大赛璐手性柱-HPLC操作与维护

手性高效液相色谱法检测恩替卡韦中光学异构体杂质的含量

手性高效液相色谱法检测恩替卡韦中光学异构体杂质的含量 王文娜　邓桂凤　张玲娣　姚彤炜 3 (浙江大学药学院药物分析和药物代谢研究室,杭州310031) 摘　要　采用Chiral pak AD 2H 手性柱(250mm ×416mm,5μm ),建立了正相高效液相色谱(NP 2HP LC )法直接拆分恩替卡韦与其光学异构体的方法。考察了流动相组成、酸碱性对柱效、分离度、保留时间等参数的影响。经优化,以正己烷2异丙醇2乙醇2三氟乙酸2三乙胺(70∶12∶18∶0105∶0105,V /V )为流动相,流速 015mL /m in;检测波长261n m 。在此条件下,恩替卡韦与光学异构体分离度>412;光学异构体的检出限为0112mg/L ,在0125～410mg/L 浓度范围内有良好的线性关系;日内与日间精密度RS D <410%;按标准加入 法计算,加样回收率在8710%～10018%之间;RS D <310%;按外标法计算,加样回收率在9812%～11014%之间;RS D <310%。本方法可作为恩替卡韦原料药中光学异构体杂质限量的控制方法。关键词　恩替卡韦,光学异构体,高效液相色谱法,手性拆分 　2008212229收稿;2009204229接受3E 2mail:rethe m@https://www.360docs.net/doc/3814859664.html, 1　引　言 慢性乙肝病毒感染一直是全球公共卫生的难题,开发抗乙肝病毒药物也一直是个热点。目前,我国临床上应用的抗病毒治疗药物主要有两类:α2干扰素和核苷或核苷酸类似物,主要包括拉米夫定、阿德 福韦和阿昔洛韦[1,2] 。2005年3月美国F DA 批准了新一代抗HBV 核苷类似物恩替卡韦(entecavir, 　图1　恩替卡韦及其光学异构体的化学结构 Fig .1　Structures of entecavir and its op tical is omer ET V,商品名Baraclude )上市[3] 。恩替卡韦是一种鸟嘌呤核苷类似物(图1),在磷酸激酶的作用下在体内形成活性三磷酸化合物,拮抗HBV 所需天然底物脱氧鸟苷三磷(dGTP ),抑制HBV 2DNA 聚合酶和逆转录酶,阻断HBV 复制。细胞内作用 半衰期为15h,在人体内不被肝细胞代谢,主要从 肾脏排出体外。同时,其耐药性好,可有效治疗慢 性乙型肝炎,临床应用前景良好[4,5] 。 由于手性药物在合成过程中可能引入光学异构体杂质,故采用手性分离方法检查合成产品中光学异构体含量。恩替卡韦及其光学异构体手性分离方法未见报道。本研究采用直接手性HP LC 法拆分两光学异构体,建立恩替卡韦中光学异构体杂质限量检查方法。 2　实验部分 211　仪器、试剂及材料 LC 210A 型高效液相色谱仪、SP D 210A 型紫外可见光检测器(日本岛津公司);Chiral pak AD 2H 手性 柱(250mm ×416mm ,5μm ,日本D iacel 公司)。乙醇(TE D I A )、正己烷(Burdick &Jacks on )及异丙醇(TE D I A )均为色谱纯;三氟乙酸(国药集团化学试剂有限公司);三乙胺(分析纯,上海化学试剂采购供应五联化工厂);恩替卡韦及其光学异构体(99187%,浙江医药股份有限公司新昌制药厂)。212　色谱条件 色谱柱:Chiral pakAD 2H 手性柱;流动相:正己烷2异丙醇2乙醇2三氟乙酸2三乙胺(70∶12∶18∶0105∶0105,V /V );流速015mL /m in;检测波长261nm;柱温:室温;灵敏度:01005AUFS;进样量20μL 。 第37卷 2009年8月 分析化学(FE NX I HUAXUE )　研究简报Chinese Journal of Analytical Chem istry 第8期 1206～1210

