饲料卫生标准饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允许量

（GB 13078.2-2006）

1 范围

本标准规定了饲料中玉米赤霉烯酮（ZEN）和赭曲霉毒素A(OA)的允许量。

本标准适用于配合饲料和玉米。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 19539 饲料中赭曲霉毒素A的测定

GB/T 19540 饲料中玉米赤霉烯酮的测定

3 允许量

赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允许量表1

项目适用范围允许量/（ug/kg）

赭曲霉烯酮配合饲料、玉米≤100

玉米赤霉烯酮配合饲料、玉米≤500

4 检验方法

饲料中曲赭霉毒素A检验方法按GB/T 19539的测定方法的规定执行。

饲料中玉米赤霉烯酮检验方法按GB/T 19540的测定方法的规定执行。

赭曲霉毒素A标准检测规程

赭曲霉毒素A标准操作规程 1、目的为了规范亲和柱净化样本中赭曲霉毒素A的操作流程，特制订本操作规程。 2、范围本标准适用于粮食、饲料、食品中赭曲霉毒素A的检测。 3、检出限和定量限项目岛津安捷伦样本检出限（μg/kg）样本定量限（μg/kg）样本检出限（μg/kg）样本定量限（μg/kg） OTA 0.28 0.84 3.6 11.9 4、职责部门名称部门职责质量管理部1、负责本制度的实施。 2、负责本制度的监督执行。 5、程序 5.1 原理测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过赭曲霉毒素A免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用2%乙酸甲醇洗脱赭曲霉毒素A，然后注入到高效液相色谱仪中用于检测。 5.2 溶液配制 5.2.1 提取液Ⅰ（用于粮食类样品及酱油、醋类样品的提取）：80%甲醇-水溶液（V甲醇: V水=80 : 20）：取800mL甲醇，加入去离子水定容至1L。 5.2.2 提取液Ⅱ（用于酒类样品的提取）：称取150g氯化钠、20g碳酸氢钠溶于约950mL 水中，加水定容至1L。 5.2.3 清洗缓冲液（用于酱油、醋类样品净化步骤的洗涤）：称取12.5g 氯化钠、2.5g 碳酸氢钠溶于水中，加0.1mL吐温-20，用水定容至1L。 5.2.4 冲洗液（用于酒类样品净化步骤的洗涤）：称取25g 氯化钠、5g碳酸氢钠于约 950mL水中，加水定容至1L。

5.2.5 洗脱液（甲醇: 乙酸=49 : 1）：取1ml乙酸加入到49ml甲醇中混匀即可。 5.2.6 赭曲霉毒素A标准工作液：用色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到20 ng/ml、10 ng/ml、5ng/ml、2 ng/ml、1 ng/ml。 5.3 样品前处理 5.3.1 粮食类 ----20g±0.01g样品（固体样品需粉碎，并过2mm分样筛），5g氯化钠于三角瓶中，加入100mL的提取液Ⅰ（见5.2.1）； ----高速均质（≥10,000r/min）1min（或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min）；----用快速定性滤纸过滤，收集滤液； ----取10mL滤液加入40mL去离子水稀释，混匀； ----用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液； ----取25mL上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：1 5.3.2 酒类 ----取脱气的酒类样品（含二氧化碳的酒类样品，使用前先搅拌或超声脱气）或不含二氧化碳的酒类样品20g±0.01g，加入提取液Ⅱ（见5.2.2）定容至25mL； ----高速均质（≥10,000r/min）1min（或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min）；----用微纤维滤纸过滤至滤液澄清，并收集滤液作为上样液； ----取1mL上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：1.25 5.2.3 酱油、醋类样品 ----取样品25g±0.01g，加入提取液Ⅰ（见5.2.1）定容至50mL； ----高速均质（≥10,000r/min）1min（或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min）；----用快速定性滤纸过滤，收集滤液； ----移取10mL滤液用水定容至50mL； ----用微纤维滤纸过滤至滤液澄清，并收集滤液作为上样液； ----取25mL上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：0.4 5.4 净化 5.4.1 上样 ----取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上；(3mL的免疫亲和柱去

