实验室常用缓冲液 常用引物序列汇总
实验常用试剂、缓冲液的配制方法
Na2HPO4，2 mM KH2PO4 1 M Tris-HCl 、11M Tris-HCl □组份浓度
□配制量□配制量1L 1L （pH7.4，7.6，8.0）
□配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。烧杯中。□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L
NaCl 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
8 g 2.
KCl 0.2g
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
Na2HPO4 1.42 g 浓值
HCl pH
KH2PO4 0.27g 7.4
约70mL
2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。
7.6 约60mL
3. 滴加HCl将pH42mL 8.0
约值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 将溶解定容至1L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中pH注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的值大约降低
6、10 M醋酸铵0.03个单位。□组份浓度10 M醋酸铵
□配制量100mL 1.5 M Tris-HCl 2、1.5 M Tris-HCl □组份浓度□配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～配制量pH8.8 （）□1L 200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。1L1. □配置方法称取181.7gTris置于烧杯中。 2. 加入约800mL2.加去离子水将溶液定容至100mL。的去离子水，充分搅拌溶解。
3.使用8.8pH3. 用浓盐酸调值至。0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。。1L 4. 将溶液定容至
5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
7、Tris- HCl平衡苯酚□溶液的注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris配置方法
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，pH值大约无需重蒸馏℃，溶液的值随温度的变化差异很大，温度每升高pH1便可用于分子生物学实验。0.03降低个单位。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其，□TE Buffer、310×组份浓度100 mM Tris-HCl10 mM EDTA
这些氧化产物可引起磷酸二酯进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，1L 配制量），，（pH 7.47.68.0 □
、苯酚的质量对DNADNA的交联等。因此，键的断裂或导致1L1. 配置方法□量取下列溶液，置于烧杯中。RNA 和的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物8.07.6pH7.4 1 M
Tris-HCl Buffer（，，）100mL RNA ）20mL 学实验。pH8.0500 mM EDTA （操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时向烧杯中加入约 2. 800mL2. 的去离子水，均匀混合。
与苯酚接触1L将溶液定至3. 后，高温高压灭菌。所有操作均应在通风橱中进行，应戴手套及防护镜等。 4. 室温保存。过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
分配于有机相，因4条件下醋酸钠组份浓度□醋酸钠、3 M 3 M pHDNA 3. 苯酚平衡：因为在酸性以上，苯酚）pH5.2（值达到100mL 7.8此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH □配制量～100置于称取1. □配置方法40.8gNaOAc?3H2O200mL烧杯平衡操作方法如下：℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从40mL中，加入约的去离子水搅拌溶解。-20①液化苯酚应贮存于
℃加入冰乙酸调节 2. 冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68 5.2值至pH。100mL加入去离子水将溶液定容至3. 。水浴中使苯酚充分溶解。％。该化合物0.1 高温高压灭菌后，室温保存。 4. ）至终浓度加入羟基喹啉（②8-Quinolinol 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，RNA是一种还原剂、10 mM
，2.7mM KCl，137 mM NaCl 组份浓度□PBS Buffer、5．
同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。EDTA，50mM Glucose
（质粒提取用）），使用磁力搅拌器搅□配制量1L ③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。拌15 ④重复操作步骤③。1M Tris-HCl（pH8.0）25mL
0.5 M EDTA（pH8.0⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器）20mL
20％Glucose（1.11M）15搅拌分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。45mL
dH2O 910mL ⑥重复操作步骤
⑤，稍微残留部分上层水相。
2. 高温高压灭菌后，4℃保存。⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的℃避光保存。⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4
RNase A（20mg/mL）。
15、Solution II/8、苯酚/氯仿异戊醇□配置方法□组份浓度250mM NaOH，1％（W/V）SDS
（质粒提取用）□配制量500mL 异 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/ □配置方法1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。125 1）。氯仿可使蛋白（：24 ：）质变性并有戊醇（25：24：
10而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现％SDS 50mL 助于液相与有机相的分离，
的气泡。2N NaOH 50mL
2. 加灭菌水定容至异戊醇500mL，充分混匀。Tris-HCl 2. 配置方法：将平衡苯酚与等体积的氯仿/
3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中：14℃保存。（24 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。
SDS W/V）10 ％（9、10W/V）SDS□组份浓度％（16、Solution III□组份浓度3M KOAc，5M CH3COOH 配制量□100mL
