对乳酸菌的一点认识

对乳酸菌的一点认识
对乳酸菌的一点认识

对乳酸菌的一点认识

摘要:乳酸菌是一类革兰氏阳性杆菌或球菌、不形成芽孢、不运动、过氧化氢酶反应阴性、微需氧,不能还原硝酸盐,糖发酵能产生50%以上的乳酸细菌的总称。人们在认识乳酸菌之前就已利用它们来加工和保存食品。目前,乳酸菌已广泛应用于发酵酸乳、干酪、发酵豆乳、酿造食品、腌渍物、面包、发酵肉制品及食品防腐保藏等方面。乳酸菌不仅可以提高食品保藏性和附加值,而且有其特殊生理活性和保健功能。

关键词:乳酸菌、历史与现状、分类、生理功能、前景

一、乳酸菌的历史及现状

20世纪,俄国的生物学家梅契尼柯夫(Mechnikoff,1845-1916),在他的“长寿学说”里明确指出,保加利亚的巴尔干岛地区居民,日常生活中经常饮用的酸奶中含有大量的乳酸菌,这些乳酸菌能够定植在人体内,有效地抑制有害菌的生长,减少由于肠道内有害菌产生的毒素对整个机体的毒害,这是保加利亚地区居民长寿的重要原因。这个“长寿学说”具有划时代意义。今天,乳酸菌及其饮品已在许多国家相当普及。早在5 000年前人类就已经在使用乳酸菌。人们在认识乳酸菌之前就已利用它们来加工和保存食品,帮助调节肠道微生态平衡,促进排出毒素,促进营养有效吸收。乳酸菌不仅可以提高食品保藏性和附加值,而且有其特定生理活性和保健功能。

二、乳酸菌分类

乳酸菌大体上可分为两大类。

一类是动物源乳酸菌,一类是植物源乳酸菌。因为动物源取自动物,因此菌种常处于相对不稳定状态,其生物功效也较不稳定,且在大量食用时很容易导致人体动物蛋白过敏,即排斥反应。而植物源乳酸菌,因为取自植物易被人体认可,不论摄取多大量,都不会产生蛋白排斥反应,且植物源乳酸菌比动物源性更具有活力,能比动物源性蛋白以多8倍的数量到达人体小肠内定植,从而发挥其强大而稳定的生物功效。

三、乳酸菌的生理功能

1.改善制品的风味,提高制品营养价值

发酵过程中还可产生醋酸、丙酸等有机酸。乳酸菌产生的有机酸可以提高钙、磷、铁的利用率,促进人体吸收。而乳糖分解产生的半乳糖是构成脑神经系统中脑苷脂的成分,与婴儿出生后脑的迅速生长密切关系。乳酸菌在代谢过程中还可以产生多种氨基酸、维生素和酶类。乳酸菌所分泌的乳糖酶能够分解乳中的乳糖,提高乳制品的消化吸收性能及营养价值。

2.治疗肠道功能紊乱,维持肠道菌群平衡

人体肠道内有数百种细菌,包括有益菌和有害菌两大类,它们分别集中在肠道的某个部位形成菌群。在机体正常的情况下,有益菌占优势,此时称为肠道菌群平衡。当宿主机体抵抗力较弱时,有害菌会引起机体发病。而乳酸菌进入肠道后,即在肠内进行繁殖,抑制病原菌和有害人体健康的细菌的繁殖,从而起到预防感染,维持肠内菌群的平衡。乳酸菌及其代谢产物能够促进宿主消化酶的分泌和肠道的蠕动,促进食物的消化吸收并预防便秘的发生。乳酸菌的代谢产物乳酸和醋酸对病原性微生物有拮抗作用。有机酸使肠道pH 值下降,促进肠蠕动,防止病原菌的定植。保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳酸乳杆菌所产生的H2O2也有明显的抑菌效果。乳酸菌还能分泌能抑制生病原菌的细菌素,如双岐杆菌、嗜酸乳杆菌和乳酸链球菌素等对多种革兰氏阳性菌,包括葡萄球菌、链球菌、微球菌、分支杆菌和斯特氏菌、乳杆菌均有抑制作用。

3.抗肿瘤和免疫赋活作用

乳酸菌具有抗肿瘤活性。研究者们认为这种活性是由于乳酸菌本身及其代谢产物所

致。用艾利希腹水癌细胞,研究了嗜酸乳杆菌抗肿瘤活性。他们将肿瘤细胞移植到小白鼠体内,然后分成对照组和实验组,实验组饲喂添加嗜酸乳杆菌的饲料。结果发现实验组比对照组白鼠体内肿瘤细胞少得多,因此认为嗜酸乳杆菌在生长过程中产生了某种对肿瘤细胞增殖有拮抗作用的物质。据报道保加利亚乳杆菌有抗白血病的活性。乳酸菌及其产物拮抗致病菌的机理与免疫有关。北泽春树等对酸凝乳和乳酸菌进行了研究,发现酸凝乳具有明显的免疫活性。其原因是乳酸菌和代谢产物能通过诱导产生干扰素和促细胞分裂剂,对巨噬细胞的B-半乳糖苷酶活性、巨噬细胞的吞噬活性等具有显著的激活和促进作用。当异物侵入机体时,被乳酸菌激活的免疫细胞,则有增加机体和对异物产生抗体的作用。

4.降低胆固醇

乳酸菌能降低血清胆固醇水平,可预防由动脉。硬化而引起的心脏病。把嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌混合制成片剂,实验者服用三周后,实验者的血清胆固醇含量下降,六周后下降显著,对于食用高脂肪者效果更显著。用人粪便中分离的嗜酸乳杆菌在加有胆固醇的培养基中进行培养,结果随着胆汁酸的生成,培养基中的胆固醇含量大大下降,而菌体内的胆固醇含量却显著增加,说明乳杆菌细胞能较好地吸收胆固醇,通过菌体的新陈代谢,转化成胆汁酸排出体外。

5.延缓衰老

实验证实乳酸菌的抗变异性,并发现了乳酸菌能够产生超氧化物歧化酶(SOD)。SOD 是一种含有金属离子的酶,其生理功能是清除体内代谢过程中产生的过量超氧阴离子自由基,延缓衰老,提高机体对那些由于自由基侵害而诱发的疾病的抵抗力,减少肿瘤患者在化疗和放疗时的疼痛和副作用。另外,乳酸菌产生的乳酸,抑制了肠道腐败细菌的生长,从而减少了这些细菌所产生的毒胺、靛基质、氨、H2S等致癌物质和其他毒性物质,使机体衰老过程变得缓慢。保加利亚人长寿与长期服用酸奶密切相关。

