乙型脑炎病毒E蛋白结构域抗原表位鉴定
乙型脑炎病毒E 蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域抗原表位鉴定
闫丽萍1，华荣虹2，亓文宝3，周艳君1，李国新1，
于
海1，姜一峰1，田志军2，童光志1*
(1.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点
实验室/猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001；3.华南农业大学兽医学院，广东广州510642)
摘要：为鉴定乙型脑炎病毒(JEV)E 蛋白I ，II 结构域抗原表位，本研究设计了一系列针对E 蛋白的I 、II
结构域(1aa ～296aa)部分重叠短肽，分别进行GST 融合表达，用JEV 阳性血清进行western blot 和ELISA 反应性筛选，获得了5个线性抗原表位分别为：E1(1FNCLGMGNRDFIEGAS 16)、E10-4(77TGEAHNEK 84)、E11-2(83EKRADSS YVCKQ 94)、E19(145GTTTSENHGNYSAQVG 160)和E33(257SQEGGLHHALAGAIVV 272)。除E10和E19外，其它表位均为第一次通过实验方法确定的。将这5个融合蛋白对小鼠进行免疫，获得了高滴度的针对5个融合短肽的抗血清，研究证明了这些表位具有良好的免疫原性。本研究为乙型脑炎特异性诊断试剂及表位疫苗的开发奠定了基础。
关键词：乙型脑炎病毒；E 蛋白；抗原表位中图分类号：S852.65
文献标识码：A
文章编号：1008-0589(2010)01-0056-05
Antigenic epitopes mapping of domain I,II of Japanese
encephalitis virus envelope protein
YAN Li-ping 1,HUA Rong-hong 2,QI Wen-bao 3,ZHOU Yan-jun 1,LI Guo-xin 1,
YU Hai 1,JIANG Yi-feng 1,TIAN Zhi-jun 2,TONG Guang-zhi 1*
(1.Division of Swine Infectious Diseases,Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Shanghai 200241,China;2.Division of Swine Infectious Diseases,State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,
Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150001,China;3.College of Veterinary Medicine,Southern China Agricultural University,Guangzhou 510642,China)
Abstract:In order to map the antigenic epitopes domain Ⅰ,Ⅱof the envelope (E)protein of Japanese encephalitis virus (JEV),a set of partially overlapping fragments spanning the E protein were fused with GST and expressed.The reactivity of the fusion proteins was detected by western blot and ELISA.Five linear antigenic epitopes,E1(1FNCLGMGNRDFIEGAS 16),E10-4(77TGEA HNEK 84),E11-2(83EKRADSSYVCKQ 94),E19(145GTTTSENHGNYSAQVG 160)and E33(257SQEGGLHHALAGAIVV 272)were identified.Immunization of mice with the fusion proteins revealed that all five proteins could elicit short peptide specific antisera.These results provided important basis for study of the structure and function of domain I,II of the JEV E protein,and development of diagnostic techniques.
Key words :Japanese encephalitis virus;envelope protein;epitope
收稿日期：2009-09-24
基金项目：院所长基金(2006-A-02)
作者简介：闫丽萍(1977-)，女，黑龙江双鸭山人，助理研究员，博士，主要从事动物病毒分子生物学研究.*通信作者：E-mail ：gztong@https://www.360docs.net/doc/28729177.html,
*Corresponding author
中国预防兽医学报
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
第32卷第1期2010年1月
Vol.32，No.1Jan.2010
流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis ，JE)，是由JE 病毒(JEV)引起的一种人与动物共同感染的蚊
媒病毒性疾病。JEV 主要侵害人的中枢神经系统，引起急性病毒性脑炎，导致高病死率(25%)，或神经
表2进一步确定的短肽序列与位置Table2The sequence and the location of deeply devided designed short peptides
编号Number E10-1 E10-2 E10-3 E10-4
氨基酸序列
Amino acid sequence
73RCPTTGEA80
81HNEKRADS88
75PTTGEAHNEKRA86
77TGEAHNEK84
编号
Number
E11-1
E11-2
E11-3
氨基酸序列
Amino acid sequence
89SYVCKQGF96
83EKRADSSYVCKQ94
85RADSSYVC92
-精神后遗症[1]；JEV感染猪可引起其繁殖障碍，给养猪业造成巨大的经济损失[2]。JEV主要流行于亚洲[3-4]，在南半球亦有报道[5-6]。
E蛋白是JEV的主要结构蛋白，由500个氨基酸组成，它在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。Kolaskar等认为E蛋白的三维结构域Ⅲ(292aa ～402aa)，集中许多抗原中和表位[7]。Seif等通过分段表达E蛋白，证明了中和表位存在于E373～399位的27个氨基酸序列内[8]。Wu等发现JEV的中和位点主要集中在EⅢ的E307～309、E327～333、E386～390这3个区域内[9]。本研究通过截短表达鉴定出JEV EⅢ的线性抗原表位E39(305～320)、E45-1(355～366)、E48-1(377～384)和E49(385～400)，经体外病毒中和试验表明，E39为具有病毒中和活性的抗原表位[10]。
