关于胶回收
胶回收
一. 提高胶回收量的办法：
1）增加电泳时的上样量。
2）电泳缓冲液用新鲜配制的。
3）切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4）把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。
5）溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。
6）胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul （PH 5.0，3mol/L的 NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7）加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以
使乙醇充分挥发。
8）最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液
洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充
分洗脱结合在膜上的DNA。
9）可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴
10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。
10）将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
DNA胶回收实验技术总结
胶回收
一. 提高胶回收量的办法：
1）增加电泳时的上样量。
2）电泳缓冲液用新鲜配制的。
3）切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4）把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。
5）溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。
6）胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的 NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7）加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。
8）最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反
而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
9）可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。
10）将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
二. 几种PCR 产物回收的详方法和步骤
1）普通胶回收
如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。
2）从低熔点凝胶回收DNA
纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5
分钟保温，使凝胶完全溶解。待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。反复1-2次。取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。将纯化的DNA加适量TE溶解，测定含量，备用（可用于目的基因结构分析，探针制备等）。
3）扩增特异性好的PCR回收
如果PCR扩增特异性好，只是简单的PCR产物纯化回收，可以在PCR产物中加入50ug／ml 的蛋白酶K，37度1h，酚／氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入0.1体积的醋酸钠，2.5体积的无水乙醇沉淀回收。
三. 不需胶回收就可直接连接的方法
胶回收
除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点: (1)防止抽提过程中污染DNA酶 与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末 端时也会导致严重的连接困难. (2)紫外照射选择长波段 回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射. (3)实验操作要轻柔 特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离 心管等操作均应缓慢,轻柔. 综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础. 3 实验步骤 一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例) (1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率) (2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN) (3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀. (4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒. (5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟. (6)重复步骤5一次. (7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm 离心2分钟. (8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放 置2分钟. (9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA 片段. 胶回收 一. 提高胶回收量的办法： 1) 增加电泳时的上样量。 2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
