乳腺癌HER2 FISH检测的问答

乳腺癌HER2状态问题与解答（答医生）

什么是FISH？

FISH（荧光原位杂交）是指以标记荧光分子的DNA为探针而其结果于荧光显微镜下观察的一类杂交。“原位”是指固定于玻片标本的细胞核原有位置。

为了进行FISH分析，加热固定在玻片上的标本，使其染色体DNA伸展并将双链打开，令DNA探针易于与其结合，加上探针后冷却细胞，使DNA探针杂交于与其互补的靶序列，一旦杂交，探针上的荧光分子将于染色体上精确地显示靶DNA，依赖于靶DNA的设计，许多类型的遗传学改变都可以检测出来。

FISH的优势何在？

1）细胞内相对稳定的DNA靶；

2）逐个细胞定量分析遗传学改变；

3）在完整细胞内同时分析多种遗传学靶；

4）容易判读；

5）容易操作；

6）结果快速；

FDA批准的FISH检测HER2实验用于以下目的：

评价预后、基于阿霉素的化疗选择和赫赛汀治疗的选择。

DNA探针系统是怎样的？

FISH标本分析需进行：

1）肿瘤组织切片；

2）探针与切片上的肿瘤组织细胞核内的HER2基因序列杂交；

3）在荧光显微镜下观察结果

FISH信号判读应采用薄层切片。当处理肿瘤组织时，常会有“核截断”。因大多数细胞核约10微米厚，所以4-6μm切片最佳。

操作者以计数荧光信号来客观地分析结果。

FISH探针的标记有几种？

FISH已经是目前诊断实验室的主要技术之一，有两种标记探针的方法：直接标记和间接标记。

直接FISH：是采用了直接标记有荧光基团的探针，通过一步杂交，荧光信号即结合到靶序列上。这种方法步骤很少、简便且快速。非常适合临床诊断实验室。目前所做的HER2基因状态评价的探针就是采用了直接标记的方法。HER2基因评价由HER2基因特异性探针和17号染色体着丝粒探针共同完成。

间接FISH：是采用了半抗原标记的探针，多为地高辛或生物素标记，杂交后，以针对半抗原的荧光物质标记的抗体进行探针检测，例如采用抗地高辛抗体进行“夹层”分析。间接FISH大多需要封闭试剂和多个扩增步骤，常存在荧光背景问题。对于研究者来说，它有可以根据需要放大信号，价格相对低一些等特点。

为何评价17号染色体数目？

HER2基因位于17号染色体上，大约有47%的乳腺癌存在17号染色体异体性（aneusomy）。必须将17号染色体非整倍体（aneuploid）和真正的HER2基因扩增区分开。只有当HER2基因与17号染色体数目比值大于2时，才为HER2基因扩增。所以17号染色体着丝粒探针是杂交检测的内对照。

IHC及结果如何？

IHC是采用特异性抗体对玻片上的组织进行染色。病理学家可以通过IHC识别不同类型的肿瘤细胞，以利于更准确的最终诊断。IHC是目前HER2状态检测最常采用的方法，但有时采用抗体的不同、福尔马林和石蜡固定和贮存组织的过程，以及根据抗体染色后组织颜色的变化记分的主观性，都可能影响IHC的结果。

FISH检测乳腺癌HER2状态的意义何在？

通过FISH检测福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺癌组织标本的HER2基因，在已知临床和病理信息的情况下，作为临床II期、淋巴结阳性乳腺癌病人的辅助预后因子。它可以帮助预测II期、淋巴结阳性且辅助环磷酰胺、阿霉素和5-氟尿嘧啶（CAF）化疗的乳腺癌病人的无病生存期和总生存期；它可以帮助评价是否采用赫赛汀（HERCEPTIN?或Trastuzumab）治疗。

什么是HER2/neu?

HER2/neu也叫做c-erbB2或HER2，是在调节细胞生长过程中起关键作用的基因，人类乳腺癌、卵巢癌和其它癌症都有HER2基因扩增，并且它在许多肿瘤的进展中起重要作用，该基因扩增，增加了mRNA的转录并继而导致基因产物过表达。大约25-30%乳腺癌有HER2基因扩增。检测HER2基因扩增在某些癌症的诊断、预后、选择适当的治疗方案和预测治疗效果等方面都是十分重要的。

HER2扩增的乳腺癌治疗重要性如何？

近年来，HER2扩增和随后的基因产物过表达已经成为乳腺癌预后和治疗的标记。该基因扩增与淋巴结阳性和淋巴结阴性的乳腺导管癌的快速增殖、无病生存期和总生存期短有关。随着单克隆靶向治疗药物如赫赛汀（Trastuzumab）的应用，准确的HER2评价更加重要。ASCD推荐每个原发乳腺癌都应做HER2评价。

HER2状态与选择阿霉素为基础的治疗的关系？

HER2扩增与阿霉素治疗反应之间的相关性已经得到证实。临床试验显示HER2扩增者得益于改进的强化剂量阿霉素为基础的治疗。阿霉素剂量增强对于无HER2扩增的病人来说，是无益的。