为了进一步确定E蛋白的抗原表位，本研究设计了一组覆盖E蛋白I、II结构区域的部分重叠短肽，基因合成后克隆于原核表达载体进行融合蛋白表达。通过对表达融合多肽进行western blot和ELISA反应性筛选，鉴定线性抗原表位为针对JE建立基于抗原表位水平的特异性诊断方法奠定了基础。
1材料和方法
1.1质粒、阳性血清及实验动物质粒pGEX-6P-1、E.coli DH5α及BL21均为本实验室保存。兔抗JEV SA14-14-2疫苗株阳性血清由第四军医大学马文煜教授惠赠。BALB/c小鼠为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供。
1.2酶与标记物限制性内切酶及T4DNA连接酶均为TaRaKa公司产品；红外荧光标记(IRDye700)的抗兔IgG抗体、红外荧光标记(IRDye700)的抗鼠IgG 抗体购自Rockland化学免疫试剂公司；IPTG、凝胶回收试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品。合成短肽由南京博亚生物有限公司合成。
1.3短肽融合蛋白的设计对E蛋白I、II结构区域(1aa～296aa)进行抗原表位作图，设计了一套覆盖全部E蛋白I、II结构区域的36个短肽E1～E36。这些短肽长为16aa，部分重叠，各肽序列及位置如表1所示。并设计合成了36对寡核苷酸链。在编码区的5'端引入Bam H I位点，3'端引入Xho I位点。寡核苷酸由北京英骏生物技术有限公司合成。
1.4短肽的融合表达与纯化pGEX-6P-1经Bam H
I、Xho I双酶切回收后分别与退火的各双链寡核苷酸连接，重组子经酶切鉴定后命名为pGEX-E1至pGEX-E36，由北京英骏生物技术有限公司测序验证。将重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21，进行表达。将表达产物超声波裂解后，12%SDS-PAGE检测表达情况。可溶性短肽融合蛋白用谷胱甘肽Sepharose 4B RediPack亲和层析柱(Pharmacia Biotech)纯化，操作步骤按说明进行，纯化后测定蛋白质含量。不溶性短肽融合蛋白经超声波裂解后纯化[11]。
1.5抗原表位进一步确定根据实验结果，将E10、E11进一步截短，设计系列短肽，如表2所示。具体步骤按1.4所述的方法进行。
1.6抗融合蛋白血清的制备融合蛋白的纯化按1.4所述方法进行。首免用纯化融合蛋白(浓度为1mg/mL)与完全弗氏佐剂等体积混合乳化，腿部皮下注射免疫6周龄～8周龄雌性BALB/c小鼠5只(100mg/只)，每隔2周用与不完全弗氏佐剂等体积乳化的纯化融合蛋白加强免疫，第2次加强免疫后
表1短肽序列与位置
Table1The sequence and the location
of designed short peptides
编号
Number
E1
E2
E3
E4
E5
E6
E7
E8
E9
E10
E11
E12
E13
E14
E15
E16
E17
E18
氨基酸序列
Amino acid sequence
1FNCLGMGNRDFIEGAS16
9RDFIEGASGATWVDLV24
17GATWVDLVLEGDSCLT32
25LEGDSCLTIMANDKPT40
33IMANDKPTLDVRMINI48
41LDVRMINIEASQLAEV56
49EASQLAEVRSYCYHAS64
57RSYCYHASVTDISTVA72
65VTDISTVARCPTTGEA80
73RCPTTGEAHNEKRADS88
81HNEKRADSSYVCKQGF96
89SYVCKQGFTDRGWGNG104
97TDRGWGNGCGFFGKGS112
105CGFFGKGSIDTCAKFS120
113IDTCAKFSCTSKAIGR128
121CTSKAIGRTIQPENIK136
129TIQPENIKYKVGIFVH144
137YKVGIFVHGTTTSENH152
编号
Number
E19
E20
E21
E22
E23
E24
E25
E26
E27
E28
E29
E30
E31
E32
E33
E34
E35
E36
氨基酸序列
Amino acid sequence
145GTTTSENHGNYSAQVG160
153GNYSAQVGASQAAKFT168
161ASQAAKFTVTPNAPSV176
169VTPNAPSVALKLGDYG184
177ALKLGDYGEVTLDCEP192
185EVTLDCEPRSGLNTEA200
193RSGLNTEAFYVMTVGS208
201FYVMTVGSKSFLVHRE216
209KSFLVHREWFHDLALP224
217WFHDLALPWTSPSSTA232
225WTSPSSTAWRNRELLM240
233WRNRELLMEFEGAHAT248
241EFEGAHATKQSVVALG256
249KQSVVALGSQEGGLHH264
257SQEGGLHHALAGAIVV272
265ALAGAIVVEYSSSVML280
273EYSSSVMLTSGHLKCR288
281TSGHLKCRLKMDKLAL296
闫丽萍，等.乙型脑炎病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域抗原表位鉴定
第1期57
图3E 蛋白1aa ～296aa 结构区域表位作图
Fig.3
Schematic diagram of epitope mapping within E 1aa-296aa
123456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536GST
Short peptide-fused proten
0.10.20.30.40.50.60O D 450n m
1-36:Recombinant short peptide-fused protein
GST-E1-GST-E36;GST:GST control
图2短肽融合蛋白与免疫兔血清的ELISA 分析Fig.2ELISA analysis of the reactivity of JEV immunized rabit sera to short peptide-fused protein GST-E1-GST-E36
10d 采血分离血清，-20℃保存备用。1.7
Western blot 分析
1.7.1检测融合蛋白与JEV 阳性血清的免疫反应性
样品经SDS-PAGE 电泳后，转移至硝酸纤维素膜上，5%脱脂乳4℃封闭过夜，一抗为1∶100稀释兔抗JEV SA14-14-2株阳性血清，二抗为1∶5000稀释的红外荧光标记的抗兔IgG 抗体，具体试验步骤按Odyssey 双色红外激光成像系统说明书进行。1.7.2
检测鼠抗融合蛋白免疫血清将纯化的JEV
样品经SDS-PAGE 电泳后，转移至硝酸纤维素膜上，5%脱脂乳4℃封闭过夜。一抗用1∶100稀释的鼠抗融合蛋白免疫血清(该血清被过量的GST 蛋白37℃孵育半小时)，其它步骤同1.7.1。1.8
ELISA 分析检测
1.8.1融合蛋白与阳性血清的免疫反应性用
