土壤中性磷酸酶(S-NP)活性测定试剂盒说明书
货号：MS2901 规格：100管/96样土壤中性磷酸酶（S-NP）活性测定试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
土壤磷酸酶是催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH的显著影响，根据最适PH范围，一般把土壤磷酸酶分为中性、酸性和碱性三种类型。
测定原理：
中性环境中，S-NP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出NP活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加100mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）
标准品：液体×1支，0.5 μmol/mL酚标准液，4℃保存。
催化反应：
称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。
显色反应：
1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。
2. 空白管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL蒸馏水，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后25℃静置30min，于660nm测定吸光度，记为A 空白管。
3. 标准管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL标准液，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后25℃静置30 min，于660nm测定吸光度，记为A 标准管。
4. 测定管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL上清液，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后室温25℃30 min，于660nm测定吸光度，记为A 测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
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S-NP活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。
S-NP（nmol/d/g 干重）= [C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W÷T
= 725×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W
b.使用96孔板测定的计算公式如下
活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。
S-NP（nmol/d/g 干重）= [C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W÷T
= 725×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W
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组织及血液碱性磷酸酶(AKP ALP)活性检测试剂盒说明书 微量法
组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书微量法 货号：BC1595 规格：100T/48S 产品说明： AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。 自备仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。 标准品：液体×1支（EP管中），2μmol/mL酚标准液，4℃保存。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂 一）进行冰浴匀浆，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。 2.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。 二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。 2.试剂三置于37℃水浴中预热30min以上。 3.空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；
加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。 4.标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min； 加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A标准管。 5.对照管：取EP管，加入40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂 四120μL，混匀；最后加入4μL上清液，混匀后于510nm测定吸光度，记为A对照管。 6.测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min； 加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。 其中标准管和空白管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。 三、AKP/ALP活性计算： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1.血液中AKP/ALP活力计算 活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为一个活性单位。 AKP/ALP活力(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷V样×V样总÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02mL；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V样总：1mL；T：反应时间（min），15min。 2.组织中AKP/ALP活性计算 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr （2）按样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克样品每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/g)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(V样÷V样总×W)÷T