四、乳酸菌的发展前景

有专家报道人体肠道内乳酸菌拥有的数量,随着人的年龄增长会逐渐减少,不健康的饮食习惯、摄入低纤维的食物、每天的压力都会对肠胃健康造成不良的影响。通过乳酸菌清除肠道垃圾能使人们的生活更加健康。当前,由于抗生素的大量使用,使人体肠道内以乳酸菌为主的正常菌群已遭到严重的破坏,人的抵抗力越来越低,人类的健康正面临严重的危胁。人们正在不断寻求新的更加有效的抗菌产品,世界上发达国家已经认识到并开始了以使用乳酸菌为代表的免疫疗法革命。其实普通的乳酸菌,活力极弱,它们只能在相对受限制的环境中存活,一旦脱离开这些环境,其自身也会遭到灭亡。只有经过特殊工艺处理的乳酸菌才能到达肠道。进入肠道内的乳酸菌,必须具备数量多、活力强的特性,才能发挥其生物功效[3]。如何研制出高浓度且活力强的乳酸菌,成为了当今微生物学家们追求的梦想。据中国食品科学技术学会数据统计显示,20世纪初乳酸菌奶饮料行业在我国乳制品行业的市场份额不足0.1%,到2005年就超过了3.0%。然而一些发达国家的乳酸菌奶类产品,已占到乳品市场的80.0%,世界乳酸菌奶饮品平均市场占有率已达30.0%。以乳酸菌饮料为代表的乳酸菌应用产业开始走红,已成为业内外的投资热点。要有高质量的产品,必须健全产品的质量,便于生产,也便于管理。医药保健品质量标准已经引起国家有关部门的关注。标准不健全很难与国际接轨。要使乳酸菌及其产业在中国稳健地发展,并给消费者带来真正的健康,就要有规范的东西,那就是标准。老百姓知道如何消费,企业知道如何生产,也便于政府管理。这样,乳酸菌制品及乳酸菌的产业在中国将越走越远,发展会越来越健康。

关于乳酸菌的分离与发酵的实验

乳酸菌的分离与发酵实验 生命科学学院2009级四班2组 傅盛晟 摘要:本文对乳酸菌的分离与发酵实验进行阐述,从市售酸乳中分离保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌,并进行分离与鉴定,最后进行酸乳的发酵实验!实验主要是分离与纯化,鉴定与发酵,最后用分离的菌进行酸乳发酵在与市售酸乳混合菌种进行比较。 关键词:酸奶,乳酸菌,分离鉴定,发酵 微生物在厌氧条件下,分解己糖产生乳酸的作用,称为乳酸发酵。能够引起乳酸发酵的微生物种类很多,其中主要能利用可发酵糖生产乳酸的细菌,即乳酸细菌。常见的乳酸细菌属于链球菌属(Streptococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobaterium)和明串珠菌属(Leuconostoc)等。乳酸细菌多是耐氧菌,只在厌氧条件下才进行乳酸发酵,所以在筛选乳酸茵或需要进行乳酸发酵的情况下,应保证提供厌氧条件。 酸奶是以全脂牛奶等为原料,经乳酸细菌发醇而成的一种具有较高营养价值和特殊风味的发醇制品,是具有一定保健作用的食品。酸奶发酵过程通常是由双菌或多菌的混合培养实现的。其中的杆菌先分解酪蛋白为氨基酸和小肽.由此促进了球菌的生长,而球菌产生的甲酸又刺激了杆菌产生大量乳酸和部分乙醛,此外球菌还产生了双乙酰这类风味物质,因此,达到了稳定状态的彻合发酵。酸乳发酵的基本原理是通过乳酸细菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸,乳酸使牛奶中的酪

蛋白(在全乳中的质量分数为2.9%,在乳蛋白中的质量分数为85%)变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。同时,通过发酵还可以形成酸奶特有的风味和香味(与形成乙醛、丁二酮等有关)。酸奶发酵中的主要生物化学变化是:乳酸菌将牛奶中的乳糖发酵成乳酸使其PH降至酪蛋白等电点(4.6)附近(4.0~4.6)从而使牛奶形成凝胶状;其次,乳酸菌还会促使部分酷蛋内降解、形成乳酸钙和产生一些脂肪、乙醛、双乙酰和丁二酮等风味物质。这就是酸奶具有良好的保健作用和适合广大乳糖不耐症患者饮用的主要原因。按凝固状态可将酸奶分为搅拌型酸奶和凝固型酸奶,两者工艺过程基本相似,本实验主要是凝固型酸奶的制作方法。 一,材料与方法 1.材料和用具 1)菌种,嗜热乳酸链球菌,保加利亚乳酸杆菌,这两类菌种可从市场销售的各种新鲜酸乳或酸乳饮料中分离。 2)培养基参照相关文献和老师的建议以及乳酸菌生长需要复杂营养物质和多种生长因子,我们选用如下培养基: 分离纯化培养基:脱脂乳平板培养基 鉴定培养基:脱脂乳试管 其他:脱脂乳粉或脱脂牛奶,蔗糖等 3)仪器及用具恒温培养箱,高压蒸汽灭菌锅,超净工作台,培养皿,试管,三角瓶若干 2.培养条件 培养温度:40℃ 厌氧条件:由于乳酸菌的发酵与分离纯化都需要厌氧条件,而实验室没有专门的厌氧培养箱,所以我们采用在培养皿和发酵杯上套上保鲜膜制造无氧环境。 培养时间:在培养基上分离培养的时间为2天左右,酸乳发酵为12个小时左右 方法和步骤 1)乳酸菌的分离纯化 101-~105-,取其中的 (1)分离。取市售新鲜酸乳或泡菜的酸液稀释 104-、105-2个稀释度的稀释液各0.1~0.2mL,分别接入脱脂乳琼脂培养基上,用无菌玻璃刮铲依次涂布,或者直接用接种环沾取原液,平板划线分离,置40℃下培养48h,如出现圆形稍扁平的淡黄色菌落及其周围培养基变为黄色者,可初步定为乳酸菌。 (2)鉴别。选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中,40℃培养8~24h。若牛乳出现凝固,无气泡,呈酸性,涂片镜检细胞呈杆状或链球状(两种形状的菌种均分别选入),革兰氏染色阳性,则可将其接种到试管斜面上连续传代4~6次,最终选择出在3~6h能凝固的牛乳管,作菌种待用。 2)乳酸菌饮料—酸乳的发酵