汽车维修工程复习题及答案
《汽车维修工程》复习及答案题 一、名词解释 （1）汽车产品：包括整车、部件、零件。 （2）可靠性：产品在规定条件下，在规定时间内，完成规定功能的能力。 （3）可靠度：产品在规定条件下，在规定时间内，完成规定功能的概率。 （4）失效度：也称不可靠度，是指产品在规定条件下，在规定时间内丧失规定功能的概率。（5）汽车故障：是指汽车部分或完全丧失工作能力的现象。 （6）汽车的技术状况：是指定量测得的表征某一时刻汽车外观和性能的参数值的总和。（7）磨损：零件摩擦表面的金属在相对运动过程中不断损失的现象。 （8）黏着磨损：当金属表面的油膜被破坏，摩擦表面间直接接触而发生黏着作用，使一个零件表面的金属转移到另一个零件表面引起的磨损。 （9）疲劳磨损：在交变载荷作用下，零件表面产生疲劳剥落的现象。 （10）腐蚀磨损：零件摩擦表面由于外部介质作用，产生化学或电化学的反应而引起的磨损。（12）修理尺寸法：将待修配合副中的一个零件利用机械加工的方法恢复其正确的几何形状并获得新的尺寸，然后选配具有相应尺寸的另一配合件与之配合，以恢复配合性质的一种修理方法。 （13）附加零件修理法：也称镶套修理法。是通过机械加工的方法将磨损部分切去，恢复零件磨损部位的几何形状，然后加工一个套并采用过盈配合的方法将其镶在被切去的部位，以代替零件磨损或损失的部分，恢复到基本尺寸的一种修复方法。 （14）喷涂：是用高速气流将被热源熔化的金属雾化成细小的金属颗粒，以很高的速度喷敷到已准备好的零件表面上。 （15）喷焊：是用高速气流将氧-乙炔火焰加热熔化的自融合金粉末喷涂到准备好的零件表面上，并经再一次重熔处理形成一种薄而平整呈焊合状态的表面层-喷焊层。 （16）电镀：将金属工件浸入电解液中，以工件为阴极，通以直流电，在电流作用下，电解液中的金属离子析出，向工件表面扩散，并沉积在工件表面，形成金属镀层。 （17）汽车维护：采用相应的技术措施预防故障发生的作业。 （18）修理工艺过程：汽车修理可分为许多工艺作业，按规定顺序完成这些作业的过程称为汽车修理工艺过程。 （19）磁力探伤：是利用电磁原理检查铁磁性零件表面及近表面缺陷的一种无损探伤检测方法。 （20）静不平衡：是由于零件的质心偏离了其旋转轴线而引起的旋转振动现象 （21）动不平衡：是由于零件的质心偏离了其旋转轴线，或零件的惯性主轴与其旋转轴线不重合且不平衡质点还产生有力偶，从而引起的旋转振动现象 （22）汽车大修：是指发动机主要零件出现破损、断裂、磨损、变形，在彻底分解后，用修理或更换零件的方法，使其达到完好技术状况和使用寿命的恢复性修理。 （23）汽车小修：是指用修理或更换个别零部件的方法来消除发动机在运行中临时出现的故障，或针对维护作业中发现的隐患所进行的运行性修理。 （24）自动变速器失速工况：在前进档或倒档时，踩住制动踏板，并完全踩下加速踏板，发动机处于最大转矩工况，而变速器输入、输出轴静止，涡轮也是静止不动的，只有变矩器壳与泵轮随发动机转动，此工况就称为失速工况。 (25) 全面质量管理：全面的（全方位的）全员参加的，全过程的质量管理简称"三全"管理，又叫全面质量管理。
胶回收DNA注意事项
胶回收DNA注意事项 ①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。 ②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。 ③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。 ④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。 ⑤可以改用去离子水洗脱。但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。 ⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。 ⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。 ⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，
其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。 ⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。 关于胶回收切胶的一点注意事项 1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。 2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3. 关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果戴树脂眼镜就可以了。要是非常害怕紫外照射，或者对于胶有特殊要求，例如要求不含EB，可以采用点marker和带刻度的尺子一起照相的方法来确定目的条带在胶上的位置进行切胶。 4. 按照正常程序点marker跑胶，然后切下有marker的胶，EB染色，紫外灯下与带刻度的尺子一起照相。由于要回收的带与marker间的相对位置已知，根据尺子来衡量未染色胶上目的带的位置即可。如果觉得很难判断，可以直接在marker边点少量的样，这样位置就容易确定了。 胶回收
废旧橡胶回收利用的方法