气相色谱柱知识详解

气相色谱柱知识详解 第一节气相色谱柱的类型 气相色谱法（gas chromatography, 简称GC）亦称气体色谱法，气相层析法。其核心即为色谱柱。 气相色谱柱有多种类型。从不同的角度出发，可按色谱柱的材料、形状、柱内径的大小和长度、固定液的化学性能等进行分类。色谱柱使用的材料通常有玻璃、石英玻璃、不锈钢和聚四氟乙烯等，根据所使用的材质分别称之为玻璃柱、石英玻璃柱、不锈钢柱和聚四氟乙烯管柱等。在毛细管色谱中目前普遍使用的是玻璃和石英玻璃柱，后者应用范围最广。对于填充柱色谱, 大多数情况下使用不锈钢柱，其形状有U型的和螺旋型的，使用U 型柱时柱效较高。按照色谱柱内径的大小和长度，又可分为填充柱和毛细管柱。前者的内径在24mm，长度为110m左右；后者内径在0.20.5mm，长度一般在25100m。在满足分离度的情况下，为提高分离速度，现在也有人使用高柱效、薄液膜的10m短柱。 根据固定液的化学性能，色谱柱可分为非极性、极性与手性色谱分离柱等。固定液的种类繁多，极性各不相同。色谱柱对混合样品的分离能力，往往取决于固定液的极性。常用的固定液有烃类、聚硅氧烷类、醇类、醚类、酯类以及腈和腈醚类等。新近发展的手性色谱柱使用的是手性固定液，主要有手性氨基酸衍生物、手性金属配合物、冠醚、杯芳烃和环糊精衍生物等。其中以环糊精及其衍生物为色谱固定液的手性色谱柱，用于分离各种对映体十分有效，是近年来发展极为迅速且应用前景相当广阔的一种手性色谱柱。 在进行气相色谱分析时，色谱柱的选择是至关重要的。不仅要考虑被测组分的性质，实验条件例如柱温、柱压的高低，还应注意和检测器的性能相匹配。有关内容我们将在以后章节中加以详细讨论。 第二节填充气相色谱柱 填充气相色谱柱通常简称填充柱，在实际分析工作中的应用非常普遍。据资料统计，日常色谱分析工作大约有80%是采用填充柱完成的。填充柱在分离效能和分析速度方面比毛细管柱差，但填充柱的制备方法比较简单，定量分析的准确度较高，特别是在某些分析领域（例如气体分析、痕量水分析）具有独特用途。从发展上看，虽然毛细管柱有逐步取代填充柱的趋势（例如已有一些日常分析使用PLOT柱代替过去常用的气固色谱填充柱），但至少在目前一段时期内，填充柱在日常分析中仍是一种十分有价值的分析分离手段。 填充柱主要有气固色谱柱和气液色谱填充柱两种类型。在色谱柱中关键的部分是固定相。在本节我们将首先介绍柱管的选择及其处理方法，然后再分别重点讨论气固色谱柱和气液色谱填充柱有关固定相的内容。

高效液相色谱手性固定相研究进展

收稿日期:2003-05-25 作者简介:寿崇琦(1963-),男,山东省济南市人,济南大学化学化工学院教授,硕士研究生导师,中国科学院兰州化学物理研究所博士研究生。 高效液相色谱手性固定相研究进展 寿崇琦1,张志良2,赵春宾2,邢希学2,李关宾1,陈立仁1 (11中国科学院兰州化学物理研究所,甘肃兰州　730000; 21济南大学化学化工学院,山东济南　250022) 摘要:对近年来高效液相色谱手性固定相的研究进行了综述。重点介绍了手性固定相的分类、拆分机理 和应用的新进展。讨论了各类手性固定相优缺点,提出了目前存在的问题、今后的研究方向和重点。 关键词:高效液相色谱;手性固定相;拆分机理中图分类号:O658 文献标识码:A 文章编号:1004-4280(2004)01-0069-05 随着生物工程和生物科学的发展,手性拆分和测定引起了人们的普遍关注。尽管对映体间物理化学性质几乎完全相同,但它们的生化和药理作用却往往不同。这是因为生物本身内部的核酸、蛋白质及多糖都具有与其功能相适应的结构,它们常常对扬长避短一化合物的两种对映体表现出不同的响应。例如具有镇静作用的反应停(thalidomide ,酞胺哌啶酮),其有效成分是R 构型,而S 构型则具有致畸作用[1]。据统计,常用的200种药物中,大约有120种至少含有一个手性中心。而这些手性药物中有80%～90%以外消旋体形式在市场销售,存在巨大的潜在危险性[2]。因此,对映体的拆分与识别对于生命科学和药物化学研究以及人类的健康具有十分重要的意义。 目前用于手性分离的方法主要有毛细管电泳法、薄层色谱法、亚临界及超临界流体色谱法、气相色谱法和液相色谱法[3]。近年来,高效液相色谱法取得了令人瞩目的进展,已成为对映体拆分强有力的手段之一。而其中所用的手性固定相的是能否进行手性分离的关键。1　手性固定相的分类 虽然液相色谱常被分为不同的分离模式,但实质上所有的分离模式都基于两个最基本的因素:即固定相的结构和组成,以及决定分离机理的固定相与流动相相互作用的性质。因而手性固定相(CSP )的制备则是手性分离的关键。目前所研究的HP LC -CSP 主要可分为下列几类[4]: 1.1　蛋白质手性亲和固定相 多数蛋白质CSP 的分离机理目前尚不十分清楚,但是蛋白质CSP 的手性识别能力可以归结为它们独特的空间立体结构特征[4]。尤其是在对映体的手性识别过程中,三级结构所造成 第18卷第1期 2004年3月山　东　轻　工　业　学　院　学　报JOURNA L OF SHANDONG INSTIT UTE OF LIGHT INDUSTRY Vol.18No.1Mar.2004

