第六章 保健食品安全性毒理

第六章保健食品安全性毒理学与功能学评价研究

学习目的

把握保食品安全评价基本方法:握保健食品功能评价方法及一盘要求;热保使食晶安全性与功诉价的一般要求;了保食品安全性与功能评价的相技术規范。

学习要点

保健食品毒理学评价原则、试验阶段与试验原、试内容与结果判定原则;保食品功能评价方法的一般要求。

第一节保健食品安全性毒理学与功能学评价一般要求

保健食品的评价，包括毒理学评价，功能学评价和卫生学评价。保健食品声称具有保健功能.应当具有科学依据，不得对人体产生急性、亚急性或者慢性危害。这是对保健食品的基本要求。首先，保健食品所声称的保健功能应当具有科学依据要建立在科学研究的基础上，有充足的研究数据和科学共识作为支撑，不能随意声称具有保健功能。其次，保健食品应当保证安全性，保健食品不得对人体产生任何健康危害。保证保健食品安全性应该从以下三个方面考虑:D保健食品所使用的原料应当能够保证对人体健康安全无害，符合国家标准和安全要求:②国家规定不可用于保键食品的原料和辅料、禁止使用的物品等不得作为保健食品的原料和辅料③依法注册的保健食品，注册时应当提交保健食品的研发报告、安全性和保健功能评价等材料及样品，并提供相关证明文件;依法备案的保健食品，备案时应当提交表明产品安全性和保健功能材料。在本章中将介绍与保健食品安全性相关的保健食品原料要求、保健食品安全性评价方法、，食品安全毒理学评价程序及方法，与保健食品功能性相关的功效评价原则及方法。保健食品的卫生评价则与普通食品相似，这里不再赘述。

新修订的保健食品原料目录中，已将单一物质的名单扩充为包括原料名称、用量和对应的功效的完整目录，以保障产品的安全和保健功能。保健食品的用量是指保证保健食品安全性和具备相应保健功能应当达到的最低和最高限量。功效是指保健食品原料在一定用量下的功效。原料或者用量的改变都有可能导致功效的改变。部分普通食品原料纳入了保健食品原料目录，保健食品原料目录中不仅规定了原料名称，还规定了原料的用量和对应的功效。因此，列入保健食品原料目录的原料及用量和对应的功效只能用于保健食品生产，不能用于其他食品生产。

第二节保健食品安全性毒理学评价方法

概述

(一)保健食品毒理学评价原则

对保健食品的毒理学评价是确保人群食用安全的前提，该评价应严格按照卫生部(食品安全性毒理学评价程序和方法》进行、主要评价食品生产、加工、贮藏、运输和销售过程中使用的化学和生物物质以及在这些过程中产生和污染的有害物质，食物新资源及其成分和新资源食品。对于保健食品原则上必须进行卫生部《食品安全性語理学评价程序和方法中規定的第一、三阶段的理学试验，必要时进行三、四阶段的毒理学试验。

(二)受试物要求

1.以单一已知化学成分为原料的受试物、应提供受试物(必要时包括其杂质)的物理、化学性质(包括化学结构、纯度、稳定性等)。含有多种原料的配方产品，应提供受试物的配方，必要时应提供受试物各组成成分，特别是功效成分或代表性成分的物理、化学性质(包括化学名称、结构、纯度、稳定性、溶解度等)及检测报告等有关资料。

2.提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量、使用说明书等有关资料。

3.受试物应是符合既定配方和生产工艺的规格化产品，必须是在保健食品CMP认证车间生产的中试规模以上的样品，其组成成分、比例及纯度应与实际产品相同。

(三)受试物处理要求

对保健食品检验进行试验时应针对试验特点和受试物的理化性质进行相应的样品处理。

1.介质选择介质是帮助受试物进入实验系统或动物体内的重要媒介。应选择适合于受试物的溶剂、乳化剂或助悬剂。所选溶剂、乳化剂或助悬剂本身应不产生毒性作用，与受试物各成分之间不发生化学反应，且保持其稳定性。一般可选用蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶、按甲基纤维素等材料。

2.人可能摄入量较大的受试物处理对人的可能摄人量较大的受试物，在按其摄入量设计实验剂量时，往往会超过动物的最大灌留剂量或超过摄入句料中的限量(10％w/w)，此时可允许去除既无功效又无安全间题的轴料部分(如淀粉、糊精等)后进行试验。

