细胞计数
细胞计数
一、实验目的
a)1、掌握血球计数板的正确使用方法及技巧。
b)2、掌握用血球计数板计算细胞浓度的原理及方法。
二、实验原理
a)计数室容积一定，只要将适宜浓度的待测细胞悬液加入计数室并在显微
镜下计数就可算出单位体积内的细胞总数目。
b)血球计数板的计数室结构：大小：3.0mm×3.0mm。分区：9个边长1.0mm
的正方形区；其中四周和中央区为计数区，称之为一个大方格。中央大
方格用双线围成中方格；中方格内再用单线划分成小方格。四周大方格
由单线围成中方格。
c)血球计数板的规格：第一种：中间大方格组成为16×25（16个中方格，
每个中方格内25个小方格）＝400。第二种：中间大方格组成为25×16
（25个中方格，每个中方格内16个小方格）＝400
d)计数板上标识数目含义：1/400mm2：中间大方格共有400个小方格，每
小格面积为1/400mm2。0.1mm：计数板底部到盖玻片的高度。
三、实验仪器及试剂
a)材料：1/1000稀释的抗凝鸡血或绵羊血
b)试剂:肝素钠溶液,0.9%氯化钠
c)用品：普通显微镜、血球计数板、计数用盖玻片、10μL枪及枪头、酒
精棉球、吸水纸等。
四、实验步骤
a)清洁计数板及盖玻片：先用水洗，再用（70%）酒精棉球擦
b)镜检计数室：加盖片一起观察是否干净、格子是否清晰
c)样品浓度检查：加样显微观察，以每小格不超过4~5个细胞为宜，否则
应进行稀释
d)样品稀释：等渗盐水
e)加样：先加盖玻片，再加样；样加在盖玻片边缘，毛细作用吸入
f)选择计数区域：2个或4个周围大方格或全部格子。
g)计数：压线细胞不重复计数
h)计算原始细胞样品浓度：个/mL或个/L
i)清洗计数板
五、实验结果
六、实验分析
经过两次计数的统计及平均，最后得到的菌液浓度为3.85*10^6个每毫升。
七、实验注意事项
a)准确稀释及混合细胞样品。
b)计数板要清洁。
c)加样量要准确。
d)计数要准确。每个样品至少计数2次，结果取其平均值；2次计数误差
不应大于10%。
e)压线细胞不能重复计数。
细胞计数方法------细胞计数板法..
实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1.将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2.将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静 置3min ，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3.计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml （注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有 16 个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m × 16即每个格的平均值。所以，细胞密度=m×16×104个/ml） 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 33 1.0mm（长）× 1.0mm（宽）× 0.1mm（高）=0.1mm 3而1ml=1000ul=1000mm 3 注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。） 细胞计数板的使用 一、血球计数板 -基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。 中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16 个大方格（大方格用
三线隔开），而每个大方格又分成25 个小方格；另一种是一个计数区分成25 个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16 个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400 个小方格组成。
迈瑞-BC-5380血液细胞分析仪标准操作程序资料
