病毒保存液和细胞保存液的区别
病毒保存液和细胞保存液的区别
一、病毒保存液
病毒保存液适用于新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒等常见病毒样本采集保存运输工作，是采样管内浸末采样拭子病毒样本一种保护病毒的被检测物质的液体，可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本,储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。通常分为两种，一种是非灭活型，能够保护病毒的蛋白和核酸，另一种是灭活型，通常含有灭活病毒的裂解盐，裂解蛋白而保护核酸。
1、灭活型：添加有裂解盐的病毒保存液就是灭活型的病毒保存液，里面含有的Tris、裂解盐、EDTA等主要目的是裂解核酸而释放出核酸，从而通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测，以此判断样本是否含有病毒特征核酸，即是否感染病毒。
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类，是生命的最基本物质之一。病毒结构单一，就只含有一种核酸和蛋白质，因此检测出特征核酸就检测除了病毒。病毒属于寄生生物，采样后体外无法存活，如果不能及时检测，就需要放入病毒保存液中。为了保护病毒检测环境的安全性，就需要加入裂解盐来灭活病毒，释放出可以被检测的核酸即可。
2、非灭活型：除了灭活型的病毒保存液，此外还有非灭活型病毒保存液，不含裂解盐，但是保存的病毒完整性更好，检出率更高，除了核酸检测外还可以用于其他研究。灭活型病毒保存液则使用上更安全，操作环境要求也不用那么严格，各有各的优势，目前研究的非灭活病毒保存液的成分主要为Hank's液基础，在Hank's液基础之上，还添加了诸如庆大霉素、真菌抗生素、BSA（牛血清白蛋白第五组分）、生物缓冲剂HEPES、氨基酸、冷冻保护剂、甘油等多种组分：
3、病毒样本采集方法：
a .鼻拭子：将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法釆集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一含3成釆样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。
b.咽拭子：用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml病毒保存液（也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液）的管中，尾部弃去，旋紧管盖。
c.鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采样液冲洗收集器1次（亦可用小儿导尿管接在50ml注射器上来替代收集器）。
二、细胞保存液：
通常所说的细胞保存液是一种通用型的细胞冻存液，可用于冻存人和各种动物细胞株；细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中，及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败，如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而前功尽弃。
细胞保存液优点：目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，
从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤；非程序降温，-80℃低温冰箱冻存长达5年，可以确保冻存细胞安全；可孔板（细胞培养板）冻存，可用于杂交瘤细胞的冻存液.细胞保存液具有稀释作用，能分离出大量包埋在粘液中的有效细胞，使更多有检验价值的细胞被保存下来，提供充足的细胞数量，为检验结果的准确提供保证；同时，处理后的样品经低速离心过滤后能彻底清除样本中的粘液，有效防止粘液对样品检验结果的干扰。细胞保存液经过低速离心后可制成均匀单层的细胞薄片，达到检验要求。
病毒感染细胞实验整体流程及原理
病毒感染细胞实验整体 流程及原理 Standardization of sany group #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#
病毒感染细胞实验整体流程及原理 目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。 1、病毒的种类 病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒 慢病毒 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。 1）直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合 RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 2）可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。 3）可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。 4）无需任何转染试剂，操作简便。 5）可以根据客户需要制备多种标记。 1）含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。 2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3）培养 48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4）病毒的纯化和浓缩。 5）分装、- 80 ℃保存。 6）滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。 、腺病毒 原理
如何看验血单来分辨细菌感染还是病毒感染