0.1mol/L 碳酸盐缓冲液(pH9.6)将纯化的短肽融合蛋白按10μg/mL 的量包被ELISA 板，4℃过夜，用1%BSA 37℃封闭3h 。以1∶100稀释的JEV 阳性血清为一抗，37℃作用1h ，以1∶5000稀释的HRP 标记羊抗兔IgG 抗体为二抗，37℃作用1h ，经TMB 显色液显色15min ，读取450nm 波长测量吸收值。[以P/N 值≥2为阳性，P/N 值＜2为阴性，P/N 值=(检测孔A 值-空白对照孔A 值)/(阴性鼠血清100倍稀释A 值-空白对照孔A 值)]。
1.8.2鼠抗融合蛋白血清与合成肽的免疫反应性用0.1mol/L 碳酸盐缓冲液(pH9.6)将合成短肽按10μg/mL 的量包被ELISA 板，一抗为倍比稀释的鼠抗融合蛋白血清(1∶50～1∶800)，同时设非免疫鼠血清为阴性对照，二抗加入1∶5000稀释的HRP 标记羊抗鼠IgG 抗体，具体试验步骤按1.8.1的试验方法进行。
2
结果
2.1短肽融合蛋白的表达与纯化
经SDS-PAGE 分
析表明，各短肽融合蛋白均得到了表达(图略)。
2.2短肽融合蛋白的western blot 分析与ELISA 检测
Western blot 和ELISA 结果表明，表达的融合蛋
白GST-E1、GST-E10、GST-E11、GST-E19和GST-E33能被JEV 阳性血清所识别(图1，图2)。由于GST-E10，GST-E11是一个连续的氨基酸序列，为了确定抗原表位的主要功能性区域，将该段基因进
一步截短表达，通过蛋白质印迹结果表明该区域含有2个抗原表位，即E10-4和E11-2(图1)。
2.3E 蛋白1aa~296aa 结构区域抗原表位作图
36个相互重叠且覆盖E 蛋白1aa ～296aa 的I 、II 结构区域的短肽融合蛋白经JEV 阳性血清免疫印迹及ELISA 筛选，以及通过免疫印迹进一步精确定位后，最终确定E1、E10-4、E11-2、E19和E335个线性抗原表位，表位作图如下(图3)。
2.4融合短肽免疫原性分析融合蛋白GST-E1、
GST-E10、GST-E11、GST-E19和GST-E33经纯化免疫小鼠制备了免疫血清，通过合成短肽包被ELISA 板进行分析表明，这些融合短肽能诱导小鼠产生针对相应短肽的特异抗体，而且抗体滴度高于1∶200(图4)，该结果表明所鉴定出的抗原表位均具有良好的免疫原性。而与全病毒的western blot 结果表
M:protein Marker;GST:GST control;E1-36;E10-1-E11-3:
Recombinant fusion protein E1-36;E10-1-E11-3图1短肽融合蛋白与兔血清的western blot 分析Fig.1Western blot analysis of the reactivity of short peptide-fused protein to JEV immunized rabit sera 中国预防兽医学报2010年
58
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
[6]
[7]
明，只有抗GST-E1，GST-E10，鼠血清能识别全病毒抗原(图5)，分子量约为53ku 。
3
讨论
3.1
E 蛋白1aa ～296aa 区域的表位鉴定本实
验采用原核表达系统对E 蛋白I 、II 结构域1aa ～296aa 进行表位鉴定。通过免疫学反应性筛选，鉴定出5个线性抗原表位：E1(1aa ～16aa)、E10-4(77aa ～84aa)、E11-2(83aa ～94aa)、E19(145aa ～160aa)和E33(257aa ～272aa)。其中的E11-2、E19和E33与1999年预测的表位E86～90、E153～158、E258～285及Kolaskar 和Tongaonkar 所预测的
E88～95相似[7，12]
。而且，其中E10(73aa ～88aa)与
Kutubuddin 等报道的线性中和表位74aa ～87aa 重叠[13]；E19(145aa ～160aa)表位包含E 蛋白上唯一的糖基化位点，Dewasthaly 等制备了一株抗表位E149aa ～163aa 具有中和活性的MAb
[14]
，该位点与
本实验鉴定的E19表位有12个氨基酸的重叠，E10和E19是否具有中和活性，还需进一步的实验来证明。本实验所确定的表位除E10和E19外，其它均是第一次通过实验方法确定的。3.2
抗原表位的免疫原性
融合蛋白GST-E1，
GST-E10，GST-E11，GST-E19和GST-E33经纯化免
疫小鼠制备了免疫血清，通过合成短肽包被ELISA 板进行分析表明，GST-E1诱导的免疫原性最强，其次是GST-E10、GST-E11和GST-E19，最弱的是GST-E33。这些融合短肽能诱导小鼠产生针对相应短肽的特异抗体，而且抗体滴度高于1∶200该结果表明所鉴定出的抗原表位均具有良好的免疫原性，为今后建立基于表位水平的特异性诊断JE 试剂的研发奠定了基础。
单因子血清与全病毒进行western blot 分析，发现GST-E1和GST-E10制备的血清有反应性，而处于E 蛋白中间的抗原表位融合蛋白GST-E11、GST-E19和GST-E33制备的血清没有与全病毒反应。分析原因可能是由于E19(145aa ～160aa)中包含E 蛋白上唯一的糖基化位点和一个二硫键位点，E33(257aa ～272aa)处有一个a-螺旋，E11(81aa ～96aa)位于域П，由于原核表达蛋白不能进行正确的折叠以及糖基化修饰等蛋白质的后期加工，所以导致GST-E11、GST-E19和GST-E33制备的单因子血清没有与全病毒反应。
参考文献：
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图4合成短肽检测融合蛋白ELISA 分析Fig.4ELISA analysis of the reactivity of sera against
fusion proteins to the synthetic short peptides M E1E10E11E19E33阳性阴性72ku 55ku 40ku
E1,E11,E19,E33:Mouse sera against recombinant fusion protein GST-E1,E11,E19,E33图5Western blot 检测抗融合蛋白血清Fig.5Western blot analysis of the reactivity of immunized mouse sera to JEV SA14-14-2
闫丽萍，等.乙型脑炎病毒E 蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域抗原表位鉴定第1期59
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(本文编辑：徐佳)
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《电子绘图员》职业技能鉴定实践操作试题四