迈瑞-BC-5380血液细胞分析仪标准操作程序 适用于血液白细胞计数及分类，红细胞计数，血红蛋白，血小板计数，红细胞压积，红细胞体积分布宽度，平均红细胞血红蛋白含量，平均红细胞血红蛋白浓度，平均红细胞体积，血小板体积分布宽度、平均血小板体积和血小板压积等检验。 2 仪器设备试剂 BC-5380血液细胞分析仪专用试剂：M-53D稀释液；M-53LEO(I) 溶血剂；M-53LEO(II) 溶血剂；M-53LH 溶血剂；M-53 清洁液；M-53P 探头清洁液。所有试剂应参照试剂的使用说明进行保存。变质、超过效期的所有试剂不能使用。 3 仪器设备标本 原始样品采集、制备、处理、检验和存放见检验科相关规范。 4 仪器设备性能参数 BC-5380血液细胞分析仪一般资料见附件1；BC-5380血液细胞分析仪性能指标见附件2。 5 仪器设备环境要求，使用安全措施 5.1 仪器设备环境要求 5.1.1 空间安装要求 仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保留至少1米的空间，以方便维护和保养。后部至少要有0.50米的空间，以防止阻碍热气的排放并保证主机后的液路管道不受挤压。将BC-5380血液细胞分析仪安放在通风良好、灰尘少的地方。避免在过热或过冷以及日光直射的环境中使用BC-5380血液细胞分析仪。保证操作台面以及主机下方有足够的空间放置稀释液、废液桶。 5.1.2 运行条件 环境温度要求：10℃～40℃。 环境相对湿度要求：10%～90%。 电源电压要求：100～240VAC，50/60Hz。 仪器设备周围应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰；仪器附近无强电磁干扰源以及电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备；不应放在通风条件差、阳光直射的环境中，或热源及风源前。 5.2 仪器安全 在仪器设备上面和周围不要使用可燃性危险品，避免引起火灾和爆炸。 在电源打开状态下，禁止打开仪器前上面、侧面及背面面板，以免损害线路板；禁止触摸BC-5380血液细胞分析仪外壳里面的电子元件，尤其避免湿手触摸，以免造成电击。 仪器设备使用前，必须认真检查设备之间连接及外接线(件)是否正确、正常，电源插头是否正确插接，设备是否处于正常状态。实验过程中如遇水、电故障或中断，应立即关闭影响仪器设备安全的有关开关，并实施安全保护措施。 仪器设备的运输必须按BC-5380血液细胞分析仪使用说明书规定进行搬运，禁止鲁莽装卸，应避免倾斜，振动和碰撞。 如果标本、试剂溢出在分析仪上，立即擦掉并依照检验科相关规范处理。 5.3 人员安全 仪器设备中所有与病人的样品接触或有潜在性接触可能的表面与零件都视污染物。
细胞计数方法 细胞计数板法
细胞计数方法------细胞计数板法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml (注：当细胞很多时，可在四个大格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后对选定的小格计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个大格的平均值。所以，细胞密度=m×16×104个/ml) 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。） ================================================ 细胞计数板的使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
细胞数的测定(血球计数板的使用方法)
、目的与要求了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。 二、原理 用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的厚载玻 片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分为16个小方格（即25X 16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，每一个大方格边长为 1 mm则每一个大方格的面积为 1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片 与载玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容积为0.1 mm3 实磴圈-石血球计弦板杓构jfi 三、血球计数板的使用方法 （一）菌悬液的制备为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5?10个酵母为 宜，可采用10倍系列稀释法。 （二）加菌悬液样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。由盖玻 片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。静置5-10分钟。 （三）显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。当芽抱菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。 （四）计数时若使用刻度为25X 16 （大格）的计数板，则数四角的4个大格（即100小格）内的菌数。如用刻 细胞数的测定 D申決甌裕牧我