乳酸菌的作用及对治疗妇科病的功效

乳酸菌的作用及对治疗妇科病的功效据很多专家的多年研究,人体内特别是女性下体的健康问题和酸碱平衡问题直接相关,PH值(酸碱平衡)一旦不平衡,人体的健康会很快出现问题。而人体内的益生菌就是专门负责调解酸碱平衡的,并且吞噬有害细菌。但益生菌的数量会因人压力的增大、生活的无规律、精神状态的低沉及年龄的增大而迅速减少。也正因此,人的健康特别是妇科问题,治疗的根本是及时补充益生菌,以调节体内酸碱平衡,改善健康环境,增强免疫力,以安全、彻底的方式解决自身的病症。 而乳酸菌对人体的作用就是直接补充益生菌的数量,增加有益细菌的数量,微生物细菌直接相互制约和共生关系,可迅速恢复女性生殖系统平衡的菌群状态。也就是利用乳酸菌产生乳酸调节机体内PH值,改善和保障活性益生菌群最佳的生存环境,使机体PH值达酸碱平衡状态。通过活性益生菌来抑制致病菌的感染,能够做到自治自愈之功效,促使其恢复微生态平衡状态,从源头解决女性的下体问题。 这种治疗理念就是目前国际上最先进的生物酸碱疗法,这种疗法的的优势有: 一、定位准确:利用微生物原理有益菌和致病菌的相互制约及共生关系,“益菌抑菌”准确查清致病菌种,给予精确定性,实现快速治疗。 二、安全高效:在不破坏人体正常组织的情况下,通过机体自身

调理阴道内微生态环境,激活自体有益菌繁殖,阻止致病细胞复制,避免交叉感染,安全无损伤、无痛苦、无耐药性。 三、疗效确切:使用生物酸碱平衡疗法能快速抑制阴道内部细菌,排出生殖器官内积存的炎性分泌物和毒素。消除月经期前后,更年期前后和生育前后各种因素及内分泌引起的情绪不宁和烦躁抑郁等心理障碍。能全面有效地杀灭致病菌,清除体内病毒,修复受损表皮细胞,使机体自身免疫功能自然恢复,解决了久治不愈、易反复等难题。 四、安全快捷:快速杀菌、当天止痒、去除异味。1周内内完全阻止细菌沿生殖道上行及血行播散,半个月即可利用增加体内有益菌群改善和平衡体内微生态环境,清除致病菌在阴道内异常繁殖,安全无损伤、无痛苦、无耐药性、无副作用。 五、滋阴润道:纳米级微生物分子超强渗透阴道粘膜,深层清洁阴道内部。活性菌进入阴道后立即开始呈几何倍增的形式释放活菌因子,并在阴道壁形成薄膜层,快速修复因用药不当,性生活不洁造成的阴道粘膜损伤,补充缺失的各类有益菌,祛腐生肌。维护女性阴部生态环境,促进血液循环,濡养阴部器官,延缓阴部器官衰老。 这是一项医疗改革,这种生物酸碱平衡疗法彻底打破了人类传统医学治疗生殖系统疾病以及清洁护理方式,利用有益细菌和有害细菌之间的共生及相互制约关系,通过“非药物酸碱平衡疗法”来修复各种致病菌感染造成的生殖系统疾病。以“益菌抑菌”的微生物

乳酸菌抗菌机理

乳酸菌抗菌机理 乳酸菌的抗菌机理涉及其产生的各种代谢产物,包括酸性物质、乳酸菌素、二氧化碳和过氧化氢等。其中酸性物质可以消耗大量细胞能量并影响细胞膜的稳定性;乳酸菌素可作用于细胞膜,造成膜内物质和能量的泄漏。 乳酸菌是一类可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称,在自然界和食物中广泛存在。乳酸菌是最早被人类用于食品储藏加工的微生物之一,早在公元前6000年,人们就懂得利用乳酸菌发酵食物。他们发现食物经过一定的处理和储存就可改善风味、延长储存期和增加食物的安全性。迄今人们已明确了许多乳酸菌在生产安全优质食品中所起重要作用的生物学机理[1~2]:乳酸菌可以发酵食物中碳水化合物,分泌乳酸菌素,产生有机酸、酒精和二氧化碳等,来抑制一些腐败菌或致病菌的生长及改善食品的品质和风味,同时经过发酵,乳酸菌可以增加食品的可消化性并产生一些维生素、抗氧化剂。近几年,乳酸菌抑制食品中一些腐败菌和致病菌的作用引起人们的极大关注。虽然现代生物技术和安全体系(如HACCP)已被普遍的引入食品加工行业,但食品的安全问题仍然威胁着人类,每年都有许多关于食物中毒和食源性疾病散发或爆发的报道,同时,人们正力图追求不含化学防腐剂及各种添加剂的天然的安全食品。解决这问题需要发展新的食品保鲜技术来控制食品中腐败菌和致病菌的生长。国内外学者对之开展了大量的研究并建立了许多方法,其中最引人注目的就是利用乳酸菌来加强食品安全性和延长储存期。

1乳酸菌产生的酸性物质及其抑菌作用 1.1乳酸菌产生的酸性物质乳酸菌可产生对食品中微生物具有抑制作用的酸性物质,主要是乳酸菌的代谢终产物及中间产物,包括乳酸、乙酸、乙醇等。 1.2酸性物质对食品微生物的抑制作用一般细菌生长的最适pH 值为6~7,若低于该值,细菌的生长速率将大大降低或不生长甚至死亡,这在腐败性微生物上尤为可见。乳酸菌产生的酸性物质对食品中微生物的抑制作用已在许多实验中得到证实,这种抑菌作用取决于3个相互影响的因素:1.介质的pH值; 2.酸的离解程度; 3.酸的种类。 从20世纪70~80年代,国内外学者就开始建立pH值对食品中各种腐败菌和致病菌抑制作用的预测模型。但在这些模型中都是用无机酸如盐酸、磷酸来降低pH值,而乳酸菌产生的多是一些含羧基的弱有机酸。只有未离解的弱有机酸进入细菌细胞才能有效的发挥抑菌作用。这些有机酸的离解度取决于其pKa和pH值,可以用Henderson-Hasselbach公式计算:pH=pKa+log([A-] / [HA])。从中不难看出介质的pH值影响酸的离解,若在pH值固定条件下酸的pKa决定了其离解度。因此乳酸菌产生的弱酸的抗菌能力取决于介质的pH值及酸的种类(pKa)。由于胞质的pH值相对较高,当非离解的酸通过细胞膜进入胞质,就发生离解使细胞质酸化并释放酸性阴离子。这就给微生物带来两种后果:首先,若微生物要维持其胞内的pH值,就得动用ATP酶来清除质子,这将消耗大量细胞能量,加重细胞的代谢负担;其次,细胞内阴性酸离子的积聚可影响细胞膜的稳定性并抑制其传递

乳酸菌菌种的分离筛选方法

乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌,杆状或球状,革兰氏阳性菌,无芽孢,不运动。营养要求高,需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。 通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。 乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类 时,SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基,链球菌有TYC培养基、MS培养基。M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。 嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为:杆菌,两端圆,不运动,无 鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性,圆形或椭圆形。 乳酸片球菌细胞呈球状,直径0.6~1.0μm,在直角两个平面交替形成四联状,一般细胞成对生,单生者罕见,不成链状排列。革兰氏阳性,不运动,兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小,呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。 乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落,不易观察,所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质,也常常加入醋酸盐,因醋酸盐能抑制部分细菌生长,对乳酸菌无害。 培养基中添加碳酸钙,乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈,作为分离鉴别的依据,通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。 乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸,维生素及微氧,一般菌落比较小。分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质,均具有促进生长作用。也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长,对乳酸菌无害。 一.筛选方法: 1.溶钙圈法: 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈,从而筛选出这些产酸类细菌,可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是:①鉴别能产生酸的细菌;②中和产生的酸,以维持培养基的PH。 筛选过程:样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养