玉米赤霉烯酮定量检测卡说明书

玉米赤霉烯酮荧光定量检测卡 ——检测使用说明书【产品简介】玉米赤霉烯酮（ZEN）具有雌激素作用，主要作用于生殖系统，可使家畜，家禽和实验小鼠产生雌性激素亢进症。妊娠期的动物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产、死胎和畸胎。食用含赤霉病麦面粉制作的各种面食也可引起中枢神经系统的中毒症状，如恶心、发冷、头痛、神智抑郁和共济失调等。【检测范围】谷物粮食、饲料等【产品组成】 1、玉米赤霉烯酮检测卡（内附干燥剂） 2、10X样本稀释液 50ml/瓶 1瓶 3、使用说明书 1份∕盒【样本处理】样本稀释液配制：用去离子水将10X样本稀释液按1 : 9体积比进行稀释，即1份10X 样本稀释液加9份去离子水。样本提取液配制：70%（体积分数）甲醇溶液。取有代表性的样品500g，用粉碎机粉碎至全部通过20目筛，混匀。准确称取10．0g均匀粉碎后的样品（或者量取10ml液态样品）于50ml离心管中，再准确加入30ml样本提取液，将离心管盖盖紧密封，用漩涡振荡器振荡1min～2min，静置或于4000rpm 离心2min，得上清液（若样品为食用油取下层液）；将上清液（或者下层液）用移液器吸出100ul,于1.5ml离心管中，再加入900ul的样本稀释液混匀，待检。如样品为小麦，需将稀释后的混合提取液用针头式滤器过滤，即为待测溶液。【操作步骤】 1、使用前请仔细阅读本产品说明书以及荧光免疫层析检测仪操作说明。 2、打开荧光免疫层析检测仪，在主界面点击“系统设置”“检测项目管理”后选择要检测的产品名称，进入待检状态。 3、将检测卡和荧光微孔、样本稀释液恢复至室温。 4、用移液器准确吸取80ul待检样本，（取样时注意不要吸入气泡）垂直缓慢滴加于检测卡加样孔（S）中，加样后开始计时，加样后10分钟读取结果。 6、将检测试剂卡插入荧光免疫层析检测仪的承载器中，按快捷测试键，仪器将自动对测试卡进行扫描，从免疫层析检测仪的显示屏幕上读取/打印检测结果。【阳性判断值或者参考区间】阳性判断值：≥60ng/ml。注：建议各实验室根据实际情况，建立自己的参考范围。【产品性能指标】 1.准确度：回收率应在（80%～110%）区间内或相对偏差在±15%区间内。 2.线性范围：〔30～300〕ng/ml，线性相关系数r值应不小于0.990。 3.重复性：变异系数CV(%)值应≤15%。【注意事项】 1、检测前请先完整阅读使用说明书，将检测卡、待检样品恢复至室温。 2、从铝箔袋中取出检测卡，请在1小时内使用。 3、请严格按照操作步骤操作，操作时请勿触摸检测卡显示区。 4、本品为一次性产品，请勿重复使用，过期产品请勿使用。 5、跑条10 min后，请于1分钟内进行读数，时间过长将可能导致结果的不准。 6、检测结果如超出线性范围，可用样品提取液稀释5倍后再次检测，检测结果乘以5倍即为样品的残留浓度。 7、本试剂为筛选试剂，若检测结果显示为阳性，请用其他方法（如GC-MS）复核确证。 8、严格按照使用说明书操作，并在说明书要求的时间内读取结果。 9、使用本试剂过程中的任何问题及建议，请与生产厂商联系。【储存及有效期】原包装于4—8℃阴凉避光干燥处储存，切忌冷冻；有效期12个月，生产日期及批号见外包装。

玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用_董双_何剑斌_张燚_龙淼

董双，何剑斌，张燚，等．玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用．［J］．畜牧与兽医，2016，48（6）：25－29 Dong S，He J B，Long M，et al．Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice［J］．Animal Husbandry＆Veterinary Medicine，2016，48（6）：25－29 玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用董双，何剑斌*，张燚，龙淼* （沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110866）摘要：为探讨玉米赤霉烯酮（ZEA）对雄性生殖系统的毒性作用，本试验选取清洁级昆明系雄性小鼠93只，随机分成5组：25mg/kg、50mg/ kg、75mg/kg ZEA处理组、溶剂对照组（DMSO）、空白对照组（生理盐水），进行腹腔注射染毒，每天1次，连续5d，于末次染毒后第2天摘眼球采血并脱颈处死动物，分离睾丸和附睾，测定脏器系数、精子密度和活力，睾丸酶的活力水平以及血清睾酮和雌激素的浓度。结果显示，与对照组相比，玉米赤霉烯酮显著地降低小鼠的体重和精液品质，睾丸乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）的活力随着染毒剂量的增加显著升高（P＜0.01，P＜0.05），血清睾酮和雌激素浓度随染毒剂量的增加显著下降（P＜0.01，P＜0.05）。该结果提示，玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统具有严重的损伤作用，影响生精功能。关键词：玉米赤霉烯酮；睾丸；附睾；精液品质中图分类号：S856.9文献标志码：A文章编号：0529－5130（2016）06－0025－05 Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice DONG Shuang，HE Jian－bin，LONG Miao，ZHANG Yi （College of Animal Science and Veterinary Medicine，Shenyang Agricultural University，Shenyang110866，China） Abstract：To examine toxic effects of zearalenone（ZEA）on male reproductive system，93clean grade adult male Kunming mice were ran-domly divided into5groups and exposed to intraperitoneal injection of ZEA at25，50and75mg/kg body weight，DMSO and normal saline solution，respectively for5days．The mice were sacrified at the6th day after eyeball blood sampling．The testis and epididymis viscera inde-xes，semen quality，testis enzyme activity and serum concentrations of testosterone and estrogen were assessed．The results showed that com-pared with the control group，ZEA significantly decreased the body weight，semen quality，increased the testis enzyme activity and decreased serum concentrations of testosterone and estrogen（P＜0.01，P＜0.05）．In conclusion，ZEA can hurt male reproductive system and affect the spermatogenic function． Key words：zearalenone；testis；epididymis；semen quality；testosterone 玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA）是由镰刀菌属的霉菌，如黄色镰孢霉、禾谷镰孢霉、轮枝镰孢霉产生的类雌激素作用的次级代谢产物，是一种大环β－二羟基苯甲酸内酯类［1－2］。这种霉菌毒素存在于各类农作物中，如收割前后的小麦、大麦、玉米、高粱等，以及农产品加工阶段，进而污染世界范围内的人类食物和动物饲料，给全球带来巨大的经济损失。ZEA不仅具有肝肾毒性、遗传毒性、免疫毒性，还收稿日期：2015－06－30 基金项目：中国博士后科研基金项目（2014M551125）；国家自然科学基金项目（31201961、31302152）作者简介：董双（1989－），女，硕士生，研究方向：临床兽医学*通信作者：何剑斌（1969－），男，硕士生导师，教授，研究方向：临床兽医学，E－mail：hejianbin69@https://www.360docs.net/doc/263218185.html,；龙淼（1978－），男，讲师，博士，研究方向：动物营养代谢病及中毒病，E－mail：longjlau@https://www.360docs.net/doc/263218185.html, 由于其能够与17β－雌二醇竞争性结合雌激素受体（EＲ），具有雌激素效应，干扰机体的内分泌系统，产生生殖毒性，进而影响动物的正常生理活动，引起靶器官、靶组织甚至机体的多个系统发生病变［3－5］，对人类和动物的健康危害极大。 ZEA作为一种外源性内分泌干扰物，其生殖毒性是当今科研领域的一大研究热点。有研究显示，ZEA对机体的生殖系统损害极大［6］。研究表明玉米赤霉烯酮呈剂量依赖性方式诱导猪卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡和细胞坏死，从而减少细胞的增殖［7］，还能够引起断奶仔猪发生氧化损伤和炎症反应［8］，并且玉米赤霉烯酮还使断奶雌鼠的初情期提前，并干扰雌鼠的早期妊娠［9］。ZEA不仅影响雌性动物的繁殖机能，还损害雄性动物的生殖系统，能够引起大鼠的睾丸萎缩，并诱导生精细胞发生凋亡［10］，睾丸间质