Countstar 细胞计数仪操作手册
Countstar细胞计数仪操作手册 计数仪的标准操作程序和细胞计数和活率检测标准操作程序 一、启动Cedex XS 系统 1. 打开计数仪：按下计数仪上的ON/OFF按钮，按钮亮起蓝色光表示仪器已打开； 2. 打开Cedex XS 控制软件： ①打开配套电脑，进入Windows操作系统； ②双击桌面上的Cedex XS 图标，进入Cedex XS 控制中心； 3. 调节白平衡：首次安装Cedex XS系统或移动系统后必须调节白平衡。 ①把样品板支架拉出； ②点击Cedex XS 控制中心中的HWM键，打开硬件管理对话框； ③点击WHITE BALANCE键进行调节，结果将自动保存； ④调节完毕后关闭对话框。 二、细胞计数与活性测定 1. 样品制备 ①用培养基或PBS将样品稀释至细胞数不高于5×106/ml； ②使用0.2%台盼蓝染色（一般为10μl、1：1）：台盼蓝对血清蛋白亲和力更强，若大量血清蛋白导致图像背景过暗，可以将样品离心，用无蛋白培养基或生理盐水悬浮细胞进行计数； ③将细胞悬液充分混匀； ④用移液枪取细胞悬液加入样品板，每槽10μl；可以一次测定八槽，也可测定单槽。 2. 进样：样品板有八个槽，一次可测定四个样品槽。 ①拉出样品板支架； ②加有样品方向朝里，将样品板放上支架； ③将支架推入计数仪，有少许卡扣感表示已就位：样品槽位置指示灯表示样品测定进程。 三、软件设置： 1. 打开测定界面：在Cedex XS 控制中心点击MEASURE键，进入测定界面；
2. 设置样品参数： ①在样品参数栏输入样品名（Reactor ID），可在下拉栏选择或手动输入，最多可输入21个字符； ②输入样品编号（Sample ID），最多21个字符；若样品名已存在，软件将自动延续样品编号，也可手动重新输入编号； ③软件将自动记录日期和时间，表明样品测定的实际时间； ④点击MI×键，出现进样体积对话框； ⑤输入参数：样品量（Sample V olume）、台盼蓝用量（Dye Volume）、稀释剂用量（Diluent V olume）； ⑥系统将自动计算稀释比例等，可以手动输入注释（Comments）。 3. 设置测定与分析参数： ①在分析参数栏选择需要的精度水平（Precision）：精度水平表示单次测定样品数，最多8个； ②选择细胞类型，默认的细胞类型有：标准大小细胞直径约12-14μm；可识别对象；小细胞直径约8μm； ③系统自动添加系统名和测定时间。 四、开始测定 ①点击START MEASUREMENT键； ②测定多个样品时，在弹出对话框后将样品板支架推进一格，点击确定自动开始测定程序； ③重复上一步骤测定其他样品； ④若测定样品多于四个，可将支架抽出后样品板调转方向重新插入进行上述测定程序； ⑤全部测定结束后关闭对话框。 五、计数结果 1. 在测定界面获得结果 测定程序完成后，结果在测定界面的数据栏（Result Data）显示，数据栏有两个表格：第一个表格显示总细胞数，第二个表格显示单次测定中每个样品室的测定结果。 两个表中分别列出以下参数： ●Viable Cell Conc.: 活细胞浓度[×105/mL] ●Total Cell Conc.: 总细胞浓度[×105/mL] ●Viability (%): 细胞总数中活细胞的百分比 ●Total Cell Count: 测定总细胞数 ●Avg Compactness: 活细胞与理想状态细胞形状的平均变异程度（1表示细胞形状均一）●Avg Diameter: 测定活细胞平均直径[μm] ●Aggregate Rate (%):成团细胞占总细胞数的比值 ●Dead Cell Conc.: 死细胞浓度[×105/mL]
细胞计数方法--细胞计数板法
细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml (注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个格的平均值。所以，细胞密度=m×16×104个/ml) 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而 1ml=1000ul=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。）
================================================ 细胞计数板的使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为 1/4000mm3。 使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 二、细胞计数板-使用方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
