三叶青资料汇总

一、三叶青介绍

1、三叶青为我国特有药用植物，

2、黄酮类化合物是三叶青的重要药用成分，它能抑制癌细胞生长，诱导癌细胞凋亡，具良好的抗肿瘤作用，且无毒副作用。

3、三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤（的干燥块根/地下块茎/块根或全草）

4、具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，消肿等功效。具有清热解毒、活血祛风、抗肿瘤、抗病毒、抗炎镇痛与解热、保肝作用等。抗炎、抗病毒、抗肿瘤等功效，消肿散结

5、用于治疗（小儿）高热惊厥、肺炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调、咽痛、瘰疬、痈疔疮疖等症。小儿感冒发热、喉痒肿痛、咳嗽、肠炎、痢疾等疾病。支气管炎及支气管哮喘等症，对一些病毒性疾病，慢性和迁延性疾病有很好的功效。及恶性肿瘤。腹痛痢疾、咽喉炎、病毒性脑膜炎，外敷可治疗毒蛇咬伤、扁桃体炎、蜂窝织炎、跌打损伤。各种热症（不明原因的高热）、各种水肿（各种炎性水肿、蛇伤）等症有独特的疗效，是西药无法替代的“植物抗生素”。各种火毒炽盛之内、外科疾病（高热惊厥、肺炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调、咽痛、瘰疬等症）。

6、福建、浙江地区传统习用青草药，习称为“一粒珠”。

7、其性凉、味辛、苦，无毒，性寒味苦味微苦，性平2010

8、三叶青块根又名为蛇附子、石猴子、石抱子、拦山虎、雷胆子、破石珠、阴灵子、三叶扁藤、金丝吊葫芦。土经丸、搜夹风、三叶对、小扁藤、阴灵子、三叶扁藤、丝线吊金钟、金线吊葫芦、金线吊马铃薯。

9、三叶青又名有角乌蔹莓、石老鼠，又名金线吊葫芦、丝线吊金钟、石猴子等。别名红花青藤、三姐妹藤、毛青藤等。又名蛇附子（《植物名实图考》）、石抱子（《江西草药》）、破石珠、土经丸、搜夹风、三叶对（《浙江民间常用草药》）、小扁藤、三叶扁藤、金丝吊葫芦、金线吊马铃薯、拦山虎（《广西实用中草药新选》）、雷胆子（《湖南中草药新医疗法资料选编》）等。

10、分布于我国浙江、江西、福建、台湾、湖北、湖南、广东、广西、四川、贵州及云南等省区，主要分布于长江以南各地。生于阴湿山坡、山沟或溪谷旁林下。林中阴处, 沟谷土壤肥沃湿润处。山谷林中或沟边坡地

11、以块根或全草入药。

12、三叶青属于被子植物门双子叶植物纲原始花被亚纲鼠李目葡萄科崖爬藤属植物，是雌雄异株的多年生草质攀援藤本植物。

※史料记载

《植物名实图考》记载：“蔓生，茎如初生小竹，有节，一枝三叶，叶长，有尖圆齿，疏纹，对叶生须，须就地生根，大如麦冬”。

二、土圞儿与三叶青

三叶青属葡萄科植物，开花结红色锅里，也叫金线吊葫芦，长三瓣叶，生长于阴湿处，块根颗粒小于鹌鹑蛋或相仿，切面为粉白色，横切面见粘液细胞，性凉无毒。

金丝吊葫芦（土圞儿）为豆科，开花结豆荚，别名也称三叶青，又称金丝吊葫芦，长5~7

枚小叶，生长于路旁田埂上，块根颗粒大小和土豆相仿，切面为粉红色，横切面未见粘液细胞，性平，有小毒。

金线吊葫芦与金丝吊葫芦仅一字之差，却是完全不同的植物，千万要区别开来，不能误食。

1、原植物形态区别

三叶青: 为草质攀援藤本。块根表面深棕色 ,掌状复叶互生 ,小叶 3,叶边缘疏生具腺状尖头的小锯齿 ,无毛或变无毛 ,卷须对生。聚伞花序腋生 ;花瓣 4,卵形 ,外面顶部有角状突破起;雄蕊 4,雌蕊1,柱头 4裂 ,星状展开。浆果球形 ,直径约 6 mm ,种子 1颗。

土圞儿: 为缠绕草本。块根表面土黄色。单数羽状复叶互生 ,小叶 3～7,全缘 ,两面均被白色短毛 ,有托叶。花冠蝶形 ,有旗瓣 ,翼瓣 ,龙骨瓣之分 ;雄蕊 9+ 1,雌蕊 1,花柱细小。荚果条状扁平 ,长5～ 8 cm;种子多数

2、药材性状区别

三叶青: 块根表面棕褐色至红棕色 ,有的皱缩 ,有须根痕、小瘤状突起或凹陷;有的较光滑(广西产品 )。断面类白色或淡粉红色(广西产品较红 ),有的可见放射状维管束。

土圞儿: 块根表面土黄色 ,有的可见横向突起的皮孔及点状须根痕。断面黄白色 ,形成层环和维管束不清楚。

3、显微特片区别

三叶青: 横切面皮层散粘液细胞 ,直径 36～ 140μm,内含草酸钙针晶束 ,部分皮层细胞含棕色物; 韧皮部较狭窄 ,纤维断续略成环;形成层环和射线均较清晰;木质部导管稍多 ,伴有纤维 ,散有含针晶束的粘液细胞。粉末灰棕色或淡粉红色 ;淀粉粒直径 7～ 55μm,复粒偶见 ,由 2～ 3分粒组成;纤维壁厚 ;粘液细胞较多 ,类圆形或椭圆形 ,直径 36～ 110

μm ,有的长径可达 200 μm ,无色 ,内含粘液质 ,有的可见草酸钙针晶束; 针晶成束或散在 ,长 45～ 100μm ,簇晶少见 ,直径 10～ 39 μm ;导管具缘纹孔。

土圞儿: 横切面未见粘液细胞和棕色物; 韧皮部极狭窄 ,纤维断续成环;形成层环和射线均不明显 ;木质部导管稀少 ,仅在中心和近韧皮部处稍多 ,无纤维 ,无粘液细胞。粉末淡黄白色 ;淀粉粒直径 5～ 20 μm ,复粒较多 ,多由 2～ 3分粒组成 ,少数 4～ 6分粒; 韧皮纤维壁薄 ,有的壁撕裂状 ,少数似刺状物 ,有的可见纵或斜向纹理; 未见粘液细胞和针晶束 ;少见棱晶;导管网纹 ,稀见具缘纹 ,偶见管胞。

4、应用区别

三叶青: 未见本草记载 ,但近代药籍或某些药品标准 (特别是炮制规范 )有收载。其性凉味微苦;具清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能;用于治疗小儿高热、扁桃体炎、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎。

土圞儿: 始载于明《救荒本草》,近期使用较少。性平味甘;具消肿解毒、祛痰止咳的功能;主治百日咳、咽喉肿痛、乳痈、疮疖、毒蛇咬伤。

三、三叶青化学成分

1、三叶青提取物（ERT）主要含有淀粉、还原糖、黄酮类、甾体类化合物和氨基酸等。

2、三叶青中的化学成分主要有黄酮、黄酮苷、淀粉、还原糖、甾类化合物、氨基酸等，其中黄酮是三叶青中的主要有效成分（重要的生理活性物质），具有抗肿瘤、抑制真菌等作用（很好的抗肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡等作用），常被用来代替三叶青用于制剂生产。