赭曲霉毒素(ochratoxin)

赭曲霉毒素(ochratoxin) 是由曲霉属和青霉属产生的一组真菌代谢产物，包括赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B、赭曲霉毒素 c 和赭曲霉毒素D。其中赭曲霉毒素 A 是已知毒性最强的，可由赭曲霉、洋葱曲霉、鲜绿青霉、圆弧青霉、变幻青霉等产生。赭曲霉毒素 A 耐热，在正常烹调条件下不能被破坏，微溶于水，在紫外光照射下可产生微绿色荧光。该毒素相当稳定，溶于乙醇后在冰箱内避光可保存 1 年。1．产毒条件及对食品的污染赭曲霉毒素A 在30℃和水分活性(供微生物利用的水分，water activity，aW0．95 条件下生成量最多，但不同的菌种产毒条件也有一定差异。例如家禽饲料温度为30℃的条件下，赭曲霉产生赭曲霉毒素 A 的最低aW0．85；而在24℃条件下，最适aW 为0．99。而圆弧青霉产生赭曲霉毒素A 的最适温度为12—37℃，aW 为0．95～0．99。赭曲霉毒素主要污染玉米、大豆、可可豆、大麦、柠檬类水果，腌制的火腿、花生、咖啡豆等。赭曲霉在天然食物基质、合成或半合成的培养基中都能产生毒素，将产毒强的赭曲霉菌株在碎麦粒上培养，可产生大量的赭曲霉毒素A，而用含有4％蔗糖和20％酵母浸膏的半合成培养基培养赭曲霉也可产生赭曲霉毒素A。食品受赭曲霉污染后，主要检出的是赭曲霉毒素A。美国最先从玉米中检出赭曲霉毒素A，含量为110～1501μg／kg；其后各国在小麦、大麦、发霉饲料、干豆和咖啡豆中也先后检出了赭曲霉毒素A。我国部分省市进行调查的结果表明，谷类食品赭曲霉毒素 A 的污染不太普遍，污染率分别为小麦2％、玉米1．25％，而在大米中未检出。我国除个别样品中赭曲霉毒素 A 含量超过了某些国家制定的限量标准外，大部分阳性样品中赭曲霉毒素 A 的含量较低。2．赭曲霉毒素A 的毒性赭曲霉毒素A 的急性毒性很强，大鼠经口LD50 为20～22mg／kg。动物中毒的靶器官主要为肾脏和肝脏，可见到肾曲管上皮细胞萎缩、间质细胞纤维化及肾小球透明变性等；肝脏可见脂肪变性及肝细胞透明样变、点状坏死及灶性坏死等。大鼠和仓鼠试验发现赭曲霉毒素还有胚胎毒性和致畸陛，如吸收胎增加、胎仔发育迟缓或者脑积水、额小及心脏缺损等。有报道给猴染毒赭曲霉毒素 A 后可诱导肾细胞的异常分裂，提示其有致突变的可能。一些动物试验还显示赭曲