如何看验血单来分辨细菌感染还是病毒感染？ 首先，看白细胞(WBC)的数量，如果白细胞的数量大于10000，就提示孩子有细菌感染，需要使用抗菌素。白细胞的数值越高，说明细菌的毒力越强或者细菌的数量越多。 但有时候白细胞特别高，不见得就一定是细菌感染，白细胞内还有淋巴细胞和中性粒细胞。如果孩子患有传染性单核细胞增多症，他体内的淋巴细胞就特别高，所以白细胞总数也特别高，可能达到20000，甚至30000，实际上这里面大部分是淋巴细胞，而不是中性粒细胞。 其次，看化验单中的CRP。CRP就是C反应蛋白，很多大医院都开展微量血CRP 的检查。这是一个初筛的检查，可以判断孩子是不是细菌感染。白细胞也可以判断孩子是不是细菌感染，但CRP更敏感一些，它比白细胞出现的时间更早。同时CRP还是疾病全身反应的指标，如果数值高出正常值数倍，往往提示病人身体的多个脏器受到损伤。另外，CRP还和一些严重疾病有关系，比如传染性单核细胞增多症、川崎病、风湿热等。 第三，看中性粒细胞的百分率，数值越高，说明疾病还在发展，有可能进一步加重。中性粒细胞主要是针对细菌的，当孩子的身体受到细菌感染的时候，中性粒细胞就会增加，来杀死细菌。如果中性粒细胞百分率降低，淋巴细胞百分率相应地就要升高，说明孩子可能是病毒感染。我家孩子第二次验血就是中粒细胞偏高。 第四，要看中性粒细胞的绝对值，如果它低常值，说明有病毒感染。中性粒细胞的绝对值越低，说明病毒感染的程度越严重。如果高于正常值，说明是细菌感染。有些孩子，他们体内的白细胞总数不太高，但是中性粒细胞绝对值很高，这预示着孩子的发热会越来越厉害。之前我家孩子也病毒发烧过，都不记得当时的报告情况了。 第五，看血小板(PLT)，血小板的数值越高，说明孩子感染的次数越多。这次孩子的血小板是正常的，姑父说很多反复感染的孩子，血小板数值都是400万、500万。 第六，看嗜酸性粒细胞(EOS)绝对值和嗜碱性粒细胞(BASO)绝对值，它们是判断孩子是否过敏的指标之一。 第七，看淋巴细胞绝对值和淋巴细胞百分率。淋巴细胞是干什么的呢?淋巴细胞主要通过分泌抗体来对抗病毒的。如果这两个值高出正常值，就说明孩子可能是病毒感染。据说病毒感染不用抗生素，一般7-10天自然会好，但是当妈的一般很难抗一星期的吧，楼主还是建议去看医生，当然要去正规医院。 第八，看单核细胞百分比和单核细胞绝对值。单核细胞是吞噬细胞，吞噬细胞对病毒和细菌都有作用，不管是病毒感染、细菌感染还是支原体感染，吞噬细胞就
2020年整理)慢病毒稳转细胞株步骤
作者：空青山 作品编号：89964445889663Gd53022257782215002 时间：2020.12.13 稳转慢病毒 一、所需试剂 1、慢病毒载体（详细信息见附录及《质粒的扩增提取》）（大肠杆菌-80℃保存2-3年，质粒-20℃保存2-3年，病毒液-80℃保存1年） （1）载体质粒：两端的LTR、剪切位点、包装信号Ψ以及抗性或荧光基因、gag基因5′端350bp的序列及位于env序列中的RRE，含宿主RNA聚合酶识别部分 （2）包装质粒（psPAX2）：包含了pol、gag包装成分 （3）包膜质粒（pMD2.G）：用其他病毒的包膜蛋白代替了env基因. 三种质粒共同转染产生不具有自我复制能力的病毒载体。 2、包装细胞：293T细胞 3、菌株：大肠杆菌，用于提取质粒 4、转染试剂：XTREME-GENE（-20℃保存，不可分装），一种脂质与其他组份构成的混合物 5、浓缩试剂（配好后4℃保存，原材料室温保存）：5X PEG8000/NaCl溶液（聚乙二醇）：NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中，高压蒸汽灭菌 **也可直接从公司买来病毒液（-80℃封口膜封口冻存管保存，4℃保存3天）：滴度一般为108TU/ml 6、10mg/ml polybrene（-20℃分装保存）：溴化己二甲铵。是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene 能提高感染效率2～10 倍。有一定细胞毒性，需要摸索浓度（1～10μg/ml） 7、无血清培养基：optimen 8、贴壁细胞（复苏后3代以上的细胞） 9、puromycin：嘌呤霉素，用于筛选稳转细胞 二、具体步骤 <一>病毒包装与收集（中皿，转染步骤类似于瞬转） 第一天 1、种板，10×105个293T细胞，加入全培养基双抗DMEM 4-5ml，过夜 2、配制5X PEG8000/NaCl溶液 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃ 第二天
[VIP专享]病毒感染细胞实验整体流程及原理
病毒感染细胞实验整体流程及原理 目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。 1、病毒的种类 病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒 1.1慢病毒 1.1.1原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。 1.1.2特点 1）直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞(比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 2）可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。 3）可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。 4）无需任何转染试剂，操作简便。 5）可以根据客户需要制备多种标记。 1.1.3慢病毒包装简要流程： 1）含有目的基因的慢病毒RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。 2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3）培养48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4）病毒的纯化和浓缩。 5）分装、- 80 ℃保存。 6）滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。 1.2、腺病毒
