微生物鉴定中常用的生化反应
有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。细菌产生的脂肪酶能分解培养基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8（红）～8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则培养基可由原来固体状态变成液体状态。
详细
实验方法
∙微生物鉴定中常用的生化反应
实验材料
∙大肠杆菌
∙枯草杆菌
∙金黄色葡萄球菌
∙产气肠杆菌
∙铜绿假单胞菌
∙黏乳产碱杆菌
∙普通变形杆菌
试剂、试剂盒
∙油脂培养基
∙淀粉培养基
∙明胶液化培养基
∙石蕊牛乳培养基
仪器、耗材
∙平皿
∙接种环
∙酒精灯
∙试管
∙接种针
有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。
细菌产生的脂肪酶能分解培养基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8（红）～8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。
某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则培养基可由原来固体状态变成液体状态。
牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳的利用可分三种情况：
（1）酸凝固作用：细菌发酵乳糖后，产生许多酸，使石蕊牛乳变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固，此称为酸凝固。
（2）凝乳酶凝固作用：某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝固在中性环境中发生。通常这种细菌还具有水解蛋白质的能力，因而产生氨等碱性物质，使石蕊变蓝。
（3）胨化作用：酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透明的液体。胨化作用可以在酸性条件下或碱性条件下进行，一般石蕊色素被还原褪色。
实验材料
1、活材料：大肠杆菌（E. coli）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、黏乳产碱杆菌（Alcaligenes viscolactis）、铜绿假单胞菌（Psudomonas aeru ginosa）、普通变形杆菌（Proteus vularis ）。
2、培养基：淀粉培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加0.2%的可溶性淀粉；油脂培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加花生油10mL、0.6%中性红水溶液1mL；明胶液化培养基：蛋白胨5g，明胶100～150g，水1000mL, pH7.2～7.4，115℃灭菌2 0min。石蕊牛乳培养基：牛奶粉100g、石蕊0.075g、水1000 mL、pH6.8，1 21℃灭菌15 min 。
3、试剂：卢哥氏碘液。
实验用品
平皿、接种环、酒精灯、试管、接种针等。
（一）淀粉水解试验
1、准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。
2、接种：用记号笔在平板底部划成两部分，在每部分分别写上菌名，用接种环取少量的待测菌，点接在培养基表面的相对应部分的中心，其中一个菌种应是枯草杆菌做对照菌。★你能解释原因吗？
3、培养：将接种后的平皿置于28℃恒温箱培养24h。
4、检测：取出平板，打开平皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。菌落周围如出现无色透明圈，则说明淀粉已经被水解，表示该细菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小说明测试菌株水解淀粉能力的强弱。
（二）油脂水解试验
1、将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中熔化，取出并充分振荡，使油脂均匀分布，再倾入无菌平皿中，待凝固成平板。
2、接种：于同一平皿的两边接种，其中一种是金黄色葡萄球菌作为对照菌。置于37℃恒温箱培养24h，取出后观察平板菌苔颜色，如果出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反应为正反应。红色斑点大小说明测试菌株水解脂肪能力的强弱。
（三）明胶液化试验
1、接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基中。
2、培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下不长，则应放在最适温度下培养。
3、观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的形状。
因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观察，若明胶被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再凝固。
（四）石蕊牛乳试验
1、接种：将黏乳产碱杆菌和铜绿假单胞菌接种入石蕊牛乳培养基中。
2、培养：将接种后的试管于37℃恒温培养7d，另外保留一支不接种的石蕊牛乳培养基作为对照。
3、结果观察：取出培养物，以不接种任何细菌的试管为对照，观察接种不同细菌生长后的变化情况。
微生物生理生化反应
微生物生理生化反应