（质粒提取用）□配制量500mL 200mLSDS1. 称量10g高纯度的置于100～烧杯中，□配置方法□配置方法1. 的去离子水，加入约80mL68℃加热溶解。量取下列溶液置于500mL烧杯中。
7.22. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至。KOAc
147g
CH3COOH 57.5mL
3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。 2. 10、加入300mL去离子水后搅拌溶解。 2 N NaOH □组份浓度2N NaOH
3. 加去离子水将溶液定容至100mL 500mL。□配制量
4. □高温高压灭菌后，4 ℃保存。配置方法17、0.5M EDTA□组份
浓度塑料烧杯中（～去离子水置于1.量取80mL100200mLNaOH 0.5 M EDTA
(pH8.0) □配制量溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。1L
□配置方法小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。称取 2. 8g NaOH 1. 称取186.1g Na2EDTA?2H2O，
置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL。用去离子水将溶液体积定容至NaOH
3. 待完全溶解后，100mL的去离子水，充分搅拌。
）。（约pH值值8.020g NaOH 3. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 4. 用NaOH调节8.0时，EDTA才能完全溶解。注意：pH2.5 N HCl 组份浓度、112.5 N HCl□值至 4. 100mL 配制量□加去
离子水将溶液定容至1L。78.4mL1. 配置方法□在21.6mL的去离子水中加入的浓盐酸
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。（11.6N
6. ），均匀混合。室温保存。室温保存。 2. 组份浓度1 M DTT □18、1 M DTT
组份浓度□、125 M NaCl 5 M NaCl 配制量20mL □塑料离心管内。称取1. 3.09g DTT 1L □配制量，加入到50mL □配置方法
，溶解烧杯中，加入约置于292.2g NaCl称取1. 1L）（0.01 M 的NaOAcpH5.2800mL 2. 加20mL的□配置方法的去离子水后搅拌溶解。后使用0.22μm滤器过滤除菌。适量分成小份后，-20 后，适量
分成小份。1L2. 加去离子水将溶液定容至℃保存。 3.
组份浓度10mM A TP 19 ℃保存。43. 高温高压灭菌后，、10mM A TP □组份浓
度□Glucose ）W/V％（）W/V％（20 Glucose 20mL □配制量20、13塑料离心50mL称取121mg Na2A TP?3H2O，加入到配置方法□1. 100mL
配制量□
管内。加入约烧杯中，～100置于20g Glucose称取1. □配置方法200mL 25mM Tris-HCl的（pH8.0），搅拌溶解。20mL 的去离子水后，搅拌溶解。80mL 2. 加℃保存。适量分成小份，。100mL加去离子水将溶液定容至 2. 3. -20
高温高压灭菌后， 3. ℃保存。4 分子生物学实验常用培养基的配制方法10mM
，）pH8.0（25 mM Tris-HCl 组份浓度□Solution I 、14．
1、Ampicillin □组份浓度100mg/ml Ampicillin K2HPO4）100mL。
2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。（100mg/ml）□配制量50mL
Tryptone 12g 5g Ampicillin置于50mL离心管中。□配置方法1. 称量
Yeast Extract 。24g 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容
至50mL Glycerol 4mL 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。℃保存。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20 4. □组份浓度24mg/mL IPTG 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高
压灭菌。2、IPTG
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL（24mg/mL）□配制量50mL 的上述灭菌磷酸盐缓冲液。50mL离心管中。置于配置方法1. 称量1.2g IPTG
6. 4℃保存。加入40mL
灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 2.
7、TB/Apm培养基□组份浓度3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 1.2％（W/V）Tryptone
2.4℃保存。％（W/V）Yeast Extract 份）后，
4. 小份分装（1mL/-20 0.4 3、X- Gal □组份浓度20mg/mL X- Gal ％（V/V）Glycerol
□配制量50mL 17mM KH2PO4
20mg/mL（）
72mM K2HPO4 置于□配置方法1. 称取1g X-Gal50mL离心管中。
0.1mg/mL Ampicillin 40mL DMF
2. 加入（二甲基甲酰胺），充分混合□配制量。溶解后，定容至50mL 1L
□配置方法 3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，W/V0.5％（）0.72M K2HPO4）100mL。，组份浓度培养基4、LB □1％（W/V）Tryptone溶解
2.31g KH2PO4NaCl 1Yeast Extract，％（W/V）和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL配制量□1L ，高温高压灭菌。
2. 称取下列试剂，置于1L 1. □配置方法称量下列试剂，置于1L烧杯中烧杯中。
Tryptone 12g 10g
Tryptone
5g
Yeast Extract Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
NaCl 10g
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 值至）（约滴加 3. 5N NaOH0.2mL，调节pH7.0。加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲℃保存。 4. 高温高压灭菌后，4液和1mL Ampicillin（Tryptone W/V）100mg/mL）。％（□、5LB/Amp培养基组份浓度1
6. W/V0.5 ％（）均匀混合后4℃保存。Yeast Extract
8、SOB培养基NaCl □组份浓度2％（W/V）Tryptone ％
（1W/V）
0.1mg/mL Ampicillin 0.5％（W/V）Yeast Extract
0.05 □配制量1L ％（W /V）NaCl
2.5mM KCl 烧杯中称量下列试剂，置于□配置方法1. 1L
10mM MgCl2 Tryptone
10g
□配制量Yeast Extract
5g 1L
□NaCl 10g 配置方
法
1. 加入约
2. 800mL配制250mM KCl溶液。的去离子水，充分搅拌溶解。在90mL
的去离子水中溶解1.86g KCl后，定容至。7.0100mL。值至），调节（约5N NaOH滴加 3.