1.2.1原理 腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。 1.2.2特点 1）几乎可以感染所有类型的细胞 2）可以获得复制缺陷型(E1 和E3 缺失) 的腺病毒 3）病毒滴度高，产生病毒经过浓缩后可以达到1012 PFU/mL，能有效的进行增殖。 4）腺病毒载体感染宿主的范围比较广，制备容易，操作简单. 5）感染细胞时，不整合到染色体中，不存在激活致癌基因或插入突变等危险，生物安全性高。 1.2.3腺病毒包装简要流程 1）构建表达siRNA/miRNA 的腺病毒载体 2）采用PacI 消化纯化的质粒。 3）消化好的腺病毒表达载体转染293A 细胞，收获细胞以制备病毒粗提液。 4）将病毒粗提液感染293A 细胞以扩增病毒。 5）分装，-80℃保存。 1.3、慢病毒和腺病毒的比较 慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统慢病毒表达系统（Lentivirus）腺病毒表达系统（Adenovirus）病毒基因组RNA病毒双链DNA病毒复制自主复制自主复制 是否整合病毒基因组整合于宿主基因组，长时 间、稳定表达外源基因病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬 时表达外源基因 感染细胞类型感染分裂和不分裂细胞，适用于难转 染的原代细胞（如神经细胞）及体内 实验 感染分裂和不分裂细胞表达风度中水平表达高水平表达
转染步骤及经验(精华)
转染步骤及经验（精华） 一、基础理论 转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分类：物理介导方法：电穿孔法、显微注射和基因枪；化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法：有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节（见后文）。 二、转染操作流程（以常用的6孔板为例） (1) 细胞培养： 取6孔培养板，以3x104/cm2密度铺板，37℃5%CO2培养箱中培养至70%～90%汇合。(不同细胞略有不同，根据实验室优化的条件进行，汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备： 在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量) A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL， B液：用不含血清培养基稀释对应量的转染试剂，终量100μL； 轻轻混合A、B液（1:1混匀），室温中置15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。 (3) 转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入2mL不含血清及PS的培养液。 (4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中（缓慢滴加），轻轻摇匀，37℃温箱置6～8小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。 三、转染注意事项 1. 血清 A. DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。 B．一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。 C. 对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一种营养丰富的无血清培养基OPTI-MEMⅠ培养基， 或者在转染培养基中使用血清。对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。 2.抗生素（PS） 抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血
如何看验血单来分辨细菌感染还是病毒感染
如何看验血单来分辨细 菌感染还是病毒感染 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT
如何看验血单来分辨细菌感染还是病毒感染 首先，看白细胞(WBC)的数量，如果白细胞的数量大于10000，就提示孩子有细菌感染，需要使用抗菌素。白细胞的数值越高，说明细菌的毒力越强或者细菌的数量越多。 但有时候白细胞特别高，不见得就一定是细菌感染，白细胞内还有淋巴细胞和中性粒细胞。如果孩子患有传染性单核细胞增多症，他体内的淋巴细胞就特别高，所以白细胞总数也特别高，可能达到20000，甚至30000，实际上这里面大部分是淋巴细胞，而不是中性粒细胞。 其次，看化验单中的CRP。CRP就是C反应蛋白，很多大医院都开展微量血CRP 的检查。这是一个初筛的检查，可以判断孩子是不是细菌感染。白细胞也可以判断孩子是不是细菌感染，但CRP更敏感一些，它比白细胞出现的时间更早。同时CRP还是疾病全身反应的指标，如果数值高出正常值数倍，往往提示病人身体的多个脏器受到损伤。另外，CRP还和一些严重疾病有关系，比如传染性单核细胞增多症、川崎病、风湿热等。 第三，看中性粒细胞的百分率，数值越高，说明疾病还在发展，有可能进一步加重。中性粒细胞主要是针对细菌的，当孩子的身体受到细菌感染的时候，中性粒细胞就会增加，来杀死细菌。如果中性粒细胞百分率降低，淋巴细胞百分率相应地就要升高，说明孩子可能是病毒感染。我家孩子第二次验血就是中粒细胞偏高。 第四，要看中性粒细胞的绝对值，如果它低常值，说明有病毒感染。中性粒细胞的绝对值越低，说明病毒感染的程度越严重。如果高于正常值，说明是细菌感染。有些孩子，他们体内的白细胞总数不太高，但是中性粒细胞绝对值很高，这预示着孩子的发热会越来越厉害。之前我家孩子也病毒发烧过，都不记得当时的报告情况了。 第五，看血小板(PLT)，血小板的数值越高，说明孩子感染的次数越多。这次孩子的血小板是正常的，姑父说很多反复感染的孩子，血小板数值都是400万、500万。 第六，看嗜酸性粒细胞(EOS)绝对值和嗜碱性粒细胞(BASO)绝对值，它们是判断孩子是否过敏的指标之一。 第七，看淋巴细胞绝对值和淋巴细胞百分率。淋巴细胞是干什么的呢淋巴细胞主要通过分泌抗体来对抗病毒的。如果这两个值高出正常值，就说明孩子可能是病毒感染。据说病毒感染不用抗生素，一般7-10天自然会好，但是当妈的一般很难抗一星期的吧，楼主还是建议去看医生，当然要去正规医院。
关于慢病毒感染的相关知识总结..