实验原理 通过测定微生物细胞内某些酶类的有无、对某些底物的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物代谢的多样性。某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，当吲哚遇到含有对二甲基氨基苯甲醛试剂，形成红色的玫瑰红吲哚，为吲哚反应阳性。V-P反应也称乙酰甲基甲醇试验。微生物发酵葡萄糖产生丙酮酸，2分子丙酮酸脱羧形成乙酰乳酸，继续脱羧形成乙酰甲基甲醇，后者在碱性条件下与胍类、肌酸类物质反应，形成红色化合物，为V-P反应阳性。有些细菌发酵糖类产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，使发酵液变红色。某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。 实验材料和方法： 材料： 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖和蔗糖）、酚红半固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基； 菌种：大肠杆菌（E. coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus arueus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum）； 试剂：V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲酚紫指示剂、抗生素； 仪器及用具：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温水浴锅、试管、移液管、滴管、杜氏小管、记号笔等。 实验方法： 1.V-P反应 取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，以无菌操作分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形均、枯草芽孢杆菌菌液0.1mL至上述相应试管的培养基中，空白对照不接种。置于37℃恒温箱中培养48小时。取出培养物，分别从中取出2.5mL培养液，再加入等量V-P试剂，充分震荡后放置在37℃培养箱中温育30min。若培养液呈红色，记录为V-P试验阳性反应；无色者为V-P试验阴性反应；粉红色者为弱阳性。 2.甲基红试验 分别从V-P实验中的培养物中取出2.5mL培养液，分别加入2～3滴甲基红指示剂，立即观察培养液颜色变化。若培养液变成红色，即为阳性反应，橘色或黄色为阴性反应，橘红色为弱阳性。 3.吲哚试验 取5只装有蛋白胨水培养基的试管，以无菌操作分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形均、枯草芽孢杆菌菌液0.1mL至上述相应试管的培养基中，空白对照不接种。置于37℃恒温箱中培养48小时。在通风橱中向培养基中加入乙醚1～2mL，振荡使吲哚尽量被完全萃取至乙醚中，沿管壁缓慢加入5～10滴吲哚试剂，加入后不能摇动。若乙醚层呈现玫瑰红色，即为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。 4.糖发酵试验 取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管个4支，内装有倒置杜氏小管，杜氏小管内
各种微生物生化试验方法原理
各种微生物生化试验方法原理 通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反应，常用于细菌的鉴别。 1、糖类分解产物 （1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一般以能否分解某种糖，是否产酸产气等现象来鉴别。例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。 （2）VP试验（V oges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反应，生成红色的化合物，此为VP试验阳性。大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP试验阴性。 （3）甲基红试验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。但两者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。故大肠杆菌培养液PH在4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性；产气杆菌培养液PH在5.4以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红试验阴性。 （4）枸橼酸盐利用试验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培养基由淡绿色变为深兰色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培养基上不能生长，培养基仍为绿色。 2、蛋白质及氨基酸的分解产物 （1）硫化氢试验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢试验阳性。本试验常用于区别肠道杆菌的种类。沙门氏菌属通常为阳性;大肠杆菌、产气杆菌、志贺氏菌为阴性。 （2）明胶液化试验（gelatin liguefaction test）有些细菌具有明胶酶，能分解明胶使其失去凝固能力而液化。变形杆菌、霍乱弧菌、绿脓杆菌、枯草杆菌等能液化明胶；大肠杆菌、沙门氏菌则不能。 （3）吲哚试验（indole test）有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成无色吲哚，加入对-二甲基氨基苯甲醛，无色吲哚生成红色玫瑰吲哚， 为吲哚试验阳性。大肠杆菌、霍乱弧菌等吲哚试验阳性；产气杆菌、伤寒沙门氏菌为吲哚试验阴性。 吲哚对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚 细菌的生化反应是鉴别细菌的重要手段：其中吲哚试验（I）、甲基红试验（M）、VP试验(V)和枸橼酸盐利用试验（C），简称为IMVIC试验，常用于大肠杆菌与产气杆菌的鉴别。典型的大肠杆菌的IMViC试验结果为“++--”，而产气杆菌是“--++”。 0票票数