3.袋泡茶类受试物处理可将该受试物的水提取物进行试验，提取方法应与产品推荐饮用方法相同。如产品无特殊推荐饮用方法，可采用以下提取条件进行:常压度80-90℃，浸泡时间30分钟，水量为受试物重量的10倍以上，提取2次，将提取液合并浓缩至所需浓度，并标明该浓缩液与原料的比例关系。

4.膨胀系数较高的受试物处理需要考虑受试物的膨胀系数对受试物给子剂量的影响，依次来选择合适的受试物给予方法(灌胃或掺入词料）。

5.液体保健食品需要采用浓缩处理时，应采用不破坏其中有效成分的方法，如使用温度60-70℃，减压或常压蒸发浓缩、冷冻干燥等方法。

6.含乙醇保健食品处理当保健食品的推荐量较大时，在按其推荐剂量设计试验时，如该剂量超过动物最大灌冒容量，可将其浓縮。当乙醇浓度低于15％(VV)的受试物时，浓缩后的乙醇应恢复至受试物定型产品原来的浓度。乙醇浓度高于15％的受试物，浓缩后应将乙醇浓度调整至15％，并将各剂量组的乙醇浓度调整一致。不需要浓缩的受试物乙醇浓度＞15％时，应将各剂量组的乙醇浓度调整至15％。当进行Ames试验和果蝇试验时应将乙醇除去。在调整受试物的乙醇浓度时，原则上应使用该保健食品的酒基。

7.含有人体必需营养素等物质保健食品处理如产品配方中含有某一具有明量毒性的人体必需营养素(维生素A、硒，等)，在按其推荐量设计试验剂量时，如该物质的剂量达到已知毒作用剂量，在原有剂量设计的基础上，应考虑增设去除该物质或降低该物质剂量(如降至最大未观察到有害作用剂量，NOAEL)的受试物剂量组，以便对保健食品中其他成分的毒性作用及该物质与其他成分的联合毒性作用做出评价。

8.益生菌等微生物类保健食品处理益生菌类或其他微生物类等保健食品在进行Ames试验或体外细胞试验时，应将微生物灭活后进行。

9.以鸡蛋等食物为载体的特殊保健食品处理在进行喂养试验时，允许将其加入饲料，并按动物的营养需要调整饲料配方后进行试验。

二，保健食品安全性毒理学评价试验阶段与试验原则

毒理学评价，是对保健食品进行功能学评价的前提。保健食品或其功效成分，首先必须保证食用安全性。保健食品安全毒理学评价按照食品安全毒理学评价试验的阶段与实验原

则进行，包括四个阶段和相关的要求。以普通食品原料和(或)药食两用品作原料的保健食品，可以不做毒理学试验。

(一)四个试验阶段

第一阶段:急性毒性试验，包括经口急性毒性(LD2)试验，联合急性毒性试验次最大耐受量试验。

第二阶段:遗传毒性试验、传统致時试验、短期喂养试验。

遗传毒性试验的组合必须考虑原核细胞和真核细胞、生殖细胞与体细胞、体内和体外试验相结合的原则。

1.基因突变试验鼠伤寒沙门菌/哺乳动物微粒体酶试验(Ames试验)为首选，其次考虑选用V79/ HGPRT基因突变试验，必要时可另选其他试验

2.骨细胞微核试验或乳动物骨细胞染色体变试验

https://www.360docs.net/doc/3f6346224.html,基因突变试验

4.小鼠精子畸形分析或睾丸染色体畸形分析;

5.其他备选遗传试验显性致死试验，果蝇伴性隐性致死试验，非程序性DNA合成试验

6.60天喂养试验。

第三阶段:亚慢性毒性试验(90天喂养试验)繁殖试验和代谢试验

第四阶段:慢性毒性实验(包括致癌试验

(二)试验原则

保健食品特别是功效成分的毒理学评价可参照下列原则进行:

1.以普通食品和卫生部规定的药食同源物质以及允许用作保健食品的物质以外的动植物或动植物提取物、微生物、化学合成物等为原料生产的保健食品，应对该原料和用该原料生产的保健食品分别进行安全性评价。该原料原则上按以下四种情况确定试验内容。用该原料生产的保健食品原则上须进行第一、二阶段的毒性试验，必要时进行下一阶段的毒性试验。

(1)国内外均无食用历史的原料或成分作为保健食品原料时，应对该原料或成分进行四个阶段的毒性试验

2)仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，原则上应对该原料或成分进行第一、三阶段的毒性试验，必要时进行第四阶段毒性试验。主要包括以下两种情况

