、两大类。 13、大肠杆菌在进行错配修复时，以作为识别子、母链的标记，而参与修复合成的DNA 聚合酶是。 14、三个DNA片段A、D1和D2分别置于一个FIN2启动子控制的新霉素抗性基因的不同位置上，如下图左所示；质粒分别转染小鼠肾细胞系，所得细胞克隆在含有G418的培养基

分子生物学地研究及发展

分子生物学的应用及发展摘要：本文在文献检索的基础上，对分子生物学的发展简史，基本原理，研究领域等作了简单介绍，阐述了分子生物学在人们日常生活中的应用并结合药学专业着重讨论了其在药学及中药开发发面的应用，并进一步对分子生物学未来的研究技术、方向和前景做了展望。一前言生物以能够复制自己而区别于非生物。生命现象最基本的特征是进行“自我更新”。进行“自我更新”体现了一种最高级和最复杂的运动状态。这种运动就是生物机体从环境中摄取物质和能量，以更新本身的物质组成，而山现生长、繁殖，在这样的过程中保证了将自身的特征传给历代；同时也不断地向环境输送一些物质和释放能量。在生物机体的组成物质中，防水分外，有各种无机盐类和各种有机化合物。其中生物大分子——核酸和蛋白质在进行自我更新运动中，以其功能的重要性占第一位。为探索生命现象的本质问题，产生了分子生物学这一学科[1]。分子生物学(molecular biology)是从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科，它是研究核酸、蛋白质等生物大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域[2]。分子生物学的最终目标是远大的，从产生基本细胞行为类型的各种分子的角度，来理解这五类行为类型：生长、分裂、分化、运动和相互作用。即分子生物学力图完整地描述细胞大分子的结构、功能和相互联系，从而理解细胞为什么要采取这种方式[3]。分子生物学作为一门新兴的边缘学科。它的迅速发展及其在整个生命科学领域的广泛渗透和应用，促使人们对生物学等生命科学的认识从细胞水平进入分子水平。在农业、畜牧、林业、微生物学等领域发展十分迅速，如转基因动植物等。在医学领域，为医学诊断、治疗及新的疫苗、新药物研制等开辟了新的途径，使医学科学中原有的学科发生分化组合，医学分子生物学等新的学科分支不断产生，使医学科学发生了深刻的变革，不认识到这一点就很难跟上科学发展的步伐。分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。二分子生物学发展简史分子生物学的发展大致可分为三个阶段[4-7]：

2016年武汉大学885分子生物学考研真题(C卷)(回忆版)及详解【圣才出品】

2016年武汉大学885分子生物学考研真题（C卷）（回忆版）及详解一、名词解释题 1．Northern blot 答：Northern blot中文名称是Northern杂交，是指一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，类似于DNA印迹法的操作程序。通过northern blot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。 2．RNase H 答：RNase H，即Ribonuclease H，中文名称为核糖核酸酶H，是一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA 或RNA中的磷酸二酯键，但是可以特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA，常用于cDNA 第二链的合成 3．methyl trans-ferase 答：methyl trans-ferase中文名称是甲基转移酶，是指以S-腺苷蛋氨酸、甜菜碱和二甲基噻亭作为甲基的供体，把氨基、羟基、硫氢基甲基化。结合在四氢叶酸上的活性C1单位被还原而生成甲基，通过5-甲基四氢叶酸转甲基酶与同型半胱氨酸被甲基化而生成蛋氨酸。这种酶是以钴胺酰胺作为辅酶的。 4．frameshift mutation 答：frameshift mutation中文名称是移码突变，是指由于插入或缺失非3的倍数个的

核苷酸，从而导致蛋白质三联体密码子的阅读框发生移动，随着转译成不正常的氨基酸的突变。这种突变通常会导致多肽链上一系列的氨基酸发生变化，严重影响后续蛋白质或酶的结构和功能。 5．Ubiquitination modification 答：Ubiquitination modification中文名称是去泛素化修饰，它是泛素化的逆过程，是指去除掉泛素（一类低分子量的蛋白质）分子，且在一系列特殊的酶作用下对靶蛋白进行的特异性修饰。去泛素化修饰和去磷酸化，去乙酰化类似，都是去除蛋白质修饰的过程。去泛素化功能的主要行使者是去泛素化酶。二、简答题 1．RNA editing是什么？作用机制是什么？答：（1）RNA editing的定义 RNA editing的中文名称为RNA的编辑，是指通过插入、删除或取代一些核苷酸残基，导致DNA所编码的遗传信息改变的一种mRNA前体加工的方式。（2）介导RNA编辑的机制 ①位点特异性脱氨基作用载脂蛋白mRNA中的C→U，谷氨酸受体蛋白mRNA中的A→I，都属于脱氨基作用的结果。分别由胞嘧啶和腺嘌呤脱氨酶所催化，发生在带有具催化作用的脱氨酶亚基的复合体中，有附加的RNA结合区能帮助识别所编辑的特异性靶位点。 ②引导RNA指导的尿嘧啶插入或删除指导RNA与被编辑区及其周围部分核酸序列有相当程度的互补性，并且存在一些未能