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告 一、引言 在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。 二、目的 本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。 三、材料与方法 1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基； 2. 硝酸盐还原试剂； 3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖； 4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸； 5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶； 6. 无水硫酸铜溶液。 四、实验步骤及结果解释
1. 硝酸盐还原试验 步骤： （1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂； （2）观察液体颜色变化。 结果解释： 若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。 2. 糖类代谢试验 步骤： （1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖； （2）加入相同量的细菌液体培养物； （3）观察试管内气泡产生情况。 结果解释： 若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。 3. 氨基酸代谢试验 步骤： （1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸； （2）加入相同量的细菌液体培养物； （3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释： 若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。 4. 酶代谢试验 步骤： （1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质； （2）加入相同量的细菌液体培养物； （3）观察试管内颜色变化情况。 结果解释： 若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。 5. 硫代硫酸盐还原试验 步骤： （1）取一支细菌液体培养物，加入无水硫酸铜溶液； （2）观察液体颜色变化。 结果解释： 若液体变为黑色，则表示该细菌能够将硫代硫酸盐还原为硫化物。 五、结论 通过以上实验，可以初步鉴定出细菌的种类和特性。在实际应用中，
细菌鉴定中常用的生理生化反应
细菌生化试验 1、实验原理 （1）细菌生化试验 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。 （2）糖（醇）类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。 （3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验） 很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。 （4）大分子物质代谢实验． 靛基质（口引睬）试验 某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。 明胶液化实验 某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做） 细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解
实验室微生物鉴定常见生化反应及应用价值
实验室微生物鉴定常见生化反应及应用价值 明胶液化试验 (1)原理：某些可以产生一种胞外蛋白水解酶(明胶酶)，能使明胶分解为氨基酸，使明胶失去凝固能力而液化，因而使半固体的明胶培养基成为流动的液体。 (2)方法：将待检菌接种于明胶培养基中，22℃培养7d或更长时间，每天观察结果有无凝固。 (3)结果：如无凝固，则表示明胶已被水解，液化试验阳性。如凝固，则继续培养。 (4)应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如奇异变形杆菌、普通变形杆菌、沙雷菌属和阴沟肠杆菌等到能液化明胶，肠杆菌科中的其它细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外，许多假单胞菌也能产生明胶酶而使明胶液化 吲哚试验(靛基质试验) (1)原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚，当加入吲哚试剂(对二甲氨基苯甲醛)后则形成红色的玫瑰吲哚。 (2)培养基：蛋白胨水培养基。 (3)方法：将待检菌接种于富含色氨酸的蛋白胨水培养基中，35℃孵育24~48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂，观察结果。 (4)结果：于两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。 (5)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，如大肠埃希菌与产气肠杆菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌等的鉴别。 硫化氢试验 (1)原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸产生硫化氢，硫化氢遇亚铁离子或铅离子则结合形成黑色沉淀物(硫化铁或硫化铅沉淀)。 (2)培养基：醋酸铅培养基。 (3)方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基中，于35℃孵育24h -48h，观察有无黑色沉淀出现。 (4)结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。 (5)应用：主要用于鉴别肠杆菌科中属及种的鉴别，如沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、爱德华菌属等为阳性，其它菌属大多为阴性。但沙门菌属中亦有部分硫化氢阴性菌株，如甲型副伤寒、仙台、猪霍乱沙门菌等。 尿素分解试验