来源于：财富网废旧橡胶回收利用的方法 废旧橡胶的回收利用主要有两种方法：通过机械方法将废旧轮胎粉碎或研磨成微粒，即所谓的胶粒和胶粉；通过脱硫技术破坏硫化胶化学网状结构制成所谓的再生橡胶。本文简单介绍一下胶粉的生产技术。 1、胶粉的制造方法 废橡胶的预加工。废旧橡胶制品中一般都会有纤维和金属等非橡胶骨架材料，加之橡胶制品种类繁多。所以在废旧橡胶粉碎前都要进行预先加工处理，其中包括分拣、去除、切割、清洗等加工。对废旧橡胶还要进行检验、分类，对不同类别、不同来源的废橡胶及其制品按要求分类，最理想是采用回收管理循环方法，根据废胶来源有目的地进行处理。对于废轮胎这类体积较大的制品，则要除去胎圈，亦有采用胎面分离机将胎面与胎体分开。胶鞋主要回收鞋底，内胎则要除去气门咀等。 经过分拣和除去非橡胶成分的废橡胶，由于长短不一，厚薄不均，不能直接进行粉碎，必须对废橡胶切割。国外对轮胎普遍采用整胎切块机切成25MMX25MM不等胶块。 废橡胶特别是轮胎、胶鞋类制品，由于长期与地面接触，夹杂着很多泥沙等杂质，则应先采用转桶洗涤机进行清洗，以保证胶粉的质量。 冷冻粉碎法。低温冷冻粉碎法的基本原理是：橡胶等高分子产材料处在玻璃化温度（TG）以下时，它本身脆化，此时受机械作用很容易被粉碎成粉末状物质，硫化胶粉即按此原理制成的。 冷冻粉碎工艺有两种：一种是低温冷冻粉碎工艺。另一种是低温和常温并用粉碎工艺。前者是利用液氮为制冷介质。使废橡胶深冷后用锤式粉碎机或辊筒粉碎机进行低温粉碎。微细橡胶粉生产线即是采用后一种方法进行生产的。利用液氮深冷技术把废旧轮胎加工成80目以上的微细橡胶粉，其生产过程中的温度、速度、过载均为闭环连锁微机控制，对环境无污染。该生产线的生产全过程均采用以压缩空气为动力的送料器和封闭式管道输送，除废旧轮胎投入和产品包装时与空气接触外，全线均为封闭状态。另外，由于采用冷冻法生产，无高温气味，所以不产生二次污染。并通过微细胶粉和粗粉的热交换过程达到了充分利用能源、降低能耗即降低产品成本的目的。 常温粉碎法。废橡胶经过预加工后进行常温粉碎，一般分粗碎和细碎。目前中国的再生胶工厂中常采用两种粉碎方式，一种是粗碎和细碎在同一台设备上完成；另一种是粗碎和细碎在两台不同的设备上完成。前者适合于小型工厂的生产厂生产。 粗碎和细碎同时进行的方式：进行该操作的两个辊筒其中一个表面带有沟槽，另一个表面无沟槽，即为沟光辊机。首先通过输送带将洗涤后的胶块送入两辊筒间进行破胶，然后将破碎后的胶块和胶粉落入设备底部的往复筛中过筛，达到粒度要求的从筛网落下，通过输送器入仓；未达到要求的胶块，通过翻料再进入沟光辊机中继续进行破碎。
各种胶黏剂的分类以及优缺点的介绍
白乳胶（其主要成分： 聚醋酸乙烯） a普通型白乳胶： 广泛用于木器、胶合板、水泥砂浆、纸张、布、皮革等的黏结。 b新型复合白乳胶： 用于木器、胶合板、水泥砂浆、纸张、布、皮革等的黏结。 优点： 可常温固化、固化速度较快、粘接强度较高，粘接层具有较好的韧性和耐久性且不易老化；安全、无毒、不燃、清洗方便；对木材、纸张和织物有很好的黏着力，胶接强度高；固化后的胶层无色透明，韧性好，不污染被粘接物。 缺点： 耐水性和耐湿性差，易在潮湿空气中吸湿；在高温下使用会产生蠕变现象，使胶接强度下降；在-5℃以下储存易冻结，使乳液受到破坏。 淀粉胶黏剂 代替水玻璃黏合工业用纸箱等。（但目前淀粉胶仍高于水玻璃胶价格。） 优点： 无毒、无味、对环境无污染。施胶方便，不需专门设备，一次性涂布量低。 缺点： 易霉变、虫蛀；黏度偏低，流动性较大，胶黏剂剂量不稳定；干燥速度较慢，大批量机械化作业有—定难度；储存稳定性较差，易凝胶；粘接性能偏低。 水玻璃（俗称泡花碱）
粘结力强、强度较高，耐酸性、耐热性好； 缺点： 耐碱性和耐水性差；具腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤。 酚醛树脂胶黏剂 a水溶性酚醛树脂胶黏剂（未改性）： 用于胶合板制造。 b醇溶性酚醛树脂胶黏剂： 用于胶合板制造、木器的粘接修补。 c改性间苯二酚-甲醛树脂胶黏剂： 适用期约16h，对木材、尼龙有一定的粘结力，主要用于粘接木材与塑料、橡胶、金属等。 d酚醛-xx腈胶黏剂： 广泛用于汽车和飞机工业中。 优点： 胶接强度高；较好的耐热、耐老化性；耐水、耐化学介质和耐霉菌，特别是耐沸水性能；尺寸稳定性好；电绝缘性能优良。 缺点： 脆性大，剥离强度低，不适于作结构胶粘剂使用；固化时间较长，固化温度高。 脲醛树脂胶黏剂 广泛用于制造胶合板、压层板、装饰板、木结构家具和碎木板等。
DNA胶回收中常见问题和解答
1、如何计算提取率 1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率； 2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比； 3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。 2、如何简易测算提取率 取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。 3、如何看待提取得率 影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。 4、回收率为什么与点样量和片段大小有关 DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。 5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因 1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例；
2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收； 3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内； 4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率； 5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好； 6）回收前的样品量太少，加大点样量； 7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。 6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象 1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶； 2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收； 3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。 7、琼脂糖凝胶块不溶 1）琼脂糖质量不好； 2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃； 3）制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