碱性磷酸酶活性测定
碱性磷酸酶活性测定 磷酸酶 磷酸酶能酶促有机磷化合物的水解。试验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物的矿化起着主要的作用；某些高等植物的根系也有磷酸酶活性。土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况（特别是磷的状况）。 基本原理： 土壤磷酸酶活性的测定常用各种磷酸酯作为基质。应用得最多的是酚酞磷酸酯、苯磷酸酯、甘油磷酸酯、ɑ-或?-萘磷酸酯和p-硝基苯磷酸酯等的水溶性钠盐。当它们被酶促水解时，能析出无机磷和基质的有机基团。因此磷酸酶活性的测定时测定基质水解后的无机磷或酚的部分。这里介绍的方法是测定基质水解时生成的酚量。该法可用于测定各种磷酸酶的活性：碱性磷酸酶（用PH10的硼酸盐缓冲液），中性磷酸酶（用PH7.0的柠檬酸盐缓冲液），酸性磷酸酶（用PH5.0的乙酸盐缓冲液） 试剂配制： 1）甲苯 2）0.5% 磷酸苯二钠 3）硼酸盐缓冲液（PH9.6与PH10.0）：称取12.404g硼酸（H3BO3）溶于700ml 去离子水，用稀NaOH溶液调节至PH10.0，用去离子水稀释至1000ml 4) 氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%的乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 5）标准溶液：（a）母液：1g酚溶于蒸馏水中，并稀释至1000ml，溶液保存在暗色瓶中；（b）工作液：10ml溶液（a）稀释至1000ml（1ml含10ug酚）6）0.3%硫酸铝溶液 标准曲线绘制： 取0，1，3，5，7，9，11和13ml酚工作液（b），置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以光密度为纵坐标，浓度为横坐标绘成标准曲线。 操作步骤： 1）取5g风干土置于200ml三角瓶中，用2.5ml甲苯处理 2）处理15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠 3）将反应混合物置于37℃恒温箱中，培养24h后，在培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液用致密滤纸过滤。 4) 无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。以检验试剂纯度，整个实验设置一个对照 5)无基质对照：对每个土样，设置以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。
血清铁浓度检测试剂盒说明书
货号：MS2802 规格：100管/96样 血清铁浓度检测试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁，该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。 测定原理： 亚硫酸钠还原血清Fe3+生成成Fe2+，Fe2+进一步与2, 2’- 联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。 自备实验用品及仪器： 离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。 试剂组成和配置： 试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前配制，加入15mL蒸馏水充分溶解。 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前配制，加入469μL冰醋酸，加入15mL蒸馏水充分溶解。 标准液：液体×1 支（EP管），100μmol/L Fe3+标准液，4℃保存。 测定： 1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到520nm，蒸馏水调零。 2. 标准液解冻：提前取出标准液，置于室温下充分解冻后混匀。 3. 空白管：取EP管，依次加入125μL蒸馏水，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧， 置于沸水浴5min，自来水冷却。加入62μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm 测定吸光度，记为A空白管。 4. 标准管：取EP管，依次加入125μL标准液，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧， 置于沸水浴5min，自来水冷却。加入62μL氯仿，充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm测定吸光度，记为A标准管。 5. 测定管：取EP管，依次加入125μL血清，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置 于沸水浴5min，自来水冷却。加入62μL氯仿，充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm测定吸光度，记为A测定管。注意：空白管和标准管只需测定一次。 血清铁浓度计算公式： 血清铁含量(μmol/dL)=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总=10× (A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) C 标准液：100 μmol/L Fe 3+ 标准液；V 总：1 dL=0.1 L。 注意事项： 1、血清铁含量少，所用器皿（EP 管）需要注意，避免被铁污染。 2、试剂一和试剂二溶液不稳定，需现配现用，新配制的试剂只能当天使用。 3. 最低检出限为1μmol/L。 第1页，共1页
土壤微生物测定方法