微生物鉴定之生化实验大全
微生物鉴定之生化实验 大全 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
（一）碳水化合物代谢实验糖（醇、苷）类发酵实验 （1)原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。 （2)基本培养基：在培养基中加入%-1%的糖类（单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等).培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。 （3)实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。 （4)结果判定：如果接种进去的细菌可以发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。如发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。 （5)应用：是鉴定细菌最主要最基本的实验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。 氧化型与发酵型（O/F)的测定 （1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧的参加，称为氧化型（O），细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解的，称为发酵型(F)。发酵型细菌无论在有氧无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的细菌称为产碱型(-)。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。
（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾，葡萄糖10g，琼脂3g，1%溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mL。将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热溶解，校正PH至，然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解，分装试管，3-4mL/管；115℃，高压蒸汽灭菌20min，取出冷却成琼脂柱。 （3）试验方法：挑取18-24h的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1mL液体石蜡，37℃培养24h或更长时间。 （4）结果判定： （5）应用：O/F试验主要适用于G-肠道杆菌的鉴别。肠杆菌科的细菌为发酵型，其他肠道菌为非发酵型，非发酵型细菌为氧化型或产碱型。该试验也用于鉴别葡萄球菌（F）和微球菌（O）。 β-半乳糖苷（ONPG)实验 （1）原理：有的细菌可以产生β-半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷,而生成黄色的邻-硝基酚，在很低的浓度下也可以检测出。 （2）培养基：邻硝基酚β-半乳糖苷，L 的灭菌1%蛋白胨水300mL。先将前两种成分混合溶解，过滤除菌，在无菌条件下与1%蛋白胨水混合，分装试管，每管2-3mL。无菌检验后备用。 （3）实验方法：取一环细菌纯培养物接种在ONPG培养基上置37℃培养1-3h或24h如有β-半乳糖苷酶，会在3h内产生黄色的邻硝基酚；如无此酶，则在24h内不变色。
实验五--细菌鉴定中常见的生理生化反应
实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应 一、实验目的。 1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。 3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。 二、实验原理。 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。 1.糖（醇）类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。 2.甲基红试验（M.R试验） 甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。 3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验） 伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。 4.靛基质试验 某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。 5.硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。 6.明胶液化实验 明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。有些微生物可产生一种成为明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4 度仍能保持液化状态。 7.柠檬酸盐利用试验 有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂 pH6.0(黄)～7.6(蓝)，由绿色变为深蓝色。 8.淀粉水解实验 细菌水解淀粉的过程可以通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。 三、实验仪器、材料和用具