胶回收方法全攻略
胶回收方法全攻略 说到电泳凝胶的片断回收，想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。确实，一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里，从琼脂糖凝胶中回收DNA，仅仅是一种简单不过的常规实验操作。虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的，每个实验室也有自己的独门秘诀，可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用途，不同价钱的快速凝胶回收试剂盒，一下子将胶回收的时间缩短到10多分钟，操作也大大简化，胶回收就变成“小菜一碟”了。然而，从bbs逛上一圈下来，发现实际上还是有不少人为胶回收这种看似简单的操作而 烦恼。到底是什么导致了实验新手，甚至是老手在这个已经发展近40年的常规性实验中卡壳?由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验——比如 酶切连接、转化筛选、测序或者PCR 扩增、标记乃至显微注射等等，为大家搜罗各种产品和方法的优缺点，注意事项，做一个胶回收全攻略篇。 一、胶回收的关键参数 胶回收的质量直接影响后继实验的成功与否。要想做好胶回收，无论是自己亲力亲为还是借助目前五花八门的胶回收试剂，最基本的评定标准无外乎这么几个:质量( 回收产物的纯度和浓度)，回收效率，操作方便(速度)，柱子的载量等等。 回收产物质量：回收产物的质量主要指纯度。常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，会强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。从凝胶中回收DNA片断，产物的纯度自然是我们考虑的第一要务。对于大片断DNA回收，质量还包括了产物的完整与否，如果机械剪切力使得回收产物大小不一致，后果决不是你希望碰见的。而对于较小片断回收，质量其实还包括了回收产物的浓度。因为产物浓度太小，对后继实验同样也有影响，比如连接、标记实验等等就很不爽，往往不得不再浓缩一次，增加了操作的复杂性。此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。 回收率：回收得率，是我们考虑的另一个重要参数。由于上电泳的样品量通常都很少，电泳的过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低;又比如说，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。值得注意的是，由于样品的大小和多少对回收率都有显著的影响，所以回收率并非是一成不变的。 其他：操作方面，相信大家都会比较喜欢操作简单，快速，应用起来方便的方法或者产品。比如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计;离心过柱就比离心沉淀要简单方便。载量，就是每次回收最多能回收的产物的量。这个自然是越大越好了，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质，过量的产物吸附不了就是被浪费掉的。难免有时你需要回收比较大量的产物，大载量就很有优势——同一个片断你要用2个柱子，多郁闷啊。
厌氧胶比较常见问题及处理
厌氧胶比较常见问题及处理 随着工业的快速发展，厌氧胶已成为机械行业不可缺少的液体工具，而且厌氧胶在航空航天、军工、汽车、机械、电子、电气等行业有着很广泛的应用。在广泛的应用中，我们总会遇到关于厌氧胶各种各样的问题，如它的固化时间、它的包装、它的颜色等，下面我们一起来看看比较常见的问题，并解决这些问题。 1、可以用什么溶剂来清除液态厌氧胶产品？ 回答：大多数有机溶剂都对去除厌氧类和丙烯酸类产品有效。氯类溶剂是最常用的。 2、厌氧胶类产品需要多长的固化时间？ 回答：厌氧胶不含溶剂（溶剂需要干）。厌氧胶的固化必须接触到金属离子并且在缺氧状态。在粘接点外部，厌氧材料无法完全固化。粘接点内部，固化速率取决于产品和促进剂的种类，加热可以加速固化过程。 3、为什么50ml和250ml的厌氧胶其瓶子仅装一半？ 回答：实际上其瓶子里已经有50ml和250ml的产品。仅装一半的瓶子是为了让空气起到隔绝的作用，以防止厌氧胶固化。50ml和250ml 瓶子设计同时让空气渗入以让厌氧胶进行呼吸作用。 4、颜色代表什么意义？ 回答：厌氧胶经常被称为“红色或蓝色物品”。对于螺纹锁固胶，颜色代表强度。通常红色代表高强度，蓝色代表中强度，紫色代表低强度。其他颜色在不同产品领域中代表不同强度。 5、厌氧胶在冬季变得很稠，固化速度也比较慢？ 回答：这是缺氧胶的固有特性，气温降低，粘度变大，固化时间延长。在-5℃以下如用于非活性金属，会出现固化不完全；气温升高，粘度变小，固化时间缩短。如将操作地点改在温暖的环境，问题可解决。 6、有用户反应经常使用的缺氧胶突然锁紧强度下降？ 回答：经调查，有的客户为防止库存螺纹件生锈而涂上防锈油或其它油，或要求供货商所供螺纹件涂上油脂，装配时又未作除油处理所致。经除油处理后问题解决。
琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法
琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法 琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法20世纪70年代是一个奠定现代分子生物学的时代，1973年冷泉港实验室的Joseph Sambroo k和Phillip Sharp发明了利用琼脂糖凝胶分离DNA 和EB染料观测DNA 相结合的技术。现在，琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。这里首先介绍的是琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法： 1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。但是这个方法不适合用于大片断的回收。 2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，Buffer溶解，（区别在于这里）加入纯化填料填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片断释放出来，离心，取上清，
就是回收的产物。这个方法适合各种不同大小的片断，特别是大片断的回收，但是操作就较前者复杂一些，涉及到多次离心沉淀和取上清，有可能会误吸了微量的沉淀；另外干燥的程度也有点技巧，干过了不好洗脱，没干透又影响结果。后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，这样就避免了上述的问题。 3.低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，现在用的人已经不多了。想当年经费紧张的时候，低熔点琼脂糖贵，不舍得这么浪费的，比较取巧省钱的法子就是常规琼脂糖电泳后，在目的条带前方挖槽，灌入低熔点琼脂糖，凝胶后再电泳一小会儿，等条带进入低熔点琼脂糖区域再将那块家伙切出来，就可以非常非常节约了。除了直接酚抽低熔点琼脂糖凝胶，还有人用琼脂糖酶来消化琼脂糖凝胶，条件也相当温和，只是那酶价格并不便宜（光那酶的成本就至少5-6块，还不算其他的麻烦事），多数的酶只适合用低熔点琼脂糖，问题是我不用酶也可以直接酚抽，费时间还特长，所以，并不觉得特别好用。后来据说T家的琼脂糖酶可以用于常规琼脂糖，前提是你有办法在65度把那胶化了。但那需要极好的耐心。
废橡胶回收
废橡胶现状及回收 橡胶材料在硫化后具有粘弹性、高弹性和电绝缘性，耐久性和耐溶剂性等性能都很优越，广泛应用于人们的生活和生产，其中在汽车轮胎和胶鞋等方面使用最多[1]。橡胶在硫化以后是一种热固性聚合物，由于它在硫化成型过程中，分子链间形成交联键，使整个分子呈空间网络状结构。受到分子链间交联键的作用，分子链无法移动，使橡胶材料不能溶于相关的溶剂中，在加热以后也不会熔化，使其在使用过后难以进行回收成型利用[2]。随着我国工业、农业跟交通运输的高速发展，橡胶的消耗量越来越大。目前，在废旧高分子材料中，废旧橡胶所占的比重仅次于废旧塑料的，其中又以废旧轮胎为主。由于废橡胶不会自然分解，使得废橡胶的量非常接近于橡胶的生产量，大量废旧轮胎的堆积和不适当处理，在造成资源浪费的同时，还严重的污染环境，造成“黑色污染”。将废旧轮胎进行适当处理和资源回收，不仅能够保护环境，还关系到高分子材料工业是否可持续发展[3]。 截至2011年，全球橡胶产品的总量已经达到了3100万吨，实现橡胶资源的回收再生利用，或者对废旧橡胶产品进行回收改性再利用，既能减少全球橡胶产品的生产和消耗，又能使产品广泛应用于其它领域，具有非常大的经济效益[2]。目前，脱硫、回收废橡胶的主要方法是通过物理、化学、微生物等方式使其脱硫化、解交联，将交联网络结构转变为线性可塑结构[4]。废橡胶具有很多的利用途径： 表1-1. 废橡胶综合利用的途径 1.1 废橡胶利用现状 目前，全世界每年产生的废橡胶有1000多万吨，而我国每年生产废橡胶约80
万~100万吨，自2002年起，我国的橡胶消耗量已经超过美国，持续成为世界第一大橡胶消耗国。同时，我国的橡胶资源非常紧缺，橡胶产量供不应求，充分回收利用我国的废旧橡胶资源，可以很大程度地缓解我国橡胶资源贫乏状况。橡胶再生利用主要是将废橡胶制成再生胶或者胶粉[5]。 目前国内废橡胶的回收利用状况与国外正好相反，国外的废橡胶利用是以废胶粉为主再生胶为辅，而国内废橡胶主要是用于制造再生胶，我国是再生胶生产第一大国，年产量已超过30万吨。尽管我国的再生胶生产已经较好的处理里国内生产的废橡胶，同时还解决了部分的环境污染问题，但是仍存在能耗大、效率低、生产流程长、工作条件差等缺点[2]。 在20世纪80年代后期，我国的胶粉生产开始起步，90年代时慢慢步入活跃期，使用不同的生产工艺陆续建成了一批工厂，并且有国有企业已在美国、加拿大和澳大利亚等国建设了胶粉厂，但由于我国废橡胶是有偿使用的，且废橡胶冷冻粉碎工艺的制冷剂液氮价格昂贵，导致国内橡胶冷冻粉碎技术的发展非常艰难，使得我国的胶粉生产的规模小，产量低，产业发展十分缓慢[6]。 1.2 橡胶的回收机理 橡胶的相对分子质量为10~100万，它在大的变形下能够迅速的恢复其变形，并且能够被改性，即硫化。硫化是指通过一定的温度、压力和时间后，使橡胶大分子与硫磺等物质发生化学反应，并交联形成具有三维网络状结构的高分子弹性体。因此，要把具有网络状结构的硫化橡胶再生成为具有线塑性结构的高分子材料，必须要选择性地破坏橡胶分子中已形成的交联键，即“脱硫”。橡胶再生的目的，就是通过物理、化学或其他的手段，把已硫化橡胶尽可能地还原为未硫化状态，即将橡胶中的多硫化物逐步转化一硫化物，最后将一硫化物切断，使其最终成为具有原来橡胶塑性的再生胶[7]。由于在脱硫过程中，橡胶主链有可能会与橡胶交联键同时被切断，导致主导橡胶性能的结构遭到破坏，使再生橡胶的分子量下降，影响其再使用性能，所以在脱硫过程中，要尽可能的保护C-C本身不被破坏，使交联键发生选择性断裂。
不锈钢及金属管道密封胶
密封胶又名无氧胶、厌氧胶、机械胶，它与氧气或空气接触时不会固化，一旦隔绝空气后就迅速聚合变成交联状的固体聚合物，可以作用于不锈钢及金属管道。下面由螺纹密封胶产品销售中心曼伦自动化为大家介绍一下这款产品的主要类型有哪些，帮助大家对该产品有正确的把握。 密封胶粘剂是由多种成分组成，特别是单体千变万化，其中每种成分的变化都有可能获得新的性能，因此厌氧胶的品种甚多，其分类方法也不统一。一般情况下可按单体的结构、单体的类别和强度、粘度分类，也有按用途分类的。较常见的分类方法是按单体的结构和用途分类法具体地说，按其结构可分为四类。