2016年西北农林科技大学622分子生物学考研真题(回忆版)【圣才出品】

2016年西北农林科技大学622分子生物学考研真题（回忆版）一、名词解释（共6个，30分） 1．反式作用因子 2．单顺反子 3．外显子 4．锌指结构 5．Western blotting 二、判断题（共10个，20分） 1．5＇帽子与翻译过程无关。 2．DNA多态性 3．TATA区 4．核糖体小亚基三、简答题（共8个，40分） 1．什么是cDNA？cDNA文库与基因组文库的区别。 2．简述DNA复制所需酶类及其作用。 3．根据给出的一段DNA序列，设计引物。 4．乳糖操纵子的正负调控机制。 5．mRNA前提加工过程中，加帽和加尾的作用是什么？

四、填空题（20分，1空1分） 1．真核生物生物钟发生基因重排的一个例子是______基因。 2．真核生物基因调控可分为两大类，一类是______调控或称可逆调控，另一类是______调控或称不可逆调控，是真核基因调控的精髓部分。 3．真核生物转录因子的活性可以独立分配给特定的蛋白结构域，分别称作______和 ______。 4．Meselson-Stahl的DNA半保留复制证实实验中，区分不同DNA用______方法。分离不同DNA用______方法，测定DNA含量用______方法。 5．蛋白质合成中研究嘌呤霉素是因为______。 6．DNA突变主要分为______和______。 7．Tu的作用是______，Ts的作用是______。五、论述题（40分） 1．假设你需要将一段cDNA克隆到表达载体中并转化到大肠杆菌中。cDNA的两端和载体上均有EcoRI的酶切位点，你需要用EcoRI切割cDNA和载体然后将它们连接在一起。下面是实验方法要求的具体步骤： a．用EcoRI处理载体DNA，然后用碱性磷酸酶去除5＇端的磷酸基； b．用EcoRI处理cDNA,然后与步骤a中得到的载体DNA混合，加入DNA连接酶，在适当的条件下使cDNA与载体连接； c．将步骤b的产物转入大肠杆菌感受态细胞中，培养后均匀涂在含有抗生素的琼脂培养皿上。