微生物检验中常用的生化反应
微生物检验中常用的生化反应 各种细菌所具有的酶系统各不相同，对养分物质的利用力量各异， 因而在代谢过程中所产生的合成或分解产物也不同。应用生物化学 方法检测细菌的代谢产物，有助于细菌的种、属鉴定。这种利用生 化方法来鉴别细菌的试验，统称为细菌的生化试验或生化反应，是 识别细菌的重要方法之一。微生物生化反应是指用化学反应来测定 微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其他方面不 易区分的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要 依据之一。 微生物检验中常用的生化反应有： (一)糖酵解试验 各种微生物因含有不同的分解糖(醇、苷)类的酶，所以分解糖类 的力量各不相同，而且分解相应糖类后形成的终末产物亦随细菌种 类而异，有的产酸，有的还可以产生气体，因此可作为鉴别细菌的 依据，对肠道杆菌的鉴别尤为常见。可用指示剂及发酵管检验。 试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培育物少许，接种 于发酵液体培育基鲁，若为半固体培育基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36℃ 1.0 ℃培育，每天观看结果，检视培育基颜色有 无转变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若 为半固体培育基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有 时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培育物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵力量，从而 进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常 用的指示剂为酚红、溴甲酚紫、溴百里蓝和An-drade指示剂。 (二)淀粉水解试验 某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 试验方法：以18h~24h的纯培育物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或 平板（一个平板可分区接种，试验数种培育物）或直接移种于淀粉 肉汤中，于36℃ 1 ℃培育24 h ~48 h,或于20℃培育5d。然后将 碘试剂直接滴浸于培育基表面，若为液体培育物，则加数滴碘试剂 于试管中。马上检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培育基 呈深蓝色、菌落或培育物四周消失无色透亮环、或肉汤 颜色无变化。阴性反应则无透亮环或肉汤呈深蓝色。 淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的 力量、培育时间、培育基含有淀粉量和pH等均有肯定关系。培育基pH必需为中性或微酸性，以pH7. 2最适。淀粉琼脂平板不宜保存 于冰箱，因而以临用时制备为妥。 (三) V-P试验
微生物鉴定的生理生化反应汇总
微生物鉴定的生理生化反应 各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生物化学试验或称生化反应。生物化学试验的方法很多，主要有以下几类。 一、碳水化合物的代谢试验 1．糖（醇、苷）类发酵试验 （1）原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。 (2)方法：在基础培养基中（如酚红肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，见表6-4-1。将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。 (3)结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应（如酚红变为黄色），产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。不分解糖则无变化。 (4)应用：糖（醇、苷）类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。 表6-4-1 常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类 单糖四碳糖：赤藓糖, 五碳糖：核糖核酮糖木糖阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖果糖半乳糖甘露糖 双糖蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麦芽糖（两分子葡萄糖）三糖棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖） 多糖菊糖（多分子果糖）淀粉 醇类侧金盏花醇卫茅醇甘露醇山梨醇 非糖类肌醇 2．葡萄糖代谢类型鉴别试验 (1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。 (2)方法：挑取少许纯培养物（不要从选择性平板中挑取）接种2支HL培养管中，在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以隔绝空气（作为密封管），另一管不加（作为开放管）。置35℃孵箱孵育48h以上。。 (3)结果：两管培养基均不产酸（颜色不变）为阴性；两管都产酸（变黄）为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。
微生物生化鉴定