玉米赤霉烯酮毒素研究进展与防控

３６饲料安全及品质控制２０１７，Ｎｏ．１２收稿日期：２０１７-０８-２２；修回日期：２０１７-１０-２８作者简介：田淑丽（１９８１-），女，研究方向为预混料中营养物质及有害物质检测。通讯作者：李维（１９８２-），男，工程师，研究方向为饲料的质量安全管理。ｄｏｉ：１０．７６３３／j ．issn ．１００３-６２０２．２０１７．１２．０１０玉米赤霉烯酮毒素研究进展与防控田淑丽１，李维２（１．中粮（北京）饲料科技有限公司，北京１０１３９９；２．中粮饲料有限公司，北京１０００２９）摘要：玉米赤霉烯酮对生物体具有很强的生殖毒性和致畸作用，广泛存在于霉变的玉米、高粱、小麦等谷类作物中，家畜通过采食被污染的饲料会导致中毒，免疫功能受到抑制，生产性能降低，给畜牧业造成很大的经济损失。霉菌毒素的污染不仅给动物带来危害，而且会通过食物链直接或间接传入人体，对人类健康造成了潜在的威胁。综述了玉米赤霉烯酮的理化性质，动物中毒表现和检测防控办法，以期为饲料业和畜牧业工作者提供借鉴，最大可能的降低玉米赤霉烯酮所造成的经济损失，进而降低对人类健康的危害。关键词：玉米赤霉烯酮；饲料；防控；危害中图分类号：S ８１６．４，S ８５９．８１文献标志码：A 文章编号：１００３－６２０２（２０１７）１２－００３６－０５Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅｔｏｘｉｎ TIAN Shu -li １，LI Wei ２（１．China （Beijing ）Feed Technology Co ．，Ltd ．，Beijing １０１３９９，China ；２．COFCO Feed Company ，Beijing １０００２９，China ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Zearalenone has strong reproductive toxicity and teratogenic effect on biological organism ，and widely exists in the moldy cereals ，such as corn ，sorghum and wheat ．Livestock can be poisoned through the contaminated feedstuff ，and its immunity can be restrained ，the production performance could be reduced ，which can cause a lot of economic damage to animal husbandry ．Mycotoxin pollution not only has harmful influence on animals ，but also directly or indirectly enter the human body through the food chain ．It causes a potential threat to human health ．We summarized the physical and chemical properties of zearalenone ，animal poisoning symptoms and the prevention ，so as to provide reference for feedstuff industry and animal husbandry workers ，and to mostly reduce economic losses caused by zearalenone ，and the harm to human health ．ＫＥＹＷＯＲＤＳ：zearalenone ；feed ；p revention ；hazard 霉菌毒素是某些霉菌产生的有毒次级代谢产物，普遍存在于粮食中，引发霉变及营养价值降低，在谷物田间生长、收获、加工、仓储及运输过程皆可产生。国际粮农组织预测，全球２５％的粮食作物，包括许多基本食物，会受到霉菌产生的霉菌毒素的影响［１］。粮食及其加工副产品作为饲料原料进入养殖业，又会给畜牧业造成巨大的经济损失。家畜采食含有霉菌毒素的饲料后可发生中毒，造成家畜群发病，使动物体生长缓慢、繁殖障碍和免疫力低下，诱发多种疾病，动物生产性能下降，甚至导致动物死亡。近年来，动物饲料中霉菌毒素污染程度及范围日趋明显，霉菌毒素污染已成为影响养殖业和饲料业发展的重要因素之一。人类也会通过食物链被霉菌毒素影响，造成新的食品安全问题。目前已鉴定出来的霉菌毒素有３００多种［２］，目前研究较多的主要有６种：黄曲霉毒素B １、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮毒素、呕吐毒素、T -２毒素及伏马毒素［３］。玉米赤霉烯酮毒素（zearalenone ，以下简称ZEN ），是霉菌毒素的一种。ZEN 有区别其他毒素的显著特点，目前ZEN 的污染状况和对动物的危害程度备受国内外科研工作者的关注。联合国粮农组织和世界卫生组织早在２００２年就已经将解决ZEN 问题作为全世界的当务之急，因此研究ZEN 具有重要的意义。目前动物ZEN 中毒尚无特效药治疗，主要防控中毒的手段在于对饲料中ZEN 的检测以控制接收或者退货来避免动物中毒。ZEN 的检测较复杂，商业实验室一般都采取液相或液质色谱的方法进行测定，对仪器的要求高，不适合养殖场及饲料厂等基层企业的检测工作。因而研发新型简易、快速、准确的检测方法是进行饲料中ZEN 控制的一项重要研究方向。万方数据