慢病毒使用操作手册 一、慢病毒的储存与稀释: 1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口） ①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度 ②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。 2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。 二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验： 感染培养原代细胞和建系细胞。慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。 慢病毒感染目的细胞预实验 1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项： ①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。 ②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。 ③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。 2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。 第一天，准备细胞：在24孔培养板接种若干孔，每个孔内接种3~5X104个目的细胞，铺板时细胞的融合率为50%左右，每孔培养基体积为100 μl；进行病毒感染时细胞的融合度约为70%左右。 第二天，准备病毒：取出4℃保存的病毒，使用台式离心机离心20 秒（使病毒完全悬于离心管底部即可）；如果是冻存在-80℃的病毒需要先在冰上融化后使用。亦可以根据实验室的实际情况将按照MOI准确计算好的慢病毒稀释到培养基中，并尽可能保证所获得的含
细胞转染的详细过程
细胞转染的详细过程 1、准备工作如下： 1)从pFastBacTM construct中纯化重组的bacmind DNA(500ng/μl溶于TE中) 从相应的pFastBacTM construct对照中纯化bacmind DNA(500ng/μl溶于TE中)。 细胞培养在适合的培养基中。 细胞转染剂Cellfectin（4℃储存）无任何添加物（例如：FBS，抗生素等）的细胞培养基。用于细胞培养的完全生长培养基（例如：Sf-900ⅡSFM TNMFH 或其他适合的培养基）。2)在6孔板或是35毫米dish上，每孔培养9*105Sf9细胞，细胞培养于2ml含抗生素的生长培养基中。 3)细胞在27℃孵育至少一小时。 4)对于每一个转染的样品，准备bacmid DNA：与细胞转染剂在12*75mm消毒管中进行如下混合： 用100μl无血清培养基稀释1μl纯化的bacmid DNA。 用100μl无血清培养基稀释6μl 细胞转染剂。 将bacmind DNA与细胞转染剂进行混合，动作要轻柔，混合物在室温下孵育45分钟。 5)当DNA与脂质体进行孵育时，移去细胞原有的培养基并用2ml无血清培养基洗一次，移去用来清洗的无血清培养基。 6)在每一个含有DNA与脂质体混合物的管子中加入0.8ml无血清培养基，轻柔混合，分别把DNA与脂质体混合物加入含有细胞的孔中。 7)细胞在27℃孵育5小时。 8)从细胞中移去DNA与脂质体混合物加入2ml完全生长培养基。 9)将细胞在27℃进行孵育，实验人员必须每日观察，记录转染细胞的生长状态，细胞在转染后48小时长势应该比较良好，但72小时后直至可以看到明显的病毒感染的细胞病变。 2、第一代代病毒的收集与保存 1)当转染的细胞呈现出感染后期的形态时，收集每孔含有病毒的上清，转移到灭菌的15ml 压盖管中。 2)以500*g离心5分钟，从而移去上清中所含有的细胞及大的碎片。 3)将离心后的上清移到新的15ml压盖管中，用来保存第一代病毒，存放于4℃避光保存。 3、病毒的保存 1)病毒存放于4℃避光保存。 2)如果用的是无血清培养基，则加入终浓度为2%的FBS 。血清蛋白可以作为蛋白酶的底物。 3)长期保存时将一部分病毒储存在-80℃用于病毒的重新扩增。 4)病毒的常规储存不要低于4 ℃.病毒经过反复冻融会使其滴度下降10 到100倍。 4、杆状病毒的扩增 1)准备sf9细胞，2*106/孔，在室温孵育1小时。 2)在孵育1小时以后，用倒置显微镜观察昆虫细胞的贴壁情况。 3)在每孔中加入适量的P1代病毒。 4)在27℃进行孵育48小时。 5)在感染后48小时，收集每孔含有病毒的上清，转移到灭菌的15ml压盖管中。以1000*g 离心5分钟，从而移去上清中所含有的细胞及大的碎片。 5、病毒空斑分析 1)准备工作如下： 澄清的杆状病毒保存于4℃ 培养在适当培养基中的sf9细胞（30ml 5*105/ml对数生长期的细胞用于每一个滴度的杆状
白细胞计数及分类的临床意义分析