细胞计数仪怎么操作
细胞计数仪怎么操作 你知道细胞计数仪怎么操作呢?很多研究人员都在使用血球计数器，使用起来不方便，而自动的细胞计数仪使用方便，时间短，那么你知道细胞计数仪怎么操作吗?一起来看看。 文章目录 细胞计数仪怎么操作 1、细胞计数仪怎么操作 1.1、将计数板及盖玻片擦拭干净,并将盖玻片盖在计数板上。 1.2、轻轻吹打细胞悬液,使细胞均匀分布;吸出少许细胞悬液滴在细胞入口,使细胞悬液充满盖玻片和计数板之间,静置1-2min,使细胞沉降;注意盖玻片下不要有气泡,也避免细胞悬液进入旁边的槽中。
1.3、在显微镜下对A/B/C/D四个大格内的细胞进行计数,压在大格四周边线上的细胞只计数压在2条边线上的细胞(如右侧和下方);若镜下有2个细胞组成的细胞团,则应按单个细胞计算;若细胞团数量较多,占细胞总量的10%左右,则说明细胞分散不好会导致计算不准确,需要重新制备细胞悬液。 1.4、按公式计数细胞数量:细胞数/mL=四个大格内细胞总数×104/4?(每一个大格的体积为长1mm×宽1mm×高 0.1mm=0.1mm3,1mL=1000mm3,因此计算时需×104)。
2、细胞计数仪的原理 2.1、电阻抗检测原理血细胞是相对不良导体,当血细胞悬浮电解质中,将小孔管插入细胞悬液,使其管内充满稀释液,当一个细胞通过小孔时,瞬间引起电压变化出现一个脉冲信号,细胞体积越大,引起脉冲越大,产生脉冲振幅越高。 2.2、流式细胞术加光学检测原理利用流式细胞术使单个细胞随着流体动力聚集的鞘流液在通过激光照射的检测区时,使光束发生折射、衍射和散射,散射光光检测器接受后产生脉冲,脉冲大小与被照细胞的大小成正比,脉冲的数量代表了被照细胞的数量。 3、白细胞分类原理 白细胞三分类原理:根据电阻抗法原理,不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显差异,仪器根据脉冲的大小将白细胞进行分群。标本中加入溶血剂,将红细胞溶解,仪器将从白细胞计数池中测量得到的大于35fl电子脉冲的数量作为白细胞计数。同时根据脉冲的大小将血内白细胞分为三群:小细胞群(35～90fl,主要为淋巴细胞)、中间细胞群(91～160fl,包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞及幼稚细胞等)和大细胞群(161～450fl,以中性粒细胞为主)。
细胞计数方法细胞计数板法
细胞计数方法——-－-—细胞计数板法 实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。 具体操作: １. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。 ２、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置３miｎ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。 3。计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。然后按公式计算: 细胞数/ｍL=四大格细胞总数/4×1０个／ml (注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有１6 个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数,取平均值m,m×1６即每个格得平均值。所以,细胞密度=m×1６×10个／ml) 说明:公式中除以4,因为计数了４个大格得细胞数。 公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为: １。0mm(长)×1.0mm(宽)×０。１mm(高)=0.1mm 而1ml=1０00ul＝１0０0ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10% 以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。) =========＝===============＝==＝=＝=＝＝===＝=＝＝====＝== 细胞计数板得使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区。计数区得刻度有两种:一种就是计数区分为１６个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成２5个小方格;另一种就是一个计数区分成２5个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成1６个小方格。但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成、
细胞计数板使用方法.