1)若根据有关文献资料及成分分析，未发现有毒或毒性基做不至构成对健康损害的物质，以及较大数量人群有长期食用历史而未发现有害作用的动植物及生物等，可以先对该物质进行第一、二阶段的毒性试验，经初步评价后，决定是否需要进行下一阶段的毒性试验。

2)凡以已知的化学物质为原科，国际组组已对其进行过系统的毒理学安全性评价，同时申请单位又有资料证明我国产品的质量规格与国外产品的结果一致，一般不要求进行进一步的毒性试验，否则应进行第三阶段毒性试验。

(3)在国外多个国家广泛食用的原料，在提供安全性评价资料的基础上，进行第一，二阶段毒性试验，根据试验结果决定是否进行下一阶段毒性试验。

2.以卫生部规定允许用于保健食品的动植物或动植物提取物或微生物(普通食品和卫生部规定的药食同源物质除外)为原料生产的保建食品，应进行急性毒性试验、三项致突变试验(Ame 试验或V79HGPT基因突变试验，骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验，TK基因突变试验或小鼠精子形分析或丸染色体時变试验中选择)和30天喂养试验，必要时

进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验。

3.以普通食品和卫生部规定的药食同源物质为原料生产的保健食品，分别根据以下情况确定试验内容:

(1)以传统工艺生产且使用方式与传統使用方式相同的保健食品，一般不要求进行毒性试验。

(2)以水提取配制生产的保健食品，如服用量为原料的常規用量.且有关资料未提示其具有不安全性的.一般不要求进行毒性试验。如服用量大于常规用量时，需进行急性毒性试验、三项致突变试验和30天喂养试验，必要时进行传统致试验。

(3)用水提以外的其他常用工艺生产的保健食品，如服用量为原料的常規用量时，应进行急性毒性试验、三项致突变试验。如服用量大于原料的常规用量时，需增加30天製养试验，必要时进行传统致试验和第三阶段毒性试验。

4.用已列入营养强化剂或营养补充剂名单的营养索的化合物为原料生产的保健食品。如其原料来源、生产工艺和产品质量均符合国家有关要求，一般不要求进行毒性试验。

5.针对不同食用人群和(或)不同功能的保健食品，必要时应针对性地增加敏感指标及敏感试验。

三，保健食品安全性毒理学评价试验目的与试验内容

毒理学研究需要实验动物来进行各种实脸，通过对动物的实验观察和分析来研究毒理作用、获得毒物的毒性、剂量-反应关系、毒作用机制等方面的资料，有关试验内容见文所述。

1.急性毒性试验通过测定获得1D(半致死剂量)，了解受试物的毒性强度、性质和可能的钯器官.为进一步进行毒性试验的剂量和毒性判定指标的选择提供依据，并根据LD50进行毒性分级。

试验内容:口急性毒性(LD50)试验、联合急性毒性试验。

2.遗传毒性试验、传统致畸试验、短期喂养试验

(1)遗传毒性试验:对受试物的遗传毒性以及是否具有潜在致癌作用进行筛选。

(2)传致畸试验:了解受试物对胎仔是否其有致畸作用。

(3)短期喂养试验:对只需进行第一、二阶段毒性试验的受试物，在急性毒性试验的基础上，通过短期(30天眼养试验)进一步了解其毒性作用，并可初步估计最大无作用剂量。

试验内容:

(1)细菌致突变试验:鼠伤寒沙门菌哺乳动物微粒体酶试验(Ames试验)为首选项目，必要时可另选和加选其他试验。

2)小鼠骨髓微核率测定或骨髓细胞染色体畸变分析。

(3)小鼠精子畸形分析和丸染色体畸变分析。

3.亚设性毒性试验(90天喂养试验、繁殖试验和代谢试验观察受试物以不同剂量水平经较长期喂养后对动物的毒性作用性质和把器官，并初步确定最大作用剂量:了解受试物对动物繁殖及对仔代的致商作用，为慢性毒性和致癌试验的剂量选择提供依据。其中通过代谢试验可以了解受试物在体内的吸收、分布和排泄連度以及蓄积性，寻找可能的器官;为选择慢性毒性试验的合适动物种系提供依据;了解有无毒性代谢产物的形成。

4.慢性毒性试验(包括致癌试验)了解经长期接触受试物后出现的毒性作用尤其是进行性或不可逆的毒性作用以及致癌作用:最后确定最大无作用剂量和致癌的可能性，为受试物能否应用于保健食品的最终评价提供依据。