玉米及玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案

玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案 --10min快速定量一、玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN污染情况玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是由镰刀菌产生的一种霉菌毒素，属于二羟基苯甲酸内酯类化合物，具有雌激素活性，分子式为C18H2205，相对分子量318.4。玉米赤霉烯酮ZEN主要污染玉米、小麦、大米、棉籽等粮谷作物，可引起动物和人的雌激素过多综合征，还具有生殖毒性、免疫毒性、基因毒性及可疑致癌性等。 2003年止，根据世界粮农组织公布已有19个国家制定了食物中玉米赤霉烯酮ZENDE 限量标准，欧盟规定精炼玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN不得超过200μg/kg。中国标准规定，玉米、小麦及其制品中玉米赤霉烯酮ZEN不得超过60μg/kg，但没有规定植物油中玉米赤霉烯酮的限量标准。但农作物特别是玉米种的玉米赤霉烯酮ZEN检出率很高，而植物油均是以这些农作物为基本原料，因此非常有必要对玉米及玉米油中的玉米赤霉烯酮ZEN进行检测与控制。二、玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN国家残留限量标准食品类别限量标准（μg/kg）玉米、玉米面（渣、片） 60 大麦、小麦、麦片、小麦粉（面粉） 60 引自：《GB 2761-2011 食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》三、飞测生物玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案--10min快速定量上海飞测生物基于全球领先的荧光定量POCT技术平台，在国内率先推出了玉米赤霉烯酮荧光定量检测试纸条，本产品可在10min快速定量的检测出玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮的残留含量，样品前处理简单（仅需8min），检测操作简便，采用荧光免疫定量分析仪读数，结果准确可靠且可现场打印，准确性符合HPLC法的检测结果，适用于各类玉米及玉米油加工企业及检测机构。

玉米赤霉烯酮ELISA说明书

玉米赤霉烯酮ELISA快速检测试剂盒操作说明书 1、简介本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附ELISA原理快速定量检测谷物、饲料中的玉米赤霉烯酮（ZearaLenone,ZEN）。谷物/饲料的前处理包括：提取、过滤、稀释，处理时间大约为20-40分钟。本试剂盒的检测限为：10 ppb；谷物/饲料中ZEN的回收率≥80%；批内、批间变异系数<15% 。 2、试剂盒组成 A. 24/48/96孔ZEN酶标板: 3/6/12条×8孔 B. 20×浓缩洗涤液：25mL (用蒸馏水稀释20倍使用) 1瓶 C. ZEN抗体: 3/6/12mL 1瓶(红盖) D. 酶标二抗：3/6/12 mL 1瓶(绿盖) E. 显色液：3/6/12 mL 1瓶(蓝盖) F. 终止液:3/6 mL 1瓶(黄盖) G. ZEN标准品:1.5/2mL/瓶（0、30、60、200、500ppb）各1瓶 H. 操作说明书1份注意：标准品含有低浓度ZEN、终止液含2 N H2SO4，需小心取用；勿在有效期外使用本试剂盒。 3、贮存条件与有效期 2-8℃避光贮存，忌0℃以下冻存，有效期见试剂盒内盖。 4、样品处理程序 ●实验准备：配制60%甲醇水溶液（v/v，60:40）和20%甲醇水溶液（v/v，20:80）。注意：请精确配制上述溶液，以免影响检测的准确性。 ●称取5 g 具有代表性的粉碎样品于100 mL带塞三角瓶内，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液。 ●将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡3分钟后，用 whatman 1号滤纸过滤，收集滤液。 ●取滤液2mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。注意：某些样品待检液(如花生等)久置影响检测结果的准确性，为保证检测的准确性，样品

玉米赤霉烯酮的毒性

玉米赤霉烯酮的毒性雷灼贵（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州510640）摘要：真菌毒素广泛存在于世界各地的谷物及其副产物当中。玉米赤霉烯酮(Zearalenone, 简称为ZEN) 作为镰刀霉毒素的代表,是一种具强烈致畸作用的生殖系统毒素,对肝脏肾脏均有强烈毒害作用，也是影响食物安全的重要因素之一。主要对玉米赤霉烯酮的毒素来源、中毒机理、中毒表现以及防治措施进行论述，其中重点对中毒机理进行综述。关键词：玉米赤霉烯酮；毒性；雌激素；中毒机理 The toxicity of zearalenone LEI Zhuogui (School of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology， Guangzhou 510640, Gaungdong, China) Abstract：Mycotoxin widely exist in the grain and its by-products all over the world. Zearalenone(ZEN), as the representative of the fusarium toxin, is a teratogenic, mutagenic and carcinogenic mycotoxin, is strong toxic effect on kidney and liver and is also one of the important factors that affect food safety. This pape mainly elaborates the sources, poisoning mechanism, poisoning manifestations as well as the prevention and control measures of Zearalenone, besides,the poisoning mechanism were especially discussed. Key words：zearalenone；toxicity；estrogen；mechanism of toxication 引言食品安全已成为世界各国普遍关注的焦点问题,它不仅涉及到贸易壁垒中的技术问题,而且涉及到从农场到餐桌的食物链安全保障问题。生物毒素是食源中较为广泛的危害之一,真菌毒素作为影响食品安全的一大类生物毒素,成为科技攻关的核心问题。玉米赤霉烯酮作为世界上污染粮食最广泛的真菌毒素之一，在谷物以及农副产品中都可检测到ZEN的存在[1]。ZEN作为镰刀霉毒素的代表,不仅影响食物安全，而且通过食物链在人或动物体内富集，危害机体。ZEN不仅可直接污染谷类等作物,进而进入人或动物体内,还可通过被污染的肉、奶等动物性食品进入人体,危害人和动物的健康,造成巨大的经济损失。同时，ZEN本身具有分布广、繁殖快、耐热、代谢产物多、毒性大、残留时间长、难处理等问题,正在引起全世界的关注。因此，对玉米赤霉烯酮毒性的研究具有重要的意义。