乳酸菌的分离纯化说课讲解

乳酸菌的分离纯化

乳酸菌的分离与纯化 1.实验目的 2.实验材料 2.1试验设备 天平、牛角匙、电炉、 pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、试管、棉塞、培养基、吸管、牛皮纸、线绳、标签、 500mL 锥形瓶两个、 250mL锥形瓶两个、试管20只、 500mL烧杯两个、 250mL 烧杯两个、 100mL烧杯两个、酒精灯、石棉网、接种针(环)。 2.2实验仪器 50L的高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超镜台、光学显微镜、 75%酒精棉、冰箱。 2.3实验药品 新鲜酸奶、脱脂奶粉或全脂奶粉、蔗糖、 1.6%溴甲酚绿乙醇溶液、酵母膏、琼脂、结晶紫染液、卢戈氏碘液、 95%乙醇、诗坛酸复红染液。 3.试验方法及操作过程 3.1BCG牛乳培养基配方及灭菌 (A)液:脱脂奶粉10克,水50ml,加入1.6%溴甲酚绿乙醇溶液1ml,80℃灭菌20min。 (B)液:酵母膏1克,水50克,琼脂2克,pH6.8,121℃灭菌2.min。 按照配方正确称取所需药品放于烧杯中,在搪瓷杯中加入所需水量,玻棒搅匀,加热溶解,用1N NaOH或1N HCl调pH,用pH试纸对照,加琼脂溶化,

加热过程要不断搅拌,可适当补水。琼脂完全溶解后倒入250mL的锥形瓶中,用纱布包扎好(注意不要污染纱布) 再用牛皮纸包扎,贴上标签(必须用铅笔写),注明何种培养基。在高压锅中,在1kg/cm2压力下维持30min。 3.2倒BCG培养基平板的方法 将灭好菌的A液和B液趁热充分混合,点燃酒精灯对周围的空气进行灭菌,并在酒精灯的附近用左手握着平板用拇指和小拇指打开一个小缝,趁热将培养液倒如平板内,倒入的量能使培养基刚要覆盖平板底部,倒好后把平板平放到实验台,轻轻晃动是培养基形成一个平面,等培养基冷却凝固后倒放并贴上标签。(注意:整个实验要在酒精灯附近做,以保证培养基不染菌) 3.3脱脂乳试管的配制与灭菌 直接选用脱脂乳液或按脱脂奶粉10克与蔗糖5克,水95克(蔗糖与水的比例在1:10的范围内)的比例配制,装量以试管的1/3为宜,115℃灭菌15min。 3.4乳酸菌的分离纯化 取市场销售的新鲜的酸奶,分别用接种针接入BCG牛培养基琼脂平板上,40℃培养48h,如出现圆形稍扁平的黄色菌落及其周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。 选取乳酸菌典型菌落转致脱脂乳试管中,40℃培养8~24h若牛乳出现凝固,无气泡,显酸性,涂片镜检细胞杆状或链球状,革兰氏染色显阳性,则可将其连续传代3次,最终选择出在3~6h能凝固的牛乳管,作菌种待用。 3.5乳酸发酵及检查

喝乳酸菌有什么好处

喝乳酸菌有什么好处 乳酸菌在动物体内能发挥许多的生理功能。大量研究资料表明,乳酸菌能促进动物生长,调节胃畅道正常菌群、维持微生态平衡,从向改善胃肠道功能;提高食物消化率和生物效价;降低血清胆固醇,控制内毒素;抑制肠道内腐败菌生长:提高机体免疫力等。 乳酸菌通过发酵产生的有机酸、特殊酶系、细菌表向成分等物质具有生理功能,,可刺激组织发育,对机体的营养状态、生理功能、免疫反应和应激反应等产生作用。 1.提供营养物质,促进机体生长乳酸菌如果能在体内正常发挥代谢活性,就能直接为宿主提供可利用的必需氨基酸和各种维生素(维生素B族和K等),还可提高矿物元素的生物活性,进而达到为宿主提必需营养物质、增强动物的营养代谢、直接促其生长的作用。研究报道乳酸菌可以改良水质,提高斑节对虾的存活率、生长速率和健康状况。试验证明,小麦、稻米等谷物进行乳酸发酵后,营养价值大大提高。此外,乳酸菌产生的酸性代谢产物使肠道环境偏酸性,而一般消化酶的最适PH值为偏酸性(淀粉酶6.5、糖化酶4.4),这样就有利于营养素的消化吸收。何机峻的产生还可加强肠道的蠕动和分泌,也可促进消化吸收养分。 2.改善胃肠道功能,维持肠道菌群平衡动物的整个消化道在正常情况卜郁寄生有大量微生物。 就其作用而言,可分乃三类: ①共生性类型,主要是兼性厌氧菌,在生态平衡时,它们的维生素和蛋白质合成、消化吸收、生物拮抗和免疫等功能对宿主有利。 ②致病性类型,正常情况下数量少,寄生于正常部位,不至于使宿主发病。若失控,则会导致宿主的不良反应。 ③中间性类型,即同时具有生理和致病两种作用。微生物群的平衡,对机体的健康十分重要,而乳酸菌就能够调节这种微生态平衡,保障宿主正常生理状态。乳酸菌是畅道常在菌,畜禽服用乳酸菌后,可以改变肠道内环境,抑制有害菌繁殖,调整胃肠道蔺群平衡。乳酸菌通过粘附素与肠粘膜细胞紧密结合,在肠粘膜表面定植占位,成为生理屏障的主要组成部分,从向达到恢复宿主抵抗力,修复肠道菌群屏障、治愈肠道疾病的作用。如采这个屏障遭剑抗生素或其他因素的破坏,宿土丧失了对外来菌抵抗力,会使具有耐药性的肠内菌异常增殖而取代优势菌的位置,造成肠道内微生态平衡的失调。 3.改善免疫能力乳酸杆菌和双歧杆菌一方面能明显激活巨噬细胞的吞噬作用,另一方面由于它能在肠道定植,相当于天然自动免疫。它们还能刺激腹膜巨噬细胞、诱导产生干扰素、促进细胞分裂、产生抗体及促进细胞免疫等,所以能增强机体的非特异性和特异性免疫反应,提高机体的抗病能力。报道,口服乳酸菌后,对巨璇细胞的?半乳糖甙酶活性、巨噬细胞的吞噬活性等具有显著的激活和促进作用。当异物侵入机体时,免疫细胞被乳酸菌激活,增强了机体对异物产生抗