手性色谱柱知识介绍

手性色谱柱知识介绍 手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。。在手性拆分中，温度的影响是很显著的。低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。 根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系： 第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。 第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。 第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong 教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。 第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。 第5类：蛋白质型手性色谱柱。手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。 但由于市场上可选择的手性色谱柱越来越多，此分类系统有时很难将一些手性柱归纳进去。因此参考Irving Wainer的分类方法，根据固定相的化学结构，将手性色谱柱分为以下几种： 刷（Brush）型或称为Prikle型 纤维素（Cellulose）型 环糊精（Cyclodextrin）型 大环抗生素（Macrocyclic antibiotics）型 蛋白质（Protein）型 配位交换（|Ligand exchange）型 冠醚（Crown ethers）型 刷型： 刷型手性色谱柱的出现和发展源于Bill Prikle及其同事的卓越工作。六十年代，Bill Prikle将手性核磁共振中的成果运用到手性HPLC固定相研究中，通过不断实践，发明了应

高效液相色谱法在生命科学中的应用

高效液相色谱法在生命科学中的应用 高效液相色谱在生命科学中的应用范围越来越广，高效液相色谱由于具有高选择性、高灵敏度，并可同时用于有关物质检查与含量测定的特点，已成为医药研究的有力工具。如在中草药有效成分的分离和纯度测定、人工合成药物成分的定性和定量测定、新型高效手性药物中手性对映体含量的测定以及药物代谢物的测定等方面都需要用到HPLC的不同测定方法予以解决。而目前高效液相色谱的蒸发现了它在生命科学中的重要地位。光散射检测器的应用更体现了它在生命科学中的重要地位。1天然药物分析 天然药物的来源有动物、植物和矿物之分，其中以植物类为主。由于天然药物的化学成分复杂，其有效成分，可能有一个，也可以有多个，这对于控制药品质量，建立质量标准来说比较困难，HPLC可通过对天然药物的有效成分进行分离鉴定，再测定有效成分的含量；通过指纹图谱建立识别模式，可以判定药材的质量高低。 2 天然药物及复方成药分析 复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。增免扶正片系由当归、党参、黄芪（图3）等十几味天然药物精制而成，具有益气生津、活血养血、滋补肝肾、健脾开胃之功效，主要用于抗缺氧、抗疲劳、抗衰老，长期服用可扶正祛邪，提高机体免疫功能，健身强体，益寿延年。该药对心、肝、脾、肾虚、纳差、心脑血管疾病、神经衰弱、

慢性肝炎、脂肪肝等都有较好的防治作用。 由于化学药品的开发费用昂贵，而且毒副作用大，近年来人们已把目光转向自然、民族传统医药、草药、植物药等天然药物，据世界卫生组织统计，当前全世界60多亿人口中80％的人使用过天然医药。在全世界药品市场中，天然物质制成的药品已占30％，国际上植物药市场份额已达300亿美元，且每年以20％以上的速度增长。HPLC分析必定能为我国传统中医药实现现代化，走向世界提供强有力的技术支持。 3 抗生素分析 抗生素是由微生物或其他方法产生的化学物质，在高度稀释的情况下仍具有抑制或杀灭其他微生物的性能。抗生素的分离、分析和定量测定是药物分析中较困难的领域。采用较多的方法是微生物法、分光光度法和化学方法，但所需时间较长、专一性较差。 HPLC分析技术近年来在抗生素的质量控制中已广泛应用。对结构、组分等较清楚的药物，HPLC分析将逐步取代传统的生物测定。目前，各国药典中应用HPLC技术对抗生素进行质量控制的项目包括鉴别、组分分析、含量测定和相关物质测定等。 4 在鉴别中的应用 在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别.如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含 量测定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别.