0.2mLpH2. 4. 配制2M MgCl2溶液。在。加去离子水将培养基定容至1L 90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。
3. 100mg/mL（1mL Ampicillin 6. 加入）后均匀混合。称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone ℃保存。
7. 420g
W/V％（组份浓度□培养基TB、6
1.2Yeast Extract 5g Tryptone ）
W/V％
（ 2.4NaCl Yeast Extract ）0.5g
4. 0.4 加入约Glycerol ）800mL的去离子水，充分搅拌溶解。V/V％（5 量取10mL 250 mM KCl KH2PO4
17mM 溶液，加入到烧杯中。
6. 72mM K2HPO4 滴加5N NaOH 溶液（约0.2mL），调节pH值至
7.0。
7. 加入去离子水将培养基定容至1L 配制量□1L。
℃保存。4高温高压灭菌后，8. 0.72M
，0.17M KH2PO4配制磷酸盐缓冲液（1. 配置方法□
9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压后，4℃保存。□培养基组份浓度2％（W/V）Tryptone 9、SOC13、NZYM培养基□组份浓度0.5％0.5％（W/V）Yeast Extract （W/V）Yeast Extract
1％（W /V）NaCl W /V）NZ 胺0.05％
（0.5％
（ 2.5mM KCl W /V）
NaCl
0.2％
（10mM MgCl2 W /V）MgSO4?7H2O
□配置方法20mM 葡萄糖NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。
□配制量100mL
14、NZM培养基□组份浓度1％（W /V □配置方法）NZ胺
0.5％（18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充W /V）NaCl 将1. 配制1M葡萄糖溶液。0.2％（W /V，用分溶解后定容至100mL0.22μm滤膜过滤除菌。）MgSO4?7H2O
□配置方法NZM培养基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，，均匀葡萄糖溶液2mL培养基中加入除菌的2. 向100mL SOB1M其他成份与NZYM 培养基相同。混合。153. 4℃保存。、一般固体培养基的□配置方法1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。（1％W/V）（组份浓度培养基10、2×YT□1.6％W/V）Tryptone，
配制），Yeast Extract0.5％（W/VNaCl Agar（琼脂：铺制平板用）15g/L
□配制量1L Agar（琼脂：配制顶层琼脂用）
7g/L
Agarose烧杯中。□配置方法1.称取下列试剂，置于1L （琼脂糖：铺制平板用）15 g/L
Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用）7g/L Tryptone
16g
2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使Yeast Extract
10g
琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。5g
NaCl
3. 2. 加入约800mL待培养基冷却至50～的去离子水，充分搅拌溶解。60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。值至1N KOH，调节pH7.0 。滴加 3.
4. .铺制平板（30。 4. .加水离子水将培养基定容至1L ～35mL培养基/90mm 培养皿）。
16、LB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度 1 高温高压后， 5. 4℃保存。％（W
/V）W/VTryptone，）Tryptone
0.5％％（培养基、11Φb×broth□组份浓度2 ）％（）（W/VYeast Extract，0.5W/VMgSO4?7H2O 平板培养基0.5％（W/V）Yeast Extract
1％（W/V）
□配制量1L
NaCl
1L1.配置方法□称取下列试剂，置于烧杯中。0.1mg/mL Ampicillin
0.5％（W /V）
Tryptone 20g IPTG
0.04mg/mL 5g
Yeast Extract X-Gal
1.5％（W /V）
MgSO4?7H2O 5g Agar
□充分搅拌溶解。800mL 2. 加入约的去离子水，配制量1L
pH1N KOH3. 滴加，调节值至□配置方法1. 称取下列试剂，置于7.5。1L烧杯中。
加水离子水将培养基定容至
4. .1LTryptone 。10g
Yeast Extract 45.