（1）醚型以双甲基丙烯酸三缩四乙二醇酯为代表的结构。 （2）醇酸酯常见的有双甲基丙烯酸多缩乙二醇酯；甲基丙烯酸羟乙酯或羟丙酯。 （3）环氧酯其由各种结构的环氧树脂与甲基丙烯酸反应的产物。常见的有双酚A环氧酯（如国产Y-150、GY-340等是环氧酯与多缩乙二醇酯的混合物）。 （4）聚氨醋其由异氰酸酯、甲基丙烯酸羟烷基酚和多元醇的反应产物。实际上厌氧胶的产品很多是混合物或是复杂的组成物，是难以简单分类的。 还有一种分类方法，按用途可分为紧固件锁紧和密封、法兰面和
管接头的密封、粘接固持和浸渗堵漏等。这种分类方法简单明了，易记易用，特别容易为用户所接受。尽管胶种有多种用途，但总有一种主要的用途可以作为分类的依据。 安徽曼伦自动化设备有限公司是一家专业代理经销品牌工业电气自动化产品服务商，集科工贸于一体的系统集成商，公司代理汉高旗下经营汉高旗下乐泰Loctite、泰罗松teroson等厌氧胶、快干胶、聚氨酯、硅橡胶等粘合剂。 同时，该公司广泛服务于汽车、电力、电子、冶金、化工、太阳能、水泥、造纸、船舶、卷烟、纺织、机床、包装机械、印刷机械、橡胶机械、物流设备等行业，以货期快，服务好，价格优惠等优势赢得了广大客户的支持与信任。如果您想进一步了解，可以直接点击官网曼伦自动化进行在线咨询。
废旧橡胶回收利用的方法
来源于：注塑财富网https://www.360docs.net/doc/3a13677537.html, https://www.360docs.net/doc/3a13677537.html, 废旧橡胶回收利用的方法 废旧橡胶的回收利用主要有两种方法：通过机械方法将废旧轮胎粉碎或研磨成微粒，即所谓的胶粒和胶粉；通过脱硫技术破坏硫化胶化学网状结构制成所谓的再生橡胶。本文简单介绍一下胶粉的生产技术。 1、胶粉的制造方法 废橡胶的预加工。废旧橡胶制品中一般都会有纤维和金属等非橡胶骨架材料，加之橡胶制品种类繁多。所以在废旧橡胶粉碎前都要进行预先加工处理，其中包括分拣、去除、切割、清洗等加工。对废旧橡胶还要进行检验、分类，对不同类别、不同来源的废橡胶及其制品按要求分类，最理想是采用回收管理循环方法，根据废胶来源有目的地进行处理。对于废轮胎这类体积较大的制品，则要除去胎圈，亦有采用胎面分离机将胎面与胎体分开。胶鞋主要回收鞋底，内胎则要除去气门咀等。 经过分拣和除去非橡胶成分的废橡胶，由于长短不一，厚薄不均，不能直接进行粉碎，必须对废橡胶切割。国外对轮胎普遍采用整胎切块机切成25MMX25MM不等胶块。 废橡胶特别是轮胎、胶鞋类制品，由于长期与地面接触，夹杂着很多泥沙等杂质，则应先采用转桶洗涤机进行清洗，以保证胶粉的质量。 冷冻粉碎法。低温冷冻粉碎法的基本原理是：橡胶等高分子产材料处在玻璃化温度（TG）以下时，它本身脆化，此时受机械作用很容易被粉碎成粉末状物质，硫化胶粉即按此原理制成的。 冷冻粉碎工艺有两种：一种是低温冷冻粉碎工艺。另一种是低温和常温并用粉碎工艺。前者是利用液氮为制冷介质。使废橡胶深冷后用锤式粉碎机或辊筒粉碎机进行低温粉碎。微细橡胶粉生产线即是采用后一种方法进行生产的。利用液氮深冷技术把废旧轮胎加工成80目以上的微细橡胶粉，其生产过程中的温度、速度、过载均为闭环连锁微机控制，对环境无污染。该生产线的生产全过程均采用以压缩空气为动力的送料器和封闭式管道输送，除废旧轮胎投入和产品包装时与空气接触外，全线均为封闭状态。另外，由于采用冷冻法生产，无高温气味，所以不产生二次污染。并通过微细胶粉和粗粉的热交换过程达到了充分利用能源、降低能耗即降低产品成本的目的。 常温粉碎法。废橡胶经过预加工后进行常温粉碎，一般分粗碎和细碎。目前中国的再生胶工厂中常采用两种粉碎方式，一种是粗碎和细碎在同一台设备上完成；另一种是粗碎和细碎在两台不同的设备上完成。前者适合于小型工厂的生产厂生产。 粗碎和细碎同时进行的方式：进行该操作的两个辊筒其中一个表面带有沟槽，另一个表面无沟槽，即为沟光辊机。首先通过输送带将洗涤后的胶块送入两辊筒间进行破胶，然后将破碎后的胶块和胶粉落入设备底部的往复筛中过筛，达到粒度要求的从筛网落下，通过
琼脂糖凝胶电泳常见问题分析
琼脂糖凝胶电泳常见问题分析
DNA凝胶电泳简介 一、实验原理 DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类：
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。 2、琼脂糖凝胶电泳可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。电泳结果用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。 二、琼脂糖凝胶 琼脂糖是从琼脂中分离得到，由1，3连接的吡喃型b-D-半乳糖和1，4连接的3，6脱水吡喃型阿a-L-半乳糖组成，形成相对分子量为104～105的长链。琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成孔径结构，而随着琼脂糖浓度不同形成不同大小的孔径。表1给出了不同浓度凝胶对DNA片段的线性分离范围。 表1不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围 由于琼脂糖凝胶是通过氢键的作用，因此过酸或过碱等破坏氢键形成的方法常用于凝胶的再溶化，象NaClO4能用于凝胶的裂解，一般的凝胶回收试剂盒利用的也是这一原理。 随着实验技术的发展，也针对不同用途开发了各种类型的琼脂糖凝胶：（1）低熔点琼脂糖凝胶，用于DNA片段的回收，且由于该种凝胶中无抑制酶，可在胶中进行酶切、连接等；（2）高熔点凝胶，可分离小于1kb的DNA片段，专用于PCR产物的分析；（3）快速凝胶，电泳速度比普通凝胶中快一倍，可节省实验时间；（4）适用于DNA大片段的分离。（5）其它类型。各生产商还开发很多类型的凝胶，可根据实验要求选择不同类型的，选择原则是考虑合适的机械强度和熔点。
最新切胶回收的步骤