3、现已分离并鉴定出的化学成分主要有黄酮类如槲皮素、山柰酚及三萜类化合物如蒲公英萜醇等。2012

4、关于三叶青的针剂提取物，目前研究发现含有淀粉、还原糖、黄酮、黄酮苷、甾体类化合物和氨基酸等。其中重要的生理活性物质有黄酮类、黄酮苷类、甾类。

5、三叶青的提取物中含有多种药用活性成分。三叶青叶中含有黄酮类、有机酸类和花青素类等成分。

6、在相同浓度下, 三叶青的乙醇提取物对肿瘤细胞的增殖并不表现出显著地抑制作用; 三叶青中抗肿瘤的活性部位是三氯甲烷部位和石油醚部位, 而且其对不同肿瘤细胞的体外抑制作用呈一定的浓度依赖作用。2011

7、从其块根中分离并鉴别出的化学成分（18种）有β-谷甾醇、胡萝卜苷、6’-O-苯甲酰基胡萝卜苷、山柰酚、槲皮素、α-香树脂醇、三十二酸、水杨酸、丁二酸、山奈酚-7-O-β-L-吡喃鼠李糖-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、没食子酸乙酯、甘露醇、环四谷氨肽、山柰酚-3-O-新橙皮糖苷、5，7，4’-三羟基黄酮-6-α-L-吡喃鼠李糖-(1-4)-α-L-吡喃阿拉伯糖甙、5，7，4’-三羟基黄酮-8-α-L-吡喃鼠李糖-(1-4)-α-L-吡喃阿拉伯糖甙、5，7，4’-三羟基黄酮-6，8-2-C-β-D-吡喃葡萄糖甙。块根中的挥发性成分有亚油酸、棕榈酸、油酸、二苯胺、亚麻酸甲酯和硬脂酸。

8、研究发现

①以三叶青块根为原料，霍昕等从三叶青乙醚提取物中，共分离出 21 个化合物，检测出18个组分，检出率为98.45%。它们分别是亚油酸、棕榈酸、油酸、二苯胺、亚麻酸甲酯、硬脂酸、樟脑、2，3-丁二醇、己酸、苯甲酸、苯乙醇、苯酚、6，10，14-三甲基-2-十五烷酮、异丙苯、豆蔻酸、十五酸、补骨脂素、十七酸，其中前6种提取物含量较高。其中相对百分含量大于1%的分别确定为亚油酸35.28%、棕榈酸26.93%、油酸15.56%、二苯胺7.40%、亚麻酸甲酯7.15%、硬脂酸2.14%。

亚油酸有多种生物功能，并具有抗癌、抗动脉粥样硬化、增强免疫、抑制脂肪沉积、建造骨骼、防止高血糖和糖尿病、促进生长发育等生理功能；棕榈酸对胰岛素有保护作用，并且可用于合成棕榈酸衍生物。2008

②李瑛琦（2003）从块根的乙酸乙酯萃取物中分离到7个化合物，经鉴定的有 4 个，分别为β-谷甾醇、三柰酚、槲皮素和三柰酚 -3-O- 新橙皮糖苷。

③毛一亮（2008）分离到4个化合物，鉴定为：β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素和山柰酚-3-O-新橙皮糖苷。

④Liu D（2002）报道从三叶青中得到一种新的黄酮碳苷。

⑤刘东（1999）从其地上部分的石油醚萃取物中分离到4个化合物：蒲公英萜酮、蒲

公英萜醇、β-谷甾醇和麦角甾醇。

刘东等对三叶青地上部分的化学成分进行研究，采用溶剂提取和硅胶柱层析法进行分离，根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定其结构，共分离出 16 种化合物，分别是蒲公英萜酮、蒲公英萜醇、β- 谷甾醇、麦角甾醇、α- 脂醇、三十二酸、水杨酸、丁二酸、胡萝卜嵌、芹菜素 6-α-L- 鼠李糖（ 1-4 ） -α-L- 阿拉伯糖苷、芹菜素 -8-α-L- 鼠李糖（ 1-4 ）-α-L- 阿拉伯糖苷、山柰酚 -7- 氧 - 鼠李糖基 -3- 氧 - 葡萄糖苷、甘露醇、没食子酸乙酯、芹菜素 -6 ， 8- 二葡萄糖苷、环四谷氨肤。2013

刘东等从三叶青中鉴定出 3 种黄酮类化合物, 分别为 5, 7, 4’- 三羟基黄酮- 6- α- L- 吡喃鼠李糖- ( 1- 4) -α- L- 吡喃阿拉伯糖甙, 5, 7, 4’- 三羟基黄酮- 8-α- L- 吡喃鼠李糖- ( 1- 4) -α- L- 吡喃阿拉伯糖甙, 5, 7, 4’- 三羟基黄酮- 6, 8- 2- C-β- D- 吡喃葡萄糖甙。

三叶青根中含槲皮素、山柰酚、山柰酚- 3- O- 新橙皮糖苷、β- 谷甾醇、胡萝卜苷及6’- O- 苯甲酰基胡萝卜苷。其中槲皮素、山柰酚、山柰酚- 3-O- 新橙皮糖苷为黄酮类化合物。

叶中含有黄酮类, 没食子酸和花青素类。

1、黄酮抗肿瘤

①通过三叶青总黄酮含量和抗肿瘤活性的相关分析证明，总黄酮含量与三叶青抗肿瘤活性存有一定的正相关，总黄酮含量越高，对HepG2细胞增殖的抑制活性越强，说明三叶青黄酮类成分是其抗肿瘤作用的药效物质基础。

②黄铜具有显著的生物学活性，具有很好的抗菌、抗病毒、抗肿瘤的特点。2012

③主要活性成份黄酮可用于治疗高热、扁桃体炎、肝炎、风湿性关节炎及病毒性脑膜炎等多种疾病，也是抗肿瘤常用药物。

④槲皮素 (Quercetin)是植物界分布最广, 具有多种生物活性的黄酮类化合物, 广泛存在于蔬菜和水果中, 同时它也是多种中草药的成分。槲皮素具有抗肿瘤、降血压、降血脂、抗炎、抗过敏、抗病毒等多种生物学活性, 所以对人类肿瘤、衰老、感染、心血管疾病的治疗和预防具有重要意义。最近的研究表明, 槲皮素一方面可以诱导多种肿瘤细胞凋亡, 另一方面又可以阻止一些非肿瘤细胞凋亡的发生。

倪克锋等发现三叶青黄酮具有明显的抗肿瘤作用，但其作用不呈剂量依赖性，低剂量组的作用要优于高剂量组。低剂量三叶青黄酮可增加荷瘤小鼠脾脏和胸腺指数，对脾脏指数的作用有统计学意义。低剂量三叶青黄酮可明显上调肿瘤组织内TIMP-2mRNA 表达。三叶青黄酮的抗肿瘤机制与上调 TIMP-2mRNA 有关。