高温高压后，℃保存。5g
NZCYM12、培养基Yeast Extract W/V（％0.5）NaCl 10g □组份浓度％（0.1
加入约 2. 800mL W/V）Casamino Acid 的去离子水，充分搅拌溶解。胺W /V％（1 ）NZ 。pH值至7.0（约0.2mL），调节溶液
3. 滴加5N NaOH 15gAgar。
4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入W
/V0.5 ％（）NaCl
MgSO4?7H2O ）60 ℃左右。 5. 高温高压灭菌后，冷却至W /V％
（0.21mL IPTG
100mg/mL）、配制量□1L 6. 加入1mL Ampicillin（□配置方法20mg/mL）后均
匀混合。）、2mL X-Gal（（烧杯中。称取下列试剂，置于1. 1L24mg/mL 培养基/90mm培养基）。7. 铺制平板（30～5g Yeast Extract 35mL 8. 4 Casamino Acid 1g ℃保存平板。
10g NZ 胺□组份浓度
TB/Amp/X-Gal/IPTG17、
5g NaCl Tryptone ）％（W /V 1.2 2g MgSO4?7H2O
Yeast Extract W/V平板培养基 2.4％（）
Glycerol 加入约 2. ）的去离子水，充分搅拌溶解。800mLW/V
0.4％（KH2PO4 17mM 。7.0值至pH），调节0.2mL溶液（约5N NaOH滴加 3.
72mM K2HPO4 1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g，
钼酸钠?2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL，0.1mg/mL Ampicillin
浓盐酸25mL 0.024mg/mL IPTG ，充分混合。
2.回流10 0.04mg/mL X-Gal 小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。
3.然后开口沸腾15minW /V 1.5％（）Agar ，以驱除过量的溴，冷却后
定容到250mL。
4.于棕色瓶中保存，可使用多年1L □配制量
注意：配制磷酸盐缓冲液（1.0.17M KH2PO4，0.72M 上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左右，□配置方法
几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至K2HPO4）100mL。1mol/L的浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍，使之浓度为0.1mol/L 2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
略高。这种稀释18倍后的Folin Tryptone
12g 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Yeast Extract 24g Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L
左右的标准氢氧化钠溶液，Glycerol
4mL 当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴3. 加入约800mL的去离子水，充分
搅拌溶解。
定Folin试剂乙，终点不太好掌握，加入 4. 加水离子水将培养基定容至1L后，15gAgar。溶
液地颜色是由浅黄变为浅绿，
60℃左右。再变为灰紫色为终点。高温高压灭菌后，冷却至 5.
DNS试剂的上述灭菌磷酸盐缓冲液、 6. 加入100mL1mL 8、氢氧化钠溶液2mol/L5-，二硝基水杨酸10g,加入□配置方法1.取32mL X-Gal）、24mg/mL100mg/mLAmpicillin（）、1mL IPTG（二硝基水杨酸试剂）20mg/mL）后均匀混合。（3，5-200mL。（培养基铺制平板（7. 30～35mL/90mm培养基）。。，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g2.将3 ，棕色瓶保存。3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL 8. 4℃保存平板。
5生物化学实验常用试剂的配制方法％％蔗糖溶液9、5 □组份浓度1L □配制量
□、10.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度0.5mol/L
。50g，用去离子水溶解定容至1L □配置方法
□配制量2L 称取蔗糖0.1mol/L □准确称取氢氧化钠□配置方法1.40g。组份浓度10、0.1mol/L蔗糖溶液用去离子水溶解并稀释至 2.2L配制量1L 。
53种常见缓冲液配制方法
53种常见缓冲液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)取5 mol/L醋酸溶液15.0 ml，加乙醇60 ml和水20 ml，用10 mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14 g，加水800 ml，搅拌溶解，并稀释至1000 ml，用6 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294 g，加0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06 g，加盐酸赖氨酸3.65 g、氯化钠5.8 g、乙二胺四醋酸二钠0.37 g，再加水溶解使成1000 ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液取乌洛托品75 g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2 ml，再用水稀释至250 ml，即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42 g，加水使溶解并稀释至400 ml，用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52 g与巴比妥钠30.9 g，加水使溶解成2000 ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05 g，加氯化钠3.7 g及水适量使溶解，另取明胶0.5 g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2 mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.8，再用水稀释至500 ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2 mol/L甲酸溶液25 ml，加酚酞指示液1滴，用2 mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2 mol/L甲酸溶液75 ml，用水稀释至200 ml，调节pH值至3.25～3.30，即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10 g，加水900 ml，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000 ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液取枸橼酸4.2 g，加1 mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40 ml使溶解，再用20％乙醇稀释至100 ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。
分子生物学 常用引物序列
日常备库引物序列(5'-3') 1492R GGTTACCTTGTTACGACTT 27F\8F AGAGTTTGATCCTGGCTCA 35S GACGCACAATCCCACTATCC 3'AD AGATGGTGCACGATGCACAG 3'AOX\AOX1rev GGCAAATGGCATTCTGACAT 3'BD TAAGAGTCACTTTAAAATTTGTATAC 5'AD\GAL4AD\P17110 TACCACTACAATGGATGATG 5'AOX\AOX1for GACTGGTTCCAATTGACAAGC 5'BD\GAL4-BD-Cfor TCATCGGAAGAGAGTAG 96gIII\M13-96 CCCTCATAGTTAGCGTAACG a-FACTOR\Alphafor TACTATTGCCAGCATTGCTGC BAC1 AACCATCTCGCAAATAAATA BAC2 ACGCACAGAATCTAGCGCTT BGH\pCDNA3.1R TAGAAGGCACAGTCGAGG CMV-24 TTAGGACAAGGCTGGTGG CMV-30 ATAACCCCGCCCCGTTG CMV-F\CMV-Profor CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG\ATGGGCGGTAGGCGT G CMV-R TCGTTGGGCGGTCAGC DuetDOWN1 GATTATGCGGCCGTGTACAA DuetUP1 GATCTCGACGCTCTCCCT DuetUP2 TTGTACACGGCCGCATAATC EBVrev GTGGTTTGTCCAAACTCATC EGFP-Cfor AGCACCCAGTCCGCCCTGAGC EGFP-Nrev CGTCGCCGTCCAGCTC GAL1-Profor AACATTTTCGGTTTGTATTACTTC GLP1 TGTATCTTATGGTACTGTAACTG GLP2 CTTTATGTTTTTGGCGTCTTCCA