乳酸菌益生特性及其功能性乳品的研究

乳酸菌益生特性及其功能性乳品的研究 乳酸菌及其发酵乳制品具有营养丰富、风味优良和功能性多样等特点,深受消费者喜爱,备受企业界的关注,研究开发功能性较强的乳酸菌及其发酵乳制品已成为研究的焦点。为研制具有抗氧化作用的乳酸菌发酵乳制品,本文以鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus,LCR)、植物乳杆菌(Lactobacillus Plantarum,LP)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei,LC)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium animalis,BL)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri,LR)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei,LCP)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus,LA)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus,LB)、粪链球菌(Enterococcus faecalis,SF)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus,ST)等十株乳酸菌为发酵菌株,分析研究其益生特性、蔬菜增菌作用及其所产超氧化物歧化酶(SOD酶)、过氧化氢酶(CAT酶)、VB1和VB6等功能性成分,并针对SOD 酶抗氧化活性指标,初步研制蔬菜与鲜乳复合乳酸菌发酵乳。 主要研究结果如下:十株乳酸菌的益生特性:分别对菌株产酸能力、人工胃肠液的耐受能力以及MRS培养过程中所产生的SOD酶、CAT酶、VB1和VB6进行分析研究。结果表明:十株菌株在MRS液体培养基中37℃下培养48 h后,总酸量(%)依次为2.75、2.98、3.03、1.23、2.88、2.66、2.34、2.38、1.11、1.01;SOD 酶活力(U/mL)依次为17.58、15.34、28.43、26.21、16.32、36.24、38.45、16.82、11.78、13.53;CAT酶活力(U/mL)依次为2.28、2.12、3.43、5.36、2.31、7.23、8.56、2.46、1.56、1.24;VB1量(mg/L)分别为1.32、1.64、2.01、1.24、1.02、1.56、1.26、1.07、1.28、2.37;VB6量(mg/L)分别为3.42、2.36、4.81、1.47、1.53、1.87、5.32、0.98、0.56、0.35;在人工胃液培育3h后的存活率(%)分别

乳酸菌得分离、纯化与鉴定

乳酸菌得分离、纯化与鉴定 第一部分:乳酸菌得分离、纯化 一、实验器材: 1、实验药品新鲜乳酸饮料(市售)、脱脂奶粉、蔗糖、1、6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄)、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙; 0、4gNaOH固体、4、2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g 香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g; 2、仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿(φ9或φ12)、试管、300ml三角瓶(带玻珠)、移液管、天平、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯。 二、实验步骤: 1、培养基配制(BCG牛乳培养基): (A)溶液:取脱脂乳粉100g,水500ml,加入1、6%溴甲酚氯乙醇溶液1ml,混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅80℃灭菌20 min;(1、6%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液用1、6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中,再加水至100ml制成) (B)溶液:酵母膏10g,水500ml,CaCO3 10g,琼脂20g,加热溶解,用精密pH试纸调节pH到6、8,分装入三角瓶后在103kPa 121℃高压蒸汽灭菌20Min。 以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均匀混合。 2、药品配制 2、1 结晶紫:结晶紫乙醇饱与液(结晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中)20ml,1%草酸氨水溶液80ml。将两液混匀,放置24小时后过滤即可。 2、2 卢哥氏碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加入蒸馏水300ml即成。 2、3 蕃红溶液:番红2、5g,95%乙醇100ml,溶解后存于密闭得棕色瓶中。用时取20ml与80ml蒸馏水混匀即可。 2、4 0、1%得吕氏美蓝染液:A液:美蓝0、3g,95%乙醇300ml;B液:0、01% KOH 100ml。混合A与B液即成,按1:100稀释即可。 2、4 生理盐水:称取9g氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到1000毫升。 3、菌悬液得配制

乳酸菌菌种的分离筛选办法

精心整理 乳酸菌菌种的分离筛选方法 乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌,杆状或球状,革兰氏阳性菌,无芽孢,不运动。营养要求高,需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。 通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。 时,SL 培养基、MS 对乳酸菌无害。一.筛选方法: 1.溶钙圈法: 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈,从而筛选出这些产酸类细菌,可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是:①鉴别能产生酸的细菌;②中和产生的酸,以维持培养基的PH 。 筛选过程:样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h →挑选产生溶

钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色,经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。 2.溴甲酚绿指示剂法: 培养基:MRS培养基(含溴甲酚绿酒精溶液) 筛选过程:同上,不同之处是稀释涂布后长出菌落,挑取使溴甲酚绿变色的菌落。 二.菌种的分离筛选 1.培养基: ★1.1麦芽汁碳酸钙培养基:麦芽汁(10BX)1L预先灭菌碳酸钙5-10g/LPH自然(分离用) ★★1.2吐温 ★1.3 酵母膏(分离用) 1.4 1.5 MgSO 4 1.6 ★★1.7 蛋白胨 葡萄糖、琼 脂18.0g 酸钙, 1.8BCP 乳糖5.0g蛋白胨5.0g酵母膏3.0g0.5℅溴甲酚紫10ml自来水1000ml pH6.5-7.0(分离用) 1.9BCG牛乳营养琼脂:脱脂奶粉10g,溶于50ml水中,加入1.6℅溴甲酚绿酒 精溶液0.07ml,0.075Mpa20min。另取琼脂2.0g,溶于50ml水中,加酵母膏 1.0g溶解后调pH6.5-6.8,0.1Mpa20min.趁热在无菌操作下两者混合均匀, 倒平板,37℃培养24h,检查是否有杂菌。

乳酸菌的作用与功效有哪些呢

乳酸菌的作用与功效有哪些呢酸奶里含有很多乳酸菌成份,食用后可帮助肠胃的消化与吸收,对皮肤是非常好的,同时也能增强患者的味口,但是很多人却不喜欢酸奶的味道,从而是对酸奶食物远离,其实只要大家知道了乳酸菌的作用与功效后,就会选择这样的产品类型食物,那么乳酸菌的作用与功效有哪些呢?请随我们一起来分析乳酸菌的作用与功效。 乳酸菌是一种发酵制品。一般来说在葡萄糖中发酵的细菌都被叫做乳酸菌。它是一种对人体有益的菌。像人们平时所喝的酸奶,啤酒等等需要用来发酵的都有它的加入。像电视上的酸奶广告,就经常会说此酸奶中添加了活性乳酸菌。这个活性乳酸菌就是对人体很有的益生菌。可以说乳酸菌在生活中被用到的地方很多。 乳酸菌一般被分为两类,一种是从动物中提取的,一种是植物。也就是常说的动物源和植物源的乳酸菌,乳酸菌在动物体内能发挥许多的生理功能。大量研究资料表明,乳酸菌能促进动物生长,调节胃肠道正常菌群、维持微生态平衡,从而改善胃肠道功能;提高食物消化率和生物效价;降低血清胆固醇,控制内毒素;抑制肠道内腐败菌生长:提高机体免疫力等。 乳酸菌通过发酵产生的有机酸、特殊酶系、酸菌素等物质具有特殊生理功能,可刺激组织发育,对机体的营养状态、生理功能、免疫反应和应激反应等产生作用。