手性色谱柱

手性色谱柱是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。 要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。 对于新的实验室要开展手性方面的研究，但不知怎么配置手性柱才能最好的，最大范围的对目标化合物取得较好的分析结果，下面我们来给您一些建议吧。 （加个表情或者箭头） 我把常用手性柱分成了五类，具体情况如下，建议每一类选择其中一种。

第一类：AD-H和IG，两个型号分离范围都比较广，区别是AD-H是涂敷型的，只能用于正相体系，IG是键合型的，正反相体系都适用。相对而言，AD-H这个型号是所有手性柱中的明星柱，所以建议选择AD-H型号。 AD-H IG 第二类：OD-H和IC,同理，OD-H是涂敷型的，只能用于正相体系，IC是键合型的，正反相体系都适用。其中IC对于含有羧基的酸性手性化合物分离性能更优异一些，并且第一类选择了涂敷型，所以这个建议选择键合型IC型号。 OD-H IC 第三类：IBN-5和AS-H，AS-H是四大金刚柱之一，比较经典，IBN-5是最近两年上市的，他跟其他型号互补性较强，当然这样也造成其应用范围比较窄的缺点，比如：有100种消旋体，AS-H或者AD-H能分离其中的85种，但对于剩下的15种分离效果不是很好，IBN-5可能对剩下的15种分离效果不错。所以这一类如果整体考虑，可以选择IBN-5，如果单独考

BRUKER TENSOR 27 FT-IR仪器操作规程与维护规程

BRUKER TENSOR 27 FT-IR 仪器操作规程与维护规程 1目的 规范TENSOR27红外光谱仪的操作程序，正确使用仪器，保证检测工作顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。 2适用范围 适用于TENSOR27红外光谱仪的使用操作与日常维护。 3操作程序 3.1安全操作注意事项和特别提示 3.1.1该仪器必须由专人保管，专人使用，使用人员必须经过专门培训， 并仔细阅读说明书，确保对仪器具有充分的认识。 3.1.2使用环境： 电源电压：85～265V，47～65Hz 温度范围：18～35℃ 湿度范围：小于70% 仪器室须保持无尘，无腐蚀性气体，无强烈振动。 3.1.3严格遵守操作规程，如仪器出现故障，须立即退出检测状态，并向 保管人或科室负责人报告，查明原因，及时处理，不得擅自“修理”， 同时做好使用和故障情况登记及实验室记录。 3.1.4日常保养：当位于仪器的右上角的红色电子湿度指示灯闪烁时，应 该立即更换干燥剂。包括位于样品仓内的干燥剂及位于干涉仪仓内 的干燥剂。若仪器长期不用，则必须至少每两星期更换一次干燥剂 并且每周至少开启主机一次，每次开机时间不低于4小时， 样品仓内干燥剂为变色硅胶，再生按变色硅胶方法处理。 再生、更换干涉仪仓干燥剂步骤： （1）小心将失效干燥管从仪器中取出，并将已再生好的备用干燥

管小心装入仪器； （2）打开失效干燥管密封盖，将干燥剂（分子筛，白色）倒出； （3）将倒出的干燥剂放入适当的容器，在干燥烘箱于150℃下再生不低于24小时；（切勿连同干燥管一起加热！））（4）在干燥气氛中冷却干燥剂至50℃以下，然后才能将干燥剂重新装入干燥管中，盖好密封盖，在干燥气氛中保存备用。 （切勿将高温干燥剂立即放入，否则会损坏红外光谱仪！） 3.1.5样品测定完毕，须保持仪器样品仓的清洁，并将样品移出仪器室， 关好仪器、电脑及水、电、门窗等。 3.2开机前的准备 3.2.1检查确认电源插座上的电压是否在规定的范围内。 3.2.2开除湿器，湿度须小于70%。 3.3开机步骤 3.3.1按仪器后侧的电源开关，开启仪器，加电后，开始一个自检过程； 约30秒钟。自检通过后，状态灯由红变绿。仪器加电后至少要等 待10分钟，等电子部分和光源稳定后，才能进行测量。 3.3.2开启电脑，运行OPUS操作软件。检查电脑与仪器主机通讯是否正 常。 3.3.3设定适当的参数，检查仪器信号是否正常，若不正常需要查找原因 并进行相应的处理，正常后方可进行测量。 3.3.4仪器稳定后，进行测量。 3.4测量步骤 3.4.1根据实验要求，设置实验参数。 3.4.2根据样品选择背景。 3.4.3测量背景谱图。 3.4.4准备样品（如用压片机压片或液体池等） 3.4.5将样品放入样品室的光路中（如放在样品架或其它附件上）。 3.4.6测量样品谱图。 3.4.7对谱图进行相应处理。

