分光光度计
第一章：产品概述
产品原理：
分光光度计的原理是利用物质对不同波长的选择性吸收现象对物质进行定性和定量分析，通过对吸收光谱的分析，普安短物质的内部结构及化学组成。
光谱系列紫外/可见分光光度计就是根据以上原理，将传统的设计制造经验与现代精密光学和最新微电子等高新科学技术合理的结合在一起，研制开发的具有当代先进水平的新型分光光度计，是化工、药品、生化、冶金、轻工、材料、环保、食品、制药以及教学等行业的必备仪器。
产品特点：
光谱系列紫外/可见分光光度计具有以下特点：
采用经改良的低杂散光、高分辨率的单光束光路以及简捷、可靠的结构设计，使仪器具有良好的单色性、稳定性、重现性和精确的测量读数。2-4nm的光谱带宽可满足大多数分析测试项目的要求。
新型微机技术的运用，使仪器具有自动设置0%T和100%T、浓度计算和数据处理、自动校正波长，自动切换滤光片，自动光源切换点、自动显示出错信息等功能。科学的设计，新技术的运用，将光、机、电以及微机技术有机的结合在一起，使仪器的稳定性指标接近或达到高级紫外可见光光度计的水平。
一起选用2×20位大屏幕点阵式带背光显示器，可现实透射比、吸光度、浓度、波长等参数，还实现了仪器人机对话功能和连接PC等功能。仪器安装了标准的RS—232C通讯接口，可向计算机输送测试参数，并可接受计算机发送的控制指令（需使用SPECTRUM用户应用软件），实现PC机对仪器进行直接操作。外接打印机，可打印实时测试参数。
仪器附有可在视窗95（WIN95）操作平台运行的PC—SPECTRUM基本应用软件，可进行透射比、吸光度测试，浓度计算和直读，并可以打印，保存和调用测试参数，使使用者轻松、方便、准确、可靠地进行分析。
仪器各部件介绍
1.“方式设定”键（MODE）：用于设置测试方式。
仪器可供选择的测试方式有：透射比方式；吸光度方式和浓度直读方式。使用功能键（FUNC），根据提示可将标准样品的浓度值或K因子（FACTCR）输入仪器。
2.“100%/0ABS”键：用于自动调整100.0%T（100.0%透射比）或0ABS（零吸光度）。
当波长被改变时，请不要忘记重新调整100%T或0ABS。
3.“0%T”键：用于自动调整0%透射比。
仪器在开机后自检的过程中已经将0%T的参数保存在微机处理器中。一般情况下，无需使用此键。仪器长时间使用过程中，0%T可提高测试数据的精确度。
4.“波长设置”键（ρδ）：用于设置分析波长。
波长位置显示在显示器的左上角。
5.“功能”键（FUNC）：
①.输入已知的标准样品浓度值：
按功能键一次，仪器显示：Std/00NC=1000
当您需要直读被测样品的浓度时，首先将标准样品的浓度值输入仪器中。仪器会根据标准样品的吸光度与输入的浓度值自动计算出标准样品K的因子。被测样品的浓度值符合公式：C=KA
②.输入已知标准样品K因子：
按功能键二次，仪器显示Std/FACTOR=1000
当您需要直读被测样品的浓度时，首先将标准样品K因子输入仪器中。仪器会自动将输入的K因子储存起来。被测样品的浓度值符合公式：C=KA
③.光源切换位置控制：（此功能只用于紫外可见分光光度计）
按功能键三次，仪器显示LAMP EXCH…。
此功能可使被测样品在仪器能量许可的情况下，使用同一种光源进行测试，以提高测试数据的精确度。光源切换位置在325nm—355nm范围内可任意选择。
钨卤素灯开关控制：（此功能只用于紫外可见分光光度计）
按功能键四次，仪器显示W LAMP OFF?当钨卤素灯是关闭状态时，仪器显示W LAMP ON？
氘灯开关控制：（此功能只用于紫外可见分光光度计）
按功能键五次，仪器显示D2 LAMP OFF?当氘灯是关闭状态时，仪器显示D2 LAMP
ON？
④.连接计算机：按功能键六次，仪器显示：CONNECT PC
仪器与计算机连接时，仪器显示：PC CONNECTING
仪器与计算机连接成功时，仪器显示：PC CONNECTED
仪器与计算机联机操作时，仪器显示：PC CONN…
仪器与计算机连接失败时，仪器显示：CONNECT PC？
6.“确认”键（ENT）
用于确认所设置的各种参数或仪器功能。
7.“打印、清除”键（P/C）:
“打印”键（PRINT）：当仪器处于测试状态时，使用该键，可将测试参数通过RS—232C 串行口输送给外接打印机。
“清除”键（CLEAN）用于清除设置的参数或仪器功能。
8.RS—232C输出接口：用于连接个人的计算机或打印机。
串行输出接口的主要参数：
波特率（Band rate）:9600 数据位（Data bit）：8
停止位（Stop bit）：1
奇偶检验位（Par ity）：无串行输出接口的连接方式：PIN2—发送数据
PIN3—接收数据
PIN5—信号接地
9.模拟信号输出接口：
用于连接记录仪。科技路模拟信号在一定时间内的变化量。
此功能可用于动力学分析测试。
10.电源开关：用于控制仪器电源开或关。
仪器通电前，首先请检查仪器铭牌上表明的工作电压是否与您当地的供电电压相符。光谱WFJ72系列可见分光光度计主要技术指标：
光谱WFZ275系列紫外可见分光光度计主要技术指标：
第二章：仪器安装与使用
配件检查：
光谱分光光度计采用坚固的产品包装以避免产品在运输中碰撞，请根据仪器所附的产品装箱单检视您的仪器附件和配件，倘若发现附件和配件有缺少或损坏现象，请尽快与当地光谱产品代理商联系。
工作环境及安装要求
放置仪器的工作台应平坦牢固、结实，不应有震动或其他影响仪器正常工作的现象（强烈电磁场、静电及其他干扰，都可能影响仪器的正常工作，应尽快原理干扰源）。
仪器使用时，务必保持散热孔畅通，以利散热。
仪器应放置在室温在5-35℃，相对湿度不大于85%的环境中。
仪器放置应避开有化学腐蚀气体的地方，如：硫化氢、二氧化碳、氨气等。
仪器应避免阳光直射。
仪器的电源供给要求在一起额定电压的±10%范围内，并有良好的接地。
仪器通电前，首先请检查仪器铭牌上标明的工作电压是否与您当地的供电电压相符。
如何您安装的仪器
首先，欲使用分光光度计，我们必须供给它电源。取出随机所附的交流电源线，将电源线的一头接到分光光度计的电源插座上，将另一头插到墙壁上的插座上。确认联接无误，电源线安装好之后，按下分光光度计后面的电源开关，即可开机。
仪器性能的检查：
接通电源，让仪器预热至少二十分钟，使仪器进入热稳定工作状态。
有时仪器会因运输，存储环境因素而受潮产生诸如读数波动等不稳定现象，此时，请保持仪器周围有良好的通风环境，并连续开机数小时直到读数稳定为止。
仪器接通电源后，即进入自检状态。显示器实时显示仪器的自检状态。当仪器发生故障时，显示器会自动显示故障位置。自检结束，仪器自动停留在546nm处，并自动调100%T 和0%T。显示器上显示546nm和“100%T”。仪器此时便进入测试状态。显示器显示仪器各部分自检项目的符号为（以752型紫外可见分光光度计为例）：
电源接通：仪器显示“WELCOME”和“SPECTRUM 752”
电源切换器状态自检：仪器显示“SELFTESTING:LIGHT SOURCE”
滤光片位置自检：仪器显示“SELFTESTING：FILTER”
单色器状态自检：仪器显示“SELFTESTING：MONOCHROMATOR”
自动调“0%T”“100.0%T”仪器显示：“546nm BLANK”
进入测试状态：“546”“100.0%T”
怎样使用您的仪器
1.电源开关，使仪器预热20分钟；
仪器接通电源后，仪器即进入自检状态，自检结束后波长停在546nm处，测量的方式自动设定在透射比方式（%T），并自动调100%T和0%T。