土壤微生物测定 土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中的一些特殊种群状态，可以反映自然或农田生态系统的微小变化。土壤微生物活性的表征量有:微生物量、C/N、土壤呼吸强度和纤维呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。 测定指标： 1、土壤微生物量(MierobialBiomass，MB) 能代表参与调控土壤能量和养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量，一般指土壤中体积小于5Χ103um3的生物总量。它与土壤有机质含量密切相关。 目前，熏蒸法是使用最广泛的一种测定土壤微生物量的方法阎，它是将待测土壤经药剂熏蒸后，土壤中微生物被杀死，被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解(矿化)而放出CO2，根据释放出的CO2:的量和微生物体矿化率常数Kc可计算出该土样微生物中的碳量。 因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。 此外，还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中的微生物量—碳。受土壤水分状况影响较大，不适用强酸性土壤及刚施 用过大量有机肥的土壤等)、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。 熏蒸提取-容量分析法 操作步骤： （1）土壤前处理和熏蒸 （2）提取 -1K2SO 4（图将熏蒸土壤无损地转移到200mL聚乙烯塑料瓶中，加入100mL0.5mol·L 水比为1:4；w：v），振荡30min（300rev·min -1），用中速定量滤纸过滤于125mL塑料瓶中。熏蒸开始的同时，另称取等量的3份土壤于200mL聚乙烯塑料瓶中，直接加入100mlL0.5mol·L -1K2SO4提取；另作3个无土壤空白。提取液应立即分析。 （3）测定 吸取10mL上述土壤提取液于150mL消化管（24mmх295mm）中，准确加入10mL0.018 mol·L -1K2Cr2O7—12mol·L-1H2SO4溶液，加入2~3玻璃珠或瓷片，混匀后置于175±1℃ 磷酸浴中煮沸10min（放入消化管前，磷酸浴温度应调至179℃，放入后温度恰好为175℃）。冷却后无损地转移至150mL三角瓶中，用去离子水洗涤消化管3~5次使溶液体积约为80mL， 加入一滴邻菲罗啉指示剂，用0.05mol·L -1硫酸亚铁标准溶液滴定，溶液颜色由橙黄色 变 为蓝色，再变为红棕色，即为滴定终点。 （4）结果计算
血钙浓度检测试剂盒说明书 微量法
血钙浓度检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号：BC0725规格：100T/96S 产品内容： 试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存。试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体×1瓶（空瓶，试剂自备）。取15mL 试剂瓶，依次加入9mL 无水甲醇和1mL 丙酮，盖紧混匀即可。 标准液：液体0.5mL×1支，2μmol/mL CaCl 2?2H 2O 溶液，4℃保存。临用前进行5倍稀释得到0.4μmol/mL 标准溶液。产品说明： 血钙几乎全部存在于血浆中，所以血钙主要指血浆钙。血浆钙有离子钙和结合钙两种形式，其中只有离子钙直接起生理作用，它与结合钙处于动态平衡，并受血液pH 的影响。血钙水平与多种重要的生理功能相关，过高或过低都会影响正常生理功能。本试剂盒用于检测血液中游离钙浓度。 在强碱溶液中游离钙与GBHA 反应生成红色钙-GBHA 复合物，在520nm 有吸收峰；通过测定520nm 吸光度，计算游离钙浓度。自备仪器和用品： 可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、无水甲醇、丙酮和蒸馏水。操作步骤： 1.分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长到520nm，蒸馏水调零。 2.加样表： 名称（μL） 空白管标准管测定管血浆--12蒸馏水12--0.4μmol/mL 标品 -12 -
试剂一505050 试剂二505050 试剂三100100100混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A，记为A测定管、A空白管、A对照管。血钙浓度计算： 血钙含量(μmol/dL)=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×100 =40×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) C标准液：0.4μmol/mL；100：单位换算系数，1dL=100mL。 注意事项： 1、宜早晨空腹采血，并且采血后应该尽快完成测定； 2、尽量在10min内完成测定； 3、因反应完成后需尽快测定，使用微量比色皿时，建议每批次测定5-10个样本； 4、若A测定管高于0.8，建议用蒸馏水稀释后测定。
铁测定试剂盒(PAPS显色剂法)产品技术要求huayuyikang
铁测定试剂盒（PAPS显色剂法） 适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中铁的含量。 1.1 产品型号/规格 试剂1：1×20 ml、试剂2：1×5 ml；试剂1：1×40 ml、试剂2：1×10 ml；试剂1：2×40 ml、试剂2：2×10 ml；试剂1：4×40 ml、试剂2：4×10 ml；试剂1：4×60 ml、试剂2：2×30 ml；试剂1：1×80 ml、试剂2：1×20 ml；试剂1：2×80 ml、试剂2：2×20 ml；试剂1：5×80 ml、试剂2：5×20 ml；试剂1：3×60 ml、试剂2：1×45 ml；试剂1：6×70 ml、试剂2：3×35 ml；试剂1：5×40 ml、试剂2：1×50 ml；试剂1：4×40 ml、试剂2：2×20 ml；试剂1：4×80 ml、试剂2：4×20 ml；试剂1：4×50 ml、试剂2：1×50 ml；试剂1：8×50 ml、试剂2：2×50 ml；试剂1：8×16.8 ml、试剂2：8×4.2 ml。 1.2 划分说明 试剂1：醋酸缓冲液 0.2 mol/L 表面活性剂适量 稳定剂适量 试剂2：PAPS 2.6 mmol/L 2. 性能指标 2.1 外观和性状 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；中文包装标签应清晰、准确、牢固。 2.1.2 试剂1应为无色澄清液体；试剂2应为棕色液体。 2.2 净含量
不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在光径1 cm、主波长578 nm下，以蒸馏水为检测样本时，吸光度应不大于0.300 。 2.4 分析灵敏度 铁含量为30.00 μmol/L时，测定吸光度差值（△A）应大于0.080。 2.5 线性范围 铁试剂在线性范围(0～120] μmol/L内： （a）回归系数r应不小于0.990； （b）在（0～12.0 ] μmol/L范围内，线性绝对偏差应不大于±1.2 μmol/L；（c）在（12.0～120]范围内，线性相对偏差应不大于±10%。 2.6 测量精密度 2.6.1 重复性 变异系数（CV）均应不大于5%。 2.6.2 批间差 相对偏差（R）应不大于5%。 2.7 准确度 采用GBW09152 冷冻人血清中无机成分分析标准物质对试剂盒进行测试，相对偏差应不超过±10%。 2.8 稳定性 铁试剂盒贮存于2 ℃～8 ℃、避光环境中，有效期为12个月。有效期满后应满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP微板法)