白细胞计数及分类的临床意义分析白细胞是一类有核的血细胞。白细胞不是一个均一的细胞群，根据其形态、 功能和来源部位可以分为三大类：粒细胞、单核细胞和淋巴细胞。白细胞与红细胞和血小板一样都起源于骨髓中的造血干细胞，在细胞发育过程中又都是经历定向祖细胞、前体细胞，而后成为具有各种细胞功能的成熟白细胞。 1 白细胞计数 1.1 检验标本的正确采集严格使用EDTA-K2抗凝静脉血，抽血后立即轻轻颠倒混匀，防止血小板黏附和聚集，摇晃切勿用力，防止产生气泡及造成溶血；取样后2小时内及时送检进行测定，室温贮存不得超过6小时。 1.2 临床意义白细胞总数具有明显的生理波动性，一日之间最高值与最低值之间可以相差1倍。如下午较上午偏高；用餐后较用餐前偏高；剧烈运动、情绪激动时较安静状态下偏高；月经前期、妊娠、分娩、哺乳期亦可增高；新生儿及婴儿明显高于成人。 正常成年人白细胞总数是(4.0～10.0)×109／L，每日不同的时间和机体不同的功能状态下，白细胞在血液中的数目是有较大范围变化的。当每升超过10．0×109个白细胞时，称为白细胞增多。而每升少于4.0×109个白细胞时，称为白细胞减少。机体有炎症时常出现白细胞增多。 有急性感染，组织损伤、坏死、恶性肿瘤、白血病，尤其是慢性白血病、急性失血、急性中毒、类白血病反应等，白细数计数病理性增多。某些感染，如革兰阴性杆菌感染、病毒感染、寄生虫感染等；某些血液病，如再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症、白细胞不增多型白血病等；自身免疫性疾病；理化损伤及药物反应；肝硬化、脾功能亢进等，出现病理性减少。抗癫痫类药物、某些抗生素、麻醉药、激素类药物可引起一过性白细胞增多。磺胺类药物、解热镇痛药、抗肿瘤药物等，会使白细胞降低。 2 白细胞分类计数、，。 参考值：中性杆状核粒细胞1％～5％，(0.04～0.50)×109／L；中性分叶核粒细胞50％～70％，(2.00～7.00)×109/L;嗜酸性粒细胞0．5％～5％，(0.02～ 0.50)×109／L;嗜碱性粒细胞0％～1％，(0～0.10)×109／L；淋巴细胞20％～40％，(0.80～4.00)×109／L；单核细胞3％～8％，(0.12～0.70)×109／L 2.2 临床意义 2.2.1粒细胞中性粒细胞有趋化作用和调节作用、变形性和粘附作用、吞噬作用和杀菌作用。由于中性粒细胞占白细胞总数的50％～70％，其增高和减低直接影响白细胞总数的变化。在临床的具体应用中单纯的白细胞总数检测意义不大，其数量变化必须参考白细胞分类的变化值。 中性粒细胞病理性增多急性化脓性感染时，中性粒细胞增高程度取决于感染微生物的种类、感染灶的范围、感染的严重程度、患者的反应能力。如感染很局限且轻微，白细胞总数仍可正常，但分类检查时可见分叶核百分率有所增高；中度感染时，白细胞总数增高大于10×109／L，并伴有轻度核象左移；严重感染时总数常明显增高，可达20×109／L以上，且伴有明显核象左移；在脾破裂
整理)慢病毒稳转细胞株步骤
稳转慢病毒 一、所需试剂 1、慢病毒载体(详细信息见附录及《质粒得扩增提取》）（大肠杆菌-８0℃保存2-3年,质粒-２0℃保存2—3年,病毒液—80℃保存１年) (１)载体质粒:两端得LＴR、剪切位点、包装信号Ψ以及抗性或荧光基因、gag基因5′端350bp 得序列及位于env序列中得RRＥ,含宿主RNＡ聚合酶识别部分 （2）包装质粒（psPAX2）:包含了pｏl、gａｇ包装成分 （３）包膜质粒（pＭD2、G):用其她病毒得包膜蛋白代替了ｅnv基因、 三种质粒共同转染产生不具有自我复制能力得病毒载体。 2、包装细胞：293T细胞 3、菌株：大肠杆菌，用于提取质粒 4、转染试剂：XTＲEME—ＧENＥ(－20℃保存，不可分装），一种脂质与其她组份构成得混合物 5、浓缩试剂（配好后4℃保存，原材料室温保存)：5ＸPＥG800０／NaＣｌ溶液(聚乙二醇)：NaCl ８、766 g; PEG８00050ｇ溶解在2０0mｌMilｌi-Q纯水中,高压蒸汽灭菌 ＊＊也可直接从公司买来病毒液（—80℃封口膜封口冻存管保存,4℃保存３天）:滴度一般为10８TU/ml 6、10ｍｇ/ml polyｂreｎｅ（-20℃分装保存）:溴化己二甲铵。就是带正电得小分子，与细胞表面得阴离子结合,提高慢病毒对细胞得感染效率,通常加入pｏｌybrｅnｅ能提高感染效率２～1０倍。有一定细胞毒性，需要摸索浓度(1～１0μｇ/ｍl） 7、无血清培养基:ｏｐtｉmｅn 8、贴壁细胞(复苏后3代以上得细胞) ９、puromｙcin:嘌呤霉素，用于筛选稳转细胞 二、具体步骤 ＜一〉病毒包装与收集（中皿，转染步骤类似于瞬转) 第一天 １、种板,10×1０５个293Ｔ细胞，加入全培养基双抗ＤMＥM４—5ml，过夜 2、配制5ＸPＥG８0０0/NaCl溶液 称取NaCｌ8、766 g； PEG800０ 50g溶解在200ml Miｌli-Ｑ纯水中;1２1摄氏度３０miｎ湿热灭绝 30min；保存在4℃ 第二天 １、配管
病毒感染血常规检查
病毒感染血常规检查 病毒感染的主要表现有发热、头痛、全身不适等全身中毒症状，在人体免疫力下降的时候特别容易造成病毒感染，病毒感染又会对身体造成一系列的症状反应，血常规是最一般，最基本的血液检，血常规检验的是血液的细胞部分。病毒感染与血常规有什么关联呢？今天我们一起跟随科学的脚步了解病毒感染血常规： 取血检查白细胞及其细胞分类是确定感染原因的最为准确 最为快速的方法。急性高热主要由感染所致，但在发热的24小时内进行血液检查不易判断感染的性质。有时，孩子刚发热几小时就查血，并不易察觉白细胞的增高。白细胞增高是人体对细菌侵犯的一种反应。那么，既然是“反应”自然需要一定时间才能被察觉。这种“察觉”多指白细胞超过10×109／L（白细胞的正常值为4～10×109／L）。由于每个人白细胞的正常基线不同，只有当白细胞超过10×109／L才能达到共识的“察觉”水平。每个人的白细胞达到此水平的时间不同，所以感染后（一般指发热后）至少24小时检查白细胞对确定病毒或细菌感染才有帮助。