赭曲霉毒素检测卡说明书(完整版)

赭曲霉毒素快速检测卡【产品简介】赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)是由曲霉属和青霉属产生的有毒代谢产物，具有强烈的肾脏毒性和肝脏毒性，并有致畸、致突变和致癌作用。赭曲霉毒素A胶体金快速检测卡基于胶体金免疫层析技术，采用竞争反应原理检测赭曲霉毒素A，样品中的OTA毒素与固定于NC膜上的OTA毒素- BSA偶联物共同竞争抗OTA毒素单克隆抗体的胶体金探针，根据不同的竞争作用而显示的颜色判读结果。【检测原理】测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过赭曲霉毒素A 免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱赭曲霉毒素 A，然后注入到分析仪器中用于检测。【产品规格】规格：40 份/盒 4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。 5．5-10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。【操作步骤】 1、取出所需试纸卡，多余试纸卡放在干燥避光处保存； 2、用移液器取待检样品液100UL（或用滴管取 3、4滴）滴入样品孔中； 3、5-10分钟开始观察结果，30分钟后结果无效。

【结果判断】 1、阴性（－）：T线（检测线）与C线（对照线）都显色，检测结果为阴性，说明样品中赭曲霉毒素A的含量低于10ppb。 2、阳性（＋）：C线（对照线）出线，T线（检测线）不显色，说明样品中赭曲霉毒素A的含量高于或等于10ppb。 3、无效：未出现C线，表示操作不正确或测试板已变质失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的测试板重新试验。【注意事项】 1、在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。 2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面；请勿使用过期的检测卡；【特异性】本产品与粮油中玉米赤霉烯酮、伏马毒素、呕吐毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇没有交叉反应。【贮存条件及有效期】储存于2-30℃阴凉避光干燥处，切勿冷冻；有效期18个月。

玉米赤霉烯酮毒素标准检测规程

玉米赤霉烯酮标准操作规程 1、目的为了规范亲和柱净化样本中玉米赤霉烯酮的操作流程，特制订本操作规程。 2、范围本标准适用于粮食、饲料、食品中玉米赤霉烯酮的检测。 3、检出限和定量限项目岛津安捷伦样本检出限（μg/kg）样本定量限（μg/kg）样本检出限（μg/kg）样本定量限（μg/kg） ZEN 2.96 8.96 75.9 253.2 4、职责部门名称部门职责质量管理部1、负责本制度的实施。 2、负责本制度的监督执行。 5、程序 5.1 原理测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱玉米赤霉烯酮，然后注入到高效液相色谱仪中用于检测。 5.2 溶液配制 5.2.1 提取液：80%乙腈 ----用量筒移取800mL 乙腈，加入超纯水定容至至1L。 5.2.2 稀释液：0.01M PBST 溶液 ----称取8g NaCl、0.2g KCl、0.2g KH2PO4和1.16g Na2HPO4.12H2O，加入800mL 超纯水溶解，加入2mL Tween-20，定容至1L。 5.2.3 玉米赤霉烯酮标准工作液：用色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到1000 ng/ml、 500 ng/ml、200ng/ml、100 ng/ml、50 ng/ml。

5.3 样品前处理 ----20g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛）加入100mL 提取液（80%乙腈-水溶液）混匀； ----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液； ----取10mL 滤液加入40mL 稀释液稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液； ----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：1 5.4 净化 ----取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上；(3mL 的免疫亲和柱去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与注射器固定后使用) ----将柱子与气控操作架上的注射器连接固定，取适量处理后的溶液上样； ----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以1～2 滴/秒速度流出； ----待液体排干后，用10mL 去离子水洗涤2 次，流速2～3 滴/秒； ----待液体排干后，上样1mL 甲醇，流速1 滴/秒，收集洗脱液并定容至1mL； ----洗脱液用0.22μm 微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。 * 每次上样前都要将上次液体完全排干。 * 谷物样本也适用于GB/T 5009.209-2008 5.5 液相测定 5.5.1 液相色谱条件 C18柱：250mm（长）×4.6mm（直径），填料粒径5μm；流动相：60%乙腈流速：1.0 mL/min；柱温：40℃；进样体积：20μL 荧光检测器：激发波长：274nm 发射波长：440nm 5.5.2 色谱定量分别取相同体积样液和标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试