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法) 产品简介： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。 Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法，其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构，呈较深的黄色，产物黄色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 产品组成： 自备材料： 1、 水浴锅或恒温箱 2、 96孔板 3、 酶标仪 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制显色工作液： 取出1支pNPP ，恢复至室温后溶解于ALP Assay buffer ，混匀， 冰上预冷备用。新配制的显色工作液应在6h 内用完。 2、 配制标准品工作液：取出p -nitrophenol(10mM)恢复至室温后，取10μl 溶解于190μ 编号 名称 TE0002 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支 -20℃ 避光 试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法 土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法） 一、原理 脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。 土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。 二、试剂 1）甲苯 2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。 3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。 4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。 5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。 6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。 三、操作步骤 称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h 内保持稳定）。 标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。再加入4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 注意事项: 1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作与样品 实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。 2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验试剂纯
人类K-ras基因突变检测试剂盒说明书
人类K-ras基因突变检测试剂盒（PCR-熔解曲线法）说明书 【产品名称】 通用名：人类K-ras基因突变检测试剂盒（PCR-熔解曲线法） 英文名：Diagnostic kit for Mutations of Human K-ras Gene (PCR-Melting Curve Analysis) 【包装规格】 20测试/盒 【预期用途】 K-ras基因位于12号染色体短臂上，是重要的癌基因之一，编码一种21kD 的kras蛋白，参与细胞内的信号传递，主要包括PI3K/PTEN/AKT 和 RAF/MEK/ERK信号转导途径，这些转导途径是当前肿瘤靶向药物研究的热点，靶向药物通过抑制这些途径发生药理作用。K-ras基因第12和13密码子发生突变，将导致kras蛋白变异并处于持续激活状态，使药物失效。。据中国2010版《肿瘤学临床实践指南》，在一项包含101例肺腺癌亚型细支气管肺泡癌患者的回顾性研究中，所有患者均接受厄洛替尼单药一线治疗。K-ras突变者无一例缓解（0/18），而无K-ras突变者则有20例缓解（20/62，32%），差别有统计学意义（P <0.01）。因此，指南建议，非小细胞肺癌和结直肠癌患者使用靶向药物前应进行K-ras基因突变状态的检测。 本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA为检测样本，用于检测肿瘤组织K-ras基因第12，13密码子的12种体细胞突变（表1），提供突变状态的定性结果。为临床肿瘤靶向药物的个体化用药提供辅助诊断依据，本品适用于进入个体化靶向治疗疗程前的患者使用。 【检验原理】 本试剂盒基于实时PCR平台，结合了特异引物、荧光探针和熔解曲线技术，定性检测DNA样品中K-ras基因12，13密码子是否存在突变。用一对K-ras基因特异引物，该引物可
总铁结合力测定试剂盒(Ferene法)产品技术要求九州泰康
总铁结合力测定试剂盒(Ferene法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中的总铁结合力。1.1包装规格 试剂Ⅰ（R1）：60mL×3、试剂Ⅱ（R2）：20mL×3、试剂Ⅲ（R1）：60mL×3、试剂Ⅳ（R2）：20mL×3； 试剂Ⅰ（R1）：60mL×2、试剂Ⅱ（R2）：20mL×2、试剂Ⅲ（R1）：60mL×2、试剂Ⅳ（R2）：20mL×2； 试剂Ⅰ（R1）：60mL×1、试剂Ⅱ（R2）：20mL×1、试剂Ⅲ（R1）：60mL×1、试剂Ⅳ（R2）：20mL×1； 试剂Ⅰ（R1）：45mL×1、试剂Ⅱ（R2）：15mL×1、试剂Ⅲ（R1）：45mL×1、试剂Ⅳ（R2）：15mL×1； 试剂Ⅰ（R1）：90mL×1、试剂Ⅱ（R2）：15mL×2、试剂Ⅲ（R1）：90mL×1、试剂Ⅳ（R2）：15mL×2。1.2主要组成成分
2.1 外观 试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；试剂均为澄清溶液，无未溶解物。2.2 装量 试剂瓶内试剂的净含量不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在波长A600nm，记录吸光度值，试剂空白吸光度（R1+R2）不超过0.80A，试剂空白吸光度（R3+R4）不超过0.80A。 2.4 分析灵敏度 Fe：测试浓度100μmol/L的样本，吸光度变化值不低于0.002A。 UIBC：测试浓度50μmol/L的样本，吸光度变化值不低于0.002A。 2.5 线性 2.5.1铁离子： 在[1，120]μmol/L范围内，线性回归的确定系数应不低于0.990； 在[1，30)μmol/L范围内，线性绝对偏差不超过±3.0μmol/L； 在[30，120]μmol/L范围内，线性相对偏差不超过±10%； 2.5.2不饱和铁： 在[1，80]μmol/L范围内，线性回归的确定系数应不低于0.990； 在[1，30)μmol/L范围内，线性绝对偏差不超过±3.0μmol/L； 在[30，80]μmol/L范围内，线性相对偏差不超过±10%。 2.6 重复性 2.6.1批内重复性