当然，仅凭借一个白细胞数目不够准确，在检查白细胞数目时还要进行白细胞的分类。白细胞可分为中性细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞等。其中，细菌感染时中性细胞多增高，超过70%；病毒感染时淋巴细胞多增高，超过50%。如果在白细胞增高的同时存在中性细胞的增高，比较符合细菌感染，应选用抗生素治疗；在白细胞“正常”或稍降低水平的同时存在淋巴细胞增高，比较符合病毒感染。 血液白细胞和分类检查只能初步分析细菌或病毒感染，但不能确定是何种细菌或病毒。对于较为严重的感染则需进行感染局部的分泌物培养、血液抗原或抗体的检测以及培养等。一旦怀疑细菌感染，医生多选用广谱抗生素；而对于病毒感染，特别是呼吸道感染，则多选用针对流涕、咳嗽等症状的药物或清热解毒等中药。
实用指导(二)：慢病毒感染贴壁细胞实验步骤
实用指导（二）：慢病毒感染贴壁细胞实验步骤 和元生物|2016-03-1513:51 慢病毒慢病毒（Lentivirus）是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体，基因组为RNA，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒基因组进入细胞后，在细胞浆中反转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定，并随细胞基因组的分裂而分裂。 以24孔为例： 第一天：准备细胞将状态良好的目的细胞接种到24孔板中，细胞计数后，进行铺板，每孔加入500ul培养基。保证第二天感染病毒时融合效率达到30-40%。通常，24孔板内以 5-8*10^4cells/孔的密度铺板。 第二天：病毒感染，换液1计算病毒加药量 选择合适MOI值，进行病毒感染。 加药量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒原液滴度）×10^3=病毒加药量（μl）。 2弃去部分培养基 将每组中加入的病毒及感染增强剂的体积去掉，保证加入病毒和感染增强剂后，每孔中仍保持500ul的液体量。 3加入慢病毒加药量计算方法
（细胞数×MOI值/病毒原液滴度）×10^3=病毒加药量（μl），培养基的总量必须充分覆盖住细胞。 4添加感染增强剂polybrene,保证终浓度为5ug/ml Polybrene是一种聚阳离子，可以中和电荷以促进假病毒外壳与细胞膜的作用。Polybrene 最佳浓度因不同细胞株而异并应根据经验而定（通常范围为2-10μg/ml）。过长时间暴露于Polybrene（>12小时）可对某些细胞产生毒性作用。 5病毒感染8~12小时后，观察细胞状态。 如细胞状态差，尽快换新鲜培养基；如细胞状态良好，可以在24小时内换液，但不宜超过24小时。弃去培养基后每孔加入500μl新鲜的完全培养基。5%CO2培养箱培养。 第五天：观察荧光表达情况病毒感染细胞72h后，在荧光显微镜下观察细胞，估计慢病毒感染目的细胞的效率。若荧光弱，可到96h后观察。如果96h仍无荧光，即感染实验失败。
细胞转染的操作步骤
细胞转染的操作步骤 转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。红外碳硫仪理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。 >需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑。 一、细胞传代 1. 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。 2. 弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。 3. 用Tip头加入1ml Trypsin液，消化1分钟。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。 4. 加入1ml的含血清培养基终止反应。 5. 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。 6. 将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。 7. 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。8. 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。 9. 将培养皿转入培养箱中培养，第二天转染。 二、细胞转染 1. 转染试剂的准备 ①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。 ②震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。 2. 选择合适的混合比例（1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。 3. 将混合液在室温放置10―15分钟。 4. 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。 5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。 6. 到时后，红外碳硫仪根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。三、第二次细胞传代1. 在转染后24小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。 2. 再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度0.8X10 个细胞/35mm培养皿将细胞重新转入培养皿中。 3. 在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。