2016分子生物学复习重点

分子生物学 1.Poly （A）尾巴： ①大多数真核mRNA的3’端有多聚腺苷酸序列；②poly(A)序列不是DNA编码，是转录后被poly(A)聚合酶加上去的；③mRNA初进入细胞质时，其poly(A)尾长度大致与核中长度相同，随后逐渐缩短；④单poly(A) 尾长短并不影响其功能，poly(A)尾常结合了一约78,000道尔顿的蛋白质分子。⑤组蛋白mRNA不含poly(A) 结构。（2）功能①保护mRNA，增强mRNA的稳定性②增强mRNA的翻译能力 2.帽子结构： ①mRNA转录完成后，前提mRNA进行加帽，帽子为7-甲基鸟苷，与5’第一个核苷酸以5’-5’三磷酸键相连②合成：A、RNA焦磷酸酶将前提mRNA末端的磷酸基团去除B、鸟苷转移酶在此末端加上GMP C、两个甲基转移酶分别将鸟苷的第七位的N和倒数第二个核苷2’-羟基甲基化功能：1）增加mRNA稳定性；2）增强mRNA的翻译能力3）增强mRNA从细胞核到细胞质的转运4）提高mRNA剪接效率 3.回文序列回文序列是双链DNA中含有的结构相同、方向相反的序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构,这两个反向重复序列不一定是连续的。这种结构中脱氧核苷酸的排列在DNA两条链中顺读与倒读其意义是一样的，脱氧核苷酸的排列对于一个假象的轴成180°旋转对称，这种结构称为回文结构。 4. 反向重复序列在同一多核苷酸链内下游存在着与上游某一段序列的互补序列反向的序列，如GTGCTAA和TTAGCAC构成反向重复序列。在双链DNA中反向重复可能引起十字形结构的形成。 5.不依赖于p因子的终止子结构特点： 1.终止位点上游一般存在一个富含GC碱基的二重对称区，由这段DNA转录产生的RNA容易形成发卡式结构。 2.在终止位点前面有一端由4—8个A组成的序列，所以转录产物的3’端为寡聚U，这种结构特征的存在决定了转录的终止。 6.依赖于p因子的终止子的结构特点： 1.转录的RNA也具有发夹结构，但发夹结构后无poly(U)。 2.形成的发夹结构较疏松，茎环上不富含GC。 3.终止需要ρ因子的参与。 4.与不依赖于ρ因子的终止一样，终止信号存在于新生的RNA链上而非DNA链上过程。 7. 原核、真核生物释放因子的作用（1）原核：RF1识别终止密码子UAA、UAG；RF2识别UAA、UGA；RF3是GTP结合蛋白，能促进RF1和RF2与核糖体的结合。（2）真核：eRF1识别三个终止密码子；eRF3是一种核糖体依赖性GTP酶，帮助eRF1释放翻译成熟的肽链。 8. 细菌转录机制的转换模式细菌RNA聚合酶全酶由核心酶和σ因子组成，核心酶是基本的转录装置，σ因子指导核心酶转录特异的基因。转录起始：RNA聚合酶结合在DNA上形成闭合启动子复合体，σ因子促使聚合酶由闭合启动子复合体转变为开放启动子复合体。转录延伸：聚合酶合成一段初生RNA产物后，聚合酶的启动子清除，核心酶转换为延伸特异构象，σ因子与聚合酶核心酶解离，由核心酶单独执行延伸功能，σ因子可被不同的核心酶再利用。是核心酶决定了RNA 聚合酶全酶对利福平的抗性或敏感性。) 噬菌体感染细菌后,其基因转录以时序模式进行:早期基因先转录,然后是中期基因,最后是晚期基因.这种转换由噬菌体编码的一系列σ因子来调控。这些σ因子与宿主核心聚合酶结合，从而改变对早、中、晚期