常用生化试验 一．糖、醇发酵试验 1.糖、醇发酵试验 原理：各种细菌因含有发酵不同糖、醇的酶，所以分解糖、醇的能力个不相同。有的能分解某些糖、醇类，有的则不能分解。有的分解某些糖、醇类发酵产酸产气，有的仅产酸，而不产气。根据这些特点，可鉴别细菌。 培养基：糖发酵试验应用的培养基种类很多，大致可分为液体，半固体，固体（高层、斜面）等几类。可根据试验的要求和细菌的特性来选择。 2.乙酰甲基甲醇试验（V-P试验） 原理：某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，并将丙酮酸脱羧，变为乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下，被空气中的氧氧化成二乙酰，二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色的化合物。故在培养基中加入少量含胍基的化合物，如肌酸、肌酐可增加胍基含量。试验中加入的α-萘酚为催化剂，可加速此反应，使反应颜色增加，提高反应的敏感性。大肠埃希菌不能将丙酮酸脱羧，故V-P试验呈阴性。 培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基 3.甲基红试验（MR试验） 原理：许多细菌如大肠埃希菌等，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再次被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，这样使培养基的PH降至4.5以下。这时加入甲基红指示剂呈红色。若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醛、气体和水等），则培养基的酸度仍在PH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应。 培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基 MUG葡萄糖醛酸苷酶试验 原理：细菌的葡萄糖醛酸苷酶在碱性条件下，作用于4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸甘（4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide简称MUG）的β葡萄糖醛酸甘键，使其水解，释放的4-甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。 培养基：MUG培养基 4.β-半乳糖苷酶试验 原理：肠杆菌科细菌发酵乳糖，依靠半乳糖苷渗透酶和β-半乳糖苷酶两种不同的酶作用，能水解邻硝酸酚-β-D半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG），而释放出黄色
实验十 微生物鉴定中常用的生理生化试验
实验十微生物鉴定中常用的生理生化试验 摘要 本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。最后观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。 关键词 微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验 前言 类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。 一、实验目的 1、大分子水解试验 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 2、糖发酵试验 了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 3、IMViC试验 了解IMViC的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二、实验原理 在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。代谢过程主要是酶促反应过程。具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶（endoenzymes）.许多细菌产生胞外酶(exoenzymes)，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下： 1、大分子水解试验： 微生物对大分子如淀粉、蛋白质和油脂不能直接利用，必须依靠产生的胞外
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告 背景 细菌鉴定是微生物学中的一项重要任务，通过对细菌的形态、生理特征和生化反应进行分析，可以确定细菌的种属和特性。生理生化反应实验是其中的关键步骤，通过观察细菌对不同物质的代谢情况，可以获取有关其代谢能力、营养需求和产物生成等信息。本报告旨在介绍常用的细菌生理生化反应实验方法，并分析实验结果以提供准确的鉴定和分类建议。 分析 1. 嗜热/嗜冷性 嗜热/嗜冷性是指细菌对温度的适应能力。常用实验方法包括在不同温度条件下进 行培养观察，并记录生长情况。根据结果可将细菌分为嗜热菌（适宜高温）、嗜冷菌（适宜低温）或中温菌（适宜中等温度）。 2. 好氧/厌氧性 好氧/厌氧性是指细菌对氧气需求的差异。常用实验方法包括在含氧和不含氧的培 养条件下观察细菌生长情况。根据结果可将细菌分为好氧菌（需氧）、厌氧菌（不需氧）或兼性厌氧菌（能在有或无氧的条件下生长）。 3. 革兰氏染色 革兰氏染色是观察细菌壁结构的常用方法。该实验通过处理细菌样品，并使用革兰染色剂将其染色，然后观察其颜色变化。根据结果可将细菌分为革兰阳性（蓝紫色）或革兰阴性（红粉色）。 4. 淀粉酶活性 淀粉酶活性实验用于检测细菌对淀粉的降解能力。该实验将待测细菌培养于含淀粉的琼脂平板上，经过一段时间后，用碘液滴定并观察是否出现透明圈。透明圈表示淀粉被降解且产生了淀粉酶。 5. 水解酪蛋白活性 水解酪蛋白活性实验用于检测细菌对酪蛋白的降解能力。该实验将待测细菌培养于含酪蛋白的琼脂平板上，经过一段时间后，用盖有硫酸铜的试管放置在平板上，观察是否出现由蓝色转变为紫色的反应。