电子行业特有工种鉴定统一试卷 单位：淮考证号：姓名： 电子绘图员（高级）上机试题（Protel 99se） 注意事项 题号一二三四五六七八总分得分 第一题 原理图模板制作（5分） 1、在指定根目录底下新建一个以考生的准考证号为名的文件夹，然后 新建一个以自己名字拼音命名的设计数据库文件。例：考生准考证号的文件名为：CDY.ddb；然后在其内新建一个原理图设计文件，名为：mydot1.dot。 2、设置图纸大小为A4，水平放置，工作区颜色为18号色，边框颜色为 3号色。 3、 绘制自定义标题栏240mil*80mil，如图1所示。其中边框直线为小号 直线，颜色为3号，文字大小为12磅，颜色为黑色，字体为仿宋 _GB2312。 图1 第二题 原理图库操作（10分） 1、在考生的设计数据库文件中新建库文件，命名为myschlib1.lib。
2、在myschlib1.lib库文件中建立样图2所示的带有子件的新元件， 元件命名为74ALS000，其中图中对应的为四个子件样图，其中 第7、14脚接地和电源，网络名称为GND和VCC。 3、在myschlib1.lib库文件中建立样图3所示的的新元件，元件命名 为P89LPC930。 保存操作结果。 图2 图3
第三题 PCB库操作（15分） 1、在考生的设计数据库文件中新建PCBLIB1.LIB文件，按照图4要 求创建元件封装，已知数码管的管脚直径为45mil，请选定合适 焊盘及过孔大小命名为KEY。 2、在PCBLIB1.LIB文件中继续新建74ALS000的元件封装，名称 SOP14。按照样图5要求创建元件封装。焊盘的大小为 80mil*24mil。
呼吸道合胞病毒新型表位的鉴定及免疫效果评估
呼吸道合胞病毒新型表位的鉴定及免疫效果评估第一部分呼吸道合胞病毒预防性肽疫苗的设计目的: 尝试运用理论设计和分 子模拟技术确定和优化呼吸道合胞病毒的肽疫苗。方法: 首先检索蛋白质晶体结 构数据库中呼吸道合胞病毒相关蛋白晶体结构数据和呼吸道合胞病毒中和抗体- 识别肽段的复合物晶体结构数据。 后采用分子模拟, 分析了中和抗体与表位肽间作用方式;通过分子动力学模拟技术评估FFL-001 抗原蛋白的各个部分对其稳定结构的作用及与中和抗体结合的影响;通过理性设计优化得到抗原肽, 并评估其与中和抗体的作用,最终通过实验来验证其效果。结果:1.成功从蛋白质晶体结构数据库中获取RSV F蛋白变构前后高级结构晶体数据,抗体Motavizumab 与其表位肽的共晶结构数据。 2. 对F 蛋白变构前后的高级结构分析可知,F 蛋白的结构中存在高级结构相 对稳定的肽段，该肽段受F蛋白变构影响较小。该肽段亦是已开发的RSV中和抗体的靶标。 3. 结构和能量分析Motavizumab-FFL001 作用表明,FFL-001 与 抗体Motavizumab的结合区仅局限于H2和H3螺旋连接转角区（氨基酸65-89）, 在此相互作用界面上, 存在9 个氢键和一条盐桥作用。 4. 分子动力学结果表明, 完整FFL-001能在整个动力学模拟时段内能维持稳定的空间结构，而缺少H1螺旋束的FFL001的结构出现明显变构;H2和H3螺旋连接转角区（即Motavizumab结合位点肽段（氨基酸65-89））肽段结构只有其N端的一小段螺旋 结构维持着，而其C-端和中间的氨基酸序列呈完全的无序状态。
蛋白抗原表位预测及抗原多肽设计
蛋白抗原表位预测及抗原多肽设计 利用在线软件BepiPred Server（）从蛋白序列直接预测抗原表位 还有其他在线预测网站 进Antigenic Peptide Prediction 用tools 把氨基酸序列粘贴进去，就可以直接得出预测结果 抗原多肽选择的基本原则 1、尽可能是在蛋白表面 2、保证该段序列不形成α-helix 3、N,C端的肽段比中间的肽段更好 4、避免蛋白内部重复或接近重复段的序列 5、避免同源性太强的肽段 6、交联可以交联在N，C两端，选择依据就是交联在对产生抗体不太重要的一端 7、序列中不能有太多的Pro,但有一两个Pro有好处，可以使肽链结构相对稳定一些，对产生特异性抗体有益。 抗原多肽设计的基本原则 ????? 为了使生产抗体获得最佳效果，仔细地设计抗原多肽是很有必要的，设计应满足一个基本条件：在免疫过程中，该抗原既不会产生过强的免疫反应，同时又能产生出对感兴趣的蛋白有结合能力的抗体。尽管抗原设计是一个很复杂的课题，有诸多需要注意的细节，已超过了我们所能提供的范围，根据我们所积累的经验，有几点关键的基本设计原则可以提供给大家参考：
1、确定抗体的用途（应用）新开展一个研究项目，弄清楚所感兴趣的蛋白的一些基本特性是很有必要的，特别是如果知道蛋白的结构会对选择抗体易于接触和识别的识别区域有很大的帮助。然而，在没有这样精确的结构信息（多数是这种情况）的情况下，了解研究的用途（应用）会影响多肽设计的策略。例如：如果研究重点是集中在蛋白的不同区域，如C端或N端，或在一种特定状态下的蛋白，如磷酸化等，那么按照所需序列设计的多肽和产生的相应的抗体在应用上应该没有太大的困难，然而，蛋白的构象将影响抗体与其识别区域之间的相互作用。这种情况下可能存在的问题是如果在折叠的蛋白中，该识别区域被藏在蛋白的内部，抗体将无法接触到该区域。（无法产生相互作用）。 2、识别区域的选择原则一般说来最理想的抗原性识别区域应具备亲水、位于蛋白表面和结构上易变形性等特点。因为在大多数的天然（自然）环境中，亲水区域倾向于集中在蛋白表面，而疏水区域常常被包裹在蛋白内部，同样道理，抗体只能与在蛋白表面发现的识别区域相互作用，而当这些识别区域有足够的结构易变形性而转移到抗体可接触的位置时，将会与抗体间有很高的亲和性。 3、连续的与不连续的识别区域连续的区域是指由连续的氨基酸序列（残基）构成的识别区域。大多数抗体是针对连续识别区域的，抗体能与这类区域以很高的亲和力相结合表明这段序列不在蛋白内部。不连续的识别区域是代表有一定折叠的一段多肽序列，或是将两段分离开的多肽连在一起的抗体的识别区域。在某些情况下，针对这样不连续识别区域的抗体也能产生，只是用来免疫的抗原多肽必须具备与该不连续识别区域相似的二级结构，而序列的长度需要符合相关的要求。 4、基本建议为了避免识别区域隐藏在蛋白内部的风险，我们通常建议选择蛋白的N，C两端来产生的相应的抗体。因为在完整的蛋白中，N，C两端通常是暴露在蛋白表面的。然而，一定要注意膜蛋白的C端疏水性太强，不适合作为抗原。 5、序列的长度通常我们建议抗原多肽的序列长度在8-20个氨基酸残基之间，如果太短，就有多肽太特殊、所产生的抗体与天然蛋白之间的亲和力（结合能力）不够强的风险，同样，
cad绘图考试试卷计算机辅助设计绘图员(中级)技能鉴定试题(机械类)
Cad考试样题计算机辅助设计绘图员(中级)技能鉴定试题（机械类） 题号：M_cad_mid_07 考试说明： 1．本试卷共6题； 2．考生须在考评员指定的硬盘驱动器下建立一个以自己准考证号后8位命名的文件夹作为考生文件夹； 3．考生在考评员指定的目录下，查找"Test_07.exe"文件，并双击文件，将文件解压到考生文件夹中，解压密码为abcde（注意字母大小写）； 4．然后依次打开相应的6个图形文件，按题目要求在其上作图，完成后仍然以原来图形文件名保存作图结果，确保文件保存在考生已建立的文件夹中； 5．考试时间为180分钟。 一、基本设置(8分) 打开图形文件A1.dwg，在其中完成下列工作： 1. 按以下规定设置图层及线型，并设定线型比例；绘图时不考虑图线宽度。
二、用比例1:1作出下图，不标注尺寸。（10分） 绘图前先打开图形文件A2.dwg，该图已作了必要的设置，可直接在其上作图，作图结果以原文件名保存。 三、根据立体已知的2个投影作出第3个投影。（10分） 绘图前先打开图形文件A3.dwg,该图已作了必要的设置，可直接在其上作图，作图结果以原文件名保存。