2、黄酮提取

①愈伤组织生产

三叶青愈伤组织中总黄酮含量较高，用愈伤组织可大规模生产三叶青黄酮，满足医药市场的迫切需求。

采用愈伤组织培养方式生产三叶青黄酮，不仅可以大大地缩短生产周期，而且培养物中的总黄酮含量也明显高于原植株叶片，接近于根茎中的黄酮含量，具有较大的可行性。

②提取方法

最佳提取方法为微波提取法

选用乙醇回流法进行三叶青总黄酮的提取

张立明等实验已得出用乙醇溶剂提取三叶青中总黄酮的最佳工艺条件

黄真等用正交实验法对三叶青中总黄酮的提取工艺进行优化设计

郑军献等采用紫外可见分光光度法以芦丁为对照品，在波长 500 nm 处对不同产地三叶青中的总黄酮进行含量测定。

3、黄酮种类

三叶青块根中含量相对较高的依次为儿茶素、原花青素B1、山奈酚-3-O-芸香糖苷、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷，而原花青素B2、槲皮苷、槲皮素、山奈酚含量较低。

1 选地与整地

①苗圃地。

三叶青苗圃地通常选在温室大棚中，将大棚内土翻松，整地做畦，种植畦宽度65cm，沟深12cm，在松土过程中将草木灰混入。

②林地选择与整地。

林地选择是种植的关键环节。三叶青林地选择尤为苛刻，尤其喜欢时隐时现的阳光，湿润的气候，有极强的地域选择性。宜选土质疏松、肥沃、呈微酸性及排水良好的背阳的林地。在已抚育间伐后的中龄林或近熟林，林分郁闭度0.6左右的林下种植最佳。林地选定后，将杂草除尽，15d后用除草剂除草，待恶性杂草枯萎后在树蔸周围深翻地30cm左右，打碎土块，耙平并拣出树根、草根、石块等杂物，并做畦，畦高20~25cm，畦宽60~80cm，树蔸四周各做1个畦。

③三叶青对土壤要求不严，在含腐殖质丰富或石灰质的壤土上种植为好。

野生转家种，应选择无水土污染，有水源、能抗旱排涝、地块较大、偏酸性土壤、周围环境较好的坡地、旱地、稻田进行种植。低海拔对三叶青的生长无影响，只要选好种植地域即可。有条件在山区或丘陵山区进行种植为佳。在选好栽培地后，清除地面上的杂草树蔸石块，每亩先施火烧土等农家肥 2000 — 3000 公斤，翻耕土地时翻入土中，然后按南北方向做栽培畦，畦高 30 厘米左右，宽度 80 厘米，沟距 30 厘米，待种。畦面中部开沟，深度 15 厘米左右。2011

2 育苗

30℃~35℃为三叶青试管无菌苗最适宜生长温度

①容器育苗。

选土质疏松、肥沃、呈微酸性的土壤，将土壤碾碎装于直径30cm 的容器袋中，并整齐排列在温室大棚内的苗床上。2月初，选择生长健壮、无病虫害的三叶青植株。将藤条剪成15cm 左右的插穗，1个插穗必带2~3个腋芽。将插穗顺腋芽生长方向倾斜插于温室大棚内容器袋中，要保证每个插穗至少有1 个腋芽露在土外，用手压实周围土壤，浇足定根水。

②大田育苗。

在大棚内做垄，田垄宽65cm、高20cm，垄沟宽30cm、深12cm。将藤条剪成15cm左右的插穗，每1个插穗必带2~3个腋芽。将插穗顺腋芽生长方向倾斜插于温室大棚已做好的田垄中，要保证每个插穗至少有1个腋芽露在土外，用手压实周围土壤，浇足定根水，但需要注意保温，可以用秸秆覆盖在垄上。

3 栽植

定植时间为育苗2个月后，一般在3月底至5月初，此时日均气温以上升到10℃以上，地表土壤温度上升，土壤10cm左右无冰冻，可以有效防止低温冻害对三叶青幼苗的伤害，提高三叶青栽植的成活率。

①裸根苗栽植：选择植株高度 15~20cm、直径2mm左右、有5~10条根系的健壮种苗

进行定植，可直接定植于树蔸周围，定植时每畦种3行，保持行距20cm、株距30cm，定植后用手压实种苗周围土壤，浇足定根水。

②器苗栽植：在树蔸四周已做好的畦上挖穴，规格为 35cm×35cm×20cm，将三叶青容器苗种在穴，四周覆土，压实即可。定植后保持遮荫通风、土壤湿润。

4 林地管理

①除草松土。三叶青定植后需定期进行人工除草松土，为三叶青幼苗提供一个疏松、通风的生长环境。每年中耕除草4次，中耕培土和除草以不伤根、不压苗为原则。林地杂草应及时清除，要做到有草必除，最好采用手工拔除，切勿用锄头，以免伤到三叶青根系，影响块根的产量。

hm。草

②施肥培土。种植三叶青前可用草木灰作为基底肥，施用量为22.5~30.0t/2

木灰富含钾、磷、钙、镁等营养元素，能有效促进三叶青插穗腋芽生长，同时具有防治三叶青落叶、抑制病虫害、广谱杀菌作用。为了保证质量（药效），禁用化肥。三叶青以块根入药，因此在整个生长过程中要防止其根系外露和烂根，要注意适时培土，以免影响三叶青的产量。

③搭架引蔓。三叶青是攀授藤本植物，当藤蔓长到40cm左右，插入竹竿将藤蔓引向树干，帮助三叶青向树上攀爬。

④搭建棚架。用钢材或竹木搭建棚架，用遮阳网或树枝、柴草等遮挡太阳光种植三叶青，要求所搭棚架高度 2.4 米以上 ( 过低易被强光灼伤 ) 。当藤蔓长到 35 — 40厘米时，在棚内插树枝、竹子引蔓攀援。冬季适当剪去过密弱枝和枯枝。

⑤ 4.4 控制光照。三叶青喜荫凉环境，长时间的太阳光直射，三叶青不能存活。在春末、夏季、秋初应酌情遮挡70%左右的太阳光，秋后及冬季和初春时节则需稍高的光照度。病虫害防治

三叶青植株抗病性强，基本无病害。但如果在夏季雨水过多时，没有做到及时排水，造成田内大量积水，可能引发三叶青根腐病、霉菌病和叶斑病。

①根腐病。根腐病主要是由木贼镰孢病原引起，表现症状为三叶青植株根部发黑腐烂，导致整株死亡。防治根腐病措施：发病初期可以使用50%甲基托布津可溶性粉剂800~1000倍液喷洒。

②霉菌病。在潮湿的环境中，由于三叶青生长过于旺盛或者种植密度过大，容易造成三叶青间不通风，叶片下表面容易出现白色菌丝团，严重时导致三叶青成片死亡。防治霉菌病措施：发病初期及时剪除病叶，并用50%多菌灵可溶性粉剂600~1000倍液喷洒叶片，连续喷洒3次。

霉菌病，防治方法是注意排涝通风、喷施托布津。 2011

③叶斑病。初期三叶青叶片表面产生圆形或不规则深褐色病斑，病斑不断扩大严重时导致全株叶片枯死。防治叶斑病措施：用65%代森锌500~600倍液或1：1：150波尔多液防治。

采收

三叶青在种植3年以后，植株（藤）颜色呈褐色时，（块根的表皮颜色如呈金黄色和褐色）表明三叶青已经进入成熟期，可以在秋后或者初冬进行采收。勿过早或过晚采收。过早采收块根不壮实，产量较低；过晚采收受霜冻影响质量低。每年的冬至—惊蛰期间采摘的质量最好 ( 休眠期 ) ，此时采摘的三叶青块根，经检测淀粉含量在 70% 以上，药用效果最好。采收前浇洒少量水，保证土壤疏松，挖取块根，除去泥土，洗净，可切片鲜用，也可烘干。藤蔓可用于育苗。