白细胞数偏高就一定是细菌感染吗
白细胞数偏高就一定是细菌感染吗血常规，俗称“血象”，是临床上最常见的一项血液检查。 血常规中的许多指标都是病理改变常用的敏感指标，通常白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板最具诊断参考价值。其中临床常以白细胞数来大致判断感染是病毒性还是细菌性的。 白细胞：人体防御的卫士 白细胞是人体重要的防御细胞，对人体具有保护和防御功能。白细胞的正常参考值（）×10^9个/L。 白细胞根据形态可以分为中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。 中性粒细胞：在白细胞中所占百分率最高，达到（50%－70%），它能够吞噬和杀死细菌，防止细菌和有害物质侵入机体，是影响白细胞总数的关键。 淋巴细胞：与免疫有关，它是机体保护自己不受病原体侵袭的主要细胞，主要是通过体液免疫和细胞免疫来发挥作用的。 单核细胞：具有很强的吞噬功能，能够从血液中清除死亡和不健康的细胞、废物和碎片以及杀死入侵的细菌。 白细胞数量和功能异常多见于白细胞疾病。 病理性增多：常见于急性感染、中毒或严重组织损伤、白血病等。 病理性减少：常见于细菌或病毒感染、血液系统疾病（如低增生性白血病）以及免疫系统疾病等。 如果存在细菌感染的话，最明显的表现是白细胞的变化。细菌性感染第一看白细胞增高，跟感染程度有关系，感染程度越重，增高越大。如果是非常严重的感染，有可能白系跑还要降低，一般
上线是一万，孩子发烧、感冒血象一万二，一万五，高度怀疑孩子是不是呼吸道感染，可能需要抗生素了。 但有时候白细胞特别高，不见得就一定是细菌感染，白细胞内还有淋巴细胞和中性粒细胞。如果孩子患有传染性单核细胞增多症，他体内的淋巴细胞就特别高，所以白细胞总数也特别高，可能达到20000，甚至30000，实际上这里面大部分是淋巴细胞，而不是中性粒细胞。 常见支原体感染，不会让白细胞异常增高。看孩子感染性疾病，一定要把白细胞总数和分类联合在一起看，如果白细胞总数增高，分类里面以中性粒细胞为主，中性粒细胞增高的话，孩子是很有可能是一个细菌感染。一般在病毒感染的话，中性粒细胞不会增加的，除了白细胞不高以外，可能以淋巴细胞分类为主。 “血液白细胞总数与年龄呈反比。新生儿白细胞会高过20；6个月内婴儿白细胞可达15；2-3岁<12再正常不过了。所以，不要因为仅是白细胞偏高就认为是细菌感染，使用抗生素。细菌感染必然有感染灶，再有除了白细胞增高，中性粒细胞百分比至少应该超过80%，甚至更高；C反应蛋白也应高于30。” “与一位朋友谈及孩子生病。因咳嗽、流涕，到医院先要求查血。血常规示白细胞13，就果断选用抗生素。当问及是否考虑过不用抗生素时，家长疑惑地说“白细胞增高了，难道不应用抗生素吗”其实，普通细菌感染也未必用抗生素，只有严重细菌感染（白细胞超过至少15），才需考虑使用抗生素。” ——着名儿科专家崔玉涛 当然了也不需要谈抗生素色变，该用的时候必须用，但是不该用的时候还是尽量不要用了。
如何区别细菌感染和病毒感染
如何区别细菌感染和病毒感染，应该是大家最感兴趣的，经过几次折腾验血查询自己找资料，终于基本可以确定，列出以下几点，对大家也许有帮助： 1）细菌：热退后精神依然不好 病毒：发烧但精神依旧好。 2）细菌：体温忽上忽下 病毒：体温居高不下，即使吃了退烧药，依然会反弹很高。 3）细菌：扁桃体上有脓点 病毒：扁桃体上有疱疹、滤泡 两者喉咙都可能会红，细菌是表明不平暗色，病毒为表明光滑色鲜 4）病毒感染常伴皮疹 以上只是作为一个参考，宝宝有个体差异，并且表症的东西有时候个人判断也有误 重要的是下面的验血指标 5）验血 病毒感染初期：白细胞可轻度升高，但中性粒细胞比多不高，淋巴细胞比高 细菌：一般二者均高，另外还有几种情况： A、白细胞升高，中性粒细胞比不高 B、白细胞正常/稍低，中性粒细胞比升高（多为阴性菌） C、白细胞升高，中性粒细胞比升高（多为阳性菌） 但幼儿急疹开始也可能会显示细菌性的血象，要注意，具体看13楼 但这里尤其要注意一点是：在症状体征不典型，血象又“四不象”时，应结合CRP、NALP等检查综合分析。 同时普及一下： 白细胞分有颗粒和无颗粒两类，三种颗粒白细胞即嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，无颗粒白细胞包括单核细胞和淋巴细胞。因此化验单上血常规可以看到有：白细胞总数，中性粒细胞比，淋巴细胞比，嗜酸性粒细胞比和嗜碱性粒细胞比等 人体内白细胞总数和种类白细胞的百分比是相对稳定的。机体发生炎症或其他疾病都可引起白细胞总数及各种白细胞的百分比发生变化，因此检查白细胞总数及白细胞分类计数成为辅助诊断的一种重要方法。 婴儿CRP 〉8，提示有炎症，如果验血结果是如B的，结合有发烧腹泻咳嗽呕吐等现象，在急性早期我觉得确实有必要验CRP，以排除败血症，支气管炎，肺炎等严重病症，败血症也为革兰氏阴性菌感染，白细胞可能不高，但CRP会达到最大值，很恐怖的，一定要谨慎。 6）再顺便介绍下CRP，MM们多了解下也是有益的 （网上摘录） C- 反应蛋白(C—Reactive Protein简称CRP)是人体受微生物等多种因子侵袭后，在人体血液中很快产生的一种急性期反应蛋白。在炎症及侵袭因子作用下， 6-12小时后血清中CRP浓度开始增高，24—48小时达到最高峰，反复的炎症刺激可致CRP水平持续上升。此反应不受放疗、化疗、皮质激素治疗的影响。CRP的出现比其它急性期的反应物质早，所以对疾病的早期诊断很有帮助。