碱性磷酸酶测定试剂盒注册技术审查指导原则(2016年修订版)
附件1 碱性磷酸酶测定试剂盒注册 技术审查指导原则 （2016年修订版） 本指导原则旨在指导注册申请人对碱性磷酸酶测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对碱性磷酸酶测定试剂盒的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 碱性磷酸酶测定试剂盒是指基于分光光度法原理对人血
清、血浆或其他体液中的碱性磷酸酶活性进行体外定量测定的试剂。本指导原则适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。 碱性磷酸酶活性的测定方法目前主要有连续监测法和比色法两类： 1.连续监测法（磷酸对硝基苯酚底物法） 碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚（4-NPP），生成对硝基苯酚（4-NP），在特定波长处监测吸光度变化速率，可计算碱性磷酸酶活性。 2.比色法（磷酸苯二钠底物法） 碱性磷酸酶催化水解磷酸苯二钠，生成游离酚，酚与4-氨基安替比林结合，经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物，在特定波长处监测吸光度值，可计算碱性磷酸酶活性。 从方法学考虑，本文主要指以碱性磷酸酶水解底物引起特定产物的吸光度的改变对碱性磷酸酶活性进行定量测定的体外诊断试剂，不包括干化学和酶联免疫检测试剂。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），碱性磷酸酶检测试剂属于酶类检测试剂，管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。 二、注册申报资料要求
2.1土壤酸性磷酸酶活性测定
土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。在pH 4-9 的土壤中均有磷酸酶。积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。 磷酸苯二钠比色法 1.试剂配制 （1）0.5%磷酸苯二钠（用缓冲液配制）。 （2）pH5醋酸盐缓冲液。 a.醋酸盐缓冲液（pH=5.0） A：0.2mol/L 醋酸溶液（11.5mL，稀释至1000mL） B：0.2mol/L 醋酸钠溶液（16.4g C2H3O2Na 或27.2g C2H3O2Na·3H2O 定容至1000mL） 14.8ml A + 35.2ml B混合即得 （3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 （4）酚的标准溶液： 酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中。 酚工作液——取10ml 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01mg酚）。 （5）甲苯。 （6）0.3%硫酸铝溶液。 标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11、13ml 酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标（mg）绘成标准曲线。 2.操作步骤 称5g风干土置于200ml三角瓶中，加2.5ml 甲苯，轻摇15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠（用醋酸盐缓冲液配制），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h后于培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。 吸取3ml 滤液于50ml 容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在分光光度计上于660nm 处比色。 3.结果计算 磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。 酚（mg）=a*8 式中a—从标准曲线上查得的酚毫克数 8—换算成1g 土的系数
glp-1试剂盒说明书
人胰高血糖素样肽1（GLP-1）ELISA 定量检测试剂盒 点击放大 产品型号： 48T/96T 产品报价： 产品特点： 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法 （ELISA ），定量检测人血清、血浆及相关液体样本中 胰高血糖素样肽1（GLP-1）的含量 本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 人胰高血糖素样肽1（GLP －－1）定量检测试剂盒（ELISA ） 使用说明书 【试剂盒名称】 人胰高血糖素样肽1（GLP-1）定量检测试剂盒（ELISA ） 【试剂盒用途】 定量检测人血清、血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1（GLP-1）的含量。 【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA ）。将标准品、待测样本加入到预 先包被人胰高血糖素样肽1（GLP-1）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤 除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加 入底物A 、B ，底物（TMB ）在辣根过氧化物酶（HRP ）催化下转化为蓝色产物，在酸的作 用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人胰高血糖素样肽1（GLP-1）浓度呈正相关，450nm 波 长下测定OD 值，根据标准品和样品的OD 值，计算样本中人胰高血糖素样肽1（GLP-1）含 量。 【试剂盒组成】
1 酶标包被板12孔×8条7 显色剂A液6mL 2 标准品0.3mL×6管8 显色剂B液6mL 3 20倍浓缩洗涤液25mL 9 终止液6mL 4 样本稀释液6mL 10 说明书1份 5 特殊稀释液6mL 11 封板膜2张 6 酶标试剂6mL 12 密封袋1个 备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：8、4、2、1、0.5、0.25pmol/L 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。 4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸 上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