分子生物学第五章课后习题

分子生物学第五章作业 1，哪些重要的科学发现和实验推动了DNA重组技术的产生及发展？答：重组DNA技术发展史上的重大事件1.40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题；2.50年代提示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题；3.50年代末至60年代，相继提出了"中心法则"和操纵子学说,成功地破译了遗传密码，充分认识了遗传信息的流动和表达。年份事件：1869 F Miescher首次从莱茵河鲑鱼精子中分离DNA。1944 O.T. Avery证实DNA是遗传物质。1952 A.D. Hershey和M.Chase再次证实和噬菌体的遗传物质是DNA。1953 J.D.Watson和F.H.C.Crick提出DNA分子结构的双螺旋模型。M.Wilkins用X-射线衍射法证实了这一结构。1957 A.Kornberg从大肠杆菌中发现了DNA聚合酶I。1958 M. Meselson和F. W. Stahl提出了DNA的半保留复制模型。1959-1960 S. Ochoa发现RNA聚合酶和信使RNA，并证明mRNA决定了蛋白质分子中的氨基酸序列。1961 Nirenberg 破译了第一相遗传密码；F. Jacob和J. Monod提出了调节基因表达的操纵子模型。1964 C. Yanofsky和S. Brenner等人证明，多肽链上的氨基酸序列与该基因中的核苷酸序列存在着共线性关系。1965 S. W. Holley 完成了酵母丙氨酸tRNA的全序列测定；科学家证明细菌的抗药性通常由"质粒"DNA所决定。1966 M.W.Nirenberg，S.Ochoa、H.G.Khorana、F.H.C.Crick等人破译了全部遗传密码。1970 H.O.Smith，K.W.Wilcox 和T.J.Kelley分离了第一种限制性核酸内切酶。H.M.Temin和D.Baltimore从RNA肿瘤病毒中发现反转录酶。1972-1973 H.Boyer，P.Berg等人发展了DNA重组技术，于72年获得第一个重组DNA分子，73年完成第一例细菌基因克隆。1975-1977 F.Sanger与A.Maxam、W.Gilbert等人发明了DNA序列测定技术。1977年完成了全长5387bp的噬菌体φ174基因组测定。1978 首次在大肠杆菌中生产由人工合成基因表达的人脑激素和人胰岛素。1980 美国联邦最高法院裁定微生物基因工程可以专利化。1981 R. D. Palmiter和R. L. Brinster获得转基因小鼠；A. C. Spradling和G. M. Rubin得到转基因果蝇。1982 美、英批准使用第一例基因工程药物--胰岛素；Sanger等人完成了入噬菌体48,502bp全序列测定。1983 获得第一例转基因植物。1984 斯坦福大学获得关于重组DNA的专利。1986 GMO首次在环境中释放。1988 J. D. Watson出任"人类基因组计划"首席科学家。1989 DuPont公司获得转肿瘤基因小氧--"Oncomouse"。1992 欧共体35个实验室联合完成酵母第三染色体全序列测定(315kb) 1994 第一批基因工程西红柿在美国上市。1996 完成了酵母基因组(1.25×107bp)全序列测定。1997 英国爱丁堡罗斯林研究所获得克隆羊。 2，如何理解PCR扩增仪的原理及过程？答：聚合酶连反应技术又称PCR技术（1）PCR的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。首先将双链DNA在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子，然后以单链DNA为模板，并利用反应物中的四种脱氧核苷酸合成新的DNA互补链。（2）PCR的基本过程：加入模板DNA，PCR引物，四种核苷酸，即适当浓度Mg，DNA聚合酶，经过; 1.变性（Denaturation）：将待扩增的DNA模板加热变性成两条单链； 2.退火（Annealing）：降低温度，使单链靶序列与寡核苷酸引物退火； 3.延伸（Extension）：在适当条件下，利用DNA聚合酶使引物延伸，产生新的双链。上述变性、退火、延伸步骤的重复循环，导致特异的靶序列的指数扩增。PCR产物是介于引物的5’端之间的双链DNA片段。3，简述定量PCR的原理和过程？答：（1）利用荧光测量的PCR仪对整个PCR过程中扩曾DNA的积累速力绘制动态变化图，从而消除了在测定终端产物丰度时有较大变异系数问题。（2）反应在带透明盖的塑料管中进行，激发光可以直接透过管盖，使其中的激发光被激发，荧光探针事先混合在PCR反应液中，只有与DNA结合后，才能被激发发出荧光，随着新合成目的DNA片段的增加，结合到DNA上得荧光探针，即被激发产生的荧光相应增加。最简单的DNA结合的荧光探针是非序列特异性的，一般探针不能区分不同的双链DNA，所以人们设计了能与目的DNA特异性结合的荧光探针，如TapMan探针（是一小段被设计成可以与靶DNA序列中间部位结合的单链DNA并且该单链DNA的3，端和5，端带有短波长和长波长两个不同荧光集团这两个荧光集团由于距离靠近，在荧光共振能量转移作用下会发生荧光粗灭因而检测不到荧光，随着PCR反应的进行

(完整版)分子生物学习题与答案

第0章绪论一、名词解释 1.分子生物学 2.单克隆抗体二、填空 1．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。三、是非题 1、20世纪60年代，Nirenberg建立了大肠杆菌无细胞蛋白合成体系。研究结果发现poly(U)指导了多聚苯丙氨酸的合成，poly(G)指导甘氨酸的合成。（×）四、简答题 1. 分子生物学的概念是什么？ 2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？ 3. 分子生物学研究内容有哪些方面？ 4. 分子生物学发展前景如何？ 5. 人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？ 6．简述分子生物学发展史中的三大理论发现和三大技术发明。 7. 简述分子生物学的发展历程。 8. 二十一世纪生物学的新热点及领域是什么？ 9. 21世纪是生命科学的世纪。20世纪后叶分子生物学的突破性成就，使生命科学在自然科学中的位置起了革命性的变化。试阐述分子生物学研究领域的三大基本原则，三大支撑学科和研究的三大主要领域？答案：一、名词解释 1.分子生物学：分子生物学就是研究生物大分子之间相互关系和作用的一门学科，而生物大分子主要是指基因和蛋白质两大类；分子生物学以遗传学、生物化学、细胞生物学等学科为基础，从分子水平上对生物体的多种生命现象进行研究。