各种缓冲液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 24 Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 687·H2 柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12 ，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。 7．磷酸盐缓冲液
2 4·2H 2Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 24·2H 2KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）
10．Tris –盐酸缓冲液（0.05M ，25℃） C HOCH2 NH2 分子量=121.14; 0. 1M 溶液为12.114克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。 247·H 2硼酸H 2BO 3,分子量=61.84,0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
247·10H 2硼酸H 2BO 3，分子量=61.84, 0.2M 溶液为12.37克/升。 硼砂 易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。 12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（ 0.05M ） 13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根） 2 47·10H 2 14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+22·10H 2
常见缓冲溶液的配制
常见缓冲溶液的配制 缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH 值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。 在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH 值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。 由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。 柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。 磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。 三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4℃时是8.4，在37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。 缓冲液的pH值由哪些因素决定？ 设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式： 根据此式可得出下列几点结论： （1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。 （2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。 （3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。 从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。 经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。 所以500ml 0.1M磷酸缓冲液需要Na2HPO4量为: 需Na2HPO4量为 : 计算好后，按计算结果称好药品，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，便得所需的缓冲液。 各种缓冲溶液的配制，均按下表按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确的浓度才能进行，如醋酸、NaOH等 常用体系 1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05M） X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M盐酸再加水稀释至200ml pH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml 2.2 50 44.0 3.0 50 11.4 2.4 50 32.4 3.2 50 8.2 2.6 50 24.2 3.4 50 6.4 2.8 50 16.8 3.6 50 5.0
常用的β-actin 引物序列
human actin f ctc cat cct ggc ctc gct gt human actin r gct gtc acc ttc acc gtt cc product size:268 rabbit actin r agt gcg acg tgg aca tcc g rabbit actin f tgg ctc taa cag tcc gcc tag product size:295 mouse actin r cgt tga cat ccg taa aga cc mouse actin f aac agt ccg cct aga agc ac product size:281 rat actin f TCAGGTCATCACTATCGGCAAT rat actin r AAAGAAAGGGTGTAAAACGCA product size:432 human actin r gag cta cga gct gcc tga cg human actin f cct aga agc att tgc ggt gg product size:416 mouse actin f tca tca cta ttg gca acg agc mouse actin r aac agt ccg cct aga agc ac product size:399 rat actin f CCCATCTATGAGGGTTACGC rat actin r TTTAATGTCACGCACGATTTC product size:150 rabbit actin f tct tcc agc cct cct tcc tg rabbit actin r cgt ttc tgc gcc gtt agg t product size:409 内参基因名称引物引物最佳退火扩增 基因库序列号引物名称序列位置Tm 温度C 长度 Human actin beta F305 ctgggacgacatggagaaaa 305-324 52.3 BC002409 R868 aaggaaggctggaagagtgc 868-849 52.6 59.4 564 F1379 agcgagcatcccccaaagtt 1379-1398 57.3 R1663 gggcacgaaggctcatcatt 1663-1644 56.3 54 285 Rat actin beta F18 cacccgcgagtacaaccttc 18-37 54.5 NM_031144 R224 cccatacccaccatcacacc 224-205 54.4 60.4 207 F694 gagagggaaatcgtgcgtgac 694-714 54 R1146 catctgctggaaggtggaca 1146-1127 53.2 57.1 452 Mouse actin beta F91 atatcgctgcgctggtcgtc 91-110 57.5 NM_007393 R607 aggatggcgtgagggagagc 607-588 57.8 60.4 517 F1566 gtccctcaccctcccaaaag 1566-1585 54.5 F1831 gctgcctcaacacctcaaccc 1831-1811 54.4 55.7 266 human GAPDH F369 agaaggctggggctcatttg 369-388 55.6 BC004109 R626 aggggccatccacagtcttc 626-607 55.1 57.5 258