四、把下图所示立体的主视图画成全剖视图，左视图画成半剖视图。（10分） 绘图前先打开图形文件A4.dwg，该图已作了必要的设置，可直接在其上作图，左视图的右半部分取剖视。作图结果以原文件名保存。 五、画零件图（附图1）。（50分） 具体要求： 1.画3个视图。绘图前先打开图形文件A5.dwg，该图已作了必要的设置，可直接在其上作图； 2.按国家标准有关规定，设置机械制图尺寸标注样式（样式名为“M_cad”）； 3.标注主视图的尺寸与表面粗糙度代号（表面粗糙度代号要使用带属性的块的方法标注，块名Block Name为“RA”，属性标签Tag 为“RA”，提示Prompt为“RA”）； 4.不画图框及标题栏，不用标注右上角的表面粗糙度代号及“未注圆角。。。”等字样）； 5. 作图结果以原文件名保存。 附图 1
抗原表位研究方法进展_宋帅
动物医学进展,2010,31(12):87-91Pr ogress in Veterinary Medicine 抗原表位研究方法进展 宋 帅,李春玲* ,贾爱卿,杨冬霞,李 淼 (广东省农业科学院兽医研究所 广东省兽医公共卫生实验室,广东广州510640) 收稿日期:2010-05-18 基金项目:广东省农业攻关项目(2007A020300005-11) 作者简介:宋 帅(1982-),男,河南汝州人,研究实习员,硕士,主要从事动物疫病及综合防控技术研究。*通讯作者 摘 要:抗原表位是抗原分子中的主要功能单位,能有效刺激机体的细胞免疫和体液免疫。随着免疫学和生物信息学技术的不断发展,用于研究T 细胞表位和B 细胞表位的方法得到了很大的提高。论文中概述了近几年用于研究T 细胞表位的预测方法和鉴定方法,以及在B 细胞表位研究中所用的表位肽扫描技术、蛋白质/切割0法、噬菌体展示技术、X -衍射与核磁共振、表位预测方法等技术,并对每种研究方法进行了比较,为从事抗原表位研究的人员提供参考,从而更有利于表位肽疫苗的研制和诊断方法的建立。 关键词:T 细胞表位;B 细胞表位;预测;鉴定 中图分类号:S852.4 文献标识码:A 文章编号:1007-5038(2010)12-0087-05 抗原表位又称抗原决定簇,是指抗原分子表面具有特殊结构和免疫活性的化学基团,具有刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞并能够被其识别的一个 免疫活性区。根据抗原表位特异性免疫应答的程度,可将抗原表位分为免疫优势表位、亚优势表位和隐性表位。根据与抗原受体结合细胞的不同,分为B 细胞抗原表位和T 细胞抗原表位;其中B 细胞抗原表位则往往为亲水性肽段,一般位于抗原三维大分子的氨基酸长链折叠处[1],而T 细胞抗原表位往往仅为埋藏在蛋白质空间结构内部的疏水性肽段[2]。根据表位对机体的影响,可分为保护性表位(免疫位)、致病性表位(变应位)和耐受性表位(耐受位)。按抗原表位结构的不同分为连续性抗原表位和非连续性抗原表位,前者又称线型表位,是由肽链上顺序连续的氨基酸组成,后者又称构象型表位,是由那些空间邻近但顺序上不连续的氨基酸组成。线型表位见于T 细胞表位和部分B 细胞表位,构象型表位只见于B 细胞表位[3]。在机体的免疫系统中,免疫细胞通常难以借助其表面受体识别整个蛋白质分子,仅识别抗原分子上的抗原决定簇,也就是说抗体的特异性是针对抗原表位而不是针对完整的抗原分子的[4]。表位一般只占5个~7个氨基酸或单糖残基的大小,最多不超过20个氨基酸残基。抗原表位是蛋白质抗原性的基础,所以深入研究蛋白质抗原表位对疾病的诊断及预后判定,定点改造蛋白质分子以降低蛋白质药物的免疫原性,设计无毒副作 用的人工疫苗以及免疫干预治疗等具有重要意义。 1 T 细胞表位的研究方法 T 细胞表位是抗原蛋白中经抗原递呈细胞(an -tig en presenting cell,APC)处理,由主要组织相溶性复合物(major histocompatibility com plex,MH C)分子递呈给T 淋巴细胞受体的多肽片段。主要涉及细胞毒性T 细胞(cytotox ic T cell,CT L )抗原表位和辅助性T 细胞(helper T cell,Th)抗原表位的研究,其中CT L 抗原表位与MH C ?类分子亲和肽相关,Th 抗原表位与M H C ò类分子的亲和肽相关。所以对T 细胞表位的筛选主要基于候选肽能否和MH C 分子结合。与M H C ?类分子结合的多肽长度通常为8个~11个氨基酸,一般为9个,在序列特定位置上有锚点存在。而MH C ò分子亲和肽长度可达30个氨基酸以上,其结合基序存在不同程度的退化[5]。随着免疫学和生物信息学技术的不断发展,对T 细胞表位的研究主要有以下几种方法。 1.1 合成肽法 在机体的免疫系统中,T 细胞主要识别抗原分子上的线型表位。所以根据抗原蛋白质分子的氨基酸序列随机合成或连续合成一个或几个重叠氨基酸的一系列肽段,然后通过多肽活性的检测实验进一步确定T 细胞表位。此方法鉴定的T 细胞表位较可靠,且能发现一些不符合多肽结合基序(motif)的MH C 结合抗原肽。Gerner W 等[6]将口蹄疫病毒结
三种分析蛋白结构域(Domains)的方法
三种分析蛋白结构域(Domains)的方法 三种分析蛋白结构域(Domains)的方法 1，SMART入门，蛋白结构和功能分析 SMART介绍 SMART (a Simple Modular Architecture Research Tool) allows the identification and annotation of genetically mobile domains and the analysis of domain architectures. More than 500 domain families found in signalling, extracellular and chromatin-associated proteins are detectable. These domains are extensively annotated with respect to phyletic distributions, functional class, tertiary structures and functionally important residues. Each domain found in a non-redundant protein database as well as search parameters and taxonomic information are stored in a relational database system. User interfaces to this database allow searches for proteins containing specific combinations of domains in defined taxa. For all the details, please refer to the publications on SMART. SMART(http://smart.embl-heidelberg.de/)，可以说是蛋白结构预测和功能分析的工具集合。简单点说，就是集合了一些工具，可以预测蛋白的一些二级结构。如跨膜区（Transmembrane segments），复合螺旋区（coiled coil regions），信号肽（Signal peptides），蛋白结构域（PFAM domains）等。 SMART前该知道的 1，SMART有两种不同的模式：normal 或genomic 主要是用的数据库不一样。Normal SMART, 用的数据库 Swiss-Prot, SP-TrEMBL 和 stable Ensembl proteomes。Genomic SMART, 用全基因组序列。详细列表：http://smart.embl-heidelberg.de/smart/list_genomes.pl 2，一些名词解释