开机前，先确认仪器样品室内是否有东西挡在光路上。光路上有东西将影响仪器自检甚至造成仪器故障。
如果您要获得被测样品的透射比参数事（透射比方式）：
2.按“方式键”（MODE）将测试方式设置为透射比方式：
显示器显示“XXXnm XXX.X%T”
3.按“波长设置”键（ρδ）设置您想要的分析波长，如340nm;
按波长设置键“ρ”或“δ”直到显示器显示340nm为止，此时显示器显示“340nm XXX.X%T”
每当波长被重新设置后，请不要忘记调整100.0%T。
4.将您的参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中：
比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米，大约25毫升。否则，会影响测试参数的精确度。
被测试的样品中不能有气泡和漂浮物，否则，会影响测试参数的精确度。
5.打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。
一般情况下，参比放在样品架的第一个槽中。
被测样品的测试波长在340nm-1000nm范围内时，建议使用玻璃比色皿，被测样品在190nm-340nm范围内时，建议使用石英比色皿。
的测试精度。
比色皿的透光部分表面不能有指印、溶液痕迹。否则，将影响样品的测试精度。
6.将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整零ABS。
仪器在自动调整100%T的过程中，显示器显示“340nm Blank…”，当100.0%T调整完成后，显示器显示“340nm 100.0%T”。
7.将被测溶液推或拉入光路中，此时，显示器上所显示是被测样品的透射比参数。
如果你要获得被测样品的吸光度参数时（吸光度方式）：
2.按“方式键”（MODE）将测试方式设置为吸光度方式：
显示器显示“XXXnm X.XXXAbs”
3.按“波长设置”键（ρδ）设置您想要的分析波长，如340nm;
按波长设置键“ρ”或“δ”直到显示器显示340nm为止，此时显示器显示“340nm X.XXXAbs”
每当波长被重新设置后，请不要忘记调整零Abs。
4.将您的参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中：
比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米，大约25毫升。否则，会影响测试参数的精确度。
被测试的样品中不能有气泡和漂浮物，否则，会影响测试参数的精确度。
5.打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。
一般情况下，参比放在样品架的第一个槽中。
被测样品的测试波长在340nm-1000nm范围内时，建议使用玻璃比色皿，被测样品在190nm-340nm范围内时，建议使用石英比色皿。
仪器所附的比色皿，其透射率是经过测试和匹配的，未经匹配处理的，比色皿影响样品的测试精度。
比色皿的透光部分表面不能有指印、溶液痕迹。否则，将影响样品的测试精度。
6.将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整零ABS。
仪器在自动调整100%T的过程中，显示器显示“340nm Blank…”，当100.0%T调整完成后，显示器显示“340nm 0.000Abs”。
7.将被测溶液推或拉入光路中，此时，显示器上所显示是被测样品的吸光度参数。
如果你要获得被测样品的浓度值参数时（浓度直读方式）：
-已知标准样品浓度值：
2.按“方式键”（MODE）将测试方式设置为浓度直读方式：
显示器显示“XXXnm XXXXC”
3.按“波长设置”键（ρδ）设置您想要的分析波长，如340nm;
按波长设置键“ρ”或“δ”直到显示器显示340nm为止，此时显示器显示“340nm XXXXC”
每当波长被重新设置后，请不要忘记按“100%T”调整零Abs。
4.将您的参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中：
比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米，大约25毫升。否则，会影响测试参数的精确度。
被测试的样品中不能有气泡和漂浮物，否则，会影响测试参数的精确度。
5.打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。
一般情况下，参比放在样品架的第一个槽中。
被测样品的测试波长在340nm-1000nm范围内时，建议使用玻璃比色皿，被测样品在190nm-340nm范围内时，建议使用石英比色皿。
的测试精度。
比色皿的透光部分表面不能有指印、溶液痕迹。否则，将影响样品的测试精度。
6.将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整0ABS。
仪器在自动调整100%T的过程中，显示器显示“340nm Blank…”，当100.0%T调整完成后，显示器显示“340nm 0000C”。
7.将标准样品推入光路，按“功能键”直至显示器上显示“STD/CONC=1000”
8. 按参数设置键（“ρ”或“δ”），直到显示器上显示的参数与标准样品的浓度值相等，如标准样品浓度值为200；
此时显示器显示“340nm 0000C”“STD/CONC=200”
9.按确认健将设置的参数输入仪器；
此时显示器显示“340nm 0200C”
10.将被测溶液推或拉入光路中，此时，显示器上所显示是被测样品的浓度值。
-已知标准样品K因子：
2.按“方式键”（MODE）将测试方式设置为浓度直读方式：
显示器显示“XXXnm XXXXC”
3.按“波长设置”键（ρδ）设置您想要的分析波长，如340nm;
按波长设置键“ρ”或“δ”直到显示器显示340nm为止，此时显示器显示“340nm XXXXC”
每当波长被重新设置后，请不要忘记调整零Abs。
4.将您的参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中：
比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米，大约25毫升。否则，会影响测试参数的精确度。
被测试的样品中不能有气泡和漂浮物，否则，会影响测试参数的精确度。
5.打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。
一般情况下，参比放在样品架的第一个槽中。
被测样品的测试波长在340nm-1000nm范围内时，建议使用玻璃比色皿，被测样品在190nm-340nm范围内时，建议使用石英比色皿。
仪器所附的比色皿，其透射率是经过测试和匹配的，未经匹配处理的，比色皿影响样品的测试精度。
比色皿的透光部分表面不能有指印、溶液痕迹。否则，将影响样品的测试精度。
6.将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整0ABS。
仪器在自动调整100%T的过程中，显示器显示“340nm Blank…”，当100.0%T调整完成后，显示器显示“340nm 0000C”。