2.单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。二、填空 1.结构分子生物学，基因表达与调控，DNA重组技术三、是非题四、简答题 1. 分子生物学的概念是什么？答案：有人把它定义得很广：从分子的形式来研究生物现象的学科。但是这个定义使分子生物学难以和生物化学区分开来。另一个定义要严格一些，因此更加有用：从分子水平来研究基因结构和功能。从分子角度来解释基因的结构和活性是本书的主要内容。 2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。狭义：偏重于核酸的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调节控制等过程，其中也涉及与这些过程有关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。这些生物大分子均具有较大的分子量，由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息，并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统，由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。 3. 分子生物学主要包含以下三部分研究内容：A.核酸的分子生物学，核酸的分子生物学研究核酸的结构及其功能。由于核酸的主要作用是携带和传递遗传信息，因此分子遗传学（moleculargenetics）是其主要组成部分。由于50年代以来

1996-2016年中科院610分子生物学考研真题及答案解析汇编

2017版中科院《610分子生物学》全套考研资料我们是布丁考研网中科院考研团队，是在读学长。我们亲身经历过中科院考研，录取后把自己当年考研时用过的资料重新整理，从本校的研招办拿到了最新的真题，同时新添加很多高参考价值的内部复习资料，保证资料的真实性，希望能帮助大家成功考入中科院。此外，我们还提供学长一对一个性化辅导服务，适合二战、在职、基础或本科不好的同学，可在短时间内快速把握重点和考点。有任何考中科院相关的疑问，也可以咨询我们，学长会提供免费的解答。更多信息，请关注布丁考研网。以下为本科目的资料清单（有实物图及预览，货真价实）：全套资料包括以下内容：一、中科院《610分子生物学》考研内部信息汇总 “备考篇”主要汇总了考中科院生物专业必备的一些信息，主要包括：历年复试分数线，本专业报考难度及竞争情况分析，根据历年真题的考察范围而归纳的考试大纲，学长对于政治、英语等公共课及本专业课的复习策略等。掌握初试必备的信息，才可安心复习。二、中科院《610分子生物学》历年考研真题及答案解析 2016年中科院《610分子生物学》考研真题（含答案解析）（后续免费更新）2015年中科院《610分子生物学》考研真题（含答案解析） 2013年中科院《610分子生物学》考研真题（含答案解析） 2012年中科院《610分子生物学》考研真题（含答案解析） 2010年中科院《610分子生物学》考研真题（含答案解析） 2007年中科院《610分子生物学》考研真题（含答案解析） 2006年中科院《610分子生物学》考研真题（含答案解析） 2002年中科院《610分子生物学》考研真题 2001年中科院《610分子生物学》考研真题 2000年中科院《610分子生物学》考研真题 1999年中科院《610分子生物学》考研真题 1998年中科院《610分子生物学》考研真题 1997年中科院《610分子生物学》考研真题 1996年中科院《610分子生物学》考研真题三、2017版精品复习笔记（高分版）教材的作用是学习知识点，但知识点分散性很大，而且无法区分重点、难点，不太适用于考试。为此，我们完全从考试的需求出发，对教材的章节重新进行了整理，将内容相关的章节合并，汇总为专题，并通过分析历年真题提取出考点、重点和难点，将知识点与考研真题融为一体，形成这一套精品的复习笔记。通过本笔记，可在短时间内快速抓住重点和考点，提升成绩显著。本笔记主要包括以下几个版块： 1、知识概要对本章内容所涵盖的知识点进行最为简单概括的总结，所有知识点一目了然。适用于初次复习本章节前知识点的快速了解，以及冲刺前的知识点回顾与检验。2、考点综述