5、田间管理

①除草松土。移栽存活后进行人工除草松土，每年中耕除草 3 — 4 次，要尽量做到有草就拔(锄)，同时结合除草进行松土。为了保证质量(药效)，禁用除草剂，尽量少用化肥。

②搭架引蔓。当藤蔓长到 35 — 40 厘米时，搭架引蔓攀援。春、夏季以追施人粪尿或饼肥为主。秋、冬季开环状沟施堆肥或厩肥，并进行培土。冬季适当剪去过密弱枝和枯枝。

③控制光照度。要使三叶青块根高产的关键是在搞好田间管理的同时控制好光照度和掌握好采收时间。长时间的太阳光直射，三叶青将不能存活。在春末、夏季、秋初应酌情遮挡 60% 左右的太阳光，秋后及冬季和初春时节则需稍高的光照度。

④湿度调节。三叶青对生长环境要求阴湿特性，它须生长在海拔 200 米的深山密林和悬崖峭壁的背阴面，上面要有散射光，旁边要有细水渗出，下面要有树叶覆盖，常年气温保持在 18℃左右。因此人工栽培应合理运用湿度调节以利三叶青的生长。

⑤施肥。结合中耕除草，每年的春、夏季追施人粪尿或厩肥为主；春、夏季施人粪尿或化肥为主；秋、冬季开环状沟施堆肥或厩肥，并进行培土；可施少量复合肥催苗。

6、繁殖与移栽方法

三叶青扦插育苗技术，2~3年生老枝1,000mg/L IBA浸渍10s后扦插于黄土中生根效果最佳。2011

①扦插繁殖。应选无病害健壮三叶青枝条，苗藤不宜过长，剪成长 12 — 15 厘米的插穗。于春、夏季进行扦插，以春季较好。将剪好的插穗按株距 5 厘米斜插入苗床，入土深度为枝条的 2/3 ，插后压紧；浇水保湿。插后约 30 — 40 天，长根出叶时即可定植。按行株距 100 厘米×100 厘米开穴，每穴栽 2 — 3 株，压紧，浇足定根水。此外，也可以用种子繁殖。

②移栽种植。先在整好的畦内开种植沟，畦沟内每 10 厘米 1 株排好三叶青种苗，撒入适当的钙镁磷肥和草木灰，覆盖少量泥土踩实，浇透定根水。春、秋季均可种植。可利用某些藤本植物的棚架遮挡阳光进行套种，要求棚架高度在 2 米以上。最简单种植方法是利用高大又较稀疏的树木或南北朝向的山区毛竹山进行种植，掌握好光照度、勤除草，该方法成本低，质量好，但不易管理，产量不稳定，种植地域受限。

7、繁殖方法

选择排水良好，土层深厚疏松的沙质壤土做圃地。圃地深耕以提高土壤肥力。苗床采用黄心土整细整平，无树根，无石块。

用打插繁殖。于春、夏季进行扦插，以春季较好。选择健壮的枝条，剪成长 12 ～ 15cm 的插穗，斜插入苗床，入土深度为枝条的 2/3，插后压紧，浇水保湿。此时已处于高温期，为防止晒伤幼苗，苗棚需做好遮荫措施，遮荫率在 80% 以上。插后约 30 ～ 40d，长根出叶

时即可定植。为便于起苗，前 1天傍晚苗床需浇透水，起苗时，人工将苗轻轻拔起，尽量挑选健壮的苗，剪去过长根系统，并注意防晒保湿。起完苗后，苗床再浇少量定根水。移植后的苗床按行株距 100cm×100cm 开穴，每穴栽 2 ～ 3 株，压紧，浇足定根水。移栽最好选在早晚进行，或者阴雨天，避开高温时间，以利于幼苗移栽后的成活。

此外，也可以用种子繁殖。

当藤蔓长到 35 ～ 40cm 时，搭架引蔓攀爬。每年中耕除草 3 ～ 4 次，掌握除早、除小、除了的原则，做到长年无杂草，以免杂草丛生和三叶青争夺水肥，助长病虫害的传播。除草在雨后进行效果最佳，连根拔除，不使苗根裸露。

春、夏季施人粪尿或化肥为主。秋、冬季开环状沟施堆肥或厩肥，并进行培土。追肥最好选择阴天或傍晚进行。冬季适当剪去过密弱枝和枯枝。

不同时间扦插生长情况

生长条件株数块茎数重量

2011 年阔叶树下光照强 30 主 161 侧 65 559.5g

2011 年阔叶树下光照弱 30 主 33 19.3g

2012 年阔叶树下优地段 30 主 114 218g

2012 年阔叶树下劣地段 30 主 46 116g

2011 年在阔叶树下光照度强的立地条件下，三叶青块茎生长数量最多，重量最多，相比之下无光照地段的产量很少，仅为光照强时的 3%；而 2012 年在阔叶树下优劣地段的对比，三叶青块茎数的相差 68 个，其重量相差102g。试验结果表明，不同基质对三叶青扦插的生长情况影响极为显著。

六、三叶青临床

1、医学临床试验表明具有清热解毒、消肿散结、祛风化痰、活血止痛的功效，可用于治疗小儿高热、扁桃体炎、肝炎及病毒性脑膜炎等多种疾病，也是抗肿瘤常用药物，其三叶青乙酸乙酯提取物为最有效的成分，它不但能减慢癌细胞的生长，而且对肝癌和血癌细胞株具有“促凋亡作用”。

2、急性支气管炎、肺炎、肠炎及咽喉炎等感染性疾病。

3、三叶青在抗肿瘤临床应用中，对多癌种（肺癌、乳腺癌、胃癌、恶性淋巴癌、肝癌、肾癌、鼻咽癌、子宫癌、慢性粒细胞白血病、多发性骨髓瘤等）临床观察，按照世界卫生组织（WHO）对恶性肿瘤疗效判定标准统计总有效率达78.33%

4、目前临床主要用于抗癌、抗艾滋病毒，治疗血液病、心脑血管疾病、肝炎、病毒性脑膜炎等。能治疗慢性乙型肝炎，疗效显著；能治疗感染性疾病；治疗小儿外感高热及低热咳嗽。能治疗妇科疾病如血崩、白带；能治疗类风湿性关节炎；还能治疗毒蛇咬伤，肛裂及痈疽等疾病。具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功效。用于治疗小儿高热惊厥、痢疾、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎。外用治毒蛇咬伤，扁桃体炎，蜂窝织炎，跌打损伤。三叶青对食道癌、胃癌、肺癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胆囊癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌等多种原发癌、转移癌等均具有很好的治疗作用。对肿瘤化疗带来的种种不良反应，如食欲低下、呕吐、恶心、头发脱落以及白细胞减少等都有明显的改善作用。

5、三叶青石膏汤治疗小儿外感发热72例，总有效率94.4%。加味后还可治疗以下疾病：

①伴鼻塞、流涕者加荆芥、防风；②伴咳嗽者加浙贝母、前胡；③支气管肺炎者加炙麻黄、苏子；④扁桃腺炎者加射干、山豆根；⑤疱疹性咽峡炎者加黄连、蚤休；⑥腮腺炎者加柴胡、夏枯草。总有效率94.4%。

6、用三叶青研制出的一种创新中药，有抑制和清除乙肝病毒，调整机体免疫、保护肝细胞、阻断肝纤维化等作用；恶性肿瘤病人口服金芪片（含三叶青），总有效率达78.33%；以清热解毒为主、健脾行气活血为辅的中肝合剂（含三叶青），配合西药治疗Ⅲ期原发性肝癌，可提高患者生活质量，延长生存期。