7.将标准样品推入光路，按“功能键”直至显示器上显示“STD/FACTOR=1000”
8. 按参数设置键（“ρ”或“δ”），直到显示器上显示的参数与已知K因子值相等，如标准样品K因子为200；
此时显示器显示“340nm 0000C”“STD/ FACTOR=200”
9.按确认健将设置的参数输入仪器；
10.将被测溶液推或拉入光路中，此时，显示器上所显示是被测样品的浓度值。
怎样连接您的计算机
1.打开电源开关，使仪器预热20分钟
仪器接通电源后，即进入自检状态，自检结束波长自动停留在546nm处，测量的方式自动设定在透射比方式（%T），并自动调100%T和0%T。
开机时，先确认仪器样品室内是否有东西挡在光路上。光路上有东西将影响仪器自检甚
至造成仪器故障。
2.打开您的计算机，并打开光谱应用软件；点击链接按钮，显示屏上出现链接对话框，
可根据您的计算机设置通讯口。
3.按功能键直至仪器显示：“CONNECT PC?”；
4.按“确认”键，同时点击屏幕上对话框中的“连接”键；
仪器与计算机连接时，仪器显示：PC CONNECTING
仪器与计算机连接成功时，仪器显示：PC CONNECTED
仪器与计算机联机操作时，仪器显示：PC CONN…
仪器与计算机连接失败时，仪器显示：CONNECT PC？（您可重试）
仪器显示器上显示“PC CONN…”且计算机屏幕上出现光谱应用软件的工作界面时。使用您的计算机操作仪器。
怎样用您的计算机操作您的仪器
光谱应用软件基于WIN95或WIN98平台是运行的操作软件，其基本功能（如调用、存储和打印文件等）的操作方式与其他应用软件的操作方式（如MS OFFICE）完全一样。而操作仪器也同样符合仪器本身操作习惯。因此无需培训，您便可轻松操作，且倍感方便。根据以下图示，参照仪器使用方法，您便可用计算机操作您的仪器。
第三章：日常维护
仪器长时间使用后，因器件老化等原因，性能和某些指标可能会产生一些变化，并可能会发生一些故障，请参考一下方法校验您的仪器。若仪器发生故障，请勿擅自打开仪器，并及时送当地维修站维修。
仪器的校验
利用镨钕滤光片吸收特征峰校验仪器的波长精度（以529nm为例）：
开机使仪器预热20分钟；
1.按“方式设定键”（MODE）将测试方发设置为透射比（%T）方式：
2.按“波长设定”键将波长设置在519nm;
一般情况下，在标准物质吸收峰的±10nm范围内由短波长向长波长方向每间隔1nm逐点测试。
3.打开样品室盖，将镨钕滤光片插入样品槽中；
一般的测试情况下，第一个样品槽放参比样品，第二个样品槽放置标准物质。
4.盖好样品室盖，将参比样品拉或推入光路中；
一般的测试情况下，以空气作为标准物质的参比样品。
5.按“100%T键”调100.0%T；
6. 将镨钕滤光片拉或推入光路中；
7.按“波长设定”键，由短波（519nm）向长波方向逐点测试，并观察或记录下每一点波长所对应的透射比值
8.将最小透射比值所对应的波长与529nm吸收峰进行比较；在仪器正常的情况下，最小吸收峰对应的波长应在仪器的波长精度范围内。
在手册的技术指标一节中可以了解仪器的各项技术规格。
如您的仪器波长发生了偏移时请及时与销售上联系或请专业人士进行修理。
非专业人士请勿自行打开仪器外壳。
常见故障的判断：
当仪器出现故障时，应首先切断主机电源，然后按下列步骤检查。
1.接通仪器电源，观察钨灯是否亮。
2.T、A、C键是否选择在相应的状态。
3.试样室是否盖紧。
4.样品槽位置是否正确。
5.样品器波长选择580nm时，打开式样盖，用白纸对准光路聚集位置，应见到一个较亮
长方形橙黄色光斑。
注意：光斑偏红或偏绿时，说明仪器波长已经偏移。
6.在仪器技术指标规定的波长范围内，是否能调“100%T”或“0A”。
7.比色皿选择拉杆手感是否灵活。
分光光度计测量误差来源分析
分光光度计测量误差来源分析 分光光度计是利用物质对光的选择性吸收进行物质的定性或定量分析的仪器，在各行各业得到了广泛应用，主要用于物质纯度检查、定量分析、物质结构鉴别等。可测量结果总会出现可接受或不可接受的误差，误差来源于测量过程的各个方面，我认为主要来源于仪器本身性能和测量条件的选择两个方面。 1仪器本身性能带来的误差 1.1复色光对比耳定律的偏离 比耳定律成立的前提条件是人射光是单色光，但是精度再高的仪器，即使是双单色器的分光光度计，也只能获得近乎单色的光，无法获得纯单色光，它仍然含有狭窄光通带，具有复色光的性质。而复色光会导致比耳定律的正或负偏离。固定狭缝的紫外分光光度计光谱带宽一般为1nm或2nm，可调狭缝的可以做到0.Inm;可见分光光度计带宽6nm、snm，甚至十几纳米。光谱带宽应该是越小越好，但是随着光谱分辨率的提高，仪器的灵敏度降低，所以选择仪器时要综合考虑各种条件的影响。当溶液浓度较小且单色光较纯时，可近似认为符合比耳定律。 1.2杂散光的影响 杂散光是指进人检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的其他波长组分，它是光谱测量中误差的主要来源。产生原因有:分光光度计的色散元件、反射镜、透镜及单色器内壁灰尘等。在分光光度计工作波段边缘波长处，由于单色器透光率、光源辐射强度、检测器灵敏度都较低，杂散光的影响更为显著。杂散光限制仪器的分析上限可引起严重的测量误差，实际工作中，在定量分析时，一般在吸收峰或其附近处测量样品吸光度，如果在分析波长处含有杂散光，这时样品的透光率较小，而杂散光大部分透过，使测量吸光度低于真实吸光度。 1.3仪器噪声对测t的影响 仪器噪声也是仪器的一个重要指标，它表征仪器做稀溶液的能力。是叠加在待测量的分析信号中的不需要的信号，扫描100%T和0%T线，可观察到分光光度计的绝对噪声水平，如果仪器噪声较大，会掩盖较小的测量信号，一般用噪音的二倍来表示仪器的灵敏度。 1.4波长和吸光度准确度 样品的每一个值都是在一定的波长下测得的，如果波长误差很大，测出的值肯定不准。吸光度准确度也是用户对仪器的直接要求，更应引起足够的重视。国家计量检定规程规定双光束紫外可见分光光度计透射比准确度为A级士0.6%,B级土1.0%。 2测量条件的选择
可见分光光度计操作规程
722N可见分光光度计操作规程 （IATF16949-2016/ISO9001-2015） 一、使用步骤 1、连接仪器电源线，确保仪器供电电源有良好的接地性能； 2、接通电源，使仪器预热20分钟。（不包括仪器自检时间）； 3、用
2、仪器使用完毕应盖好防尘罩。可在样品室及光源室内放置硅胶袋防潮，但开机时一定要取出； 3、长期不用仪器时，尤其要注意环境的温度、湿度，定期更换硅胶。 4、工作条件：环境温度：5~35℃；相对湿度：不大于85%RH； 三、期间核查 1、波长范围检查：主机正常开机并预热30分钟，模式为“透射比”档， 转动波长旋钮至波长范围两端按100%T健,应能正常调节100%T,开样品室盖时按0%T应能正常调节0%T。 2、透射比重复性检查：将主机波长设定至550nm，仪器调0%T，调100%T。 置入透射比为40%T左右并在附近平坦吸收的样品(例如:中性滤光片)连测三次检查显示值,其最大差值应在±0.3%T内。 3、定点噪声检查：设定波长在550nm，仪器调0%T，调100%T，设定标尺至“吸光度”，观察显示窗内数字跳动在0.002A范围内。 4、波长重复性检查：设置标尺为“透射比”，采用分光光度计通用的镨钕滤光片作样品。以空气为空白，仪器调0%T，调100%T，将样品置入光路，读出在520~540nm波长范围内与样品标准峰值相对应的波长值。重复三次,波长读数误差不应大于±1nm。 5、核查周期：半年一次 四、设备维护 1、为确保仪器稳定工作，电压波动较大的地方，建议用户配备220V稳压器； 2、仪器接地要良好； 3、干燥剂应保持其干燥性，发现变色立即更换或活化后再用；