1、提供营养物质,促进机体生长乳酸菌。 如果能在体内正常发挥代谢活性,就能直接为宿主提供可利用的必需氨基酸和各种维生素(维生素B族和K等),还可提高矿物元素的生物活性,进而达到为宿主提供必需营养物质、增强动物的营养代谢、直接促其生长的作用。 2、改善胃肠道功能,维持肠道菌群平衡。 动物的整个消化道在正常情况下都寄生有大量微生物。 3、改善免疫能力。 乳酸杆菌和双歧杆菌一方面能明显激活巨噬细胞的吞噬作用,另一方面由于它能在肠道定植,相当于天然自动免疫。 常喝含乳酸菌的酸奶,对身体是非常好的,多吃含有乳酸菌制成的食物,能够帮助身体吸收营养,而且乳酸菌在进入人体内后还可以帮助人们控制自己身体内的毒素,防止毒素继续生长。 乳酸菌的作用与功效对身体是很明确的,每种酸奶时都含有乳酸菌,喜欢吃酸奶的人群可以自己做,酸奶的存放时间并没有牛奶长,做好后请尽快食用。对牛奶有过敏现象的患者可多食用含有乳酸菌的食物,同样能增强身体健康,食物中的营养也能达到身体成长的需求,请患者在选择牛奶的时候谨慎。

抗氧化乳酸菌L4的SOD活性及其发酵乳的抗氧化作用

表1乳酸菌L3和L4无细胞提取物的抗氧化活性(n=3,X±SD) 抗氧化活性 DPPH自由基清除率/%脂质过氧化抑制率/%超氧自由基清除率/%羟自由基清除率/%对Fe2+螯合 还原活性(L-半胱氨酸)/μmol?L-1乳酸菌L3 50.171.814.983.5 (54.3±2.1)×10-6 (200.0±3.6) 乳酸菌L4 48.175.287.045.7 (41.3±1.9)×10-6(187±2.3) 0引言 正常情况下, 体内自由基的产生和清除是平衡 的,一旦体内自由基代谢失衡,就会导致细胞损伤并引发一些疾病,如糖尿病、高血压、关节炎、心血管疾病、癌症等[1-3]。这时外加一些抗氧化物质对协助体内氧代谢的平衡是很有帮助的。国内外对乳酸菌抗氧化活性的研究较少。在体外实验中,Lin等[4]研究发现嗜酸乳杆菌与长双歧杆菌的无细胞提取物对亚油酸过氧化反应有抑制作用;Kullisaar等[5]利用人体实验报道了发酵乳杆菌ME-3在具有抗氧化活性;Yang[6]等的研究证明,与发酵前相比,乳酸菌发酵豆奶的还原活性及清除DPPH自由基的能力明显提高。 在前期的研究中,已经从30株乳酸菌中筛选到了 抗氧化活性相对较高的乳酸菌L3和L4,发现它们的无细胞提取物有清除氧自由基,抑制亚油酸过氧化作用 等[2],见表1。 本研究进一步对这2株乳酸菌的抗氧化活性物质进行分析, 利用PCR技术鉴定了乳酸菌L4的超氧化 物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)基因及其表达,并对其发酵乳的抗氧化作用,如还原活性,螯合 Fe2+作用,清除DPPH自由基作用进行了分析,以期对 抗氧化乳酸菌L4的SOD 活性及其发酵乳的抗氧化作用 张江巍,曹郁生,刘晓华,徐波 (南昌大学中德联合研究院食品科学教育部重点实验室,江西南昌330047) 摘 要:从30株乳酸菌中筛选出的抗氧化活性相对较高的乳酸菌L3和L4进行实验,发现乳酸菌L4的抗H2O2的能力明显要高于乳酸菌L3 和保加利亚乳杆菌。并检测到乳酸菌L4无细胞提取物SOD活性为(73.70±1.77)U/mg。但未检测到乳酸菌L3和L4具有GSH-Px活性。利用PCR技术扩增了乳酸菌L4的SOD基因,通过DNA序列测定,发现乳酸菌L4的SOD基因与E.coli的Mn-SOD基因有高度的同源性。并发现乳酸菌L4发酵乳的还原活性和螯合Fe2+作用均明显高于未发酵乳。关键词:乳酸菌;超氧化物歧化酶;发酵乳;抗氧化中图分类号:Q936 文献标识码:A 文章编号:1001-2230(2006)11-0012-04 SODActivityoflacticacidbacteriaL4andtheantioxidationofitsfermentedmilk ZHANGJiang-wei,CAOYu-sheng,LIUXiao-hua,XUBo (Sino-GermanJointResearchInstitute,NanchangUniversityTheKeyLaboratoryofFoodScienceofMinistryofEducation,Nanchang330047,China) Abstract:ThisstudywasaimedatlacticacidbacteriastrainL3andL4thatdisplayedexcellentantioxidativeactivitiesamong30lacticacidbacteria.StrainL4waslesssensitivetoH2O2thanothers.Thesuperoxidedismutaseactivitywasfoundinthecell-freeextractsofL4(73.70±1.77U/mgprotein),buttheglutathioneperoxidasewasnotfoundinL3andL4.TheSODgenewasamplifiedwithPCRfromthegenomicDNAofL4,andthePCRproductwassequencedandcomparedwiththesequenceofSODgeneinGenebank.TheresultindicatedthatthesequencesofSODgenefromL4ishighlyhomologywiththesequencesofMn-SODgeneofE.coli(98%).ThemilkfermentedbyL4demonstratedbetterFe2+chelatingabilityandreducingactivitythanunfermentedmilk.Keywords:lacticacidbacteria;superoxidedismutase;fermentedmilk;antioxidative 收稿日期:2006-04-19 作者简介:张江巍(1981-),男,硕士研究生,研究方向为食品生物技术。 www.chinadairy.netrpgy@chinajournal.net.cn 中国乳品工业