引物设计原则(必看)
mi引物设计原则 1. 引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。 2. 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，也会使错误引发机率增加。 3. 引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基A。另外，引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。 4. 引物序列的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。 5. 引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm值的计算有多种方法，如按公式Tm＝4(G+C)＋2(A+T)，在Oligo软件中使用的是最邻近法(the nearest neighbor method)。 6. ΔG值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端ΔG值较低（绝对值不超过9），而5’端和中间ΔG 值相对较高的引物。引物的3’端的ΔG值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应。 7. 引物二聚体及发夹结构的能值过高（超过4.5kcal/mol）易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行。 8. 对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR 产物的载体的相应序列而确定。 引物序列应该都是写成5-3方向的， Tm之间的差异最好控制在1度之内， 另外我觉得扩增长度大一些比较好，500bp左右。 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构，就要避开它。如这一段不能
常见缓冲溶液配制方法
常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液：取5mol/L醋酸溶液，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取氯化钙0.294g，加L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L 盐酸溶液调节pH值至，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至，滤过。 巴比妥缓冲液：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用L盐酸溶液调节pH值至，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至～。 邻苯二甲酸盐缓冲液：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液：取％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液与乙液混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约调节pH值至，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液～：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液：取硼酸3.09g,加L氯化钾溶液500ml使溶解，再加L氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠18g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.4g，加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至，再加水稀释至100ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml。 醋酸－醋酸钾缓冲液：取醋酸钾14g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸铵缓冲液：取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml。
真菌检测鉴定通用引物-Fungal Primers
ITS1: 5’-CCGTAGGTGAACCTGCGG-3’ ITS4:5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ Tm 55℃ NS17: CATGTCTAAGTTTAAGCAA NS3: GCAAGTCTGGTGCCAGCAGCC NS4: CTTCCGTCAATTCCTTTAAG NS22: AATTAAGCAGACAAATCACT NS24: AAACCTTgTTACgACTTTTA LR0R: 5’-GTACCCGCTGAACTTAAGC-3’ LR3: 5’-CCGTGTTTCAAGACGGG LR3R: 5’-GTCTTGAAACACGGACC (complementary to RLR3R: GGTCCGTGTTTCAAGAC) LR5: 5’-TTAAAAAGCTCGTAGTTGAAC-3’ LR7: 5’-TACTACCACCAAGATCT LR12: 5’-GACTTAGAGGCGTTCAG Lr0R/LR5: Tm 50-52℃ NL1: 5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG NL1: 5′-TGCGTTGATTACGTCCCTGC (also called V9: TGCGTTGATTACGTCCCTGC) NL1: 5’-TGCTGGAGCCATGGATC-3 NL2: 5’-CTCTCTTTTCAAAGTTCTTTTCATCT NL2: 5’-AACGGCTTCGACAACAGC-3 NL2: 5’-CTTGTTCGCTATCGGTCTC (also NL2A: 5′-CTTGTTCGCTATCGGTCTC) NL2: 5’-TACTTGTTCGCTATCGGTCT-3' NL3: 5’-GAGACCGATAGCGAACAAG (also NL3A: 5’-GAGACCGATAGCGAACAAG) NL3: 5’-AGACCGATAGCGAACAAGTA NL3: 5’ NL4: 5’（similar to RLR3R：5′-GGTCCGTGTTTCAAGAC) NL4: 5’-TAGATACATGGCGCAGTC-3
实验室常用缓冲液 常用引物序列汇总
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Na2HPO4，2 mM KH2PO4 1 M Tris-HCl 、11M Tris-HCl □组份浓度 □配制量□配制量1L 1L （pH7.4，7.6，8.0） □配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。烧杯中。□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L NaCl 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 8 g 2. KCl 0.2g 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 Na2HPO4 1.42 g 浓值 HCl pH KH2PO4 0.27g 7.4 约70mL 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 7.6 约60mL 3. 滴加HCl将pH42mL 8.0 约值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 将溶解定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中pH注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的值大约降低 6、10 M醋酸铵0.03个单位。□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL 1.5 M Tris-HCl 2、1.5 M Tris-HCl □组份浓度□配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～配制量pH8.8 （）□1L 200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。1L1. □配置方法称取181.7gTris置于烧杯中。 2. 加入约800mL2.加去离子水将溶液定容至100mL。的去离子水，充分搅拌溶解。 3.使用8.8pH3. 用浓盐酸调值至。0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。。1L 4. 将溶液定容至 5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□溶液的注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，pH值大约无需重蒸馏℃，溶液的值随温度的变化差异很大，温度每升高pH1便可用于分子生物学实验。0.03降低个单位。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其，□TE Buffer、310×组份浓度100 mM Tris-HCl10 mM EDTA