分光光度计
第六章 吸光光度法 例6-1 铁(Ⅱ)-邻菲罗啉的摩尔吸光系数4 101.1?=ε，计算桑德尔灵敏度。 解 24 0050.010 1.185 .55-?=?= =cm g M S με 例6-2 一种含有+ 2Mn 、+ 3Cr 的未知试液，经氧化处理后得MnO ，CrO 试液，分别 在440nm ，545nm 测得吸光度为0.385，0.653，b=1cm ，求试液中+ 2Mn ，+ 3Cr 浓度。 (已知5092,201,23,786545440545440====Mn Mn Cr Cr εεεε) 解 =--=+++ Mn Cr Cr Mn Mn Cr Cr Mn Cr Cr Mn A A c 440 5454405454405455454402εεεεεε 141024.1201 237865092385 .023653.0786--??=?-??-?L mol =??-=-= -++786 1024.1201385.04440 4404403Cr Mn Mn Cr Mn Cr c A c εε 141058.4--??L mol 对于吸收曲线有重叠的混合物试样、混浊样品或其他北京吸收较大的试样，由于存在很强的散射和非特征吸收，难以找到一个合适的参比消除其影响。利用双波长技术可以从分析波长的信号中减去来自参比波长的信号，以消除散射以在测定波长时吸收的其它物质的干扰，从而提高选择性灵敏度，并简化了分析混合物的手续，扩大了光度分析的应用范围。双波长分光光度计测得值为两波长下吸光度差值定量测定依据为 bc A A A I I )(lg 12121 2 λλλλεε-=?=-=- 标准曲线c A -?曲线表示，试样溶液在两个波长1λ，2λ处的吸光度差值与试样溶液中待测物质浓度呈正比。用双波长测定时，作为参比的不是另外参比液而是试液本身对某一波长的吸光度，这样抵消了样品混浊与基本不一致的误差，提高了灵敏度及选择性。 例6-3 某有色溶液在2.00cm 吸收池中，测得百分透光率T=50%，若改用(1)1cm ，(2)3cm 厚的吸收池时，其T 和A 各为多少？ 解 先求有色溶液在2cm 吸收池中吸光度A ，由公式可得 30.0%50lg lg =-=-=T A 由吸光度与液层厚度成正比，可求得厚度为1cm 和3cm 时有色溶液的吸光度，又据公式可求各自的T ：
分光光度计说明
722可见分光光度计使用说明书 1．仪器的主要用途 722可见分光光度计能在近紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定量的的分析。仪器可广泛地应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一 2．仪器的工作环境 2．1仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃~35℃，相对湿度不超过85%。 2．2使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。 2．3 室内照明不宜太强，且避免直射日光的照射。 2．4 电扇不宜直接向仪器吹向，以免影响仪器的正常使用。 2．5 尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。 2．6供给仪器的电源电压为AC220V±22V，频率为50Hz±1Hz，并必须装有良好的接地线。推荐使用交流稳压电源，以加强仪器的抗干扰性能。使用功率为1000W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。 2．7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐 蚀气体的场所使用。 3 仪器的主要技术指标及规格 3．1 光学系统：单束光、衍射光栅。 3．2 波长范围：330nm~800nm。 3．3 光源：钨卤素灯12V30W。 3．4 接收元件：光电池。 3．5 波长准确度：≤±2nm。
3．6 波长重复性：1nm。 3．7 光谱带宽：＜6nm。 3．8 杂散光：0.7%τ（在360nm处）。 3．9 透射比测量范围：0.0%τ~100.0%τ。 3．10 吸光度测量范围：0.000A~1.999A。 3．11 浓度直读范围：0000~1999。 3．12 透射比准确度：±1.0%τ。 3．13 透射比重复性：0.5%τ。 3．14 噪声：≤0.3%τ。 3．15 稳定性：亮电流≤0.5%τ/3min， 暗电流≤0.2%τ/3min。 3．16 电源：AC220V±22V，50Hz±1Hz。 3．17 外型尺寸：570mm×400mm×260mm。 3．18 净杂散光测量范围：18 净重：22kg。 4．仪器的工作原理 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物 质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理--比耳定律。 τ=I/I0 logI0/I=KCL A=KCL
分光光度计测定铁的含量
邻二氮杂菲分光光度法的测定铁 摘要：本文主要研究了用分光光度计测定溶液中铁的含量的分析方法。采用7220型分光光度计，选用邻二氮杂菲做显色剂，以工作曲线法测定溶液中铁的含量，且讨论测定铁的最佳条件。本法简单，可靠，灵敏，易掌握，分析成本低，其准确度、精密度均复合测定要求，结果令人满意。 This paper studies the solution by spectrophotometer analysis of iron content. By 7220 spectrophotometer, used to do phenanthroline reagent to the working curve method for the determination of iron content in solution, and discuss the best conditions for determination of iron. The method is simple, reliable, sensitive and easy to grasp, analyze, low cost, its accuracy, precision measurement requirements are complex, with satisfactory results. 基荧光酮——乳化剂分光光法测定铁的含量，在乳化剂（OP）存在在条件下，基于Fe（Ⅲ）与苯基荧光酮的显色反应，建立了分光光度法测定铁的新方法。测定出的表观摩尔吸光系数为ε=2.6*10-5ml*mol-1*cm-1,铁的含量在0.035~4.0ug/25ml范围内复合比尔定律，线性回归方程为A=0.268C(ug/25ml)+0.0373，r=0.9991,干扰离子较少。结论:以用于网管水铁的含量铁的测定结果令人满意。本实验用邻二氮杂菲分光光度法测定铁，不仅灵敏度高、稳定性好，而且选择性高。