CAD制图员四级技能鉴定理论试题
一、单项选择题 1．职业道德是指从事一定职业的人们在职业实践活动中所应遵循的职业原则和规范，以及与之相应的(B)、情操和品质。 A、企业标准 B、道德观念 C、公司规定 D、工作要求 2．(B)是社会道德的重要组成部分，是社会道德原则和规范在职业活动中的具体化。 A、人生价值 B、职业道德 C、社会活动 D、职业活动 3．职业道德主要概括本职业的职业业务和(D)，反映本职业的特殊利益和要求。 A、职业分工 B、人才分类 C、职业文化 D、职业职责 4．(C)就是要做到自己绘制的每一张图纸都能符合图样的规定和产品的要求，为生产提供可靠的依据。 A、爱岗敬业 B、注重信誉 C、讲究质量 D、积极进取 5．(A)是指一个人在政治思想、道德品质、知识技能等方面所具有的水平。 A、基本素质 B、讲究公德 C、职业道德 D、个人信誉 6．制图国家标准规定，图纸优先选用的(A)代号为5种。 A、基本幅面 B、图框格式 C、图线线型 D、字体高度 7．图纸中字体的(A)一般为字体高度的2 1倍。 A、宽度 B、高度 C、角度 D、斜度 8．图纸中斜体字字头向右倾斜，与(B)成75°角。 A、竖直方向 B、水平基准线 C、图纸左端 D、图框右侧 9．机械图样中常用的图线线型有粗实线、(A)、虚线、波浪线等。 A、细实线 B、边框线 C、轮廓线 D、轨迹线 10．两段点画线相交处应是(A)。 A、线段交点 B、间隙交点 C、空白点 D、任意点 11．图样上标注的尺寸，一般应由尺寸界线、(D)、尺寸数字组成。 A、尺寸线 B、尺寸箭头 C、尺寸箭头及其终端 D、尺寸线及其终端 12．尺寸线终端形式有箭头和( D)两种形式。 A、圆点 B、圆圈 C、直线 D、斜线 13．下列叙述错误的是(C)。 A、图形的轮廓线可作尺寸界线 B、图形的轴线可作尺寸界线 C、图形的剖面线可作尺寸界线 D、图形的对称中心线可作尺寸界线 14．当标注(B)尺寸时，尺寸线必须与所注的线段平行。 A、角度 B、线性 C、直径 D、半径 15．图样中尺寸数字不可被任何图线所通过，当不可避免时，必须把(C)断开。 A、尺寸线 B、尺寸界线 C、图线 D、数字 16．标注角度尺寸时，尺寸数字一律水平写，尺寸界线沿径向引出，(A)画成圆弧，圆心是角的顶点。 A、尺寸线 B、尺寸界线 C、尺寸线及其终端 D、尺寸数字 17．画图时，铅笔在(B)方向应与纸面垂直，而且向画线前进方向倾斜约30o。 A、左右 B、前后 C、上下 D、里外 18．圆规使用铅芯的硬度规格要比画直线的铅芯(A)。 A、软一级 B、软二级 C、硬一级 D、硬二级 19．(A)是投射线汇交一点的投影法。 A、中心投影法 B、平行投影法 C、正投影法 D、斜投影法 20．平行投影法是投射线(C)的投影法。 A、汇交一点 B、远离中心 C、相互平行 D、相互垂直
年度鉴定表个人鉴定
---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 年度鉴定表个人鉴定 年度鉴定表个人鉴定【1】 大学的时光只能是过得飞快，转眼间大二已接近尾声。 大二一学年可以用繁忙来形容，大二让我感到满满当当的。 在一年的时间里，我在努力学习文化知识的同时，还注重提高政治思想素质。 下面我来总结大二的成绩与不足，从思想、文明、学习、工作等方面入手，一一梳理，不仅让老师看到我一年的表现，也让自己知晓是如何度过这一年的。 首先是思想方面：积极参加各种学校或学院组织的活动，认真学习正确的、先进的观念，努力提高自己的思想觉悟。 端正自己的态度，认真地上好每一堂《形势与政策》、《毛泽东思想、邓小平理论和三个代表重要思想》和《马克思基本原理》课程。 过去对于这种课总有些敷衍的心态，但这次可以说有较大的改观。 主要是老师讲课相当不错，以实事入手，结合教材中有关知识点，仔细地分析其中的道理。 时常穿插一些多媒体资料，激发了我对于课程的兴趣。 课后自己会翻书阅览老师讲过的知识，对其印象加深。 初步了解了中西方在意识形态方面的差异，中国的社会制度的优势具体的一些表现。 1 / 13
对于西方一些不法分子的攻击，我们要火焰眼睛将其识破，予以坚决斗争。 自己时常会去活动中心，在报刊栏阅读《文汇报》等报纸，或者收听广播，了解国家大事。 比如这次大地震，自己时刻在关注着灾区的形势，为灾区人民祈福。 响应学校捐款的号召，为受难的人尽自己的绵薄之力，俗话说：一方有难，八方支援。 我一直相信，伟大的中国人民是坚不可摧的。 有空时我会去听学校举办的讲座，这也让我受益。 当得知唐骏先生要来讲座是兴奋不已，他的成功经验或多或少会给我一些启示。 但可惜最后没有拿到票，不过通过同学拍摄的一段录像，还是让我感慨唐骏先生在工作上的执着投入和艰辛付出，才有今日的成就。 没有耕耘就没有收获，正应验了这句老话。 思想学习随时随地，我去听了三个代表理论社团的辩论，感觉他们活力四射，虽然结果并不重要，关键是在辩论之中让我对事情的是与非有了更为深刻的理解，帮组我提高了分析问题的能力。 学习了马哲原理，就要想着怎么去使用它分析具体的事物，这次活动对我产生了良好的启示作用，学以致用，才是真理。 人的思想是人的灵魂，不知这一年的收获是否足够，但我知道不懈努力、不断收获是最重要的。
蛋白抗原表位预测算法及多肽抗原设计原则
https://www.360docs.net/doc/28729177.html, 蛋白抗原表位预测算法 及多肽抗原设计原则 概述 为了获取识别天然蛋白的抗体，有两种方式可以选择。一种是利用重组蛋白的方式获取尽可能接近天然条件下的重组蛋白，然后刺激试验动物免疫系统，进而获取相应抗体。这种方式获取抗体的成功率较高且效价较好；另一种是预测天然蛋白的抗原决定簇，这种抗原决定簇最终体现为多肽形式，将其与相应的载体偶联后刺激试验动物免疫系统，也可以获取相应的抗体。这种方式的选择有其特殊需要。我们德泰生物科技南京有限公司提供这两种类型的抗体定制服务。 什么是抗原决定簇 蛋白质表面部分可以使免疫系统产生抗体的区域叫抗原决定簇。一般抗原决定簇是由6－12氨基酸或碳水基团组成，它可以是由连续序列（蛋白质一级结构）组成或由不连续的蛋白质三维结构组成。 蛋白抗原表位预测方法 目前蛋白质抗原表位预测的方法大致可以分为两类，一类是基于蛋白质高级结构预测，像beta-转角、膜蛋白跨膜区预测等；一种是基于氨基酸的统计学倾向性，像亲水性（hydrophilicity）、弹性（flexibility）、表面可接触性（surface accessibility）、抗原倾向性（antigenic propensity）。具体算法请参考相关文献，部分文献如下： 1)Chou,Fasman Adv Enzymol Relat Areas Mol Biol.1978;47:45-148. 2)Hopp,T.P.and Woods,K.R.(1981)https://www.360docs.net/doc/28729177.html,A78,3824-3828. 