赭曲霉毒素免疫亲和柱操作说明书

百奥思科赭曲霉毒素A免疫亲和柱操作说明书【概要】赭曲霉毒素A （Ochratoxin A）是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物，属烈性的肾脏毒和肝脏毒，广泛存在于各种食物中，谷物及其副产品是赭曲霉毒素A的主要来源。动物实验表明摄入了被这种毒素污染的饲料后，会发生急性或慢性中毒症。防止污染赭曲霉毒素A的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链，加强对赭曲霉毒素A的检测十分重要。【适用范围及性能】本公司真菌毒素免疫柱系列产品测试形式是一个高性能的免疫亲和柱，设计用于在进行HPLC（高效液相色谱法）、GC-MS（气相色谱-质谱联用仪）、ELISA（酶联免疫吸附剂测定）之前清理（净化）或浓缩样本。用于定性、定量检测谷物、酒类等食品和饲料等样本中的赭曲霉毒素A时的样品前处理。柱容量：≥200ng 回收率：≥90% 【试验原理】本产品的测定的基础是抗原抗体反应，赭曲霉毒素A单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的赭曲霉毒素A经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过赭曲霉毒素A 免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，赭曲霉毒素A与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱赭曲霉毒素A，然后注入到分析仪器中用于检测。【包装组成】 25支/盒，3mL柱管/支产品说明书1份【需要而未提供的设备及试剂】设备： ┅┅高速均质器或组织匀浆机 ┅┅粉碎机 ┅┅200ml/50ml量筒┅┅天平：感量0.1g ┅┅微量移液器：单道100μl～1000μl ┅┅槽纹滤纸（折叠快速定性或定量滤纸） ┅┅玻璃微纤维滤纸（1.5μm孔径） ┅┅50ml漏斗 ┅┅一次性玻璃试管 ┅┅泵流操作架（包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等）试剂： ┅┅甲醇（色谱级） ┅┅蒸馏水或去离子水 ┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液（PBS缓冲液）：称取8.0g氯化钠， 1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用 990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL ┅┅清洗缓冲液：25g 氯化钠+5g碳酸氢钠+0.1mL吐温-20 用纯水稀释至1000 mL 【试剂配制】样品提取液：配制甲醇-水（8：2）溶液作为样品提取液【样本处理步骤】（一）花生，玉米，大米，小麦及其制品和饲料 ┅┅称取20g粉碎的样品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯化钠，以甲醇-水（8：2）溶液定容； ┅┅转移到均质杯中，以均质器高速搅拌，提取2分钟； ┅┅4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤； ┅┅取10mL滤液并加入40mLPBS缓冲液稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待测； ┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取 10.0mL样品提取液注入玻璃注射器； ┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/S流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体； ┅┅以10.0mL清洗缓冲液淋洗柱子1次，流速为1滴-2滴/S，弃去全部流出液， ┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速为1滴-2滴/S，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；

玉米赤霉烯酮检测试剂盒说明书

玉米赤霉烯酮（ZEN）ELISA检测试剂盒产品描述：一、概要玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）又称F-2 毒素，主要成分为禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等产生的2，4-二羟基苯甲酸内酯类化合物。ZEN 主要污染玉米、麦类、谷物等作物，具有很强的雌性激素作用，可引起猪、大鼠、小鼠、家禽等动物的雌激素过多症和严重的生殖道症状及不孕症，还具有免疫毒性、基因毒性等，对人也有雌激素作用。玉米赤霉烯酮一般用薄层色谱、高效液相色谱法检测, 但因其操作繁杂、费用昂贵而影响实际应用。而使用玉米赤霉烯酮ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中玉米赤霉烯酮残留。本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品，操作时间低于60min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被玉米赤霉烯酮抗原，样本中玉米赤霉烯酮和此抗原竞争玉米赤霉烯酮的抗体，酶标二抗催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的玉米赤霉烯酮成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中玉米赤霉烯酮的含量。三、适用范围可定性、定量检测玉米及玉米制品、饲料等样本中的玉米赤霉烯酮。四、交叉反应率玉米赤霉烯酮……………………………………………100% 玉米赤霉酮…………………………………………13% 玉米赤霉醇 (1) 五、检测步骤测定前应须知： 1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。 2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。 3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。 4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。 5、标品里含有玉米赤霉烯酮，操作时应戴手套操作，避免皮肤接触。操作步骤： 1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷冻。 3、洗涤工作液在使用前也需回温。