相当于铁量40倍的Sn(Ⅱ)、Al(Ⅲ)、Ca(Ⅱ)、Mg(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)、Si(Ⅳ)，20倍的Cr(Ⅵ)、V(Ⅴ)、P(Ⅴ)，5倍的Co(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)、Cu(Ⅱ)不干扰测定。分光光度测定物质含量时，通常要经过取样、显色、测量等步骤。为了使测定有较高的灵敏度和准确度，必须选择适宜的显色的反应条件和测量吸光度的条件。通常所研究的显色反应条件有溶液的酸度、显色剂用量、显色时间、温度、溶剂以及共存离子干扰及其消除方法等。测量吸光度的条件主要是测量波长、吸光度范围和参比溶液的选择 关键词：7220型分光光度计；邻二氮杂菲；简单；可靠；灵敏；准确度；精密度； Keywords：7220 Spectrophotometer；Phenanthroline; Simple; reliable; sensitive; accuracy; precision; 1 实验试剂和仪器 1.1、试剂：20ug/mL的铁标准溶液、100ug/mL盐酸羟胺溶液（因其不稳定，需临用时配制）、1g/L邻二氮杂菲溶液、1mol/LNaOAc溶液、2mol/L HCl溶液、 0.4mol/LNaOH溶液 1.2、7220型分光光度计、精密pH试纸、25mL容量瓶8只、100mL容量瓶1只、50mL碱 式滴定管1支、1mL吸量管1支2mL1支5mL4支
721可见分光光度计使用方法
721可见分光光度计使用方法 一、开机预热 仪器在使用前应预热30分钟。 二、波长调整 转动波长旋钮，并观察波长显示窗，调整至需要的测试波长。 注意事项：转动测试波长调100%T/0A后，以稳定5分钟后进行测试为好(符合行业标准及质监局检定规程要求)。 三、设置测试模式 按动“功能键”，便可切换测试模式。相应的测试模式循环如下：*开机默认的测试方式为吸光度方式 四、结果打印(721型无此功能) 在得到测试结果后按动“打印”键便可打印结果(需外接标准串行打印机)。 五、光源切换(适用于752、754、755B型) 因为仪器在紫外区和可见区使用不同的光源，所以需要波动光源切换杆来手动的切换光源。建议的光源切换波长为340nm，即200nm-339nm适应氘灯，340nm-1000nm使用卤素灯。 注意事项：如果光源选择不正确，或光源切换杆不到位，将直接影响仪器的稳定性。特殊测试要求除外。 六、比色皿配对性 仪器所附的比色皿是经过配对测试的，未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。适应比色皿一套两只，供紫外光谱区使用，置入样品架时，两只石英比色皿上标记Q或箭头方向要一致。玻璃比色皿一套四只，供可见光谱区使用。 石英比色皿和玻璃比色皿不能混用，更不能和其他不经配对的比色皿混用。用手拿比色皿应握比色皿的磨砂表面，不应该接触比色皿的头光面，即透光面上不能有手印或溶液痕迹，待测溶液中不能有气泡、悬浮物，否则也将影响样品的测试精度。比色皿在使用完毕后应立即清洗干净。 七、调T零(0%T) 1.在T模式时，将遮光体置入样品架(如图七所示)，合上样品室盖，并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按动“调0%T”键，显示器上显示“00.0”或“-00.0”，便完成调T零，完成调T零后，取出遮光体。 注意事项：1.测试模式应在透射比(T)模式； 2.如果未置入遮光体合上样品室盖，并使其进入光路便无法完成调T零；
752紫外可见分光光度计使用方法解析
752紫外可见分光光度计 一、仪器的工作原理 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理—一比耳定律。 τ=I/Io log I/Io=KCL A= KCL 从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时．透过的光是根据溶液的浓度而变化的，752紫外可见分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。 二、仪器的安装、使用、安装 1 仪器在安装使用前应对仪器的安全性进行检查，电源电压是否正常，接地线是否牢固可靠，在得到确认后方和接通电源使用。 2 仪器经过运输和搬运等原因，会影响波长准确度，应进行仪器调校后使用。 使用：仪器使用前需开机预热30min。 本仪器键盘共有4个键，分别为； 1 A /τ/C/F 1SD 2 ▽／0％ 3?／100％ 4 A /τ/C/F键：每按此键来切换A、τ 、C、F之间的值。 A——吸光度（Absorbance） T——透射比（Trans） C——浓度（conc） F——斜率（Factor） (2)F值通过按键输入（后面介绍如何设置） 5SD键：该键具有2个功能 a)用于RS232串行口和计算机传输数据（单向传输数据，仪器发向计算机）。 b)当处于F状态时，具有确认的功能，即确认当前的F值，并自动转到C，计算当前的C 值（C=F*A）。 6 ▽／0％键：该键具有2个功能 a）调零；只有在τ状态时有效，打开样品室盖，按键后应显示0.000。 b）下降键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动减1，如果按住本键不放，目动减1会加快速度；如果F值为0后，再按键它会自动变为1999。而按键开始自动减1。 7 ?／100％键；该键具有2个功能 a）只有在A、τ状态时有效，关闭样品室盖，按键后应显示0.000、100.0。 b）上升键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动加1，如果按住本键不放，自动加1会加快速度，如果F值为1999后，再按键它会自动变为0，再往键开始自动加l。 例如：设置斜率为1500。 方法一 T）按A／τ／C／F键切换到F状态。 b）如果当前F值为1000，则按?／100%键，直到F值为1500。 C）再按SD键，表示当前的F值为1500，然后自动回到C状态，假如所测的A值为0．234，则此时显示C值为0351。
紫外分光光度计的使用方法
UV2600型紫外分光光度计操作规程 一、开机 1.打开仪器电源。 2.打开电脑，点击UV Analyst 进入光谱分析软件。 3.软件将自动搜索仪器端口，点击“联机”，软件与仪器联机成功。 二、选择测试模式 根据实验需求选择测试模式。仪器提供的测试模式有“波长扫描”“时间扫描”“定点测量”“定量测量”“核酸测量”和“蛋白质测量” 【波长扫描】主要用以检测样品对一定范围波长光的吸收情况，以便对样品进行定性测量。 1.点击左侧主功能栏中的“波长扫描”即可进入波长扫描界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以扣除空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 注意：在“基线测量”中所选择的基线必须与参数设置中基线一致！ 【时间扫描】是检测样品在特定波长范围内吸光度（或透过率）随时间的推移而发生变化情况。主要用以检测样品的稳定性或进行化学动力学研究。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以后扣除样品空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 【定点测量】是检测样品在特定波长中的吸光度（或透过率）。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求，在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“自动校零”，以扣除该波长中空白溶液的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“测量”，以完成样品的吸光度（或透过率）的测量。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存测量结果。 【定量测量】可通过检测标准样品或输入特定的系数建立标准曲线后测量样品的浓度值。
