萝芙木的薄层色谱鉴别
表5 4味药群提取工艺正交设计及实验结果方差分析表
方差来源s f v F显著性A30 98215 498 21
B2 8421 040 55
C193 72296 8651 35P<0 05误差3 7721 89
F0 05(2,2)=19到5味药所含有效成分以水溶性成分为主,本次实验直接探讨以水为溶剂的最佳煎煮方法。
该方主药为苦参,故以苦参总生物碱为测定指标是合理的。但有文献记载 4 ,生物碱可与鞣质的水溶液生成难溶或不溶的沉淀。据此,我们对苦参和忠伦
5汤进行预试验,考察生物碱溶出率,结果5味药一起煎煮时总生物碱溶出率只有理论值的52%,认为这与诃子所含大量鞣质有关。故对苦参和其它4味药进行了分别提取和测定,结果较满意。
参考文献
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出版社,2000:附录63
4 肖崇厚 中药化学 上海:上海科
技出版社,1997:573
(收稿日期:2001年3月29日)
萝芙木的薄层色谱鉴别
广西民族医药研究所(530001)戴 斌 丘翠嫦 陈少锋
摘 要 目的:对萝芙木(Ra uvol f ia verticillata)质量标准进行修订研究。方法:采用新拟薄层色谱法对广西产萝芙木不同产地、不同采集期、不同药用部位(根、茎及枝叶)及总碱 降压灵 等7件样品的薄层色谱进行考察。结果:广西产萝芙木不同药用部位的薄层色谱有4个以上明显的色谱斑点,而不受产地、采期的影响,均未检出与对照品利血平色谱相同斑点;该方法简便、灵敏、重视性好。为萝芙木标准修订提供了科学依据。
关键词 萝芙木 降压灵 薄层色谱法
萝芙木为夹竹桃科植物萝芙木Rauvol f ia verticillata(Loru.) Baill的根及茎。 1 其药用价值在我国历代本草中虽未见记载,但在广西壮、瑶等民族民间中很早就有应用萝芙木属植物治疗高血压、头痛、斑痧、肝炎等疾病的经验,称 假棵焦 (象州)、 腊夺 (那坡)、 萝芙亮 (金秀)等。 2,3 自从1949年印度人Vakil运用蛇根木(R.serpenina)治疗高血压症获得成功之后,引起了各国的重视,我国学者于50年代发现其同属植物萝芙木及云南萝芙木的总生物碱亦具有同样的降压作用, 5~7 广西医药研究所制药厂自60年代始研制成 降压灵 ,用于临床,随后
载入 广西药品标准 1,8 ,鉴
别项列有以利血平为对照品的薄
层色谱法。但近年来在实际执行
中存在如下问题:一是连年大量
采挖,药源日渐减少,药用部位
由单一根扩大到全株使用;二是
广西产萝芙木及 降压灵 按
标准 方法检识不出利血平对
照品相应荧光斑点。为此,我们
对萝芙木的薄层色谱鉴别方法进
行改进研究,对萝芙木不同产
地、不同采集期的根、茎和枝叶
以及不同品种萝芙木(7种)的
薄层色谱鉴别进行了对比试验,
为萝芙木质量标准的修订提供了
依据,现将实验结果报道如下。
1 实验材料来源及编号
A.萝芙木:下列4件标本
样品经鉴定均为Rauvol f ia verticil
lata:A-11990年5月采于广西
靖西(90360),为萝芙木茎枝叶
(A la)及根(A 1b)。A 2
1999年6月采于靖西(99025
2981),为萝芙木枝叶(A 2a)。
A 31999年7月采于广西药植
园(99061 3002),为萝芙木小
枝叶(A 3a)。A 41999年7
月采于乐业,为萝芙木的全株
(99074 3005)、茎枝叶(A
4a)及根(A 4b)。
B 降压灵 原料药材:
1999年7月由广西医药研究所
药厂提供。为萝芙木(广西产、
品种不明)的全株(缺叶) (Bab)。
C 降压灵:1999年7月由广西医药研究所药厂提供,为灰棕色粉末(C)。
D 云南萝芙木:广西中医药研究所提供,1965年4月采于靖西(23512),经鉴定为R. yunnanensis Tsiang(Dab)。
2 薄层色谱条件的选择与确定2 1 供试品溶液制备方法的选择:据研究报道,萝芙木降血压的有效部位为总生物碱,其中有效成分之一为利血平(reser pine)。为了寻找能检出利血平对照品相对应色谱斑点,采用了混合溶剂(乙醚 氯仿 乙醇 水=6 16 5 1)浸渍法 1 ,酸性乙醇渗漉法 9 、碱性氯仿回流法及碱性氯仿超声振荡提取法等4种方法制备供试液,通过薄层层析(T1P1C1~C2系统)考察,结果均能检出萝芙木中4个以上生物碱色谱斑点(Rf约0 2,0 4, 0 55,0 75),其中以碱性氯仿超声提取法较为简便、快速且无须加热。但均未检出有利血平对照品相应的黄绿色荧光斑点或显色斑点(Rf约0 85)。
2 2 薄层板的选择:对以0 5% NaOH 0 5%C MC Na为粘合剂制备的硅胶G薄层板(T1)及以0 5%C MC Na为粘合剂制备的硅胶G薄层板(T2)的层析效果进行了考察,结果以T1为好,色谱斑点无拖尾现象。