高效液相色谱法-药典

高效液相色谱法 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵人装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注人的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 1. 对仪器的一般要求和色谱条件 高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱内径一般为3.9?4.6 mm，填充剂粒径为3?10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm) 填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 (1) 色谱柱 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。 正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。 离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。 手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。 色谱柱的内径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。 温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提髙色谱柱的温度，但一般不宜超过60°C。残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在2?8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。

大赛路手性柱Q&A及手性分离经验

优化手性化合物的分离方法时，如何增加分离选择性？ 正相手性色谱柱上增加分离度的方法有：降低流动相中醇的含量、降低柱温、更换流动相中醇的种类、更换手性柱。 建立手性化合物的分离方法时，选定了正相手性柱之后，如何选择流动相？ 流动相首选正己烷和异丙醇的混合溶液，根据样品的酸碱性决定是否添加酸碱性添加剂。如果是中性样品则不需要添加添加剂，如果是酸性样品需要添加三氟乙酸或乙酸，如果是碱性样品需要添加二乙胺，添加剂的量一般为0.1 %。流动相中醇的含量一开始可以使用30%，根据样品出峰的快慢和分离度再调整醇的含量。流动相中醇的种类一般使用异丙醇，也可以使用乙醇。 建立手性化合物的分离方法时，如何选择手性柱？ 根据文献或者参考大赛璐公司的《应用指南》中结构类似物的分离方法，选择手性柱；另外可以寄少量消旋品，大赛璐公司能免费为您选择分离最佳的手性柱。 手性柱使用完了之后如何清洗保存？ 正相手性色谱柱如果使用正己烷和醇类的混合流动相之后，只需要用正己烷/异丙醇=90/10(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。反相手性色谱柱如果使用了水溶液和乙腈的混合流动相之后，只需要用水/乙腈=70/30(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。 CROWNPAK? CR(+)柱流动相中甲醇含量有要求吗？ CROWNPAK? CR(+)柱流动相中甲醇含量为0％-15%，甲醇的含量一旦超过15%，CROWNPAK? CR(+)柱会被损害。 正相手性柱进了水后，柱子会不会损坏？ 正相手性色谱柱（例如AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H）一旦进了水，柱压会升高，但是只要柱压不超过柱压上限，柱子就不会损坏。只需用无水乙醇低流速(0.1-0.2 ml/min)将水全部充分置换出来，再用正相流动相低流速(0.1-0.2 ml/min)将乙醇全部置换出来就能继续使用该正相手性色谱柱。 样品的保留时间漂移，可能是哪些原因，如何解决？ 1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。 2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。该情况在MA（+）柱上出现较多。 4、酸碱性的样品，有时在中性条件下能分开，峰形尚可，但保留时间会漂移；加入相应的酸碱添加剂即可。 5、流动相污染。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。需清洗色谱柱，流动相和样品溶液尽量现用现配。 （小极性样品的溶解）正相方法分析布洛芬时，有时峰形难看甚至达不到基线分离，什么原因？如何解决？ 该方法为Hexane/IPA=99/1，极性很小；若样品不是溶解在流动相中，则结果很可能达不到基线

手性色谱柱的知识

手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。 这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。 在手性拆分中，温度的影响是很显著的。低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。 迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。 根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系： 第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。 第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。 第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。 第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）。