3)Welling,G.W.,Weijer,W.J.,van der Zee,R.and Welling-Wester,S.(1985)FEBS Lett.188,215-218. 4)Karplus PA,Schulz GE.Naturwissenschafren1985;72:212-3. 5)Emini EA,Hughes JV,J Virol.1985Sep;55(3):836-9. 6)Parker,J.M.R.,Guo,D.and Hodges,R.S.(1986)Biochemistry25,5425-5432. 7)Schmidt,A.M.(1989)Biotect.Adv.7,187-213. 8) A.S.Kolaskar and Prasad C.Tongaonkar(1990)FEBS09210 9)K.Hofmann&W.Stoffel(1993) 10)Paul Horton,Keun-Joon Park,Takeshi Obayashi&Kenta Nakai,Proceedings of the4th Annual Asia Pacific Bioinformatics Conference,Taiwan.pp.39-48,2006. 11)Jens Erik Pontoppidan Larsen,Ole Lund and Morten Nielsen.Immunome Res.2006
全国计算机绘图师考试试题汇总[1]
国家职业技能鉴定统一考试 中级制图员《计算机绘图》测试试卷B 1、考试要求（10分） （1）设置A3图幅，用粗实线画出边框（400×277），按尺寸在右下角绘制标题栏，在对应框内填写姓名和准考证号，字高7。 （2）尺寸标注按图中格式。尺寸参数：字高为3.5mm，箭头长度为3.5mm，尺寸界限延伸长度为2mm，其余参数使用系统缺省配置，技术要求字体高度5mm。 （3）分层绘图。图层、颜色、线型要求如下： 层名颜色线型用途 0黑/白实线粗实线 1红实线细实线 2洋红虚线虚线 3紫点划线中心线 4兰实线尺寸标注 5兰实线文字 其余参数使用系统缺省配置，另外需要建立的图层，考生自行设置。 （4）将所有图形储存在一个文件中，均匀布置在边框线内，存盘前使图框充满屏幕，文件名采用准考证号码。 2、按标注尺寸1：1绘制图形，并标注尺寸。（20分）
3、按标注尺寸1：1抄画主左视图，补画俯视图（不标尺寸）。（30分） 4、按标注尺寸1：2抄画零件图，并标全尺寸、技术要求和粗糙度。（40分）
国家职业技能鉴定统一考试 中级制图员《计算机绘图》测试试卷C 1、考试要求（10分） （1）设置A3图幅，用粗实线画出边框（400×277），按尺寸在右下角绘制标题栏，在对应框内填写姓名和准考证号，字高7。 （2）尺寸标注按图中格式。尺寸参数：字高为3.5mm，箭头长度为3.5mm，尺寸界限延伸长度为2mm，其余参数使用系统缺省配置，技术要求字体高度5mm。 （3）分层绘图。图层、颜色、线型要求如下： 层名颜色线型用途 0黑/白实线粗实线 1红实线细实线 2洋红虚线虚线 3紫点划线中心线 4兰实线尺寸标注 5兰实线文字 其余参数使用系统缺省配置，另外需要建立的图层，考生自行设置。
教师考核鉴定表单位意见.doc
教师考核鉴定表单位意见 如果还没有着手写教师考核鉴定表单位意见，就可以来我这里看看哦!下面由本我精心整理的教师考核鉴定表单位意见，希望可以帮到你哦! 教师考核鉴定表单位意见篇一 虽不善于表达自己的情感，但只要了解他的人无不为他那爱岗敬业的精神所震惊。他对待工作学生非常负责，永远将学生放在第一位。作为班主任的他很会团结集体，体育课时他组织学生，和学生们一起打篮球，也会和女同学打羽毛球。他很关心爱护学生，在我们班水痘肆虐期间，他为我们买预防药，给宿舍消毒，到处奔波，却从无怨言，他经常为班级制定一系列的规章制度，把班级的各项事务管理的井然有序。虽然他平时对我们很严格，但古人云：严师出高徒。所以我们班一致认为"师德标兵"的称号梁志勇老师当之无愧! 教师考核鉴定表单位意见篇二 张老师以饱满的热情、诚恳的态度投入到这一年的教育教学、导师带教工作中。思想上忠于人民的教育事业，教书育人，尽职尽责，积极奉献，出色地完成了本职岗位承担的工作量和工作任务。经常深入到学生当中去，除了做好学科辅导外，还细致地了解学生，循循善诱、诲人不倦，与学生建立了民主平等和谐的师生关系，工作中谦虚谨慎、礼貌待人、以课件下载身作则、严于律己、为人师表。教学态度认真，治学严谨。精心备课，教学内容充实、丰富，能吸收学科新知识、新成果，不断更新教学内容，理论联系实际，符合教学大纲要求;能根据课程特点选择
恰当的教学形式、方法和手段，实行启发式教学，做到因材施教，讲授清晰、表达准确，重点突出，难点、疑点处理恰当，课堂设计合理，节奏适度。培养了学学习的兴趣，学生学习的积极性和主动性得到提高，学生分析问题和解决问题能力有明显改善，促进了学生的全面发展。此外，张老师还悉心对我校年轻教师孙宝义进行指导，一年来几乎天天坚持进班听课，课后做耐心细致的指导，经过一年的努力，我校孙老师的教学水平有了显著提高张老师在我校这一年的工作得到学校校领导和全体师生的认可和好评。 教师考核鉴定表单位意见篇三 ××老师有心、用心、且有一颗巧心。她不仅积极参加政治学习，认真领会践行上级精神，还用心学习各种专业书刊，不断提高自身的专业素养及教学能力。面对性格各异，基础参差不齐的学生，她耐心想办法，有条不紊地组织学生互助互学，实施分类教学。面对学校的一次次接待任务，她静心接受，细心准备，圆满地完成了一次次接待课，尽显聋校师生在面点专业的风采，使得一批批来宾喜笑颜开。面对副班主任工作，她主动配合班主任协调好各项工作，灵活到位，使得班级的日常教育工作秩序井然，班级氛围积极和谐。 教师考核鉴定表单位意见篇四 ××老师温雅、平和、踏实、细致。作为一名党员教师，她能够模范带头参与各种政治学习活动，她尊敬领导、尊重同事、待人真诚、热爱学生，人际关系和谐融洽，是老师们的好榜样。作为一名政治教师，她为了上好课，看教参、查资料、找实例......乐在其中。由于尊重学生，能
计算机辅助设计绘图员技能鉴定试题(机械类)
计算机辅助设计绘图员技能鉴定试题（机械类） 题号：M_cad_mid_01 考试说明： 1 .本试卷共6题； 2 ?考生在考评员指定的硬盘驱动器下建立一个以自己后8位命名的考生文件夹; 3. 考生在考评员指定的目录，查找“绘图员考试资源A”文件，并据考场主考官提供的密码解 压到考生已建立的考生文件夹中； 4 ?然后依次打开相应的6个图形文件，按题目要求在其上作图，完成后仍然以原来图形文件名 保存作图结果，确保文件保存在考生已建立的文件夹中，否则不得分...； 5 .考试时间为180分钟。 一、基本设置（8分） 打开图形文件Al.dwg，在其中完成下列工作： 1.按以下规定设置图层及线型，并设定线型比例。绘图时不考虑图线宽度。 图层名称颜色（颜色号）线型 01绿(3)实线Continuous ( 粗实线用) 02白(7)实线Co nti nuous （细实线、尺寸标注及文字用） 04黄(2)虚线ACAD_ISO02W100 05红(1)点画线ACAD_IS004W100 07粉红(6)双点画线ACAD_ISO05W100 2.按1:1比例设置A3图幅（横装） - 「，留装订边，画出图框线（纸边界线已画出） 3.按国家标准的有关规定设置文字样式，然后画出并填写如下图所示的标题栏。不标注尺寸。 4 ?完成以上各项后，仍然以原文件名保存。