铁测定试剂盒(亚铁嗪法)产品技术要求lepu
铁测定试剂盒(亚铁嗪法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中铁的浓度。1.1规格 试剂1: 1×30mL，试剂2: 1×10mL； 试剂1: 2×60mL，试剂2: 2×20mL； 试剂1: 1×50mL，试剂2: 1×10mL； 试剂1: 1×40mL，试剂2: 1×10mL； 试剂1: 2×40mL，试剂2: 1×20mL； 试剂1: 2×40mL，试剂2: 2×10mL； 试剂1:3×28mL，试剂2:3×7mL； 试剂1:1×4L，试剂2:1×1L； 试剂1:2×4L，试剂2:1×2L。 1.2主要组成成分 试剂1主要组分： 试剂2主要组分： 2.1 净含量
应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观 试剂1应为无色或浅色澄清液体，试剂2应为浅色或橙色澄清液体。外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。 2.3 试剂空白 在600nm处测定试剂空白吸光度，应≤1.5； 2.4 分析灵敏度 测试25μmol/L的被测物时，吸光度变化（ΔA）应不低于0.005. 2.5 准确度 用参考物质（GBW09152）对试剂（盒）进行测试，相对偏差不超过±5%。 2.6 重复性 批内变异系数（CV）应不超过5％。 2.7 线性 2.7.1在[1,100]μmol/L 区间内，线性相关系数r应不低于0.990； 2.7.2[1,8)μmol/L区间内绝对偏差不超过±0.64μmol/L；[8,100]μmol/L区间内相对偏差不超过±8%。 2.8 批间差 对同一份样品进行重复测定，相对极差≤6％。 2.9 稳定性 取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，应符合本标准2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。
土壤酸性磷酸酶活性测定
2.1土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。在pH 4-9 的土壤中均有磷酸酶。积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。 磷酸苯二钠比色法 1.试剂配制 （1）0.5%磷酸苯二钠（用缓冲液配制）。 （2）pH5醋酸盐缓冲液。 a.醋酸盐缓冲液（pH=5.0） A：0.2mol/L 醋酸溶液（11.5mL，稀释至1000mL） B：0.2mol/L 醋酸钠溶液（16.4g C2H3O2Na 或27.2g C2H3O2Na·3H2O 定容至1000mL） 14.8ml A + 35.2ml B混合即得 （3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 （4）酚的标准溶液： 酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中。 酚工作液——取10ml 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01mg酚）。 （5）甲苯。 （6）0.3%硫酸铝溶液。 标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11、13ml 酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标（mg）绘成标准曲线。 2.操作步骤 称5g风干土置于200ml三角瓶中，加2.5ml 甲苯，轻摇15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠（用醋酸盐缓冲液配制），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h后于培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。 吸取3ml 滤液于50ml 容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在分光光度计上于660nm 处比色。 3.结果计算 磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。 酚（mg）=a*8 式中a—从标准曲线上查得的酚毫克数 8—换算成1g 土的系数 1 / 1
组织铁含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
组织铁含量检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC4350 规格：50T/48S 产品内容： 提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前配制，加入7.5mL蒸馏水充分溶解，试剂一变黑后则不能使用； 试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前配制，加入375μL冰醋酸，加入12mL蒸馏水充分溶解；溶解后4℃保存一周； 标准液：液体3mL×1瓶，1μmol/mL Fe3+标准液，4℃保存；临用前稀释8倍即0.125μmol/mL的标准溶液进行实验，现用现配。 产品说明： 铁是人体必须的微量元素之一，它是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分，帮助氧的运输，促进脂肪氧化。缺乏铁元素容易造成贫血、代谢纷乱，并影响机体的免疫功能。 亚硫酸钠还原Fe3+生成Fe2+，Fe2+进一步与2,2’-联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长吸光度即可计算铁含量。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、氯仿、冰和蒸馏水。 测定操作： 1、样本处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。4000g4℃离心10分钟，取上清。 2、操作步骤： （1）可见分光光度计预热30min，波长调至520nm。蒸馏水调零。 （2）加样表： 第1页，共2页