722N分光光度计使用方法
722N可见分光光度计使用说明书 目次 1仪器的主要用途--------------------------------------------------1 2仪器的工作环境--------------------------------------------------1 3仪器的主要技术指标及规格----------------------------------------1 4仪器的工作原理--------------------------------------------------2 5仪器的光学原理--------------------------------------------------2 6仪器的安装、使用与维护------------------------------------------3 7 仪器的调校和故障分析--------------------------------------------5 8 仪器的成套性----------------------------------------------------6 9 仪器的保管及免费修理期限----------------------------------------7 制造计量器具许可证编号： 产品执行标准的编号：Q/YXLZ50-2004
1仪器的主要用途 722N可见分光光度计能在近紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定 量的分析。该仪器可广泛地应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一。 2仪器的工作环境 仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃～35℃，相对湿度不超过 85%。 使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。 室内照明不宜太强，且避免直射日光的照射。 电扇不宜直接向仪器吹风，以免影响仪器的正常使用。 尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。 供给仪器的电源电压为AC220V22V，频率为50Hz1Hz，并必须装有良好的接地线。 推荐使用交流稳压电源，以加强仪器的抗干扰性能。使用功率为1000W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。 2.7避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使用。 3仪器的主要技术指标及规格 仪器类别：2类 光学系统：单光束、衍射光栅。 波长范围：330nm～800nm。 光源：钨卤素灯12V30W。 接收元件：光电池。 波长准确度：2nm。 波长重复性：≤1nm。 光谱带宽： 5nm。 杂光：≤%（在360nm处）。 透射比测量范围：%～%。 吸光度测量范围：～。 浓度直读范围：0000～1999。 透射比准确度：%。 透射比重复性：≤%。 噪声：100%噪声≤%，0%噪声≤%。 稳定性：亮电流≤%/3min， 暗电流≤%/3min。 电源：AC220V22V， 50Hz1Hz。
分光光度计常见的用途
分光光度计常见的用途 核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。 事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。 除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。 蛋白质的直接定量（UV法） 这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg 公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320nm 的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，最佳的线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%，表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg 公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。 比色法蛋白质定量 蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介操作步骤 操作之前 1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。但是，如果检测到任何异常，初始化过程将立即中止，星标也不会加亮显示。 1.2屏幕显示和触摸键盘UV-1700的触摸键盘图可用数字键0~9和功能键F1~F4选择不同屏幕中的模式和设置。选择时，按下相应的数字键或功能键即可，无需按ENTER键确认。此外，输入数值时，如 波长设置或显示模式等，必须按ENTER键确认输入值。 下面介绍每个键的基本功能，在不同屏幕下有一些键可能被赋予特殊的功能。 ①START/STOP键一旦参数设置完成，可用该键开始和停止测量过程。 ②AUTO ZERO键按该键，当前波长的吸光度自动调整为0（100%T）。测量前，必须确保在样品侧和参比侧中都放有盛有空白的比色池。 ③GOTOWL键该键可用来改变当前的波长。 ④ENTER键输入数值后，按该键确认。 ⑤Cursor光标键（＜（-），＞）这组键可控制液晶显示屏幕中光标的左右移动。输入数值时，左光标键还可以用来输入负值（-）。 ⑥Function功能键（F1~F4）这组键的功能与液晶显示屏幕下方所显示的功能相对应。 ⑦RETURN键按下该键可返回当前屏幕的前一屏。 ⑧MODE键用该键可从每种测量模式的参数设置屏返回到主模式屏。 ⑨Print打印键用该键可输出当前屏幕显示的硬拷贝。 ⑩Numeric数字键用该键可输入数值？CE键用该键可清除数值输入错误。按该键，已输入的数值将被清除，可重新输入正确的数值。模式选择和共享操作初始化完成后即显示模式选择屏幕
分光光度计测铜