2016年浙江省中国计量大学分子生物学考研真题

2016年浙江省中国计量大学分子生物学考研真题一、单项选择题（共30小题，每小题1分，共30 分） 1. 下列属于半自主细胞器的是。 A．内质网 B．线粒体 C．高尔基复合体 D．溶酶体 2. 下列氨基酸含有羟基的是。 A．甘氨酸 B．天冬氨酸 C．亮氨酸 D．苏氨酸 3. 下列属于原核DNA结合蛋白的是。 A．H2A B．H2B C．H1 D．Hu 4. 细胞中含量最低的RNA是。 A．mRNA B．tRNA C．rRNA D．以上均不对 5. 以下关于原核DNA聚合酶Ⅰ描述不正确的是。 A．该聚合酶含有2个结构域 B．该聚合酶具有3′至5′外切酶活性 C．该聚合酶不具有5′至3′外切酶活性 D．该聚合酶具有5′至3′聚合酶活性 6. 原核DNA复制中的引物酶是。 A．DnaG蛋白 B．DnaB蛋白 C．Tus蛋白 D．DnaA蛋白 7. 下列关于DNA转录描述错误的是。 A．DNA转录需要底物NTPs B．DNA转录方向是5′至3′ C．DNA转录中非模板链又称无意义链 D．第一个被转录的碱基通常是嘌呤 8. 下列不属于操纵子模型的DNA作用元件是。 A．启动子 B．增强子 C．操纵基因 D．结构基因 9. 下列真核转录因子DNA结合域不属于碱性亮氨酸拉链结构的是。A．Jun-Jun B．Jun-Fos C．C/EBP D．Fos-Fos 10. 真核DNA复制过程中最主要复制酶是。 A．DNA聚合酶δ B．DNA聚合酶β C．DNA聚合酶γ D．DNA聚合酶α 11. 核苷酸组成中不含有的成分是。 A．磷酸 B．脱氧核糖 C．含氮碱基 D．含硫碱基 12. 下列有关DNA变性描述错误的是。 A．DNA变性后黏度下降 B．DNA变性后紫外吸收值增高 C．DNA变性后浮力密度上升 D．DNA变性破坏了一级结构 13. 下列蛋白表达水平的变化检测方法采用。 A．Norhtern印迹 B．Southern印迹 C．Western印迹 D．原位杂交 14. 下列内切酶酶切DNA后形成平整末端的是。 A．EcoRI B．BamHI C．EcoRV D．PstI 15. 在蛋白翻译中，第一个被翻译的氨基酸是。 A．甲硫氨酸 B．苯丙氨酸 C．酪氨酸 D．色氨酸 16. 真核tRNA前体的转录是由实现的。

第五章-分子生物学常用技术-习题

2016年华南理工大学研究生入学考试专业课真题624_微生物学

. 624 华南理工大学 2016 年攻读硕士学位研究生入学考试试卷（试卷上做答无效，请在答题纸上做答，试后本卷必须与答题纸一同交回）科目名称：微生物学适用专业：生理学，微生物学，生物化学与分子生物学

A.葡萄糖发酵试验 B.乳糖发酵试验 C.甘露醇分解试验 D.胆汁溶菌试验四、简答题（60 分） 1.什么是鉴别性培养基？试以EMB 培养基为例，说明其鉴别作用的原理。（6 分） 2.试述连续培养富集微生物的原理。（6 分） 3.某学生在进行微生物试验时，用3 支肉汁斜面培养基接种大肠杆菌、枯草杆菌和谷氨酸棒杆菌，因疏忽贴错标签，培养后各菌生长良好，试用最简单的方法将其区分开来，并写出试验方案。（6 分） 4.什么是高密度培养？如何才能获得微生物的高密度培养？（6 分） 5.现拟从自然界中分离筛选高产α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌，试回答下列问题：（1）你认为应该到什么地方采集含此菌的土壤样品较为适宜？（2）进行纯种分离时，为提高效率，根据该菌的何种特性可采用哪些相应的措施？（3）可采用哪些纯种分离方法？（4）在进行性能测定时，可采用何种简化的初筛方法？（8 分） 6.谷氨酸棒杆菌天冬氨酸族氨基酸的生物合成途径是微生物代谢调控的典型实例。其中，赖氨酸Lys 与苏氨酸Thr 的生物合成之间存在着协同反馈抑制的调控机制。问解除Lys 与Thr 的协同反馈抑制机制，可以采取哪些菌株遗传改造措施？选择其一，说明其原理，并拟出试验方案。（10 分） 7.试用微生物基因调控的操纵子学说解释大肠杆菌的二次生长现象。（8 分） 8.试用速度概念描述分批培养过程中，单细胞微生物生长曲线各个阶段的动力学特征。（10 分）五、综合论述题（20 分）转录组学（transcriptome）是一门在基因组水平上研究细胞中基因转录表达及转录调控规律的学科。随着现代分子生物学技术的不断进步，先后出现了以下转录组学研究技术：（1）基因表达序列标签（EST）测序技术；（2）基因芯片技术；（3）基因表达系列分析技术（serial analysis of gene expression, SAGE）；（4）大规模平行测序技术（massively parallel signature sequencing, MPSS）；（5）数字基因表达谱（digital gene