病毒感染细胞实验整体流程及原理参考(仅供参照)
病毒感染细胞实验整体流程及原理 1.1慢病毒 1.1.1原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于 并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。 1.1.2特点 1）直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞(比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 2）可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。 3）可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。 4）无需任何转染试剂，操作简便。 5）可以根据客户需要制备多种标记。 1.1.3慢病毒包装简要流程： 1）含有目的基因的慢病毒RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。 2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3）培养48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4）病毒的纯化和浓缩。 5）分装、- 80 ℃保存。 6）滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。 1.3、慢病毒和腺病毒的比较
2、构建目的基因到载体 2.1 构建手段 2.2质粒载体 2.2.1概念 能够进行自主复制的环状DNA 双链结构，包括真核生物的细胞器（主要指线粒体和叶2.2.2特征 质粒称为附加体(episome)们可以把一些目的DNA 片断构建在质粒中，通过转化入大肠杆菌中，利用选择培养基来筛选从而不断的复制，来得到目的产物。(为了扩增DNA) 3、质粒DNA 在大肠杆菌里转化 连接上目的基因的质粒转化大肠杆菌是为了让目的基因在大肠杆菌里扩增，然后提取质
如何认识血常规中白细胞和分类值的意义
如何认识血常规中白细胞和分类值的意义 全网发布：2012-07-24 23:00 发表者：陈贤楠(访问人次：33653) 血常规中的白细胞总数和分类是临床医生诊断和治疗疾病重要的参考资料，尤其在儿科急性发热、感染性疾病诊治中，血常规检查常是区别细菌性感染或病毒感染以及感染严重度必不可少的手段。但我在日常工作中也经常发现，某些家长或医生由于对白细胞总数和分类分析的片面性，导致抗生素滥用或疾病严重度判断的偏移。在此作简短讨论并提出自己的看法：北京儿童医院感染内科陈贤楠 一、必须牢记以下的基本概念： 1、白细胞总数(WBC)和分类(包括绝对值和相对百分数)值反映的是炎症指标，换言之，感染性炎症和非感染性炎症均可以引起上述参数的变化。 2、在儿科发热的患儿，白细胞和分类值常反映感染性炎症，也常作为鉴别细菌性或非细菌性感染的指标。即：细菌性感染常表现为白细胞总数和中性粒细胞绝对值和百分数升高。 3、但是在复杂性慢性、反复性发作的疾病（如哮喘、过敏咳嗽、过敏肠病等）和重症感染又伴有全身炎症反应（如各种病原体引起的重症感染、感染性休克）时，上述数值的判断必须慎重，因为它既受感染性炎症，又受非感染炎症的影响。 4、病毒感染时通常白细胞正常或减少，分类中淋巴细胞比例增加，但某些特殊病毒或病毒感染综合征时白细胞总数和中性粒细胞可增高。 5、白细胞总数和分类，作为血常规三项重要信息之一(其他二项是红细胞和血小板计数)，也是血液病和骨髓功能重要指标。如白白血病、白细胞减少症等。 二、当前儿科门诊对血常规白细胞总数分析的常见偏移和误区有： 1、以成人的白细胞和分类正常值来判断小儿的化验值。小儿各年龄段血常规中白细胞级分类有很大的不同（见下表）；白细胞主要分粒细胞(包括嗜中性、嗜酸性和嗜碱性)和淋巴细胞(单核细胞)。白细胞的分类中以粒细胞和淋巴细胞的变化比较突出：生后4～6天至～4～6岁期间以淋巴细胞（lymphocyte,L）占优势约占60%为主，中性粒细胞(neutrophil,N)约为30%；而在出生后4～6天前和4～6岁后直至成人则以中性粒细胞为优势，约占65%。 白细胞值正常范围在国内外不同教科书中有所不同的，但各年龄组的变化趋势是一致的。而目前个医院包括儿童医院化验单上均以成人正常值为标准，不少儿科医生也以此标准值去判断不同年龄患儿，这是一个很大的误区，也是抗生素滥用的重要原因。 2、白细胞和分类值增高作为感染疾病未愈的指标、作为继续应用抗生素的证据。许多家长因为化验白细胞高而不敢停用抗生素。事实上对只咳嗽不发热，没有明显感染病灶的孩子轻度的白细胞增加没有太大意义，更不能区分是细菌或病毒感染。因为有多种因素可以引起血常规中白细胞总数增高，如精神紧张、哭闹、运动或活动、预防接种，疼痛刺激等等。一天中的不同时间，服药、食物等也可使白细胞值改变。有人观察到：在12～24小时内，没有任何干预情况下，血常规中的白细胞计数可以由15.0~20.0×109/L下降至10.0×109/L（即从每立方毫米1.5万～2万降至1万以下）。 3、过度解读白细胞总数和分类，如机械、简单地用来判断感染病原体、抗生素选择的指标。 三、白细胞生成、循环和清除过程--有利于纠正上述误区 以上已提及：白细胞主要由粒细胞和淋巴细胞组成。以白细胞中占优势的中性粒细胞为例：