、用1 : 1比例作出下图，不标注尺寸。（10 分） 绘图前先打开图形文件 件 名保存。 A2.dwg，该图已作了必要的设置，可直接在其上作图，作图结果以原文 三、根据已知立体的2个投影作出第3个投影。（10分） 绘图前先打开图形文件A3.dwg,该图已作了必要的设置，可直接在其上作图，作图结果以原文件名保存。四、把下图所示立体的主视图画成半剖视图，左视图画成全剖视图。（10分）
鉴定手表的基本方法
鉴定手表的基本方法 鉴定手表有章可寻.手表不同于字画和瓷器, 因为钟表本身就是一个精密复杂的机械装置，还非常微小机械.作假工艺不可能不出马脚, 做假的主要是蒙不懂的人，假表也不可能做的和真表完全一样，其实，我觉得表没有假的，人的话才有假的！假表很多是表识不对.镀金的标成K金的//钢的—白金//假钻---天然//石英---蓝宝石//不防水---防水//等等….. 从11个方面看手表 看表必须看机芯，机芯最不容易仿，也最容易看出问题，除非你用真的！这就要求你能完好的打开和关（压合）它 一．机芯部件：（从机芯表面看） 一些重要的机芯零件，在表面,在摆夹板上比较容易看到的比如：防震器：有不同的商号，等级也不同，低档常见的用三角防震器，假表见的比较多，如(ETA 2846)好一点的用INCBLOC 的，而高档手表一般用KIF防震器，比如ROLEX，V.C ，P.P , P 等,仔细观察你会发现,即便是使用同样的机芯, 防震器的规格也上不同的.比如OMEGA和TUDOR都使用了ETA 2892机芯,但TUDOR用KIF,OMEGA用INCBLOC, 高档手表有高档的传统做法,通常KIF 防震器和一种蜗杆式的精度调整结构(叫“奥垂斯特”)组合,才是高档手表机芯的标志(见图) 最起码的是用偏心罗钉的微调机构。 （2）．材质工艺: 另外,比较容易看见的零件是擒纵轮和擒纵叉,中低档的机芯使用铜质的擒纵叉, 擒纵轮和擒纵叉表面均不抛光,高档的机芯使用钢质的擒纵叉, (因为钢的比重低)擒纵轮和擒纵叉表面均抛光,钢质零件抛光,机芯夹板做修饰和研磨是高低表机芯的一大特点. 摆轮: 高档表的摆轮肯定是金色的,其实摆轮的材质是不一样的,,一般表用锌铜合金(德国银),高档的用铍合金( BE) 铍是一种航空材料,又轻又硬,主要是温度线膨胀变化小,能保证手表的精度 原来我做进口钟表机心检测和分析，那个时候和瑞士手表厂家的定货合同里，专门有机心主要部件的详细规定，（包括零件的牌号，等级，材质，工艺，价格）
蛋白质的功能域、结构及其药物设计----6
第六章 蛋白质的功能域、结构及其药物设计 随着人类基因组全序列测定的完成，预示着基因组研究从结构基因组(Structural Genomics)进入了功能基因组(Functional Genomics)研究时代。研究基因组功能当然首先要研究基因表达的模式。当前研究这一问题可以基于核酸技术，也可以基于蛋白质技术，即直接研究基因的表达产物。测定一个有机体的基因组所表达的全部蛋白质的设想是由Williams于1994年正式提出的，而“蛋白质组”(proteome)一词是Wilkins于1995年首次提出。蛋白质组是指由一个细胞或组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质。蛋白质组与基因组相对应，均是一个整体概念，但是两者又有根本的不同：一个有机体只有一个确定的基因组，组成该有机体的所有不同细胞都共享有一个基因组；但是，基因组内各个基因表达的条件、时间和部位等不同，因而它们的表达产物(蛋白质)也随条件、时间和部位的不同而有所不同。因此，蛋白质组又是一个动态的概念。由于以上原因，再加上由于基因剪接，蛋白质翻译后修饰和蛋白质剪接，基因遗传信息的表达规律更趋复杂，不再是经典的一个基因一个蛋白的对应关系，而是一个基因可以表达的蛋白质数目大于一。由此可见，蛋白质组研究是一项复杂而艰巨的任务。 蛋白质结构与功能的研究已有相当长的历史，由于其复杂性，对其结构与功能的预测不论是方法论还是基础理论方面均较复杂。统计学方法曾被成功地应用于蛋白质二级结构预测中，如Chou和Fasman提出的经验参数法便是最突出的例子。 该方法统计分析了各种氨基酸的二级结构分布特征，得出相应参数(P а,P β 和P t )并 用于预测。本章将简要介绍蛋白质结构与功能预测的生物信息学途径。 第一节 蛋白质功能预测 一、根据序列预测功能的一般过程 如果序列重叠群(contig)包含有蛋白质编码区，则接下来的分析任务是确定表达产物——蛋白质的功能。蛋白质的许多特性可直接从序列上分析获得，如疏水性，它可以用于预测序列是否跨膜螺旋(transmenbrane helix)或是前导序列(leader sequence)。但是，总的来说，我们根据序列预测蛋白质功能的唯一方法是通过数据库搜寻，比较该蛋白是否与已知功能的蛋白质相似。有2条主要途径可以进行上述的比较分析： ①比较未知蛋白序列与已知蛋白质序列的相似性； ②查找未知蛋白中是否包含与特定蛋白质家族或功能域有关的亚序列或保守区段。 图6.1给出了根据序列预测蛋白质功能的大致过程。由于涉及数条技术路线，所得出的分析结果并不会总是相一致。一般来说，数据库相似性搜索获得的结果最为可靠，而来自PROSITE的结果相对不可靠。
高级制图员试卷2
考件编号: 理论知识部分 21. A 22. D 23. D 24. B 25. A 26. B 27. B 28. A 29. B 30. C 31. D 32. C 33. B 34. B 35. C 36. B 37. A 38. D 39. B 40. A 一、选择题 1．若空间直线与三个投影面既不平行也不垂直，则该直线为()。 A、一般位置直线 B、正平线 C、正垂线 D、侧平线 2．用()法画组合体的正等轴测剖视图，可先画出其完整的正等轴测图。 A、换面 B、旋转 C、中心投影 D、先画外形再作剖视 3．垂直于H投影面而与V、W投影面都倾斜的平面称为()。 A、正平面 B、水平面 C、正垂面 D、铅垂面 4．徒手画长斜线时，为了()，可将图纸旋转到适当角度，使它转成水平方向位置来画。 A、画图清晰 B、运笔方便 C、测量准确 D、看得清楚 5．()直线时，眼睛应多看终点，不要盯着笔尖或已画出的线段。 A、徒手画 B、用直尺画 C、用直线笔画 D、用计算机画 6．()中互相接触的两相邻表面只画一条线。 A、零件图 B、装配图 C、轴测图 D、建筑图 7．四心圆法画椭圆，四个圆心分别在()。 A、长轴上 B、长、短上 C、短轴上 D、共轭直径上 8．用换面法求一般位置直线AB与V面倾角时，新坐标轴必须平行于()。 A、a′b′ B、ab C、a〞b〞 D、AB 9．圆锥截割，截交线的形状为()时，截平面与圆锥面的所有素线相交。 A、圆 B、椭圆 C、双曲线 D、抛物线 10．两齿轮啮合时，在反映圆的视图中，啮合区内两齿顶圆均用()绘制或省略不画。 A、粗点画线 B、细点画线 C、粗实线 D、细实线 11．装配图中实心件被剖切平面通过其对称平面或轴线纵向剖切时，这些零件按()绘制。 A、全剖 B、半剖 C、局剖 D、不剖 12．三个轴向伸缩系数均为0.82的是()。 A、正轴测投影 B、斜轴测投影 C、正等轴测投影 D、斜二轴测投影 13．对较大物体目测时，人的位置()，手臂向前伸直，手握铅笔进行目测度量。人和物体的距离大小，应根据所需图形的大小来确定。 A、随时移动 B、保持不动 C、缓慢前进 D、缓慢后退 14．圆柱与圆球同轴相切组合体，与一个平行于圆柱轴线的平面相交，其截交线形状正确的是()。 A、B、C、D、