分子生物学研究法

第五章分子生物学研究法（上）------DNA、RNA及蛋白质操作技术 1、哪些重要的科学发现和实验推动了DNA重组技术的生产和发展？三大成就：a、在20世纪40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题；b、50年代提出了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制，解决了基因的自我复制和世代交替问题；c、50年代末至60年代，相继提出了“中心法则”和操纵子学说，成功的破译了遗传密码，阐明了遗传信息的流动与表达机制。 2、如何理解PCR扩增的原理和过程？ PCR (Polymerase Chain Reaction) 是体外高效复制DNA的技术，该技术几乎贯穿于现在分子生物学的各个领域。PCR体系由模板，特异性引物，高温聚合酶，脱氧核糖核酸几部分组成。反应过程分模板高温变性（Denaturation），引物与模板低温退火（Annealing），引物在高温聚合酶的作用下延伸（Extention），在一定的条件下，退火和延伸可以合二为一。 3、简述定量PCR的原理和过程。原理：1;在含有插入性染料或特异性探针的体系中扩增目标序列. 2 光学系统激发并检测报告荧光 3 报告荧光的强度与所扩增DNA的量呈比例关系反应过程分模板高温变性（Denaturation），引物与模板低温退火（Annealing），引物在高温聚合酶的作用下延伸（Extention），在一定的条件下，退火和延伸可以合二为一。 4、基因组DNA文库和cDNA文库在构建原理和用途上的主要区别是什么？基因组DNA文库含有一种生物的全部基因，从基因组文库中获得的基因是完整的，cDNA文库含有一种生物的部分基因，cDNA本质就是外显子，基因组文库大，其中基因含有启动子和内含子，cDNA文库小，没有内含子和启动子 5、基因克隆的方法主要有哪几种？简述各种方法的原理和用途。 6、在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质相对分子质量的方法？电泳，核酸通过琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质通过SDS-PAGE 7、蛋白质组学的研究对象和目的是什么？主要有哪些技术和方法？ 8、SNP作为第三代遗传标记的优点是什么？ 9、基因分型的方法有哪些？简述其原理。 10、已知一个cDNA3'端的部分序列，请设计实验流程得到该基因的全长cDNA。

2016年武汉大学分子生物学885考研真题

2016年分子生物学真题简答 1 RNA editing是什么？作用机制是什么？ 2 简述大肠杆菌乳糖操纵子的作用机制？ 3 简述原核细胞转录终止机制？ 4 简述核酸霉保护踪迹法的实验原理？ 5 设计实验，研究特异性mRNA在细胞中的水平情况论述题 1 DNA复制过程中怎样保证精确性和完整性 2 设计实验，研究细胞内与蛋白质A结合的mRNA有哪些，实验方法和原理？ 3 蛋白质修饰，磷酸化，甲基化，乙酰化，糖基化，泛素化的作用位点和生物学意义？ 2015遗传名词解释 1.deletion mapping 2.aneuploid 3.transcriptome 4.founder effect 5.endosymbiont theory 这几个需要仔细注意，其他的都是考过的简答题 1.为什么说rh抗原重要，如何防止新生儿溶血症 2.区分核内遗传、核外遗传、母体影响 3.xxx xxy个体在胚胎期为什么不会死亡、会发育成什么性别 4杂种优势是什么，如何理解还有一题不记得了…应该也是考过计算和实验设计 1.正常叶E 缺刻叶e。一个正常但四号染色体三体的雌株和缺刻叶雄株杂jiao，第一问是如果E在四号染色体上，则F1中三体和缺刻叶父本回jiao，后代基因型表型比。第二问不太记得，类似于F1后代自jiao，正常和缺刻表型比为3:1，请问该基因在四号染色体上吗？ 2.就是亲本aGe/AgE和age/age测jiao，后代基因型比例，一问是无干涉，一问是有干涉，数据不记得了，但是书后面很多习题类似，做会就ok了。 3.一个群体不考虑选择漂变等等外界因素I(A)基因频率0.5。I(B)基因频率0.3 若为平衡群体，则该群体中ABO血型基因型频率如何（A 、B、AB、O） 4.设计克隆控制水稻分蘖基因的实验。具体细节不记得，主要是这句话。