乳酸菌的提取和鉴定

酸奶中乳酸菌的筛选试验 一、实验目的:熟悉从酸奶中分离和纯化乳酸菌的一般方法 二、实验原理: 市场销售的酸奶主要含乳酸菌,乳酸菌的主要作用是把牛奶中乳糖发酵成乳酸,此外酸奶中还含有其他球菌,利用它产酸等性质可以分离乳酸菌,分离培养基一般添加蛋白胨、酵母膏提供氮源、维生素、生长因子;葡萄糖为可发酵糖类;磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂;柠檬酸铵、硫酸镁、硫酸锰、亚硫酸铁、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子,其成分还能抑制某些杂菌;琼脂是培养基的凝固剂。、也常常加入醋酸盐,因醋酸盐能抑制部分细菌生长,对乳酸菌无害。培养基中添加碳酸钙,乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈,作为分离鉴别的依据。 .筛选方法:.溶钙圈法:利用一些产酸类细菌在含CaCO3 的培养基上产生CaCO3 溶解圈,从而筛选出这些产酸类细菌,可用于乳酸菌的筛选。其中培养基中加入CaCO3 的作用是:①鉴别能产生酸的细菌;②中和产生的酸,以维持培养基的PH、更利于乳酸菌的生长和分离 三、实验药品及仪器 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、乳糖、吐温-80、柠檬酸二铵、CaCO3 、K2HPO4 NaAc·3H2O、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、琼脂、结晶紫染色液、碘液、95%乙醇、石蜡、蒸馏水。 仪器:超净工作台、电子显微镜、接种环、恒温培养箱、接

种环、培养皿、涂布环、高压锅、试管、微波炉、电子天平、离心机 四培养基类型 ①改良MRS 培养基(乳酸菌分离培养基):牛肉膏10g,蛋白胨10g,酵母膏5g,葡萄糖20g,吐温-80 1.0ml(它是一种很好的乳化剂和分散剂也就是说它的作用就是是培养基的营养成分更加的均匀就是对营养成分的再一次优化),K 2HPO4 2g,NaAc·3H2O 5g,柠檬酸二铵2g,MgSO4·7H2O 0.58g,MnSO4·H2O 0.25g,补蒸馏水至1000ml(固体培养基中加琼脂 1.5%-2%),调pH 至6.4±0.2,121℃高压灭菌15min ②改良MC 培养基(乳酸菌选择培养基):牛肉膏5g,蛋白胨5g,酵母膏5g,葡萄糖20g,乳糖20g,CaCO3 10g,琼脂20g,中性红0.05g(指示剂),最终pH6.5±0.2,补蒸馏水至1000ml,121℃高压灭菌15min。 配制方法:1把除CaCO3以外的成分称量溶解后.调PH至6.2~6.4; 2.称取20g CaCO3加入到100mL蒸馏水中,制成CaCO3乳浊液; 3.将培养基和CaCO3乳浊液分开灭菌; 4.倒平板前,待培养基融化冷却后,平板上加入一定量的CaCO3乳浊液,晾干了以后再接种。 五、实验流程 1、吸取酸奶1ml 2、10 倍梯度稀释平板涂布(改良MC Medium) 3、厌氧培养(28℃培养48h)待形成菌落 4、挑取溶钙圈较大的单菌落→ 观察、记录菌落形态与特征 5、Improved MC Medium 划线分离纯化 6、选取溶钙圈较大的单菌落进行G+染色 7、革兰氏阳性菌(G+菌)→ 记录菌株细胞形态

乳酸菌的功效和作用

乳酸菌的功效和作用 乳酸菌是一种发酵制品.一般来说在葡萄糖中发酵的细菌都被叫做乳酸菌.它是一种对人体有益的菌.像人们平时所喝的酸奶,啤酒等等需要用来发酵的都有它的加入.像电视上的酸奶广告,就经常会说此酸奶中添加了活性乳酸菌.这个活性乳酸菌就是对人体很有的益生菌.可以说乳酸菌在生活中被用到的地方很多. 乳酸菌一般被分为两类,一种是从动物中提取的,一种是植物.也就是常说的动物源和植物源的乳酸菌.那么乳酸菌都有什么对人体好的功效和作用呢?今天就来说一下. 乳酸菌在动物体内能发挥许多的生理功能.大量研究资料表明,乳酸菌能促进动物生长,调节胃肠道正常菌群、维持微生态平衡,从而改善胃肠道功能;提高食物消化率和生物效价;降低血清胆固醇,控制内毒素;抑制肠道内腐败菌生长:提高机体免疫力等. 乳酸菌通过发酵产生的有机酸、特殊酶系、酸菌素等物质具有特殊生理功能,可刺激组织发育,对机体的营养状态、生理功能、免疫反应和应激反应等产生作用. 1.提供营养物质,促进机体生长乳酸菌如果能在体内正常发挥代谢活性,就能直接为宿主提供可利用的必需氨基酸和各种维生素(维生素B族和K等),还可提高矿物元素的生物活性,进而达到为宿主提供必需营养物质、增强动物的营养代谢、直接促其生长的作用. 2.改善胃肠道功能,维持肠道菌群平衡动物的整个消化道在

正常情况下都寄生有大量微生物. 3.改善免疫能力.乳酸杆菌和双歧杆菌一方面能明显激活巨噬细胞的吞噬作用,另一方面由于它能在肠道定植,相当于天然自动免疫. 常喝含乳酸菌的酸奶,对身体是非常好的,多吃含有乳酸菌制成的食物,能够帮助身体吸收营养,而且乳酸菌在进入人体内后还可以帮助人们控制自己身体内的毒素,防止毒素继续生长.

乳酸菌及其作用

乳酸菌及其功用 凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸菌的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌,除极少数外,其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群,其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实,肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的直接关系。 早在20世纪初,俄国著名的生物学家梅契尼柯夫在他获得诺贝尔奖的“长寿说”里已明确指出,保加利亚的巴尔干岛地区居民,日常生活中经常饮用的酸奶中含有大量的乳酸菌,这些乳酸菌能够定植在人体内,有效地抑制有害菌的生长,减少由于肠道内有害菌产生的毒素对整个机体的毒害,这是保加利亚地区居民长寿的重要原因。这个具有划时代意义的“长寿学说”,为人类利用乳酸菌生产健康食品开创了新纪元。今天,利用乳酸菌生产的健康食品已经一跃成为全世界关注的健康食品。早在5000年前人类就已经在使用乳酸菌。到目前为止,人类日常食用的泡菜、酸奶、酱油、豆豉等,都是应用乳酸菌这种原始而简单的随机天然发酵的代谢产物。 乳酸菌的生理功能 6.增强免疫功能 7.具有营养作用 乳酸菌在食品加工业中的应用 1.乳酸菌在乳制品加工业中的应用 A.乳制品是乳酸菌发酵应用最多的领域,也是最为成熟的领域。主要产品有酸奶、奶油和干酪。酸奶是以鲜奶或奶粉为主要原料。经乳酸菌发酵制得 的产品。原料乳经杀菌和军之后,降低到适宜的温度,添加糖和稳定剂均 匀搅拌,接种乳酸菌发酵记载适宜的温度下发酵。发酵完毕后,置于4℃左 右的冷库中冷却至成熟,就得到成品酸奶。应用于生产的乳酸菌主要有乳 酸杆菌和链球菌以及部分双歧杆菌。 B.奶油是以乳经分离后所得稀奶油为主要原料,经杀菌、冷却、成熟、乳酸菌发酵、搅拌、压炼而制成的乳制品。奶油按发酵方法不同可分为天然发 酵和人工发酵两种。 C.干酪是指原料乳经杀菌、冷却后,加入适量的乳酸菌发酵,使蛋白质凝固后,排除乳清,再将凝块压制成块状的产品。所用的乳酸菌发酵剂随干酪 种类而定。 2.乳酸菌在植物蛋白饮料中的应用 酒精性饮料的发酵剂中除了以乳酸菌为主外还有酵母菌。酵母菌本身含有种类 齐全的氨基酸,发酵产生了风味物质形成独特酒香;酵母菌能产生多种水溶性