7、抗癌及抗艾滋病毒：黄英秀发现抗癌及抗艾滋病病毒的药物组合物。中草药的组分为: 三叶青、甘草、人参、党参、黄芪、白术、茯苓、当归、杞子、林伸、苦参、柴胡、五加皮、丹参、黄芩、天花粉、夏枯草、穿心连、贯众、千里光、丁公藤、龙胆草、蒲公英、麻黄、白头翁、黄柏、山豆根、连翘、鱼腥草、白花蛇香草、野菊花、板蓝根、仙岳草、玄参、半枝莲、天门冬、七叶一枝花、补骨脂、鸡血藤、威灵仙、牡蛎、核桃仁、桃仁、大血藤、灵芝等。

8、治疗血液病及心脑血管疾：用三叶青等中草药组合物治疗第3次化疗后1.5个月的急性粒细胞性白血病1例,患者服用中药1.5年后, 骨髓检查显示: 早幼粒细胞 1% , 病情稳定,明显低于化疗前骨髓24%的早幼粒细胞。郭武进和柴瑞芬发现一种治疗各型再生障碍性贫血、贫血、血小板减少、骨髓增生性全血细胞减少、白血病等多种血液病的中草药物, 其散剂原料药含三叶青。该中草药物能提高巨噬细胞的吞噬功能, 减轻骨髓微循环损伤, 抑制病理细胞生长, 增强机体免疫力, 疗效稳定等特点。临床实验证明, 本中草药物疗效的总有效率在 98% 左右, 治愈率在 90%以上。

黄治源发现一种治疗心脑血管疾病药物组合物, 由草药三叶青等组合而成。本药物组合物具

有服用方便、临床起效快、药效持久、安全无毒的特点, 对中风恢复期及僵硬期同样有效, 适用于脑血栓、偏瘫、高血压、冠心病等心脑血管疾病的治疗和预防。

9、治疗肝炎：民间临床用于黄疸, 对急、慢性肝炎均有较好的疗效。李承栋发现一种治疗慢性乙型肝炎的新药,并申请了国内专利。该药是以三叶青等为原料配制而成的一种中草药复方制剂。本药品具有抑制和清除乙肝病毒, 调整机体免疫, 保护肝细胞、阻断肝纤维化作用; 系全天然药物制成的片剂, 服用方便, 口感好, 价廉实用, 适用于治疗慢性乙型肝炎, 疗效显著,易于推广。（民间临床应用显示，三叶青对急、慢性肝炎均有良好的疗效。）

10、防治恶性肿瘤

①魏克民等用三叶青、黄芪、人参皂苷配制而成的金芪片治疗恶性肿瘤 120 例，完全缓解 52 例，部分缓解 42 例，稳定 18例，进展 8 例，完全缓解及部分缓解共 94 例，总有效率 78.33％。

②姜初明和龚黎燕采用清热解毒为主、健脾行气活血为辅的中肝合剂（含三叶青）配合西药治疗Ⅲ期原发性肝癌，提高了Ⅲ期原发性肝癌患者生活质量，延长了其生存时间。

上述临床实践表明，三叶青对防治恶性肿瘤确有一定作用，值得进一步临床验证

11、治疗病毒性脑膜炎：取三叶青干燥块根, 成人15g, 儿童 9g, 水煎服, 每日1剂。治疗104例,服药 3 剂后,86.5%的病人症状体征即行消失, 服4剂后全部治愈。但停药后每易复发, 故治愈后须连续再服几贴以巩固疗效。治疗期间和治疗后未发现明显不良反应,此外, 本品也可应用于其他病毒性疾病, 如乙型脑炎、病毒性肺炎等, 初步认为有一定的疗效。

12、治疗感染性疾病：用三叶青块根注射液, 每1ml含生药 2g。每次 2~ 4ml 肌内注射, 每日 2~ 4 次。共治疗急性支气管炎、肺炎、咽喉炎、肠炎、胆道感染及眼睑蜂窝组织炎等感染性疾病 84 例, 除胆道感染曾合并应用清热利胆中草药外, 其余均以三叶青为主, 部分曾加用对症治疗, 结果治愈 52例, 好转12例,无效20例。

13、治疗小儿外感高热及低热咳嗽：刘为熙应用三叶青饮治疗小儿外感高热 80 例, 经治疗痊愈41例,总有效率93.75%。治疗方法为: 三叶青饮: 三叶青 15~ 30g, 白英、银花各 15g, 板蓝根、寒水石各 15~ 30g, 荆芥、桔梗各 6g, 甘草3g, 根据发热程度及年龄, 每日1~ 2 剂, 水煎分 6 次服。治疗期间停用抗生素或其他退热药物, 3 天为 1 疗程。此外, 蒋荣耀采用三叶青治疗了 1 例 10岁低热咳嗽患者。治疗方法为:三叶青 6g, 太子参 6g, 茯

苓10g, 淮山药 10g, 生扁豆 10g,炙鸡内金10g, 生薏苡仁 10g,沉香曲 10g, 川厚朴 6g。每日 1剂, 水煎服。3 剂后, 低热咳嗽得以缓解。

10、其他

用来治疗妇科疾病如血崩、白带;治疗类风湿性关节炎, 毒蛇咬伤,肛裂及痈疽等。

七、三叶青药理研究

1、现代药理研究表明，三叶青提取物具有较好的抗肿瘤、抗炎、镇痛及解热、抗病毒、调节免疫作用等。并广泛用于多种中成药或保健品，如华佗风痛宝、结石康胶囊、三叶青粉末、金丝地甲胶囊、金芪片等。

2、药理实验表明三叶青提取物有抗病毒作用和明显的消炎镇痛及保肝作用

3、药理实验证明三叶青具有抗肿瘤、保肝、抗病毒、抗炎、调节免疫作用，并基本无毒。2012

4、在急性慢性肝损伤、肝炎、肝癌的现代药理研究中发现，ERT中主要的生物活性物质为槲皮素、山奈酚、山奈酚-3-O-新橙皮糖苷等黄酮类化合物。

5、现代药理研究已经表明，三叶青具有良好的增强免疫功能和抗肿瘤作用。三叶青主要作用于T淋巴细胞的活化、增殖、分化及效应细胞形成的过程等，而对抗原特异性T细胞的效应过程及其以后炎症过程影响较小。

抗肿瘤作用

三叶青提取物对人肺癌H1299 细胞具有明显抑制其增殖，促进细胞凋亡作用，且其机制可能与激活 caspase 蛋白表达有关。

王小莉等，不同浓度三叶青提取物作用后，A549 细胞内Caspase-3 蛋白的表达水平呈剂量依赖性升高，提示三叶青提取物可诱导 A549 细胞凋亡，可能与其调节 Caspase-3 蛋白的表达有关。

杨大坚等于1998年研究发现：三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分的主要成分 6’-O-苯甲酰基胡萝卜苷具有一定的肿瘤抑制作用。

2005 年丁钢强等研究发现，三叶青的各部分提取物对正常细胞影响较肿瘤细胞要小，证实了三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分的确具有很好的抑制肿瘤细胞作用。（三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分对人肝癌细胞HepG2活性具有较强的抑制作用, 正丁醇部分也有一定的作用。同时发现,对正常原代培养的大鼠肝细胞活性没有明显的影响, 对乳酸脱氢酶活力影响也较对 HepG2要小, 提示三叶青的各部分提取物对正常细胞影响较肿瘤细胞要小, 证实了三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分的确具有很好的抑制肿瘤细胞作用。）丁钢强等发现三叶青提取物对肝癌细胞 HepG2具有明显的体外细胞毒作用, 其毒性作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关。