颜色变化表示细菌产生了水解酪蛋白酶。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读知识专栏：细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读 封面图片：一位实验室技术人员在显微镜下观察细菌培养物 导语：在细菌学研究领域，生理生化反应实验是常用的方法之一，它可以帮助我们了解细菌的特性、代谢途径以及与环境的相互作用。本文将对细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告进行具体解读，帮助读者更深入地了解细菌的鉴定过程及意义。 一、实验背景和目的 在细菌鉴定中，我们经常需要对待测的细菌进行分类和鉴定。而生理生化反应实验是一种非常重要的手段，能够通过观察细菌对不同化学试剂的反应，以及产物的生成情况等特征，来判断细菌的性质。本实验的目的即是通过几项常用的生理生化反应实验，进一步探究待测细菌的特性和代谢途径。 二、实验方法 1. 大肠杆菌的蛋白酶试验（编号：1） 在本实验中，我们采用的是凝固酶试纸。观察到试剂的颜色发生变化，即从黄色转变为品红色，说明大肠杆菌在此试验中结果为阳性。
进一步解读：凝固酶是一种能够水解胶原蛋白的酶，大肠杆菌能够产生这种酶，因此在这一试验中呈阳性反应。这可以帮助我们进一步确认待测菌株是大肠杆菌，从而对其进行鉴定分类工作。 2. 肺炎克雷伯氏菌的氧化/发酵试验（编号：2） 我们使用菲斯氏培养基进行此实验，观察培养基颜色变化。如果培养基由绿色变为黄色，表示菌株对葡萄糖的进行氧化反应，即为氧化阳性；如果培养基继续保持绿色，表示菌株对葡萄糖进行发酵，即为发酵阳性。 进一步解读：肺炎克雷伯氏菌对葡萄糖的氧化/发酵反应具有很重要的意义。通过此实验，我们可以判断菌株的能量代谢途径是氧化还是发酵，并且可以辅助鉴定菌株的种类。 3. 金黄色葡萄球菌的氧化/发酵试验（编号：3） 氧化/发酵试验在金黄色葡萄球菌的鉴定中也扮演着重要的角色。在此实验中，当培养基由紫色变为黄色时，表示菌株对葡萄糖的进行氧化反应，即为氧化阳性；若培养基继续保持紫色，表示菌株对葡萄糖进行发酵，即为发酵阳性。 进一步解读：金黄色葡萄球菌的氧化/发酵反应结果也能帮助我们确定菌株的代谢途径，并对其分类鉴定提供重要依据。 三、实验结果和讨论 通过对以上生理生化反应实验的解读，我们可以得出以下结论：
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告 细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。 1. 氧气需求实验 氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。 2. 糖类发酵实验 糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。
通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。 3. 氧化还原实验 氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。 4. 酶活性实验 酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。 生理生化反应实验是细菌鉴定中常用的方法之一，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况、酸碱度变化、颜色变化等方面，来确定细菌的种类。在进行生理生化反应实验时，我们需要注意实验条件的控制，以确保实验结果的准确性。同时，我们还需要结合其
大肠杆菌的生化反应鉴定
大肠杆菌的生化反应鉴定 一、引言 大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人类和其他动物的肠道中。它有助于维持肠道微生物群落的平衡，并参与多种重要的生化反应。本文将对大肠杆菌的生化反应鉴定进行全面、详细的探讨。 二、大肠杆菌的主要生化反应 2.1 氧化还原反应 大肠杆菌通过氧化还原反应调节细胞内外的氧化还原平衡。其中，以下几个重要的酶参与了氧化还原反应： 2.1.1 细胞色素氧化酶 细胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）是大肠杆菌中重要的氧化酶之一。它参与电子传递链的最终步骤，将电子从还原的细胞色素C传递给氧气，生成水分子。 2.1.2 辅酶Q氧化酶 辅酶Q氧化酶（Ubiquinol oxidase）是另一个重要的氧化酶，它也参与电子传递链，并将电子从辅酶QH2传递给氧气，生成水分子。 2.2 糖代谢反应 大肠杆菌能够利用多种糖类进行代谢。以下是几个常见的糖代谢反应： 2.2.1 糖酵解 糖酵解是大肠杆菌通过分解葡萄糖产生能量的过程。首先，葡萄糖经过磷酸化反应被转化为葡萄糖-6-磷酸，然后进一步分解为丙酮酸和乳酸。这个过程通过糖酵解途径中的多个酶催化。
2.2.2 氧化呼吸 大肠杆菌也可以利用糖类通过氧化呼吸产生能量。在氧气存在的条件下，葡萄糖可以通过三羧酸循环和电子传递链来产生更多的ATP。这个过程包括多个关键酶的活性，如丙酮酸脱羧酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等。 2.3 氮代谢反应 大肠杆菌具备多样的氮代谢反应，使其能够利用多种氮源进行生长。 2.3.1 氨基酸代谢 大肠杆菌能够利用多种氨基酸作为唯一碳、氮源进行生长。在代谢氨基酸的过程中，多个酶参与了氨基酸的降解和转化。例如，谷氨酸酯酶能够将谷氨酸酯转化为谷氨酸，谷氨酰胺酶能够将谷氨酰胺转化为谷氨酸。 2.3.2 尿素代谢 大肠杆菌可以利用尿素作为氮源。尿素酶能够将尿素分解为氮和二氧化碳。此外，天冬酸酐酰胺酶能够将天冬酸酐酰胺转化为尿素。 三、大肠杆菌的生化反应鉴定方法 3.1 大肠杆菌的生化试剂 为了鉴定大肠杆菌的生化反应，需要使用特定的生化试剂。以下是几种常用的生化试剂： 1.甲醇 2.氧气 3.葡萄糖 4.尿素 5.氨基酸 3.2 大肠杆菌的生化反应实验步骤 为了进行大肠杆菌的生化反应鉴定，需要按照一定的步骤进行实验。以下是一般的实验步骤：