精品好文档，推荐学习交流 切胶回收的步骤 1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul） 2．尽量切碎凝胶 3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液，55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化， 4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min， 5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4） 6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清 7．重复步骤6，尽量去除上清，完全风干至不残留乙醇味道； 8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min 9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液， 重复8，9初一语文讲义 辨析和修改病句的基本方法 辨析并修改病句是语文实际运用能力的具体表现之一，也是中考中长“考”不衰的常青树。本专题主要就是帮助学生了解句子的致病原因，掌握辨析和修改病句的基本方法，提高“诊断和施治”的能力。 “病句的辨析及修改”是近年来各地中考的重点，也是难点。这类题的主要考查方法有客观题和主观题两种。病句的辨析一般以客观选择题出现。这是一种比较传统的考察题型，它面广量大，仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢1
精品好文档，推荐学习交流 以思维见长，是近年中考中常见的题型，也是学生最易失分的题目，这就要求同学们复习过程中要重视这一类题的复习和训练。 主观题多指修改性的题目，多用于对句子或文段的修改。不仅要求学生们了解这是病句，是什么样的病句，而且要求知道如何修改，难度更大。目前学生对病句尚处于感性认识的阶段，而且这种认识是分散和不完全的，往往还不能自觉地综合应用，这一专题的复习指导是非常必要的。 一、何为“病句” 如果一个句子文不从，字不顺，不合乎语法规范，那它就有语病。通俗地说就是，凡是读起来不通顺，感觉别扭、含混不清的句子都是病句。 二、如何辨析病句 （1）感读——凭语感，凡是读起来别扭，听起来含混的，就可能有语病。 如：她有一个女儿，同许多年轻的妈妈一样，愿意把孩子打扮的漂亮一些。 10． 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2
废旧橡胶回收利用的方法
废旧橡胶回收利用的方法 Prepared on 24 November 2020
来源于：财富网 废旧橡胶回收利用的方法 废旧橡胶的回收利用主要有两种方法：通过机械方法将废旧轮胎粉碎或研磨成微粒，即所谓的胶粒和胶粉；通过脱硫技术破坏硫化胶化学网状结构制成所谓的再生橡胶。本文简单介绍一下胶粉的生产技术。 1、胶粉的制造方法 废橡胶的预加工。废旧橡胶制品中一般都会有纤维和金属等非橡胶骨架材料，加之橡胶制品种类繁多。所以在废旧橡胶粉碎前都要进行预先加工处理，其中包括分拣、去除、切割、清洗等加工。对废旧橡胶还要进行检验、分类，对不同类别、不同来源的废橡胶及其制品按要求分类，最理想是采用回收管理循环方法，根据废胶来源有目的地进行处理。对于废轮胎这类体积较大的制品，则要除去胎圈，亦有采用胎面分离机将胎面与胎体分开。胶鞋主要回收鞋底，内胎则要除去气门咀等。 经过分拣和除去非橡胶成分的废橡胶，由于长短不一，厚薄不均，不能直接进行粉碎，必须对废橡胶切割。国外对轮胎普遍采用整胎切块机切成 25MMX25MM不等胶块。 废橡胶特别是轮胎、胶鞋类制品，由于长期与地面接触，夹杂着很多泥沙等杂质，则应先采用转桶洗涤机进行清洗，以保证胶粉的质量。
冷冻粉碎法。低温冷冻粉碎法的基本原理是：橡胶等高分子产材料处在玻璃化温度（TG）以下时，它本身脆化，此时受机械作用很容易被粉碎成粉末状物质，硫化胶粉即按此原理制成的。 冷冻粉碎工艺有两种：一种是低温冷冻粉碎工艺。另一种是低温和常温并用粉碎工艺。前者是利用液氮为制冷介质。使废橡胶深冷后用锤式粉碎机或辊筒粉碎机进行低温粉碎。微细橡胶粉生产线即是采用后一种方法进行生产的。利用液氮深冷技术把废旧轮胎加工成80目以上的微细橡胶粉，其生产过程中的温度、速度、过载均为闭环连锁微机控制，对环境无污染。该生产线的生产全过程均采用以压缩空气为动力的送料器和封闭式管道输送，除废旧轮胎投入和产品包装时与空气接触外，全线均为封闭状态。另外，由于采用冷冻法生产，无高温气味，所以不产生二次污染。并通过微细胶粉和粗粉的热交换过程达到了充分利用能源、降低能耗即降低产品成本的目的。 常温粉碎法。废橡胶经过预加工后进行常温粉碎，一般分粗碎和细碎。目前中国的再生胶工厂中常采用两种粉碎方式，一种是粗碎和细碎在同一台设备上完成；另一种是粗碎和细碎在两台不同的设备上完成。前者适合于小型工厂的生产厂生产。 粗碎和细碎同时进行的方式：进行该操作的两个辊筒其中一个表面带有沟槽，另一个表面无沟槽，即为沟光辊机。首先通过输送带将洗涤后的胶块送入两辊筒间进行破胶，然后将破碎后的胶块和胶粉落入设备底部的往复筛中过筛，达到粒度要求的从筛网落下，通过输送器入仓；未达到要求的胶块，通过翻料再进入沟光辊机中继续进行破碎。
DNA胶回收中常见问题和解答