徐彩菊等报道不同剂量的三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠主要免疫器官(胸腺和脾脏)和NK细胞活性均无明显增强或抑制作用。三叶青剂量为5.0,15.0,25.0g/kg·BW时,其ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的OD差值和小鼠左后足跖部厚度差24h测量值与对照组比较均有显著性差异,说明三叶青提取物能提高小鼠细胞免疫功能;2.5,5.0g/kg·BW 2个剂量组均能提高小鼠溶血空斑数,与对照组比较有显著性差异;2.5,5.0,15.0,25.0g/kg·BW 4个剂量组小鼠吞噬碳末的吞噬指数,15.0g/kg·BW剂量组能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数,与对照组比较均有显著性差异,说明三叶青提取物能增强单核-巨噬细胞吞噬功能。因此,调节机体的免疫功能是三叶青抗肿瘤作用的机制之一。

徐彩菊等，三叶青提取物具有一定的抑瘤效果，其作用机制可能与改善荷瘤小鼠机体的细胞免疫功能，以及激活机体的抗氧化作用途径有关。

徐彩菊等从细胞免疫、体液免疫、单核一巨噬细胞吞噬作用和自然杀伤细胞的攻击作用 4 个方面观察三叶青提取物对小鼠免疫功能的影响，证实三叶青提取物具有增强小鼠免疫力作用，初步确定其抗肿瘤作用的基本机制。

丁丽等采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法，研究三叶青乙醇提取物及其不同溶剂萃取部分对不同肿瘤细胞的体外抑制作用，筛选三叶青抗肿瘤活性部位。结果表明三叶青乙醇提取物和其 4 个提取部位对肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用。其中三氯甲烷部位和石油醚部位在一定浓度下可有效抑制肿瘤细胞的活性，乙酸乙酯部位和正丁醇部位对肿瘤细胞的抑制作用均较弱。

季绍勇报道以三叶青为主要成分的金丝地甲胶囊, 对抑制 LEWIS肺肿瘤细胞, SMMC- 7721 肝肿瘤细胞, HL- 60 人淋巴母细胞性白血病细胞, SCG- 7901胃肿瘤细胞及 HCT- 116 结肠肿瘤细胞生长的抑制有明显效果。

三叶青粗提取物对人体肝癌细胞HepG2活性、小鼠HepG2细胞的端粒酶基因表达有抑制作用，可增强小鼠免疫功能，阻滞K562和A549细胞周期、促进K562和HepG2细胞凋亡、在蛋白质水平和mRNA水平上对K562细胞中的促凋亡基因BAX有上调作用，可显著抑制K562细胞、HepG2细胞增生和端粒酶基因表达。槲皮素可诱导肿瘤细胞凋亡，又可阻止非肿瘤细胞凋亡；其提取物能通过增强单核-巨噬细胞的吞噬功能而发挥抗肿瘤功能。

冯正权等研究发现:三叶青黄酮能促进SGC-7901细胞凋亡,三叶青黄酮还能下调肿瘤细胞上清液中基质金属蛋白酶MMP-2蛋白的浓度,并呈剂量-效应正相关。

程伟等研究发现:三叶青提取物对A549细胞具有明显的体外抑制作用。随着三叶青提取物浓度的增加， Bcl-2 基因表达迅速降低。Bcl-2 基因在细胞凋亡中起着重要作用，与肿瘤的发生发展关系极为密切。

Kren 等( 2004 年) 研究发现 Bcl-2 基因的过量表达能使多种肿瘤细胞系统对放、化疗药物产生耐药性。BcL-2不但与肺癌的发病有关, 在治疗反应性及预后方面也起重要作用, 本研究发现, 随着三叶青提取物浓度的增加, BcL-2 基因的表达降低。

魏克民等研究发现:三叶青具有增强免疫功能作用。

2007年三叶青提取物对人肝癌细胞 HepG2 活性具有较强抑制作用。三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分的确具有很好的肿瘤细胞毒作用。三叶青提取物对小鼠 HepG2 细胞的端粒酶基因表达有抑制作用，并有增强小鼠细胞免疫和体液免疫功能的作用，而对正常原代培养的大鼠肝细胞活性没有明显影响。

汪珍等研究发现三叶青提取物能显著地抑制人结肠癌细胞系 RKO 细胞的生长，并且具有浓度依赖性，并能下调 Bcl-XL 、上调 Bid 来诱导凋亡。

1.1体外细胞培养实验三叶青黄酮能显著地抑制 SGC-7901 胃癌细胞的生长，并且具有浓度依赖性，且细胞有明显的凋亡特征性改变，并能降低细胞上清液中 MMP-2 的含量。三叶青黄酮还能显著抑制 SMM C-7721 肝癌细胞的生长，具有浓度依赖性。三叶青乙酸乙酯提取物具有诱导人结肠癌 HT-29 细胞凋亡作用，其作用机制与激活线粒体途径有关。对乙肝病毒具有较强活性，能明显降低 HBV（乙型肝炎病毒）的 DNA复制水平。

三叶青提取物对 HepG2 细胞具有明显的体外细胞毒作用，其毒性作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关，但对正常原代大鼠细胞毒性较小；对肺癌细胞 A549 具有明显的体外抑制作用，其抑制作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关；对人结肠癌细胞系 RKO（低分

化的结肠癌细胞系） 细胞抗增殖和诱导凋亡的作用，且呈剂量依赖性；对白血病 K562 细胞具有抑制作用，促进抑癌基因 P53 高表达和癌基因 C-myc 的低表达可能是其重要作用机制之一，并且能有效抑制体外白血病 HL60 细胞的增殖，诱导 HL60 细胞凋亡。

三叶青乙醇提取物在一定浓度范围内（1－625μg ·mL -1 ）能抑制恶性黑色素瘤 A375 细胞的增殖，且呈剂量依赖关系。

1.2动物模型药理实验

白宁宁在研究三叶青水层提取物抗 S180 实体瘤中，发现中药三叶青水层提取物具有明显的抗肿瘤作用，其作用机理与调节体内抗氧化酶活性、通过改善机体的 T 淋巴细胞亚群的功能恢复机体免疫功能及诱导细胞凋亡有关。

另有报道其作用机理可能与改善荷瘤小鼠机体的细胞免疫功能、激活机体的抗氧化作用途径有关。

倪克锋等采用小鼠肝癌 H-22 细胞右前肢腋窝皮下接种造模，证实了三叶青黄酮可显著抑制肿瘤细胞，这一作用与其能促进肿瘤细胞的促凋亡基因 Fasp-3、CytC 的表达相关。在此基础上通过定量 RT-PCR 检测小鼠皮下移植瘤基质金属蛋白酶抑制酶-2（TIMP-2）的表达情况，证实了抑制肿瘤生长与其上调肿瘤细胞 TIMP-2 基因的表达相关。

1.3 其他 以三叶青为主要成分的金丝地甲胶囊

◆ 抗病毒作用

冯正权等通过三叶青提取物含氮碱 A 和含酮物 F ，在小白鼠体内和鸡胚成纤维细胞上的实验，证实以上四种药物均显示出不同程度的抗病毒作用。其中 A 和 F 对流感病毒 PR ，株及仙台病毒(小白鼠肺适应株)有较强的抗病毒效果。