各种缓冲液配制方法
不同缓冲液的缓冲范围 pH缓冲液 六十一秒的常用缓冲溶液的配制&缓冲溶液原理（2007年6月16日更新）（一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。（三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。
C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 ①使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。
（八）磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L） Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。 NaH2PO4·H2O分子量＝138.01；0.2 mol/L溶液为27.6 g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03；0.2 mol/L溶液为31.21 g/L。 （九）巴比妥纳-盐酸缓冲液 巴比妥钠分子量＝206.18；0.04 mol/L溶液为8.25 g/L。 （十）Tris-HCl缓冲液（0.05 mol/L） 50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100
ISSR通用引物序列
ISSR通用引物序列
UBC Primer Set #9 (Microsatellite) 引物名称序列 801 ATA TAT ATA TAT ATA TT 802 ATA TAT ATA TAT ATA TG 803 ATA TAT ATA TAT ATA TC 804 TAT ATA TAT ATA TAT AA 805 TAT ATA TAT ATA TAT AC 806 TAT ATA TAT ATA TAT AG 807 AGA GAG AGA GAG AGA GT 808 AGA GAG AGA GAG AGA GC 809 AGA GAG AGA GAG AGA GG 810 GAG AGA GAG AGA GAG AT 811 GAG AGA GAG AGA GAG AC 812 GAG AGA GAG AGA GAG AA 813 CTC TCT CTC TCT CTC TT 814 CTC TCT CTC TCT CTC TA 815 CTC TCT CTC TCT CTC TG 816 CAC ACA CAC ACA CAC AT 817 CAC ACA CAC ACA CAC AA 818 CAC ACA CAC ACA CAC AG 819 GTG TGT GTG TGT GTG TA 820 GTG TGT GTG TGT GTG TC
821 GTG TGT GTG TGT GTG TT 822 TCT CTC TCT CTC TCT CA 823 TCT CTC TCT CTC TCT CC 824 TCT CTC TCT CTC TCT CG 825 ACA CAC ACA CAC ACA CT 826 ACA CAC ACA CAC ACA CC 827 ACA CAC ACA CAC ACA CG 828 TGT GTG TGT GTG TGT GA 829 TGT GTG TGT GTG TGT GC 830 TGT GTG TGT GTG TGT GG 831 ATA TAT ATA TAT ATA TYA 832 ATA TAT ATA TAT ATA TYC 833 ATA TAT ATA TAT ATA TYG 834 AGA GAG AGA GAG AGA GYT 835 AGA GAG AGA GAG AGA GYC 836 AGA GAG AGA GAG AGA GYA 837 TAT ATA TAT ATA TAT ART 838 TAT ATA TAT ATA TAT ARC 839 TAT ATA TAT ATA TAT ARG 840 GAG AGA GAG AGA GAG AYT 841 GAG AGA GAG AGA GAG AYC 842 GAG AGA GAG AGA GAG AYG
常见缓冲液配制大全
常见缓冲液配制大全 缓冲液 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml,用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解，并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸 3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液 取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml,即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4) 取巴比妥钠4.42g,加水使溶解并稀释至400ml，用 2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6) 取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成 2000ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8) 取巴比妥钠5.05g,加氯化钠3.7g及水适量使溶解,另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L 盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3) 取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L 氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH 值至3.25～3.30,即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6) 取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6,加水稀释至1000ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液 取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml，即得。
常用缓冲液配置
实验室常用缓冲液配置方案 1)1 M Tris-HCl , , 组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。 2)10×TE Buffer , , 组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法：
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 3)1.5 M Tris-HCl 组份浓度：1.5 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调节pH值至。 4. 将溶液定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。4)3 M 醋酸钠 组份浓度：3M 醋酸钠 配制量：100ml 配制方法：
1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解 2.加入冰醋酸调节pH值至 3.加去离子水将溶液定容至100ml 4高温高压灭菌后，室温保存。 5)PBS Buffer 组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L 配制方法： 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6)10 M 醋酸铵
常用的通用引物序列