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1、如何计算提取率？ 1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率； 2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比； 3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响，请仔细操作，以减小误差。 2、如何简易测算提取率？ 取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10，与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳，肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度，粗略测算回收率（如亮度只有一半时，其回收率可粗略为50%）。 3、如何看待提取得率？ 影响回收率的因素很多，如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等，所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏，最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验，结果相对真实。 4、回收率为什么与点样量和片段大小有关？ DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。 5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因？
1）胶块溶解不完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例； 2）胶块体积太大，应使用枪头捣碎，还不能充分溶解则先将其切为小块，分多次回收； 3）紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内； 4）洗涤液使用后未及时盖严瓶盖，乙醇挥发，影响回收效率； 5） TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜，失去了缓冲能力，导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力，应及时更换电泳缓冲液，最好使用新鲜配制的电泳缓冲液，效果更好； 6）回收前的样品量太少，加大点样量； 7）洗脱前，预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。 6、加入溶胶液温浴后，液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象？ 1）胶块溶解不充分，可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶； 2）胶块体积过大，应尽量切除多余部分，并将其切为小碎块，分几次回收； 3）水浴温度是否达到规定温度65℃，用温度计检测。 7、琼脂糖凝胶块不溶？ 1）琼脂糖质量不好； 2）含目的片断的凝胶在空气中放置过久，使胶块失水干躁，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃；
PCR产物胶回收实验
实验六 PCR产物胶回收实验 一、实验目的 1. 掌握胶回收的常规操作 2. 了解胶回收PCR产物的目的 二、实验原理 利用胶回收试剂盒纯化PCR产物。本试剂盒提供一个从TBE或TAE电泳缓冲液配制的琼脂糖凝胶中提取高质量DNA的简单、快速、有效的技术，适合从浓度≤3%，高，低熔点琼脂糖凝胶中，回收长度为60bp~23Kb的DNA片段，小于100bpDNA片段回收率为10%~55%，0.1~10kbDNA片段回收率最大为99%，大于10kbDNA片段回收率为20~70%。回收的基因组DNA可以应用到克隆，测序，限制性酶切等各类下游分子生物学实验。 三、试剂及配套设备和材料 3.1 试剂 Extraction buffer Wash buffer Elution buffer 3.2 配套设备和材料 无菌1.5ml离心管各种规格移液器和无菌移液器吸头 无水乙醇异丙醇可能需要3M KAc (pH 5.0) 离心机 四、基本技术参数 五、操作步骤 1. 用干净、锋利的手术刀，将含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶切下，并放入1.5或 2.0 ml离心管中。 请尽量切去不包含DNA片段的凝胶。一般情况下，电泳的DNA上样量≥50 ul （50ul为最终洗脱体积）。
2. 按1：3的比例（凝胶质量毫克数：融胶液体积微升数）加入Extraction buffer。 例如：100mg凝胶应加入300ul Extraction Buffer。对于每人份试剂用量，凝胶质量不能超过400mg。 3. 于恒温水浴或金属浴中50℃温育，直到凝胶融化。 一般温育时间为10分钟，温育过程中没隔2-3分钟混匀一次。如果温育后，混合液体颜色变紫，请加入10 ul 3M KAc （pH 5.0），使混合液颜色变回黄色。 4. 可选：按1：1的比例（凝胶质量毫克数：异丙醇体积微升数）加入异丙醇，并混合均匀。 如DNA片段大于500bp/小于4kb，不需要加异丙醇。 5. 将混合液全部转移到Spin column内，于6,000g离心1分钟，并弃去接液管内液体。 如混合液体积大于750ul可先转移750ul，其余的液体待离心弃液后，再转移。 6. 向Spin column内加500ul Extraction Buffer，于12，000g离心30~60秒，并弃去接液管内液体。 7. 向Spin column内加750ul Wash Buffer，于12，000g离心30~60秒，并弃去接液管内液体。 如果回收的DNA片段将用于盐浓度敏感的实验，请在加入Wash buffer后静置2~5分钟，再离心。 8. 再次于12,000 rpm离心1分钟，然后将spin column转移到无菌的1.5ml离心管中。 如不进行该步离心，则无法保证离心柱内残液被彻底清除。 9. 向Spin column内加50ul Elution Buffer、水或TE溶液，并于室温静置1分钟。 可根据实验的实际需要决定Elution Buffer用量。但不要低于20ul。 10. 于12，000g离心1分钟，微量离心管内溶液中含有目的DNA片段。 回收的DNA可直接用于各类下游分子生物学实验，如果不立即使用，请保存于-20℃。 六、注意事项 1. 为了保证没有外源DNA的污染，电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌。 2. 为了减少胶的体积，我们可以用相对比较薄的胶来跑电泳，这样可以减少回收试剂引起的一些后续麻烦。