细胞计数板使用方法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3 而1ml=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液） 细胞计数板的使用 血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 细胞计数板-使用方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见下图：即本格中计数细胞为3个。
血球计数法计数原理
一、血球计数板的使用原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。 计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由 16×25=25×16=400个小方格组成。 1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算： 酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数
18. Countstar Rigel S2细胞计数仪标准操作规程
Countstar Rigel S2细胞计数仪标准操作规程 1、操作步骤 1)开机：接通电源，并开启左侧底部电源按钮。显示屏启动开关变成黄色后， 长按触摸按键6-8秒，黄色指示灯变成蓝色，等待系统开机。登陆界面输入用户名和密码，点击登陆（初始用户名：admin，初始密码：admin）。 2)准备：待测样品，Countstar计数板，移液器及枪头。 3)计数：吸取20ul样品匀速加入Countstar计数板中，在“类型”界面，点击 所测实验类型图标，如“AOPI细胞活率”，将计数板插入进样口中，输入测量信息。 a)在信息输入界面选择计数槽位（自上而下为1-5），选中后槽位由蓝色变 成黄色。 b)输入实验名称（允许为空）、样品ID（允许为空）、稀释比例和细胞类型。 c)点击“确认”，槽位变成绿色。 d)点击“开始”，开始计数。 4)计数完毕，样品板自动退出，屏幕上显示计数结果。 5)数据管理：以“AOPI 细胞活率”为例，点击结果界面左上角“返回”或直 接点击导航栏“数据”并在实验类型下拉框中选择“AOPI 细胞活率”，均可进入“AOPI 细胞活率”的数据界面中，点击数据行第一列的圆形按钮选中记录，可进行如下操作： a)查看视野：查看样品ID 下各视野的结果。 b)详细结果：查看选中记录的详细结果，若选中多条记录，默认显示第一 条记录。 c)参数调节：优化识别参数。 d)样本删除：删除选中的数据。 e)Excel 导出：插入USB 存储设备，可批量进行Excel 格式的数据导出。 f)PDF 导出：插入USB 存储设备，可批量进行PDF 格式的数据导出。 g)图片导出：插入USB 存储设备，可批量进行图片形式的数据导出。 h)计算器：可以根据当前的浓度计算加入多少体积稀释至目标浓度
细胞计数法
细胞计数法 细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。 1、制备细胞悬液 对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤2（计数与计算过程）。如果计数对象为贴壁生长的细胞，首先需将培养物制备成细胞悬液。 1）、终止培养，将培养液吸出，用PBS洗培养物一次。 2）、给培养瓶内加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化1-3min 。期间在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化液。 3）、加入一定量的培养液（如果这些培养细胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。 2、计数与计算过程 1）、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。 2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。 3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。 4）、按下式计数细胞悬液的密度： 细胞密度＝（4个大正方格细胞总数/4）×稀释倍数×104个/ml 注：稀释倍数（至少乘以2，因与trypanblue等体积混合） 上图示计数的规则：表示可计数：表示不计数： 范例： T75 monolayer culture制成10ml细胞悬浮液，取0.1ml溶液与0.1ml trypan blue混合均匀于试管中，取少许混合液加入血球计数盘，计数四大方格内之细胞数目。（其实取20ul即可） 活细胞数/方格：55，62，49，59；死细胞数/方格：5，3，4，6；细胞总数=243
BC-5390CRP 血液细胞分析仪标准操作程序
MRSZ/R01N01.05.01(3.0)
保密密级：【秘密】修订记录