常用之Universal Primer 序列 Primer Primer sequence Applicable vectors T7 TAATACGACTCACTATAGGG pGEM-T, pGEM-T-Easy, pCRII, pET, pBlueScript, pcDNA3.1, pT7Blue SP6 TATTTAGGTGACACTATAG pGEM-T, pGEM-T-Easy, pCRII T3 ATTAACCCTCACTAAAGGGA pBlueScript pUC/M13 Forward (-40) GTTTTCCCAGTCACGAC pUC, pGEM-T, pCRII, pBlueScript pUC/M13 Forward (-21) TGTAAAACGACGGCCAGT pUC, pCRII, pBlueScript pUC/M13 Reverse TCACACAGGAAACAGCTATGAC pUC, pGEM-T, pCRII, pBlueScript T7 Terminator GCTAGTTATTGCTCAGCGG pET pGEX 5’GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG pGEX pGEX 3’CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG pGEX pQEF GGCGTATCACGAGGCCCTTTCG pQE pQER CATTACTGGATCTATCAACAGG pQE polyhedrin F AAATGATAACCATCTCGCAA Stag GAACGCCAGCACATGGACAGC pET-4x BGH reverse TAGAAGGCACAGTCGAGG pcDNA3.1, pTracer-CMV 5’ AOX GACTGGTTCCAATTGACAAGC pPlCZα α-factor TATTGCCAGCATTGCTGC pPlCZα 3’ AOX GCAAATGGCATTCTGACATCC pPlCZα
常见缓冲液配制
常用缓冲溶液的配制 （一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L甘氨酸＋Y毫升0.2 mol/L HCl，再加水稀释至200毫升。 甘氨酸分子量＝75.07。 0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。 （二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾＋Y毫升0.2 mol/L HCl，再加水稀释至20毫升。
邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23。0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。 （三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。 Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22；0.2 mol/L溶液为71.64 g/L。
C6H8O7·H2O分子量＝210.14；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 （四）柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液 ① 使用时可以每升中加入1克酚，若最后pH值有变化，再用少量50％氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 （五）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L）
柠檬酸：C6H8O7·H2O分子量＝210.14 ；0.1 mol/L溶液为21.01 g/L。 柠檬酸钠：Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 ；0.1 mol/L溶液为29.41 g/L。 （六）醋酸-醋酸钠缓冲液（0.2 mol/L） NaAc·3H2O分子量＝136.09；0.2 mol/L溶液为27.22 g/L。冰乙酸11.8 mL 稀释至1 L（需标定）。 （七）磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升 0.2 mol/L KH2PO4+Y毫升0.2 mol/L NaOH 加水稀释至20毫升。
RT-PCR常用引物序列
RT-PCR常用引物序列 RT-PCR引物序列基因来源引物序列产物大小（kb） β-actin 人有意义链CCTCG CCTTT GCCGA TCC 反义链GGA TC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62 kb β-actin* 大鼠有意义链TACAA CCTCC TTGCA GCTCC 反义链GGA TC TTCA T GAGGT AGTCA GTC 0.62kb β-actin 小鼠有意义链GTCGT ACCAC AGGCA TTGTG A TGG反义链GCAAT GCCTG GGTAC ATGGT GG 0.49 kb GAPDH 人有意义链GGTGA AGGTC GGAGT CAACG反义链CAAAG TTGTC ATGGA TGHACC 0.50kb GAPDH 大鼠有意义链GATGC TGGTG CTGAG TATGR CG反义链GTGGT GCAGG ATGCA TTGCT CTGA 0.20 kb Dynein 小鼠有意义链GCGGG CGCTG GAGGA GAA反义链GGA TC TTCA T GAGGT AGTCA GTC 12.3 kb Polymerase ε 人有意义链CGCCA AATTT CTCCC CTGAAA反义链CCGTA GTGCT GGGCA ATGTT C 6.8 kb Polymerase ε 人有意义链AAGGC TGGCG GATTA CTGCC反义链GA TGC TGCTG GTGAT GTACT C 3.5 kb Tuberous Sclerosis 人有意义链GGAGT TTATC ATCAC CGCGG AAATA CTGAG AG反义链TATTT CACTG ACAGG CAATA CCGTC CAAGG 5.3 kb 18S rRNA 大豆有意义链CTTTC GATGG TAGGA TAGTG GCCT反义链CAATG A TCCT TCCGC AGGTT CACCT AC 1.5 kb *引物不会扩增假基因 PCR引物序列基因来源引物序列产物大小（kb） HIV gag region 病毒SK 38ATTAAT CACTA TCCAG TAGGA GAAAT SK 39TTTGG TCCTG TCTTA TGTCC AGAAT GC 0.11kb β-globin 人(29923)GGTGT TCCCT TGATG TAGCA CA (34016)CCAGG ATTTT TGATG GGACA CG 4.1kb β-globin 人(31194)GCTGC TCTGT GCATC CGAGT GG (34016)CCAGG ATTTT TGATG GGACA CG 2.8kb
常用缓冲液配方
常用缓冲溶液的配制方法 1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量= 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 24 Na2HPO4·2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。 C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液 ① 使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH 值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶 液或浓盐酸调节，冰箱保存。 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/升。 6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ） Na 2Ac·3H 2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。 7．磷酸盐缓冲液
242Na 2HPO 4·12H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为 71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 （2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L ） 242KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ） 9．巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）