杨学楼等通过三叶青提取物含氮碱A 和含酮物 F, 粗全浸提取物1S 和2S (湖南医工所提供) 在小白鼠体内和鸡胚成纤维细胞上的实验, 证实以上四种药物均显示出不同程度的抗病毒作用。其中A 和F 对流感病毒3PR 株及仙台病毒(小白鼠肺适应株)有较强的抗病毒效果。 魏克民等列发现三叶青脂溶性成分有显著抗病毒及抗出血热的作用。

实验证实，三叶青提取物S1和S2均有抗病毒作用。其A 和F 有较强抗流感病毒PR3株及仙台病毒效果 ；其脂溶性成分亦有抗病毒及抗出血热作用。

杨大坚等发现三叶青脂溶性成分有显著抗病毒及抗出血热的作用。

◆ 抗炎、镇痛与解热作用

程伟等发现，三叶青提取物能明显抑制小鼠腹腔毛细血管炎性渗出，抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及 10％蛋清致大鼠足跖肿胀；减少醋酸致小鼠扭体次数，提高热板法小鼠痛阈值；并降低干酵母和 2，4-二硝基苯酚致大鼠发热模型的体温，证实了三叶青具有较好的抗炎、镇痛及解热作用。

吴安安等发现三叶青能抑制CIA 小鼠的足爪肿胀，同时，也明显地延缓了疾病起始时间。病理切片表现为炎性细胞浸润减少，滑膜增生减轻，正常的关节结构维持，尤其是在有效的同时并不影响小鼠体质量以及对免疫器官的无毒性，三叶青的这种作用对长期服用治疗慢性炎症性特别是类风湿关节炎是非常有益的。

资古明等发现小鼠腹腔注射三叶青块根提取物50g(生药) / kg、75g ( 生药) / kg 剂量,在热板法和苯醌法致痛模型上均有明显的镇痛效果, 给药 30min内镇痛作用最强, 维持

90min 以上, 且镇痛强度与剂量有依赖关系。腹腔注射三叶青块根提取物50g ( 生药) / kg、75g ( 生药) /kg, 能明显降低小鼠腹腔毛细血管的通透性。腹腔注射三叶青块根提取物 75g ( 生药) / kg, 对二甲苯引起小鼠耳肿胀有明显抑制作用, 50g ( 生药) / kg 剂量作用不显著。腹腔注射提取物每日25g ( 生药) / kg, 连续给药 7d,有抑制大鼠棉球肉芽肿的作用。与吡罗昔康 (炎痛喜康) 每日20mg/kg或氢化可的松每日10mg/ kg 作用相近。

小鼠腹腔注射三叶青块根提取物，在热板法和苯醒法致痛模型上均有明显的镇痛效果，以及对二甲苯引起小鼠耳肿胀有明显抑制作用。

黄真等发现: 三叶青提取物能明显抑制小鼠腹腔毛细血管炎性渗出, 抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及10%蛋清致大鼠足跖肿胀; 减少醋酸致小鼠扭体次数, 提高热板法小鼠痛阈值; 并降低干酵母和2, 4- 二硝基苯酚致大鼠发热模型的体温, 证实了三叶青具有较好的抗炎、镇痛及解热作用。

倪荷芳等研究发现:三叶青对于PCI-CS诱导相给药,可显著减轻耳肿胀。三叶青对胸腺和脾脏指数无明显影响。

倪荷芳等从免疫学角度初步探讨三叶青抗炎解毒的机理，发现三叶青主要作用于 T 淋巴细胞的活化、增殖、分化及效应细胞形成的过程等，而对抗原特异性T 细胞的效应过程及其以后的炎症过程影响较小。

钟晓明等研究发现,三叶青提取物对烫伤引起的全身和肠道局部免疫紊乱有纠正作用。

肠道免疫功能是肠道三大屏障之一。严重烫伤后, 造成人体内最大细菌和毒素的“贮库”肠道受损, 是引起肠道细菌易位及创伤后脓毒症的原因之一。肠粘膜粘液中所含的 S-IgA能有效阻止细菌在肠粘膜细胞上的附着, 是肠粘膜屏障的第一道防线, 它可抑制肠腔内细菌粘附粘膜并可预防细菌穿越粘膜层。 S-IgA的前体是 IgA, IgA是机体内分泌量最大的免疫球蛋白, 能够中和病毒, 毒素和酶等生物活性抗原, 其最主要的保护作用是阻止细菌对肠上皮细胞表面的吸附。同时烧伤后氧自由基的大量产生, 烧伤后血管收缩, 引起肠道缺血再灌注损伤产生大量氧自由基、过氧化物及 MDA, 对肠粘膜也产生明显的损伤作用, 因此测定 MDA 含量可以间接估计细胞膜脂质化氧化程度, 从而推测组织损失程度。

三叶青提取物能拮抗烫伤致大鼠血清 IgA 含量明显降低、回肠粘液中 S-IgA含量降低及肠粘膜中 MDA含量升高作用; 能拮抗烫伤致大鼠拮抗烫伤抑制大鼠脾脏淋巴细胞转化增殖、NK细胞活性, 并且拮抗烫伤引起的血清 IL-6水平增加作用。提示三叶青提取物对烫伤引起的全身和肠道局部免疫紊乱有纠正作用。

免疫调节功能

研究发现：三叶青对动物的体重、胸腺/体重比值和脾脏/体重比值无明显影响；能增强小鼠的细胞免疫功能。

丁钢强等三叶青能提高小鼠细胞的免疫功能，三叶青能增强单核—巨噬细胞吞噬能力。

通过测定大鼠血清中免疫球蛋白 A（IgA）含量和白细胞介素-6（L-6）含量、回肠粘液提取液中 S-IgA 含量、肠粘膜丙二醛（MDA）含量、脾淋巴细胞增殖情况及自然杀伤细胞（NK）活性，发现三叶青提取物对烫伤引起的肠道局部和全身免疫紊乱有纠正作用。此外，三叶青能明显提高小鼠免疫功能和 TNF-α（血清肿瘤坏死因子-α）、IFN-γ（血清干扰素-γ）指标，其乙酸乙酯提取物可以调节 I-CR 老鼠体内的免疫功能。

机体的免疫应答过程是由一系列复杂的免疫反应组成的。完整的免疫系统包含了细胞免疫、体液免疫、单核 - 巨噬细胞吞噬作用和自然杀伤细胞的攻击作用。

三叶青主要作用于T 淋巴细胞的活化、增殖、分化及效应细胞形成的过程等, 而对抗原特异性T 细胞的效应过程及其以后的炎症过程影响较小。

保肝作用

实验证明，不同剂量三叶青（SYL）治疗组的小鼠血清ALT（谷丙转氨酶）、AST（谷草转氨酶）、LDH活性及肝组织匀浆MDA含量均低于模型组，且肝组织损伤减轻，其对BCG和LPS 诱导的小鼠免疫性肝损伤也有保护作用。

三叶青提取物对 CCl4 所致肝损伤具有一定的保护作用，其作用机理可能是提高肝细胞抗氧化能力，对抗CCl4 引起的膜脂质过氧化，保护肝细胞膜结构的完整及功能，达到抗 CCl4 肝细胞膜的损害作用。