BC-5390 CRP血液细胞分析仪标准操作程序 1 仪器设备检验项目 适用于血液白细胞计数及分类，红细胞计数，血红蛋白，血小板计数，红细胞压积，红细胞体积分布宽度，平均红细胞血红蛋白含量，平均红细胞血红蛋白浓度，平均红细胞体积，血小板体积分布宽度、平均血小板体积和血小板压积等检验。 适用于血液C-反应蛋白的检测。 2仪器设备试剂 BC-5390 CRP血液细胞分析仪专用试剂：M-53D稀释液；M-5LEO(I) 溶血剂；M-5LEO(II) 溶血剂；M-53LH 溶血剂； M-53P 探头清洁液；LC 溶血剂；C-反应蛋白（CRP）测定试剂盒（乳胶免疫比浊法）。所有试剂应参照试剂的使用说明进行保存。变质、超过效期的所有试剂不能使用。 3 仪器设备标本 原始样品采集、制备、处理、检验和存放见检验科相关规范。 4 仪器设备性能参数 BC-5390 CRP血液细胞分析仪一般资料见附件1；BC-5390 CRP血液细胞分析仪性能指标见附件2。 5 仪器设备环境要求，使用安全措施 5.1 仪器设备环境要求 5.1.1 空间安装要求 仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保留至少1米的空间，以方便维护和保养。后部至少要有0.50米的空间，以防止阻碍热气的排放并保证主机后的液路管道不受挤压。将BC-5390 CRP血液细胞分析仪安放在通风良好、灰尘少的地方。避免在过热或过冷以及日光直射的环境中使用BC-5390 CRP血液细胞分析仪。保证操作台面以及主机下方有足够的空间放置稀释液、废液桶。 5.1.2 运行条件 环境温度要求：-10℃～40℃。 环境相对湿度要求：10%～90%。 电源电压要求：100～240VAC，50/60Hz。 仪器设备周围应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰；仪器附近无强电磁干扰源以及电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备；不应放在通风条件差、阳光直射的环境中，或热源及风源前。
迈瑞BC血液细胞分析仪标准操作程序
迈瑞B C血液细胞分析仪标准操作程序 SANY标准化小组 #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#
迈瑞-BC-5380血液细胞分析仪标准操作程序 适用于血液白细胞计数及分类，红细胞计数，血红蛋白，血小板计数，红细胞压积，红细胞体积分布宽度，平均红细胞血红蛋白含量，平均红细胞血红蛋白浓度，平均红细胞体积，血小板体积分布宽度、平均血小板体积和血小板压积等检验。 2 仪器设备试剂 BC-5380血液细胞分析仪专用试剂：M-53D稀释液；M-53LEO(I) 溶血剂；M- 53LEO(II) 溶血剂；M-53LH 溶血剂；M-53 清洁液；M-53P 探头清洁液。所有试剂应参照试剂的使用说明进行保存。变质、超过效期的所有试剂不能使用。 3 仪器设备标本 原始样品采集、制备、处理、检验和存放见检验科相关规范。 4 仪器设备性能参数 BC-5380血液细胞分析仪一般资料见附件1；BC-5380血液细胞分析仪性能指标见附件2。 5 仪器设备环境要求，使用安全措施 仪器设备环境要求 5.1.1 空间安装要求 仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保留至少1米的空间，以方便维护和保养。后部至少要有0.50米的空间，以防止阻碍热气的排放并保证主机后的液路管道不受挤压。将BC-5380血液细胞分析仪安放在通风良好、灰尘少的地方。避免在过热或过冷以及日光直射的环境中使用BC-5380血液细胞分析仪。保证操作台面以及主机下方有足够的空间放置稀释液、废液桶。 5.1.2 运行条件 环境温度要求：10℃～40℃。 环境相对湿度要求：10%～90%。 电源电压要求：100～240VAC，50/60Hz。 仪器设备周围应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰； 仪器附近无强电磁干扰源以及电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备；不应放在通风条件差、阳光直射的环境中，或热源及风源前。 仪器安全 在仪器设备上面和周围不要使用可燃性危险品，避免引起火灾和爆炸。 在电源打开状态下，禁止打开仪器前上面、侧面及背面面板，以免损害线路板；禁止触摸BC-5380血液细胞分析仪外壳里面的电子元件，尤其避免湿手触摸，以免造成电击。 仪器设备使用前，必须认真检查设备之间连接及外接线(件)是否正确、正常，电源插头是否正确插接，设备是否处于正常状态。实验过程中如遇水、电故障或中断，应立即关闭影响仪器设备安全的有关开关，并实施安全保护措施。 仪器设备的运输必须按BC-5380血液细胞分析仪使用说明书规定进行搬运，禁止鲁莽装卸，应避免倾斜，振动和碰撞。 如果标本、试剂溢出在分析仪上，立即擦掉并依照检验科相关规范处理。
血液分析仪说明
全自动血液细胞分析仪说明书 1 仪器名称及型号 1.1 仪器名称：全自动血液细胞分析仪 1.2 型号：BC-3000plus 2 生产厂家 中国深圳医疗电子股东有限公司 3 检测范围 本仪器用于人全血细胞计数及分类 4 检测原理 4.1 细胞计数：BC—3000运用Coulter原理，用阻抗法测量WBC、RBC和PLT的体积分布和数目。电极插在液体中计数孔的两边，在计数孔的两边周围建立了一个电场环境，根据血细胞非传导性的性质，当有细胞通过计数孔时，引起阻抗增大，因电流一定，相应电压发生变化形成脉冲而被检测；脉冲数代表细胞个数，脉冲的大小与细胞体积成正比，从而实现细胞的计数和分群。 4.2 细胞分类：脉冲的大小与细胞体积成正比，人为将30-90fl体积的细胞定为淋巴细胞、90-160fl体积的细胞定为中间细胞（单核、嗜酸、嗜碱等）、大于160fl体积的细胞定为中性粒细胞。 5 参数设置 BC-3000测试参数有Hb、RBC、WBC、PLT、Lymph#、Mid#、Gran#、Lymph%、Mid%、Gran%、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV、RDW-SD、HCT、MPV、PDW、PCT。 6 开关机程序