HER2状态与赫赛汀治疗的关系？

若要选择适于赫赛汀治疗的病人，必须进行HER2状态检测。最近，FDA批准Genentech的标签上增加了有关FISH检测HER2的注释。针对临床研究的660个病人（IHC 2+或3+）的回顾性分析数据证实，其肿瘤检测FISH（+）的病人比FISH（—）病人对赫赛汀治疗的受益更大。对于赫赛汀单药治疗来说，肿瘤检测为FISH（+）病人的总应答率为20%，而FISH（—）病人则无反应。

准确评价HER2状态的重要性何在？

专家已达成一致，HER2状态是阿霉素为基础的治疗反应的强有力的、独立的预测因子。目前HER状态已考虑视为乳腺癌选择许多辅助化疗的监护标准。准确评价HER2状态也有助于选择受益于赫赛汀治疗的病人。不正确的HER2状态评价意味着：假阳性可能导致不恰当的医疗决定，使病人得以不必要的治疗；假阴性可能使病人失去潜在有益的治疗。

应该评价HER2基因（DNA）还是其产物（蛋白质）？

DNA水平上过多的HER2基因拷贝数导致基因产物增多。直接在分子水平上的HER2评价优于抗体水平上的检测。在用赫赛汀单药治疗的IHC 2+和3+的男性乳腺癌病人中，仅FISH阳性者对药物有反应。

哪种方法检测HER2状态最准确？

目前，有两种方法检测HER2状态：一种方法是检测基因产物的基于抗体的免疫组化（IHC）；另一种方法是直接检测HER2基因的荧光原位杂交（FISH）。两种技术都是常规采用福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺组织。IHC已经广泛使用，问题是IHC和FISH所检测的结果哪个更准确。从临床病理的角度看，因IHC 固有的特点，其准确性上可能受到一些影响。组织的福尔马林固定对于稳定细胞形态非常重要，但对IHC结果所可能产生的某些变数是非实验室能控制的，尤其是福尔马林固定可能破坏HER2抗原，导致15-20%的假阴性。为了最大程度上减少此误差，采用了抗原修复技术，但不可避免地有可能导致假阳性的产生。另外，上述的17号染色体的多体性（polysomy）也是产生假阳性的原因，这种假阳性与IHC操作完全无关，是肿瘤固有的遗传学特征之一。FISH技术的靶是分子水平上稳定的DNA，福尔马林固定、石蜡包埋等必需的组织处理过程对DNA影响很小，弥补了IHC的不足。由于FISH结果分析是荧光信号计数，所以

它是十分灵敏的方法，而且非常准确、值得信赖、结果的重复性好。根据这些明确的结果，病理学家可以提供准确的HER2评价，从而，肿瘤学家和病人可以选择最有效的治疗。

为什么FISH的结果更客观？

因为FISH是针对间期细胞核进行简单的HER2基因计数得而出结果，所以能够完全客观地评价HER2状态。由于对于自然生物标准来说，正常细胞含有两个拷贝的HER2基因，通过生物学设定正常和异常之间的cut-off值，每个17号染色体的基因拷贝数超过1个为异常。现在FDA批准的HER2试剂盒中同时包括17号染色体着丝粒探针，成为内对照，使结果判读准确，排除了实验误差，同时也可以识别细胞核截断现象，最重要的是，可以通过计算HER2与17号染色体的比率，识别17号染色体多体性，判断出真正的HER2基因扩增，尤其是低水平扩增。

哪种病人应做HER2基因的FISH检测？

既然目前一致认为HER2状态是阿霉素为基础治疗的强有力的、独立的预后因子，HER2分析对于所有乳腺癌病人都是有用的。考虑到HER2状态和治疗后果之间的关系，所有病人都将从HER2状态检测中受益。

但是由于FISH检测的费用很高，因此我们推荐下列患者做FISH检测：

由于IHC结果为2+的患者中FISH+的患者约为25%左右，因此NCCN乳腺癌治疗指南2006要求所有IHC2+都应用FISH技术确定HER2状态。由于某些原因导致免疫组化结果不易判断，例如不同条件下得出的免疫组化结果不一致的情况等等，应该用FISH技术确定HER2状态。对于即将使用赫塞汀或将赫塞汀作为二三线治疗方案选择的应该尽早确定HER2状态，因为即使IHC3+的患者中也有10%左右的HER2 FISH-存在，而这部分病人无法从赫塞汀的治疗中获益，不仅造成很高的经济损失，而且耽误了应用其他方案的机会。而IHC结果0、1+中也有将近10%左右的假阴性的情况存在，对于这部分患者，将损失获得有效治疗方案的机会。IHC2+的患者如果想要使用赫塞汀，必须先做FISH以确定HER2状态。对于有足够经济能力的患者，应该在治疗初期尽早用FISH技术确定HER2状态。因为在较少考虑经济条件的情况下，准确的HER2状态对于提示预后以及获得更为准确的临床治疗方案都是有很大益处的。

可以采用存档的组织标本做HER2基因检测，如果疾病复发，除可以采用存档标本外，也可以采用新标本。