蛋白提取步骤

1. 细胞室拿出细胞，弃培养基，加冰冷PBS 1ml清洗。弃PBS
2. 加新鲜PBS 1ml放置冰上（5-20 min，适细胞种类而定）。细胞刮子刮下细胞，收于1.5 EP管中，4°离心，500-700g 5 min。
3. 离心后弃上清，加入新鲜1ml PBS，涡旋震荡，彻底清洗一遍。4°离心，500-700g 5 min。
4. 彻底弃上清（吸干），加入裂解液n ml（适细胞量而定，一般100mm dish 400 RIPA 加蛋白酶体抑制剂），冰上放置30min，每10min震荡一次。18000g 离心，15min。
5. 收取上清即为蛋白样品。加loading buffert 95-100°加热5-10min。