异戊醇作萃取剂分光光度法测定微量元素铜 实验目的 1、了解并掌握分光光度计的性能、结构及其使用方法 2、掌握分光光度计测定微量元素铜的方法 实验原理 在ph为 6---8的溶液中,二价铜与铜试剂反应生成棕黄色络合物： 用异戊醇萃取这种络合物，其颜色的深浅与铜含量成正比例系。实验试剂和仪器
4.6 铜标准贮备溶液（1.000mg/mL）：称取1.0000g金属铜，溶于15mL硝酸溶液（1+1）中，用纯水定容至1000mL。此溶液1.00mL含有1.00mg铜。 4.7 铜标准使用溶液（10.0μg/mL）：吸取10.00mL铜标准贮备液，用水定容至1000mL，摇匀。此溶液1.00mL含10.0μg铜。 实验方法 1、样品溶液的制备 不同种类样品按不同的方法处理，下面以饲料预混料为例： 称取样品2g准至(0.0002g)置于100ml烧杯中,加入少许水使之润湿,加入10ml盐酸(1+1)使样品溶解，全部转入250ml溶量瓶,以水稀释至刻度,摇匀,用时取干过滤后清液。 2、工作曲线绘制 准确移取相当于0.00、5.00、10.0、15.0、20.0,25.0mg铜标准溶液分别置50ml比色管中,各加入10ml 10%H2SO4,5ml柠檬酸铵 ---EDTA溶液,1~~2滴中性红指示剂,摇匀,滴加1+1氨水,至溶液颜色由红色变黄色,各加入2ml铜试剂,混匀,准确加入10ml异戊醇,振荡2min,静置分层后,用滴管吸取异戊醇层溶液置于1cm比色皿中,于440nm波长下,以试剂空白为参比,分别测定其吸光值,并绘制工作曲线 2、测定 准确吸取约含铜10~~20的样品试液于50ml比色管,以下操作按绘制工作曲线进行)测其吸光值,通过线性回归方程求出相应铜含量. 实验数据处理 1、结果与讨论
分光光度计基本原理
分光光度计基本原理 分光光度计主要用于反射和透射测量。 分三种光源：S偏振光、P偏振光和自然光。 现有设备7台（2台日立U4100、1台JACSO-V650、1台JACSO-V570、2台KT1100、1台瞬间7700）主要由是由分光光度计和电脑组成，由电脑程序驱动。 1 基本部件 1.1 光源： 用于提供足够强度和稳定的连续光谱。分光光度计中常用的光源有热辐射光源和气体放电光源两类。 热辐射光源用于可见光区，如钨丝灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。钨灯和碘钨灯可使用的范围在340 -- 2500 nm。氢灯和氘灯。它们可在180 -- 375 nm范围内产生连续光源。 紫外—可见分光光度计通常都配有可见和紫外两种光源。 1.2 单色器：是从连续光谱中获得所需单色光的装置。 （1）入射狭缝 （2）准直镜（透镜或凹面反射镜），它使入射光束变为平行光束。 （3）色散元件，棱镜或光栅，它使不同波长的入射光色散开来。 （4）聚焦透镜或聚焦凹面反射镜聚焦，它使不同波长的光聚焦在焦面的不同位置。 （5）出射狭缝。 1.3积分球:它主要用途是测定光源发出的总光通量。它的制造：首先在球内壁上涂一层腻子，作为底层；然后喷点白漆，作为中间层；最后喷一层白涂料（硫酸钡或氧化镁）作为表层。 1.4 检测器：检测器的作用是检测光信号。常用的检测器有光电管和光电倍增管。 1.5电脑，就是微处理机。一方面可对分光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理。 2、先用3台光度计的特点 U4100的 V650能测位相
3、日常测量 3.1改参数 1.光源要求（S.P.自然光） 2、扫描速度 3、狭缝 3.2基本的步骤 3.3设备测量种类 U4100测量：合色棱镜（成品、PL、2P）等 V650:单层，小DVD,带位相的零件，AR的反射测量等 4.测量的原理，影响准确性的因素 4.1单光路分光光度计V650 4.2双光路分光光度计 U4100 它的优点：光电传感器就可以交替探测到经过样品的探测光束的强度与参考光束的光强度，然后将两束光强信号进行相除，就可以得到样品的透过率。它可以降低光源稳定性对光谱测试精度的影响。 测量的原则：入射光轴重合，出射光轴重合，难在后着。 商用的光谱仪都有很好的性能，但是如果操作测试不当，就会获得错误的光谱测试结果。主要影响准确性的因素： 透射因素： 1、测量样品口径的影响 在测量中应保证仪器的测量光束全部穿过样品。 1）、在样品室的测量光路和参考光路中同时添加小孔光阑。 2）、只在样品池添加小孔光阑。
分光光度计操作规程
1、目的 本规程用于指导操作者正确操作和使用设备。 2、范围 本规程适用于指导本公司752 分光光度计操作规程的安全操作 3、操作规程 3.1操作准备 3.1.1开机预热 仪器在使用前应预热30分钟。 3.1.2波长调整 转动波长旋钮，并观察波长显示窗，调整至需要的测试波长 注意事项:转动测试波长调100%T/OA 后，以稳定5分钟后进行测试为好 3.1.3设置测试模式 按动“功能键”，便可切换测试模式。相应的测试模式循环如下： *开机默认的测试方式为吸光度方式 3.1.4结果打印 在得到测试结果后按动“打印”键便可打印结果（需外接标准串行打印机） 3.1.5光源切换 因为仪器在紫外区和可见区使用不同的光源，所以需要拨动光源切换杆来手动的切换光源。 建议的光源切换波长为340nm,即200nm-339nm 使用氚灯，340nm-1000nm 使用卤钨灯 注意事项：如果光源选择不正确， 或光源切换杆不到位，将直接影响仪器的稳定性。特殊测试要求除外。 1.1.6比色皿配对性 仪器所附的比色皿是经过配对测试的（其配对误差不大于0.5%T ）,未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。石英比色皿，供紫外色谱和可见光谱区使用，玻璃比色皿，供可见光谱使用。比色皿是有方向性的，置人样品架时，两只石英比色皿上标记Q 或箭头、四只玻璃比色皿上标记G 方向要一致。 注：玻璃比色皿使用的波长范围（320nm —1100nm ），石英比色皿使用的波长范围
（200-1000nm） 1.1.7调T零（0%T） 在T 模式时，将遮光体质人样品架，合上样品室盖，并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按动“调0%T”键，显示器上显示“000.0”或“-000.0”，便完成调T零，完成调T零后，取出遮光体。 注意事项：1、测试模式应在T模式 2、如果未置入遮光体合上样品室盖，并使其进入光路便无法完成调T零 3、调T零时不要打开样品室盖、推拉样品架 4、调T零后（未取出遮光体）如切换至吸光度测试模式，显示器上显示为“3.000” 5、如直接在吸光度（A）模式调T零，则在置入遮光体后不管显示器上是否显 示：3.000，均需按动“调0%T”键。 1.1.8调100%T/OA 将参比（空白）样品置入样品架，并推拉样品架拉杆使其进入光路，然后按动“调100%T”键，此时屏幕显示“BL”,延时数秒便显示“100.0”（在T模式时）或-0.000、0.000（在A 模式时），即自动完成调100%T/OA 1.1.9吸光度测试 1.按动“功能键”，切换至透射比测试模式 2.调整测试波长 3.置入遮光体，合上样品室盖，并使其进入光路，按动“调0%T”键调T零，此时仪器显示“000.0”或“-000.0”。完成调T零后，取出遮光体 4.按动“功能键”切换至吸光度测试模式 5.置入参比（空白）样品，按动“100%T”键，此时仪器显示BL 延时数秒后便便显示“-0,000”或0.000 6.置入待测样品，读数测试数据 1.1.10透射比测试 1.按动“功能键”，切换至透射比测试模式 2.调整测试波长 3.置入遮光体，合上样品室盖，并使其进入光路，按动“o%T”键调T零，此时仪器显示“000.0”或“-000.0”。完成调T零后，取出遮光体。 4.置入参比（空白）样品，按动“100%T”键，此时仪器显示“BL”延时数秒后便显示“-0。000”或“0.000” 5.置入待测样品，读取测试数据。 1.1.11浓度方式测试 1、按动“功能键”，切换到透射比测试模式 2、调整测试波长 3、置入遮光体，合上样品室盖，并使其进入光路，按动“调0%T”键调T零，此时仪 器显示“000.0”或“-000.0”。完成调T零后，取出遮光体。 4、置入参比（空白）样品，按动“调100.0%T”键，此时仪器显示“BL”延时读秒后 便显示“100.0” 5、置入标准浓度样品并使其进入光路 6、按动“功能键”切换到浓度测试模式 7、按动参数设置键(“↑”或“↓”）设置标准样品浓度，并按动“确认”键 8、置入待测样品，读取测试数据