1 开机： 1.1 打开电源，系统进行自检，显示时间和日期。 1.2 自检后，系统会对所有硬件进行初始化。 1.3 仪器进行空白检测合格后即可开展室内质控和标本检测。 2 关机： 每日关闭机器电源之前执行关机程序，步骤如下：按“菜单”键，将光标移至“关机”选项，按“确认”键，进入关机界面，弹出关机对话框。将E-Z液放置采样针下，按“开始”键，由采样针吸入1.6ml清洗液，开始执行关机操作。关机程序结束后，屏幕提示“请关闭电源”，关BC-30000电源开关；处理废液。 7 标准程序 7.1 打开电源前的检查 7.1.1 试剂的检查：检查当天检测样品所需的试剂量，如果不够，应更换试剂， 更换试剂后， 进行几次空白检查，当空白计数结果低于标准才能开始检测样品。 7.1.2 检查废液桶、液体管路、电缆、记录仪、打印机 7.2 打开电源，按下机器后部的开关键，电源指示灯亮。 7.3 自我检测，检测系统硬件工作是否正常，有无溶血试剂、稀释液、冲洗液。约一分钟后出现计数界面。 7.4 质控：分析样品前按质控操作程序进行质控，如出现问题应检查仪器，标本，试剂等有无错误，并排除问题。 7.5 样品分析：混匀标本，看标本是否合格。如标本不合格应重抽。将标本编号并将标本信息输如系统，选择分析模式进行样本分析。
细胞计数方法-细胞计数板法
细胞计数方法--—--—细胞计数板法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。 具体操作: 1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板． 2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3、计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。然后按公式计算: 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×１0个/ml （注：当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有16 个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数，取平均值m,ｍ×16即每个格得平均值。所以,细胞密度=m×１6×10个/mｌ) 说明:公式中除以4,因为计数了4个大格得细胞数。 公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为： 1、0mm(长）×1、0mｍ(宽）×0、1mｍ(高)=0、1mm 而1ml＝1000ｕl=1０００ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10% 以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。) ========＝==＝＝=====＝===＝=＝＝＝=====＝======＝====＝=== 细胞计数板得使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区.计数区得刻度有两种：一种就是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开）,而每个大方格又分成2５个小方格;另一种就是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
细胞如何计数
细胞计数，看起来简单，其实暗藏玄机。今天就一起来学习下如何计数。 1原理 计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。 血球计数盘一般有二个 chambers，每个 chamber 中细刻 9 个 1 mm2 大正方形，其中 4 个角落之正方形再细刻 16 个小格，深度均为 0.1 mm。当 chamber 上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为 1 mm2×0.1 mm=0.0001 mL。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以 10000，即为每 mL 中之细胞数目。 存活测试之步骤为 dyeexclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之 trypan blue 染料，如果细胞不易吸收 trypan blue，则用红色之 Erythrosin bluish。 计算细胞活率：活细胞数/（活细胞数+死细胞数）×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成，随时间延长，部分活细胞也开始摄取染料；因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力，用不含血清的稀释液，可以使染色计数更为准确。 2材料 ?0.4% w/v trypan blue ?Erythosin bluish stain ?取 0.1 gram Erythrosin bluish 及 0.05 gram preservative methyl paraben 溶于 100 mL Ca++/Mg++ freesaline ?血球计数盘及盖玻片 ?计数器 ?低倍倒立显微镜 ?粒子计数器 ?白细胞稀释液（4% 乙酸溶液）。