三叶青能促进家兔肝细胞吸收和吞噬放射性四碘四氯荧光素, 有加强肝脏功能的作用。

伍昭龙等、钟晓明等、张同远等研究发现:通过CCl4所致的大鼠肝损伤模型,三叶青提取物(ERT)能明显降低CC14所致血清ALT、AST、及ALP（碱性磷酸酶）的升高,同时能对抗CC14所致的肝脂质过氧化作用,提高肝损伤抗氧化能力。研究结果提示,三叶青提取物能提高肝脏的解毒能力,对肝损伤有一定的保护作用,一定范围内呈剂量依赖关系。

张同远等研究发现，三叶青可显著抑制透明质酸（ HA ）、层黏蛋白（ LN ）的异常增高，提示了三叶青抗肝纤维化作用良好。

①抗急性肝损伤

CCL所致急性肝损伤具保护作用，其有效活性成分是总氨基酸。三叶青提取物（ERT）对

4

的小鼠灌胃给药最大耐受量相当于人临床用量445倍，故临床应用很安全。临床实验证明，三叶青的人体推荐剂量是安全的。

三叶青抗 CCl4致急性肝损伤机理可能与提高肝细胞抗氧化能力，对抗 CCl4引起的膜脂质过氧化；保护肝细胞膜结构的完整及功能；达到拮抗 CCl4肝细胞膜的损害作用有关。

②抗慢性肝损伤

透明质酸（HA）为间质细胞合成的一种大分子葡萄胺多糖，是结缔组织基质的主要成分；是反映内皮细胞功能和肝硬化程度较为敏感的指标之一。其血清测量值的改变与肝纤维化呈正相关，反映已生成的纤维化程度，即肝病变程度。粘连蛋白（LN）是细胞间质成分，与肝纤维化、肝内炎细胞浸润及肝细胞坏死、变性程度正相关。它可显著抑制HA、LN异常增高，具抗肝纤维化作用，并可降低造模大鼠血清ALT（谷丙转氨酶）、AST（谷草转氨酶）、HA

（透明质酸）、LN（粘连蛋白）及T-Bili（总胆红素）水平，抑制造模动物血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）水平及白蛋白/球蛋白（A/G）下降，提高大鼠存活率，显示有良好保肝降酶作用。

张同远等采用 CCl4 反复多次给药，造成大鼠慢性肝损伤，检测造模动物血清ALT、AST、HA（透明质酸）、LN（粘连蛋白）、T-Bili （总胆红素）、TP（总蛋白）、ALB（白蛋白）水平及 A/G（白蛋白/球蛋白比率）。结果显示三叶青可降低造模大鼠血清 ALT、AST、HA、LN 及T-Bili 水平，抑制造模动物血清 TP、ALB 水平及 A/G 的下降和提高大鼠存活率。表明三叶青具有良好的保肝降酶及抗肝纤维化作用。

民间临床应用显示：三叶青对急、慢性肝炎疗效良好。

③抗免疫性肝损伤

杨雄志发现不同剂量的三叶青提取液给药组小鼠血清 AST（谷草转氨酶）、ALT（谷丙转氨酶）、LDH(乳酸脱氢酶)的水平降低，肝损伤不同程度减轻。研究结果表明，三叶青提取液对 BCG ( 卡介苗 )和 LPS ( 脂多糖 ) 诱导的小鼠免疫性肝损伤具有良好的防护作用。

◆抗关节炎

口服给药能抑制CIA小鼠足爪肿胀，延缓疾病起始时间及关节炎发生率。病理切片显示给药后可改善小鼠关节炎症，炎性细胞浸润减少，滑膜增生减轻；不影响小鼠体重，对免疫器官无毒，故可长期口服治疗类风湿关节炎。

三叶青提取物（ERT）高、中剂量对小鼠腹腔毛细血管通透性有显著抑制作用；也可抑制二甲苯所致小鼠耳廓急性炎症性水肿及蛋清所致大鼠足跖肿胀，表明其抗炎作用较强。

三叶青口服给药后, 能剂量依赖型的抑制 CIA（类风湿性关节炎）小鼠的足爪肿胀, 同时, 也明显地延缓了疾病起始时间, 关节炎发生率和关节评分, 从病理切片上也可以明显看到三叶青给药后有效的小鼠改善了关节炎症, 表现为炎性细胞浸润减少, 滑膜增生减轻,正常的关节结构的维持, 尤其是在有效的同时并不影响小鼠体质量以及对免疫器官的无毒性, 三叶青的这种作用对长期服用治疗慢性炎症性特别是类风湿关节炎的是非常有益的。

◆其他药理作用

研究表明三叶青水提取物可显著抑制缩宫素诱发的小鼠子宫收缩。

八、三叶青显微特性

赵永伟等和黄成勇等先后报道了三叶青的显微特征, 他们均发现粉末的显微特征为:

淀粉粒极多, 多为单粒, 且形状多样; 脐点也形状多样, 少见复粒; 粘液细胞较多, 无色, 类圆形或椭圆形; 纤维无色或淡黄色, 单个或成束; 草酸钙针晶成束或散在。

但黄成勇等发现粉末颜色为黄绿色, 草酸钙簇晶较多; 赵永伟等则发现粉末呈淡灰棕色或淡粉红色, 草酸钙簇晶少见; 并认为浙江产三叶青与广西产三叶青的根横切面存在导管排列和韧皮部大小及束间特征的区别, 由此表明: 三叶青产地不同显微特征有异。

①横切面木栓层薄，为4~6列木栓细胞。皮层散有直径36~136μm的粘液细胞，长径可达198μm，细胞内有长45~100μm的草酸钙针晶束，部分皮层细胞含棕色物。维管束因产地不同有较大区别，形成层成环。射线宽阔，散有含针晶束的粘液细胞。薄壁细胞内多充满淀粉粒。

②粉末淡灰棕色或淡粉红色。淀粉粒极多，多为单粒，椭圆形、类三角形、葫芦形或类圆形，直径7~55μm，脐点点状、短缝状、星状或人字状；复粒偶见，由2~3分粒组成。木栓细胞深棕色或棕红色，类长方形或不规则多角形，壁稍增厚。纤维无色或淡黄色，单个或成束，细长，壁厚，直径12~18μm。粘液细胞较多，无色，类圆形或椭圆形，直径56~110μm，有些长径可达约200μm，内含粘液质，有的可见针晶束。草酸钙针晶成束或散在，长45~100μm，草酸钙簇晶少见，直径10~39μm。导管具缘纹孔，有的较短数个相连，直径12~52μm，长93~281μm。

九、毒理学研究

按《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）“食品安全性毒理学评价试验”载：“三叶青无毒，无致突变性”。

资古明等研究发现小鼠腹腔注射三叶青块根提取物的LD50值（半数致死量）为450.8±1.9g(生药)/kg。

江月仙和郭伟娣将三叶青按《保健食品检验与评价技术规范》( 2003 年版) 中“食品安全性毒理学评价试验”进行实验, 按急性毒性分级标准判定, 属实际无毒; 说明三叶青未显示有致突变性。

钟晓明等研究发现:三叶青提取物对小鼠灌胃给药的最大耐受量为80g/kg体重,相当于人每天临床用量的445倍,说明三叶青用于临床是安全的。

三叶青为纯天然植物，经研究表明长期服用无任何毒副作用，在应用中没有出现耐药性，在治疗过程中攻补兼施，不但直接杀死肿瘤细胞，并能提高免疫，抑制肿瘤细胞增殖。