常用的分子生物学基本技术

常用的分子生物学基本技术?核酸分子杂交技术 ?由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（ｐrｏbe),待测核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因组DＮA和细胞总RNＡ。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的,能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或ＲNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。? 固相杂交 ?固相杂交（soｌｉd－phase ｈｙbｒｉdizatｉon)是将变性的DNＡ固定于固体基质(硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上,再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。? 斑步杂交(dot hyｂrｉｄizａtｉoｎ）??是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或ＲNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单,事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品,可在同一张膜上同时进行多个样品的检测;根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量,而且特异性较差，有一定比例的假阳性。印迹杂交(blｏttｉng hybridizatioｎ） ?Southｅrn印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的ＤNA片段，将凝胶上的DＮA变性并在原位将单链ＤNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上,经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显色,检测特定大小分子的含量。可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析(ＲELP)等。 ?Ｎortｈeｒn印迹杂交:由Southeｒm印杂交法演变而来，其被测样品是RNA。经甲醛或聚乙二醛变性及电泳分离后,转移到固相支持物上，进行杂交反应,以鉴定基中特定mRＮＡ分子的量与大小。该法是研究基因表达常用的方法,可推臬出癌基因的表达程度。? 差异杂交(differential hybridｉzatｉon) ?是将基因组文库的重组噬菌体DNA转移至硝酸纤维素膜上,用两种混合的不同ｃDNA探针(如:转移性和非转移性癌组织的mRNＡ逆转录后的ｃDNA)分别与滤膜上的DNA杂交，分析两张滤膜上对应位置杂交信息以分离差异表达的基因。适用于基因组不太复杂的真核生物（如酵母）表达基因的比较，假阳性率较低。但对基因组非常复杂的盐酸核生物(如人),则因工作量太大,表达的序列所占百分比较低（仅5％左右),价值不大。 ?cDＮA微点隈杂交（cDＮＡmiｃroａｒray hybriｄizａtion）? 是指将cDNA克隆或cDNA的ＰCR产物以高度的列阵形式排布并结合于固相支持物上(如:尼龙膜或活化的载玻片)以微点阵,然后用混合的不同DNＡ探针与微点阵上的DNA进行杂交。再利用荧光、化学发光、共聚焦显微镜等技术扫描微点阵上的杂交信息。它比差异杂交技术的效率高、速度快、成本低，适用于大规模的分析。已成商品问世。其缺点是无法克服保守的同源序列及重序对杂交信息的干扰。??寡核苷酸微点隈杂交(oligonucleotｉｄｅmicｒoarraｙhybridizatiｏn)? 是在特殊的固相支持物上原位合成寡核苷酸,使它共价结合于支持物表面，与平均长度为20-50nt的混合RNA或cDNA探针进行杂交，以提高杂交的特异性和灵敏度。应用共聚焦显微镜可检测跨越三个数量级的杂交信息。适用于低丰度mRNA的检测,以区分基因家族不同成员的差异表达特征，或鉴定同一转录在不同组织和细胞中的选择性剪接。但有工作量较大、

2016年武汉科技大学考研真题616分子生物学(B卷答案)

第 1 页共 5 页姓名：报考专业：准考证号码：密封线内不要写题2016年攻读硕士学位研究生入学考试试题科目名称：分子生物学（□A 卷■B 卷）科目代码：616考试时间：3小时满分150分可使用的常用工具：√无 □计算器 □直尺 □圆规（请在使用工具前打√）注意：所有答题内容必须写在答题纸上，写在试题或草稿纸上的一律无效；考完后试题随答题纸交回。一、名词翻译并解释题(共5小题，每小题4分，共20分)1、transcription factor ：转录因子（1分）。指真核细胞中，能够结合在某基因上游特异核苷酸序列上的蛋白质，这些蛋白质能直接或间接结合RNA 聚合酶进而调控该基因的转录（3分）。2、gene expression ：基因表达（1分）。细胞在生命过程中，把储存在DNA 顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的RNA 或蛋白质分子。（3分）。3、0pen reading frame ：开放阅读框（1分）。从mRNA 5-端起始密码子AUG 到3-端终止密码子之间的核苷酸序列，称为开放阅读框架（3分）。4、oncogene ：癌基因（1分）。一类会引起细胞癌变的基因。其实，原癌基因有其正常的生物学功能，主要是刺激细胞正常的生长，以满足细胞更新的要求。只是当原癌基因发生突变后，才会在没有接收到生长信号的情况下仍然不断地促使细胞生长或使细胞免于死亡，最后导致细胞癌变。（3分）。5、repression ：阻遏（1分）。基因对环境信号应答时被抑制，这种基因是可阻遏基因(repressible gene)。可阻遏基因表达产物水平降低的过程称为阻遏（3分）。刘A学长1104405515，致力于考研真题、答案、笔记、考研信息咨询辅导

分子生物学第五章分子生物学研究法(上)

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