分光光度计的原理
(一)基本原理 分光光度法是利用物质对某种波长的光具有选择性吸收的特性建立起来的鉴别物质或测定其含量的一项技术。当一束单色光通过溶液时，一部分被吸收，一部分则透过溶液。设入射光强度为Io。，透射光强度为It，，则透光度T=It ／Io，吸光度(A)或光密度(O．D)或称消光度(E)则可表示为A=-lgT。根据Lambert—Beer定律，吸光度与溶液的浓度成正比，与光束通过溶液的距离(即 光程)成正比，用数学表达式表示为： A=KLC 式中C代表该物质的浓度，L代表光程，一般以cm表示，K为摩尔消光系数，即当溶液浓度为lmol／l，光程为1cm时所测得的一定波长下的吸光度。 由于单色光透过溶液时，不仅被待测物质所吸收，而且还被比色容器与溶剂以及其它试剂吸收一部分，这部分需用空白管消除(空白液的做法即用与样本相 同的一切试剂，而不含被测定的物质) (二)波长的选择： 波长的选择一般是选择待测物质最大吸收峰的波长(λmax)。因在λmax测定吸光度，敏感度最高。在吸收峰波长处测吸光度，波长变化影响最小；而在其他波长处，波长变化对吸光度影响大，甚至测得浓度一吸光度曲线不呈直线。 选择测定某一溶液所需的波长，是可以用不同的波长作该溶液的吸收光谱曲线，从曲线上选择最适当的波长来进行这一溶液的测定工作，但是，在分析工作中，尚有个别情况，不能单凭此一原则，而应根据下列三个原则，进行实际试 测，然后全面考虑利弊，再行选定。 1．应使被测溶液有适当的光密度，一般而言，适当的光密度为0.1—0.7，而以0.2—0.6最理想。过低的光密度因仪器的读数误差而产生很大的相对误差，反之，过高的光密度则往往已超过直线范围而引入误差。 2．应使干扰影响降低至最低限度。在反应中，如遇不易去除的干扰色泽， 应选用对此干扰色泽最不灵敏的波长。 3．应使标准曲线在尽可能大的范围内接近直线。 (三)标准曲线的绘制 1．标准曲线的作用 (1)标准曲线又叫做校正曲线或工作曲线，它是比色分析法中不可缺少的步骤。从浓度——光密度直线的直线特性，可以判断所采用方法的呈色反应是 否符合Lamben—Beer氏定律。 (2)作多次平行测定绘制标准曲线，可判断在整个测定过程中操作，仪 器等误差的大小，从而确定该测定方法的可靠性。 (3)从绘制标准曲线的斜率可以比较各种方法的灵敏度。 (4)当进行大批样品分析时，可省略多次计算，从光密度值直接查阅标 准曲线而求得被测物质的浓度。
分光光度计复习资料题
分光光度计复习题 一、判断题 1. 在一定的光强照射下，光电流与射入的光量近似成正比。( √) 2. 在分光光度计中，用光电管代替硒光电池可以提高测量的准确度。( ×) 3. 单光束紫外-可见分光光度计是根据物质的分子对紫外、可见区辐射(光)产生的吸收光谱和Lambert-Beer定律测量物质的性质和含量的分析仪器。( √) 4. 单光束紫外-可见分光光度计的检定周期一般为半年。( ×) 5. 单光束紫外-可见分光光度计的仪器类别分为A类和B类。（×） 6. 检定紫外-可见分光光度计所使用的光谱中性滤光片的标称值为10%、20%、30%(或40%)。（√） 7. 仪器无需预热就能检定。（×） 8. 单光束紫外-可见分光光度计检定规程规定，仪器透射比重复性应不大于相应投射比准确度绝对值的2倍。（×） 9. 适用于可见光区的光源，常用的有钨灯和普通灯。( ×) 10．杂散光的存在，会使测量结果吸光度值增加，透射比值减小。( ×) 11. 分光光度计最重要的计量指标是波长的准确度和投射比正确度。（√） 12. 表征干涉滤光片特性的参数是峰值波长和半宽度。（√） 13. 检定可见分光光度计时，要求温度在10℃以上，相对湿度不大于80%。( ×) 14. 检定可见分光光度计时，电源电压：(220±22)V，频率：(50±1)Hz。( √) 15. 检定可见分光光度计时，可不进行外观检查。（×） 16. 可见分光光度计处于正常工作状态时，当波长置于580nm处时，在样品室内应能看到绿色光斑。（×） 17. 样品室应密封良好，无漏光现象。（√） 18. 吸收池的透光面是否光洁，有无划痕和斑点都不影响检定。（×）
分光光度计的性能检查
分光光度计的性能检查 （1）波长校正：使用光电比色计或分光光度计，在更换光源灯、重新安装、搬运或检修后，以及仪器工作不正常时，都要进行波长校正。就是正常工作的仪器，每隔一个月也要检查一次波长，必要时进行校正，这样才能保证波长读数与通过样品的波长符合，保证仪器的最大灵敏度。方法常用谱钕滤光片校正法，适用于721型仪可见光区的波长校正，常以585nm 或529nm处的吸收峰或T%为标准。鉴于721型仪器的出射光波长较宽，不易将573nm和585nm 的两峰或两谷分开，校正时易产生误差，故推荐用529nm处的峰或谷为标准来进行波长校正。校正时，将仪器按要求预热。要求电源电压稳定。波长度盘置580nm处，T%调至最大，在比色杯处放一白纸条，观察是否有光强均匀、边缘无光晕或杂光的光斑，如不符合要求，可调节灯泡位置使其符合要求，是为波长校正的粗调。再把灵敏度扭置于“1”（最低档），波长度盘对准529nm，电表机械零点为零，在光路空白时调T%为100%T，并反复查零点和100%T 稳定情况。将谱钕滤光片插入光路，慢慢旋转波长度盘，找到透光率最低的一点（向左右微旋波长度盘时，该点透光率值均增加），这一点即为波长529nm。检查波长度盘的指示值是不是529nm，如指示值为534nm，此时波长工误差为5nm，超出规定（±1nm）必须进行调整。 调整方法：将波长度盘对准529nm，从光路取出谱钕滤光片，光路空白时调电表指针到100%T，再将谱钕滤光片插入光路。打开仪器左侧小盖板，找到波长校正螺丝（3个中左侧柄长的一个）；反时针方向微微调节（负误差时顺时针方向），使电表指针的指示T%为最低。反复检查波长误差情况，直到符合仪器技术指标为止。盖好左侧小盖板，校正结束。 有些高档仪器如岛津UV-260型双光束分光光度计，可使用氢灯或置谱钕滤光片于测定比色槽内，编入滤工扫描程序后，仪器即可自动地在一定波长范围内进行波长校正。高档分光光度仪的光学系统密封在一个单元组件内，若发生故障，波长不准，常须请制造商派专人修理。其它尚有谱线校正法、干涉滤光片校正法和有色溶液校正法等，可参考有关资料。 （2）线性检查：线性检查包括仪器线性及测定方法线性两个方面的检查。线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现象。这种偏离，按比耳定