2 3 展开剂的选择:考察比较了下列4种展开剂在碱性板(T1)上的层析效果:P1 氯仿 丙酮(6 4);P2 甲苯 乙酸乙酯 甲醇 水(2 4 2 1,上层);P3 氯仿 丙酮 甲醇(6 4 0 5);P4 氯仿 丙酮 乙酸乙酯(5 5 2)。结果P3、P4的色谱斑点Rf值过大,对照品利
血平色谱斑点推至前缘;P1、P2
的层析效果较好,主要显色斑点
Rf值适中,斑点圆而清晰,无
拖尾现象。以P1的配制简便,
斑点分离较好。
2 4 显色剂的选择:考察了用
荧光灯(365nm,C1)、稀碘化铋
钾 碘碘化钾(1 1)试液(C2)
及稀碘化铋钾试液(C3)显色,
检识色谱斑点的效果。结果表
明:C1只能检出对照品利血平
有明显的黄绿色荧光斑点(R t
约0 85~0 90),萝芙木对照药
材及其样品无明显相应荧光斑
点,显色剂C3的色谱斑点(浅
橙黄色或黄色)不太清晰且较快
消失,不如显色剂C2的色谱斑
点(棕黄色至棕褐色)明显且较
稳定。
2 5 薄层色谱测定方法的拟定
取本品粉末2g,加10%氨
水1ml拌湿,放置约30分钟,
加入氯仿15ml,超声振荡提取2
次,每次20分钟,滤过,合并
滤液,蒸干,用10%醋酸5ml溶
解残渣,滤过,滤液加氨水调
pH至9,加入氯仿提取2次,每
次5ml,合并氯仿提取液,蒸
干,加入氯仿溶解残渣使成
1ml,作为供试品溶液;另取对
照药材萝芙木根2g,依上法制
成对照药材溶液。照薄层色谱法
(中国药典1995年版一部附录
VIB)试验,吸取供试品溶液10
~20 l与对照药材溶液10 l,分
别点于同一用0 5%氢氧化钠和
0 5%羧甲基纤维素钠作粘合剂
制备的硅胶G薄层板上,以氯
仿 丙酮(6 4)为展开剂,上
行展开,取出晾干,喷以稀碘化
铋钾 碘碘化钾(1 1)试液,
供试品色谱中,在与对照药材色
谱相应的位置上,显相同的4个
以上黄棕色斑点。
3 样品测定
萝芙木不同产地、不同药用
部位及不同贮存期的薄层色谱鉴
别比较:按上述拟定的薄层色谱
方法比较了下列7个萝芙木供试
液、对照药材溶液及对照品溶液
(利血平)的薄层色谱。
供试品溶液(1)萝芙木根
(A 1b):靖西产1990年5月;
(2)萝芙木茎枝叶(A 1a);
(3)萝芙木小枝叶(A 2a);
(4)萝芙木小枝叶(A 3a);
(5)萝芙木茎枝叶(A 4a);
(6)萝芙木根及茎枝(Bab);
(7)降压灵(C):称取0 1g,
加10%醋酸5ml溶解 ,以下
按上述拟定方法制备供试品溶液
(相当于含药材约2 5g/ml)。
对照药材溶液(S1):萝芙木
根(A 4b);乐业产1999年7月。
对照品溶液(S2):利血平
氯仿溶液(0 1mg/ml)。
薄层层析结果如图1。结果
表明:萝芙木根(A 1b)及其
茎枝叶(A 1a,A 2a,A
3a,A 4a)薄层色谱均有与对
照药材(S1)色谱相同的4个明
显的黄棕色斑点(Rf约a 0 18,
b 0 40,
c 0 50,
d 0 70)。降
压灵( )及其原料(Bab)的
色谱图亦与对照药材(S1)的
色谱图基本一致,说明生产降
压灵所用原料为广西产萝芙木。
均未检出有对照品利血平色谱
相同的黄绿色荧光斑点及显色
斑点(Rt约0 85~0 90)。
4 讨论
通过对广西产萝芙木的薄层色
谱鉴别研究所拟定的方法,对不同
产地、不同药用部位及其制剂 降
压灵 均可检出与对照药材色谱相
同的4个明显斑点(图1),该方法
简便、灵敏、重现性较好。
图1 萝芙木薄层色谱图
供试液:1 萝芙木根(A 1b) 2 萝芙木枝叶(A 1a) 3 萝芙木枝叶(A 2a) 4 萝芙木枝叶(A 3a) 5 萝芙木枝叶(A 4a) 6 萝芙木根茎(B) 7 降压灵(C、萝芙木总碱) 8 云南萝芙木(D)
对照液:S1萝芙木根(A 4b) S2利血平
斑点色泽:O棕黄色 黄绿色荧光(365mm灯)
展开条件:室温31 5 湿度64%
广西中药材标准 (第二册,1996年),收载 萝芙木 项下,有萝芙木和云南萝芙木两个品种。试验表明,两者的薄层色谱图明显不同,前者未检出有利血平对照品相应的色谱斑点,后者虽可观察到相应的微弱荧光斑点,但生物碱显色斑点不明显。因此在目前尚无适合的化学对照品的情况下,应以对照药材为对照,分别收载两个品种较为实际。
萝芙木的降血压作用缓和而持久,且无明显的毒副作用。 9 由于连年大量采挖其根,野生资源日渐减少,生态环境受到严重破坏。研究证实,萝芙木茎枝叶均含有与根相同的主要生物碱(图1)。叶的粗制剂及总生物碱亦有明显的降压药效作用及临床疗效。 6,9,10 因此采割地上部分,
提取 降压灵 ,对萝芙木的资
源再生和持续利用以及对石山地
区的生态环境保护有重要意义。
据文献报道,萝芙木根及茎
枝含有利血平(reserpne)、蛇根碱
(serpentine)等多种生物碱。而广
西产萝芙木及 降压灵 的薄层
色谱尚未检出有利血平色谱相同
的斑点,是否与萝芙木的产地生
境有关,有待于进一步考察研究。
致谢:广西中医药研究所中
药室及广西医药研究所制药厂提
供部分实验样品,一并致谢。
参考文献
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