食品安全国家标准食品中真菌毒素限量葡萄酒及咖啡中赭曲霉毒素A编制说明

《葡萄酒和咖啡中赭曲霉毒素A限量》（征求意见稿）编制说明一、标准起草的基本情况根据《食品安全法》和《食品安全国家标准管理办法》有关规定，为进一步完善我国食品安全国家标准《食品中真菌毒素限量》（GB 2761-2011），受国家卫生和计划生育委员会（原卫生部食品安全综合协调与卫生监督局）委托，由中国食品发酵工业研究院与天津科技大学共同承担食品安全国家标准《葡萄酒和咖啡中赭曲霉毒素A限量》的制定工作。《葡萄酒中赭曲霉毒素A限量》标准主要起草单位为中国食品发酵工业研究院，参与单位有中国酒业协会葡萄酒分会，宁波进出口检验检疫局，河北科技大学，西北农林科技大学和相关葡萄酒企业等。主要起草人：熊正河，钟其顶，邢江涛，王祖明，陈树兵，殷居易，李艳和王华。《咖啡中赭曲霉毒素A限量》标准起草单位为：天津科技大学；主要起草人：王硕、王俊平、朱华平、石楠、白茹、陈煜润。二、标准的重要内容及主要修改情况 1.葡萄酒。起草工作组根据葡萄酒赭曲霉毒素A普查数据，结合我国葡萄酒膳食调查数据，依照国际膳食暴露点评估模型，开展了我国葡萄酒赭曲霉毒素A的暴露量评估，结果表明我国葡萄酒高消费人群的赭曲霉毒素A暴露量应引起关注，但总体食品安全风险是可控的。经起草工作组会议研究，综合考虑到国际葡萄酒组织（OIV）和欧盟地区法规中规定葡萄酒中赭曲霉毒素A限量标准μg/kg，提出我国葡萄酒中赭曲霉毒素A限量标准为μg/kg。 2.咖啡。目前我国的咖啡市场的市售咖啡90%来自于进口，国产咖啡只有10%。进口咖啡货源分布广泛，亚洲地区主要来源于越南和印尼，中南美地区只要进口自哥伦比亚、古巴、巴西牙买加等地，非洲地区主要来源于肯尼亚、埃塞俄比亚等国家。由于赭曲霉污染主要发生在咖啡原料生产过程，未烘干的咖啡豆由于水分含量较高，较容易滋生霉菌、另外产地潮湿也容易产生霉菌污染，从而导致咖啡受到毒素污染。根据上述情况，样本按照三大类产品进行采集，即咖啡豆、咖啡粉和速溶咖啡。每类产品的采样按照产地进行抽取，进口咖啡重点采集我国咖啡主要进口国产品。速溶咖啡根据目前我国咖啡的消费情况，选择北京、天津、上海、广州、西安、重庆、武汉、南京8个城市的超市和商场进行随机抽样。起草工作组将我国居民通过咖啡对赭曲霉毒素A的摄入量与JECFA规定的暂定每日膳食耐受量（PMTDI）值比较，风险评估结果表明，我国居民目前通过咖啡摄入赭曲霉毒素A所引起的风险较小，不会对人体构成危险。经起草工作组开会讨论，综合考虑到欧盟和其他地区法规中规定咖啡中赭曲霉毒素A 限量标准，提出我国咖啡豆和咖啡粉中赭曲霉毒素A限量标准为μg/kg，速溶咖啡中中赭曲霉毒素A限量标准为μg/kg。 3.结论。依据现有的葡萄酒和咖啡消费量及污染水平情况，考虑到谷物的暴露量，结合国际限量标准，同时为保护我国葡萄酒和咖啡消费人群健康，建议葡萄酒和咖啡中赭曲霉毒素A安全限量值如下。

玉米赤霉烯酮

玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮(Zearalenone)又称F-2毒素,玉米烯酮. Cas号【17924-92-4】分子式:C18H22O5 分子量:318.36 它首先从有赤霉病的玉米中分离得到. 玉米赤霉烯酮其产毒菌主要是镰刀菌属(Fusarium)的菌侏,如禾谷镰刀菌(F.graminearum)和三线镰刀菌(F.tricinctum).玉米赤霉烯酮主要污染玉米,小麦,大米, 大麦,小米和燕麦等谷物,其中玉米的阳性检出率为45%,最高含毒量可达到2909mg/kg;小麦的检出率为20%,含毒量为0.364～11.05mg/kg.玉米赤霉烯酮的耐热性较强,110℃下处理1h才被完全破坏. 2011年4月20日，中华人民共和国卫生部发布了《食品中真菌毒素限量》国家标准，2011年10月20日开始实施，其中对玉米赤酶烯酮的限量标准是：谷物及其制品小麦、小麦粉、玉米、玉米面（渣、片）限量指标60µg/kg。玉米赤霉烯酮具有雌激素作用,主要作用于生殖系统,可使家畜,家禽和实验小鼠产生雌性激素亢进症.妊娠期的动物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产,死胎和畸胎.食用含赤霉病麦面粉制作的各种面食也可引起中枢神经系统的中毒症状,如恶心,发冷,头痛,神智抑郁和共济失调等. 玉米赤霉烯酮的危害作者：涂华莱齐德生来源：华中农业大学营养卫生实验室发布时间：2008-03-25 11:17:29阅读数：836 玉米赤霉烯酮首先由赤霉病玉米中分离得出，是玉米赤霉菌的代谢产物，又称为F－2毒素。自从1980年李季伦教授发现植物体内也存在玉米赤霉烯酮以来，立刻受到人们的关注。玉米赤霉烯酮具有雌激素的作用，能引起动物流产、死胎、返情等生殖异常现象，近年来，我国南方不少猪场因使用霉变玉米造成种猪流产、返情现象时有发生，给猪场造成了严重的经济损失，因此，本文对其生物学作用及对动物的危害做了综述。玉米赤霉烯酮的来源及理化性质来源与种类