手性分析之经验谈

手性分析经验谈 关于手性化合物、手性分析、手性填料和手性柱，现在的理论很多，讲的也比较复杂，我看了很多也不是特别明白，做分析三年多，分过的手性化合物最少也有几千种，拿到手里的消旋体几乎没有分不开的，没用到什么理论，主要都是经验，这里还是拣最实用的来讲。 手性分析可以使用普通的色谱柱，需要流动相中添加手性分离试剂，也可以直接用固定相为手性填料的手性色谱柱，前者使用较少，大家更多的是使用商品化的手性色谱柱。 手性分析包括气相和液相两种，这个主要和样品的物理性质有关系，现在的手性化合物绝大多数都不能做气相，所以气相手性色谱柱无论从数量还是质量上来讲都不能与液相手性色谱柱相提并论。 一、手性柱 手性分离最重要的是选择一根好的手性柱，说到手性柱就不得不提大赛璐，做手性分析的都知道，大赛璐的手性柱目前市场占有率最高，大家最熟悉的可能是OD- H，很多文献中都有报道。大赛璐公司最初有四种填料，结构类似，对应的色谱柱分别是OD、AD、OJ和AS，粒径10um，后来填料粒径变为5um，就是卖的最多、使用范围最广的柱子，号称四大金刚，分别是OD-H、AD-H、OJ-H和AS-H，在柱子名称后边加“-H”，意思应该是高效，这些柱子都只能做正相使用，为了在反相色谱中使用开发的柱子在相应的色谱柱名称中添加了一个“R”，上述色谱柱都属于涂覆型填料，不耐溶剂，使用起来受样品溶解性的限制，最近又开发了键合相手性柱，可以使用几乎所有的常见溶剂做流动相，新的溶剂还提供了新的选择性，进而提升了色谱柱的分离能力，主要是IA、I B和IC，其中IA对应AD-H，IB对应OD-H，IC是新开发的填料。和反相柱的发展趋势一样，大赛璐的手性柱也通过减小粒径来获得更高的柱效，最新的手性柱填料粒径是3um。另外大赛璐还有其它一些手性色谱柱，但是远不及上述几种。 关于大赛璐手性柱的详细资料官方网站上讲的很详细，大家有兴趣可以去看，这里主要讲我的使用经验。最近大赛璐公司的销售和技术曾经来过我们公司做讲座，因为我们先后买了他们三四十只手性柱，一直是自己摸索着使用，理论上的东西懂得很少，非常希望专家的能给我们提供指导，提升我们的技术水平，这个讲座的ppt网上流传的很多，对初学者来讲确实非常不错，但是专家的水平让我们实在不敢恭维。我们买了几十只手性色谱柱，但是型号相对很少，平时几乎只用两只色谱柱：AD-H和IC，但是拿到手里的手性化合物除去溶解性和紫外吸收的原因之外，几乎所有的样品都能用这两只色谱柱分开，我们主要的手段是在流动相上下功夫，通过流动相的调整来达到只用一两只柱子去解决遇到的所有手性分析问题，而大赛璐的专家讲座时给我们提供的思路是流动相变化相对较少，更多的是分不开就换柱子。细想一下也不难理解，厂家手里最不缺的就是柱子，为了分析一个样品他们可以试用所有型号的手性柱，但是对我们用户来说，一只柱子动辄一两万，相信没有哪个用户能有厂家那样的魄力和实力，一下子拿出那么多型号的手性柱来为一个样品的分离做筛选。 二、样品前处理 说到手性分析，样品的前处理非常重要。首先是消旋体样品的普通液相纯度问题，样品的纯度低了，看到手性柱上分离开的几个峰让人无从判断究竟对映异构体有没有分离开，分离开的几个峰哪个是杂质峰哪个是对映异构体的峰，所以样品的纯度要尽量的高，一般我们的要求是样品的纯度能达到90%以上，纯度低的样品需要做进一步的纯化。关于对映异构体峰的判断，现在比较好的手段是使用旋光检测器，在色谱图上可以直接看到分离开的两峰吸收一正一负，再有就是使用DAD检测器，通过看两峰的紫外吸收是否一致来做判断。 样品前处理的另外一项是稀释问题，这个问题最容易被忽视，处理不好会直接导致实验失败。我们都知道反

色谱柱相关知识

色谱柱相关知识 1、色谱柱的使用说明： （1）色谱柱使用前注意事项： 色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。 （2）流动相： 流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。 以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。 （3）样品： 样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。 2、色谱柱的保存?? （1）反相色谱柱每天实验后的保养： 使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。 （2）长期保存色谱柱： 如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。 3、色谱柱的再生?? 因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。 （1）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，

仪器仪表使用与维护

仪器仪表的使用与维护 放置位置要求： 1、仪表应放置在平坦、干净、无灰尘的实验台上； 2、仪表的安放位置应无大的振动； 3、放置仪表的位置应远离有害气体或液体滴落； 4、确保电极连接电缆及电源线所经过的任何位置都不接触高温的或有摩擦的物体。 一、HK-3C型台式精密酸度计使用说明 组成：HK-3C台式精密酸度计由主机、复合的PH电极、A TC温度电极及电极支架组成。电极采用测量灵敏的PH复合电极，A TC自动温度补偿，测量可靠、数据准确。 电极安装： 1、取出PH电极，摘下电极前端的保护瓶，保留保护瓶以备将来保存电极； 2、目测球泡是否破损或裂纹，如果有破损或裂纹，则该电极不能使用； 3、如球泡内有气泡，轻甩电极，使气泡上升，保证球泡内充满溶液； 4、用3.3mol/L氯化钾溶液浸泡24小时，然后用清水冲洗干净； 参数设置： 1、水质选择：不同的水有不同的温补曲线，所以，根据具体的使用情况选择相应的水质十 分必要，可选项有普通水、纯水、氨水、磷酸盐水、钼酸盐水、不补偿； 2、温度补偿方式：由于温度的波动对测量造成影响，必须进行温度补偿，可以选择自动或 手动温度补偿方式（25℃）； 仪表校准： 1、PH缓冲液校准 2、样品校准 3、输入E0.S 4、温度校准 5、电气校准 PH缓冲液校准： 通过使用标准缓冲液对仪表校准，可以校准一点，也可以校准两点，仪表在初次使用，更换电极或长时间停用后必须进行二点校准。使用仪表自动识别的标准缓冲液：（4.00、6.86、7.00、9.18、10.01）PH 测量方法： 1、向塑料烧杯中加入约100ml除盐水清洗电极，然后倒掉，清洗电极三遍。 2、向塑料烧杯中加入约100ml的待测水样，用该水样清洗电极至少两遍。 3、用步骤2的方法取待测水样，将电极插入烧杯，等待测值稳定；当稳定后，即可读出测 量值。 仪表维护： 1、电极的稳定时间与电极的新旧程度和水样的性质有关，电极越新稳定越快，电极使用一