血球计数板使用说明
血球计数板使用说明 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3. 取样： 1、样品应该保证充分的均匀的情况下才有意义； 2、样品应该尽量减少结团情况，如有结团应该吹散（或者用胰酶消化）后再计数； 3、样品的体积大概250ul（大概5-7滴）； 4、如果体积大于100ml，取样应该保证在两个以上； 5、如果是生产的技术应该取三个样，并每次都要充分混匀后取样； 6、样品的体积只有进口的离心管和吸管的数据可以取信，但是离心管会有一定的波动误 差，应该计算有15ml（-100ul）50ul（-300ul）； 稀释： 1、稀释液应该是等渗的，不能带有颗粒（如果有应该先用滤纸过滤）； 2、稀释的时候样品的体积至少要用50ul，同时取样前应该用200ul的枪吹打10次，并马上 取样；稀释后的样品也要用200ul枪吹打10次再取样计数； 3、稀释后的样品四个中格的细胞数应该保证50-150个/中格；四个的总数应该大于200个； 4、细胞应该计数应该尽量使用原样，如果有离心操作，应该保证样品在500ul以上，并用 250g 离心5min； 加样： 1、计数板要用酒精清洗干净后，晾干，表面不能有污垢和纤维； 2、盖玻片应该也保持洁净，并防在血球技术板的中间位置，血球计数板要放在平面上，再 每边加样，每边的加样量为8.5ul； 3、平稳放置30sec后放到显微镜上面，用100倍镜每次计数一个中方格； 计数： 1、每个样品应该计数至少三次（否则会有很大偏离）； 2、每个方格的数应该在50-150间，计数的标准应该统一，如果是团就记为一个，但是可以 明确分出是几个细胞的可以据实计数； 3、遵守记上不记下，记左不记右；细胞压线超过50%在线内才有效； 人员： 1、人员应该做同一个样品测试，同一个样品的细胞数总量应该在10个以内（或者是5%波 动）；同一个样品稀释后计数的数据波动应该在5%以内； 2、不同人员的测试同一个样品的波动误差应该在5%以内；
细胞培养之细胞计数
细胞培养之细胞计数 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 一.准备工作： 取一瓶传代的细胞，按照《传代细胞培养（消化法）》中的传代方法繁殖细胞，待长成单层后以被使用. 二.细胞悬液制备： 用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后，加入培养液（或Hanks液或PBS 等平衡盐溶液），吹打制成待测细胞悬液。 三.细胞计数： 1.取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上. 2.制备计数用的细胞悬液：用吸管吸5滴细胞悬液到一离心管中，加入5滴台盼蓝染液（0.4％）或苯胺黑。活细胞不会被染色，加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。 3.将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 4.统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的四个大铬（每个大格含有16个中铬）中没有被染液染上色的细胞数目。 5.计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度： 细胞悬液的细胞数/ml＝（四个大格子细胞数/4)×2×104 说明：/4因为计数了4个大格的细胞数；×2因细胞悬液：染液=1：1稀释；×104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm×1.0mm×0.1mm＝0.1mm3而 1ml＝1000mm3 四.细胞计数要点： 1.进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中； 2.要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。 3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确； 4.数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。 5. 操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。 五.初学者易犯的错误： 1. 计数前未将待测悬液吹打均匀。 2. 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。 3. 滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。 六.本实验特殊试剂的配制：