PCR技术在乳酸菌分类鉴定中的应用

PCR技术在乳酸菌分类鉴定中的应用 王庭柱,高学军,杨振宇 东北农业大学教育部乳品科学重点实验室(150030) E-mail:wangtingzhu1980@https://www.360docs.net/doc/2711183848.html, 摘要:近年来,随着分子生物学和生物信息学的迅速发展,特别是作为生物技术里程碑的PCR技术以及核酸测序和电泳技术的不断改进与完善,产生了许多新的分类学方法,如RAPD、PCR-RFLP、T-RFLP、ARDRA、PCR-SSCP、PCR-DGGE、PCR-TGGE、AFLP、REP-PCR、S-PCR、LCR、LH-PCR、SBCS以及小卫星序列多态性和序列同源性分析等。本文即论述了这些技术在乳酸菌分类鉴定中的应用及其优势和局限性。 关键词:乳酸菌,PCR,分类,鉴定,分子生物学 1. 引言 乳酸菌(lactic acid bacteria, LAB)是一大类缺乏细胞色素、糖代谢主要以乳酸为终产物的革兰氏阳性非芽孢细菌,其过氧化氢酶反应为阴性、耐氧耐酸、营养要求复杂并且严格发酵。LAB这个名称就细菌分类学而言实属一个非正式、非规范的名称。目前从自然界中已发现的这类细菌在分类学上至少可划分为23个属,涉及到的有关菌种则更多,其代表性的菌属有乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、双歧杆菌属、肠球菌属、明串珠菌属、气球菌属、肉杆菌属、酒球菌属、足球菌属、四体球菌属和漫游球菌属等[1,2]。 传统的LAB鉴定方法主要依赖于表型分析,包括形态学观察、生长需要及特性、发酵图谱、细胞壁蛋白分析、血清学以及脂肪酸甲基酯分析等,其中有些技术已被证明适用于某些LAB的鉴定,但是也普遍意识到表型分析的一些缺点,如重现率及辨识能力低、相似的表型特性并不等同于相似的或者关系密切的基因型[3]。表型试验可能的固有问题是,不是每一给定种内的所有菌株都有一个共同的性状,而且即使是同一菌株也可能呈现出一定的生化变异性。此外,实验操作的一点改变也可能产生错误的结果。因此基于表型试验的常规技术并不能对菌株做出明确的鉴定[4]。一般来讲,准确地鉴定一株乳酸菌至菌种的水平,至少需要17种表型实验[5],但是微生态系统的分离株需要更为简单快速的鉴定方法。因此,需要进行表型特性的分子水平研究和遗传特性的研究。 只有分子生物学技术才能解决LAB鉴定的复杂性。近年来发展起来的核酸技术如DNA 杂交和特定靶序列的扩增技术,对LAB的鉴定是一种改进和补充。在LAB分类学方面,代表性的遗传学方法是限制酶分析(restriction enzyme analysis, REA)的多态性(如PFGE、RFLP 和核糖分型)和PCR技术[3]。REA是进行基因组DNA的限制性内切酶消化。脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)是经酶切后,分离出大量的基因组片段;限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)指的是酶切后含同源序列的酶切片段在长度大小或数目上的差异;而核糖分型(Ribotyping)是以rDNA和/或其间隔区域作为探针,与基因组限制片段进行杂交。PFGE是菌株分类中最有识别力的方法,但是基因组DNA的所有限制片段的完全分离是个困难;迄今,最佳辨识力的遗传探针是种特异性的[6];而PCR技术以及以PCR为基础的遗传指纹技术和群落分析技术甚至可以进行高度菌株特异性的LAB鉴定。 PCR技术的创立打开了LAB快速鉴定的大门,其不仅操作简便、快速可靠并且灵敏高效,而且还克服了对培养的依赖性(自然界中有85~99.9%的微生物至今还不能进行纯培

乳酸菌的分离培养

乳酸菌的分离培养 保加利亚乳杆菌 组长: 组员: 实验目的: 1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术及微生物形态观察; 2.学习微生物制片、染色的基本技术,掌握乳酸菌的简单染色法及无菌操作接种技术; 3.通过对培养基的配制,了解配制培养基的一般步骤和方法,掌握微生物实验常用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。 4.了解各种灭菌的基本原理和应用范围,以及实验室中常用的灭菌方法。 5.了解酸奶中乳酸菌分离原理, 观察乳酸菌的基本形态,掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目的测定的方法。 6.了解稀释平板计数的原理,熟练掌握混合平板培养法。明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。 7.初步学会乳酸菌培养的基本技术,了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法,掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 8.了解并掌握微生物菌种保藏的常用方法及其优缺点,并了解不同微生物对不同的生物大分子的分解利用情况,认识微生物代谢类型的多样性。 实验原理:乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称,本实验中 用革兰氏染色法进行染色,革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+和G-菌。通过革兰氏染色以及形态学观察,乳酸菌呈紫色,为革兰氏阳性菌;乳酸菌应为乳杆菌和乳球菌的混合体。酸奶中含有乳酸菌,而且目前市场上销售的酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。细菌及其它一些微生物的大小,通常用测微计来测量,测微计分接目测微计与镜台测微计;培养基是按照微生物生长发育的需要,用不同组份的营养物质调制而成的营养基质;灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物,包括芽孢;自然条件下,微生物常以群落状态存在,这种群落往往是不同种类微生物的混合体,为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物,必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养,这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物,从而鉴别细菌的种属,称之为细菌的生化反应。 实验器材: 样品:含乳酸菌的酸奶 ①培养基:改良MRS固体培养基 蛋白胨5g 牛肉膏5g 酵母提取物 2.5g 柠檬酸二铵1g 水500mL 乙酸钠2.5g K2HPO4 1g MnSO4·4H2O 0.125 吐温80 0.5mL 琼脂12.5g MgSO4·7H2O 0.29g CaCO3 5g 葡萄糖10g 。 仪器用品:500ml烧杯一个100ml量筒一个无菌培养皿12个 250ml容量三角瓶2个5ml无菌移液管1ml无菌移液管6只 15ml试管7只高压灭菌锅天平

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