微生物鉴定中常用的生化反应
微生物鉴定中常用的生化反应 一、试验原理 有些细菌具有合成淀粉酶的力量，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。 细菌产生的脂肪酶能分解培育基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培育基pH下降，可通过在油脂培育基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8（红）～8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落四周培育基中消失红色斑点。 某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生小分子物质。假如细菌具有分解明胶的力量，则培育基可由原来固体状态变成液体状态。 牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳的利用可分三种状况：（1）酸凝固作用：细菌发酵乳糖后，产生很多酸，使石蕊牛乳变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固，此称为酸凝固。 （2）凝乳酶凝固作用：某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝固在中性环境中发生。通常这种细菌还具有水解蛋白质的力量，因而产生氨等碱性物质，使石蕊变蓝。 （3）胨化作用：酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透亮的液体。
胨化作用可以在酸性条件下或碱性条件下进行，一般石蕊色素被还原褪色。 二、试验材料 1、活材料：大肠杆菌（E. coli）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、黏乳产碱杆菌（Alcaligenes viscolactis）、铜绿假单胞菌（Psudomonas aeruginosa）、一般变形杆菌（Proteus vularis ）。 2、培育基：淀粉培育基：牛肉膏蛋白胨培育基加0.2%的可溶性淀粉；油脂培育基：牛肉膏蛋白胨培育基加花生油10mL、0.6%中性红水溶液1mL；明胶液化培育基：蛋白胨5g，明胶100～150g，水1000mL, pH7.2～7.4，115℃灭菌20min。石蕊牛乳培育基：牛奶粉100g、石蕊0.075g、水1000 mL、pH6.8，121℃灭菌15 min 。 3、试剂：卢哥氏碘液。 试验用品 平皿、接种环、酒精灯、试管、接种针等。 三、试验方法 （一）淀粉水解试验 1、预备淀粉培育基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培育基倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。 2、接种：用记号笔在平板底部划成两部分，在每部分分别写上菌名，用接种环取少量的待测菌，点接在培育基表面的相对应部分的中心，其中一个菌种应是枯草杆菌做对比菌。℃你能解释缘由吗？
细菌常见的生化反应试验
细菌常见的生化反应试验 （一）什么是生化试验? 指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。 生化试验或称生化反应：细菌的酶不完全相同，对营养物质的分解能力不一致，因此其代谢产物各异。在培养基中加入可与被测终产物反应的指示剂，产生肉眼可见的变化，如颜色的改变等，利用生化方法来鉴定细菌的试验，统称为细菌的生化试验或称生化反应 （二）生化试验的方法： 1在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。 2在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 3根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。 4根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。
（三）生化试验的注意事项 1.待检菌应是新鲜培养物，培养18~24h。 2.待检菌应是纯种培养物。 3.遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48 小时。 4.应做必要的对照试验。 5.提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进 行试验。 （四）检验细菌的生化试验范围 :1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验 二、糖醇类代谢试验 （一）糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（Methyl Red）试验MR
（五）七叶苷水解试验（六）甘油品红试验（一）糖醇类发酵试验 1、原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖(醇)，有的只能分解1~2种糖(醇) ，有的分解糖(醇)能产酸产气，有的分解糖(醇)只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。 常用的糖醇 单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖 双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖 三糖：棉子糖 多糖：菊糖、肝糖、淀粉 醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇 2试验方法：用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。置36±1.0℃培养1~3天，每天观察结果。 3、结果观察和记录： •产酸产气，阳性，以“⊕”表示