高效液相色谱与手性分离

对含有多个手性中心的药物使用含多糖类手性固定 相的高效液相色谱法进行手性拆分 摘要 对含有多个手性中心的药物进行手性分离是一项具有挑战性的工作。这篇文章介绍了用多糖类手性固定相对含有多个手性中心的药物进 行分离。并且，柱转换技术在这种化合物得分离中也被应用。 关键词: 回顾;对映体分离; 手性固定相, LC;多糖; 纳多洛尔; 吲多洛尔; 奈必洛尔;地尔硫卓 目录 1.介绍 2.含两个手性中心的药物的手性分离实例 3. 含多个手性中心（多于两个）的药物的手性分离实例 4. 结论 5. 参考文献 1. 介绍 手性是一个显著的生物学过程，一个生物活性分子的对映体通常具有不同的生物学特性。生物学作用中的对映体选择性现象并不局限于药物学，它是所有生物活性试剂（杀虫剂、除草剂、香精香料、食物添加剂等）的一个共同特征。 来源于自然物质的药物通常是光学活性或纯形式的单一异构体。然而，那些用化学方法合成的药物通常是根据不对称中心的数目由两个，四个或者更多异构体混合而成。因此，立体选择性在手性药物的

生物利用度、分配、与受体的相互作用、异构体活动中的代谢和消除过程中所产生的差异从不期望的毒性到毫无意义增大活性。 在过去的30年中，通过高效液相色谱法（HPLC）进行手性分离已经显得越来越重要。这可以通过以下两个方面得出： （a）间接进行手性分离的方法，包括在色谱分析法中通过一个非手性柱用一个手性衍生物试剂合成非对映异构体； （b）直接进行手性分离的方法，包括用手性固定相（CSPs）将外消旋药物拆分成相应的对映体。 基于手性固定相（CSPs）的直接分离方法因其可以快速、合适的用于分离外消旋酸盐而深受分析和制备行业的喜爱。自然形成和合成的手性固定相（CSPs）存在着广泛的多样性，绝大多数是用于商业（超过120种）。这些手性固定相（CSPs）中的很多在应用方面具有局限性。因此，多糖类固定相和其它固定相，如：化学键合的蛋白质、环糊精及其衍生物、Π-型和大环抗生素已经被证明是在高效液相色谱法进行手性药物的分离中最有用的固定相。 多糖类手性固定相是由Okamoto和他的课题组于1984年提出的，它可以通过纤维素涂料和直链淀粉衍生物在预处理二氧化硅上来制备。利用多糖型手性固定相（其结构如表1所示）时，对映体的拆分可以在正相和反相条件下完成，后者可以使用Chiralcel OD-R、Chiracel OJ-R 及最近提出的Chiralpack AD-R型手性柱。尽管多糖类固定相之间的手性差异机理还没有被圆满鉴定，但我们确信对映体结合产生的差异是由各种引力，如氢键、疏水相互作用、偶极相互作用和电荷传递

四合一检测仪器操作及维护规范

四合一检测仪器操作及维护规范 编制： 审核： 批准： 实施日期: 发布日期:

1目的 1.1为正常操作使用四合一，为测试作业提供指导。 1.2为了操作人员的人生安全、设备能够正常运行并延长其使用寿命而制定本 操作规范。 2适用范围 2.1适用于所有使用该测试仪进行测试动作的人员及其测试行为和设备维护人员。 3职责 3.1所有操作人员须严格遵守该操作规范；测试过程中如出现报警或异常情况，操作人员应及时通知设备负责人员处理，切勿随意自行处置。 4 工作内容 4.1测试内容 4.1.1将CD/进气压力调至0.7MP& 4.1.2检查设备无异常情况后，两人协助将测试样片抬上辅助上料架，并从左侧将样片推至贴紧右侧限位定位装置。 4.1.3软体操作界面下方菜单中选择［LOT OPERATION打开其选择界面。 4.1.4在［LOT OPERATION^择界面中，选择［RECIPE］，打开 Recipe Loading 界面。 4.1.5选择对应的RECIPE并确认OK 4.1.6返回LOT OPERATIO程序界面，点击 LOAD/UNLOAD钮运行基板的导入准备程序。 4.1.7选择“基板尺寸”，点击“ Load”按钮，基板导入程序启动。 4.1.8转动辅助上料台的手摇柄，将测试样片送至进出料门前，手摇柄旁的指 示灯闪烁，按下闪烁灯，进出料门开启，继续转动手摇柄送料，直到进料门的传感器侦测到样片，指示灯闪烁，按下闪烁灯，自动输送装置开启；待样片完全进入后，指示灯再次闪烁，按下指示灯，进出料门关闭，送料结束。 4.1.9软体界面点击“ Start ”，测试程序开始运行。 4.1.10待测试完成后，点击“ LOAD/UNLOAD,选择UNLOAD1始下载样片。 4.1.11手摇柄旁边指示灯闪烁，按下指示灯，进出料门打开，样片退至辅助上料

高效液相色谱法在手性药物拆分中的应用

高效液相色谱法在手性药物拆分中的应用 摘要：外消旋化合物的手性分离是获得单一对映体的方法之一。随着人们对纯光学药物的需求日益增加，各种手性分离技术得以快速发展。近几十年来，在这些手性分离技术中，高效液相色谱法( HPLC ) 被公认为是一种强大、快速、高效的分离技术，它已成功应用于对映体药物的分离分析和制备中。HPLC用于对手性药物分离的研究已取得很大进展，并且研发了大量可应用于手性小分子和聚合物分离的手性固定相，大大提高HPLC的手性识别能力。本文以HPLC的手性药物分离为焦点，介绍了近几年高效液相色谱法手性固定相的新发展和应用。关键词：高效液相色谱法手性药物手性拆分

Application of High Performance Liquid Chromatography in Chiral Separation of Pharmaceuticals Abstract：Resolution of racemic compounds is one of the potential ways of obtaining both enantiomers. The increasing demand for enantiopure drugs has led to the development of a variety of stereoselective separation technologies. Among several resolution techniques in the past few decades, high performance liquid chromatography ( HPLC ) is well recognized as a powerful, fast and efficient technique, which has been successfully employed for analysis and preparation of enantiomers of drugs. Enantioseparation by HPLC has significantly advanced, and a large number of chiral stationary phases ( CSPs ) for HPLC have been developed using both chiral small molecules and polymers with chiral recognition abilities. This review focuses on various HPLC methods for chiral separation of pharmaceuticals, many new developments and applications are introduced in chiral stationary phase of HPLC in recent years. Keywords：HPLC; Chiral drug; Chiral separation;

C18色谱柱维护 常识

【讨论】高效液相色谱柱的保护 各位同仁，为保证我们的分析效果，延长色谱柱的使用寿命，大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。 我先来聊聊，算是抛砖引玉了 1、最好用预柱。（但要注意，若有时出峰异常，要先看看是不是它有问题了） 2、每次做完分析，都要进行冲洗， 分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建议用90％甲醇冲洗30～60min； 若分析用流动相中含以上物质，要先用10％甲醇（或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水）冲洗1小时左右，再梯度走到90％甲醇冲洗30～60min（若用多元泵）。有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。 若长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存。 3、若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用，不能再做其它物质分析用。因色谱柱填料性质已与原来所不同，在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现。 4、尽量避免反冲，除非该色谱柱厂家明确说明允许。 5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。 6、定期测柱效，有下降，可以用10％异丙醇甲醇冲洗色谱柱。若柱效还没有改善，可以再生，甲醇－二氯甲烷－甲醇。 呵呵，还有的一时想不起来了，各位有经验的战友请发表高见！ 1．样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤，流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。 2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围 3．避免流动相组成及极性的剧烈变化。 4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。 5．每次测试完毕，要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱（分析色谱柱250×4.6mm柱体积3.2ml）。如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净，并保存于乙腈中。 6．压力升高是需要更换预柱的信号。 1：溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45μm） 2：样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45μm） 3：泵，进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装内置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器 4：柱内不溶物的形成：由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱；在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶；由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧，并保持室温恒定！ 还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生： 1 平衡色谱柱：反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。 硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或