加入试剂（μL）空白管测定管标准管蒸馏水400-- --400 0.125μmol/mL标准 液 样本-400- 试剂一200200200 试剂二400400400 混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却；加入200μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液800μL，加入1mL玻璃比色皿，于520nm立即测定吸光度，分别记为A空白管，A测定管，A标准管，计算ΔA标准=A标准管-A空白管，ΔA测定=A测定管-A空白管。 3、组织铁含量计算： （1）按组织鲜重计算: 组织铁含量（μg/g鲜重）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷W = 6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷W （2）按组织蛋白浓度计算 组织铁含量（μg/mg prot）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取） = 6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr。 C标准液：0.125μmol/mL Fe3+标准液；55.845：Fe的相对分子质量，55.845μg/μmol；Cpr：样品蛋 白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；V提取：提取液体积，1mL。 注意事项： 1、当ΔA大于1时，建议将样品用提取液稀释后进行测定；ΔA过小时，可增加酶促反应时间（1h或2h）或 增加加入的样品体积来测定。 2、试剂一溶解变黑后则不能使用；试剂二有毒性，做好防护措施。 第2页，共2页
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法 1、土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法） 一、原理 脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。 土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。 二、试剂 1）甲苯 2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。 3）柠檬酸盐缓冲液（）：184g柠檬酸和氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至，用水稀释定容至1000ml。 4）苯酚钠溶液（L）：苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和丙酮，用乙醇稀释至100ml （A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为%，溶液稳定。 6）氮的标准溶液：精确称取硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（ml）。 三、操作步骤 称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10% 尿素溶液和20ml PH 柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h内保持稳定）。 标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml 氮工作液，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。再加入4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 注意事项: 1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作 与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。 2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验 试剂纯度和基质自身分解。
柠檬酸(citric acid, CA)含量测定试剂盒说明书
货号：MS2101 规格：100管/96样柠檬酸（citric acid, CA）含量测定试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环第一步反应的产物。 测定原理： 酸性条件下，柠檬酸还原Cr6+生成Cr3+，在545nm处有特征吸收峰；通过测定545nm吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。 自备实验用品及仪器： 低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。 试剂组成和配置： 试剂一：液体×2瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体×1管，－20℃保存。 试剂四：粉剂×1管，室温保存。临用前配制，加入2mL试剂一，充分溶解。 试剂五：液体×1管，4℃避光保存。 标准品：液体×1管，250μmol/L柠檬酸标准液，4℃保存。 样品中柠檬酸提取： 1.液体样品中柠檬酸提取：取0.1mL液体加试剂一0.9mL，充分混匀，11000g，4℃离心10min， 取上清液，待测。 2.组织中柠檬酸提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约 0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。11000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 3.线粒体中柠檬酸提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取 约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，600g/min，4℃离心5min；取上清至另一EP管中，11000g，4℃离心10min，弃上清（此上清液可用于细胞质CA含量测定）；向沉淀中加试剂二200μl，以及试剂三2μl，充分悬浮溶解，11000g，4℃离心10min，取上清液，待测。 4.细菌、真菌中：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议 500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；11000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 测定操作： 1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到545 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂一置于30℃水浴中预热30min。 3. 空白管：取0.5 mL EP管，依次加入20μL蒸馏水，140μL试剂一，20μL试剂四，20μL 试剂五，混匀后室温静置30min，于545nm测定吸光度，记为A空白管。 第1页，共3页