四、保健食品安全性毒理学试验结果判定

(一)急性毒性试验

如LD50剂量小于人的可能摄人量的100倍，则放弃该受试物用于保健食品，不再继其他毒理学试验。如LD。大于或等于100倍者，可考虑进入下一阶段毒理学试验。如动物未出现死亡的剂量大于或等于10 g/kg BW(盖人体推荐量的100倍).则可进人下一阶段毒理学

试验。对人的可能摄入量较大和其他一些特殊原料的保健食品，按最大耐受量给予最大剂量动物末出现死亡、也可进入下一阶段毒理学试验

(二)遗传毒性试验

根据受试物的化学结构、化性质以及对遗传物质作用终点的不同，并兼顾体外和体内试验以及体细胞和生殖细胞的原则，在鼠伤寒沙门菌/乳动物磁粒体酶试验(Ame试验)、小鼠骨髓微核率测定、骨髓细胞染色体睛变分析、小鼠精子畸形分析和翠丸染色体畸变分析试验中选择四项试验，根据以下原则对结果进行判断。

如其中三项致突変试验(Ames试验或V79GPRT基因突变试验，骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验，TK基因突变试验或小鼠精子畸形分析或察丸染色体畸变试验中选择)试验为阳性，则表示该受试物很可能具有遗传毒性作用和致癌作用，一般应放弃该受试物应用于保健食品，毋需进行其他项目的毒理学试验。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。

如其中两项试验为阳性，而且短期哏养试验显示该受试物具有显著的毒性作用一般应放弃该受试物用于食品;如短期喂养试验显示有可疑的毒性作用，则经初步评价后，根据受试物的重要性和可能振入量等，综合权衡利弊再作出决定。

如其中一项试验为阳性，则再选择V79 HGPRT基因突变试验、显性致死试验果蝇伴性隐性致死试验，程序外DNA修复合成(UDS)试验中的两项遺传毒性试验。如再选的两项试验均为阳性，则无论短期喂养试验和传统致畸试验是否显示有性与致畸作用，均应放弃该受试物用于食品;如有一项为阳性，而在短期喂养试验和传统致府试验中未见有明显毒性与致畸作用，则可进入第三阶段毒性试验。如四项试验均为阴性，则可进入第三阶段毒性试验。(三)短期养试验

1.对只要求进行第一、二阶段証理学试验的受试物，若30天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量大于或等于人的可能摄入量的100倍，综合其他各项试验结果可初步作出安全性评价。

2.对于人的可能摄入量较大的保健食品，在最大灌胃剂量组或在饲料中的最大入量剂量组未发现有毒性作用，综合其他各项试验结果和受试物的配方、接触人群范围及功能等有关资料可初步做出安全性评价。

3.若最小观察到有害作用剂量小于或等于人的可能摄入量的100倍，或观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中的比例小于或等于10％，且剂量又小于或等于人的可能摄入量的100倍，原则上应放弃该受试物用于保健食品。但对某些特殊原料和功能的保健食品，在小于或等于人的可能摄人量的100倍剂量组，如果个别指标实验组与对照组出现有生物学意义的差异，要对其各项试验结果和受试物的配方、理化性质及功能和接触人群范围等因素综合分析后，决定受试物可否用于保健食品或进入下一阶段毒性试验

(四)传统致時试验、90天喂养试验、繁殖试验

1.传统致畸试验以LDs或30天喂养实验的最大未观察到有害作用剂量设计的受试物各剂量组，如果在任何一个剂量组观察到受试物的致畸作用，则应放该受试物用于保健食品，如果观察到有胚胎毒性作用，则应进行进一步的繁殖试验

2.90天养试验、繁殖试验国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，如最大未观察到有害作用剂量大于人的可能摄入量的100倍，可进行安全性评价。若最小观察到有害作用剂量小于或等于人的可能摄人量的100倍，或最小观察到有害作用剂量组其受试物在饲料中的比例小于或等于10％，且剂量又小于或等于人的可能摄入量的100倍，原则上应放弃该受试物用于保健食品。

国内外均无使用历史的原料或成分，根据这两项试验中的最敏感指标所得最大观察到有害作用剂量进行评价的原则是:

(1)最大未观察到有害作用剂量小于或等于人的可能摄入量的100倍者表示毒性较强，应放弃该受试物用于保健食品。

(2)最大未观察到有害作用剂量大于100倍而小于300倍者，应进行慢性毒性试验。(3)大于或等于300倍者则不必进行慢性毒性试验，可进行安全性评价。

(五)慢性毒性(包括致)试验

根据慢性毒性试验所得的最大无作用剂量进行评价，其原则是:

1.最大末观察到有害作用剂量小于或等于人的可能摄入量的50倍者，表示毒性较强，应放弃该受试物用于保健食品。

2.未观察到有害作用剂量大于50倍而小于100倍者，经安全性评价后，决定该受试物可否用于保健食品。

3.最大未观察到有害作用剂量大于或等于100倍者，则可考虑允许使用于保健食品。根据致癌试验所得的肿瘤发生率、潜伏期和多发性等进行致癌试验判定的原则是:凡符合下列情况之一，并经统计学处理有显著性差异者，可认为致癌试验结果阳性。若存在剂量反应关系，则判断阳性更可靠

1.肿瘤只发生在试验组动物，对照组中无肿瘤发生。

2.试验组与对照组动物均发生肿瘤，但试验组发生率高。

3.试验组动物中多发性肿瘤明显，对照组中无多发性肿瘤，或只是少数动物有多发性肿

4.试验组与对照组动物脚瘤发生率虽无明显差异，但试验组中发生时间较早。

(六)受试物添加剂剂量

若受试物接入饲料的最大量或液体受试物经浓缩后仍达不到最大未观察到有害作用剂量为人的可能摄入量的规定倍数时，综合其他的毒性试验结果和实际食用或饮用量进行安全性评价。

五、保健食品安全性毒理学评价需考点因素

为获得客观正确的保健食品毒理学安全性评价结果，在试验中必须考虑人群、保健食品剂型、时间-毒性效应、安全系数、动物等因素。

1.实验指标的统计学意义和生物学意义在分析试验组与对照组指标统计学上差异的显著性时，应根据其有无剂量反应关系、同类指标横向比较及与本实验室的历史性对照值范围比较的原则等来综合考虑指标差异有无生物学意义。此外如在受试物组发现某种肿瘤发生率增高，即使在统计学上与对照组比较差异无显著性，仍要给以关注

2.生理作用与毒性作用对实验中某些指标的异常改变，在结果分析评价时要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用。

3.时间-毒性效应关系对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况。

4.特殊人群和敏感人群对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。

5.推荐摄入量较大的保健食品应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受试物的毒性作用所致。

6.含乙醇的保健食品对试验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其他成分的作用。

7.动物年龄对实验结果的影响对某些功能类型的保健食品进行安全性评价时，对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因为动物年龄选择不当所致而非受试物的毒性作用，因为幼年动物和老年动物可能对受试物更为敏感。

8.安全系数将动物毒性试验结果外推到人时，鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系数通常为100，但可根据受试物的原料来源、理化性质、菲性大小、代谢特点、蓄积性、接触的人群范围、食品中的使用量和人的可能摄入量、使用范围及功能等因素来综合考其安全系数的大小。

9.人体资料由于存在着动物与人之间的种属差异，在评价保健食品的安全经时，应尽可能收集人群食用受试物后反应的资料;必要时在确保安全的前提下，可遵照有关规定进行人体试食试验。志愿受试者体内的代谢资料对于将动物实验结果推论到人具有重要意义。在确保安全的条件下，可以考虑按照有关规定进行必要的人体试食试验。

10.综合评价在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性接触的人群范、食品中的使用量与使用范围、人的可能摄入量及保健功能等因素，确保其对人体健康的安全性。对于已在食品中应用了相当长时间的物质，对接触人群进行流行病学调查具有重大意义，但往往难以获得剂量一反应关系方面的可靠资料;对于新的受试物质，则只能依靠动物试验和其他试验研究资料。然而，即使有了完整和详尽的动物试验资料和一部分人类接者的流行病学研究资料，由于人类的种族和个体差异，也很难做出保证每个人都安全的评价。即绝对的安全实际上是不存在的。根据实验资料，进行最终评价时，应全面权衡做出结论。

1.食品安全性毒理学评价应由国家认定的保健食品安全性毒理学检验机构承担

安全性评价的依据不仅是科学实验的结果，与当时的科学水平、技术条件以及社会因素均密切有关。因此，随着时间的推移，很可能结论也不同。随着情况的不断改变，科学技术的进步和研究的不断进展，有必要对已通过评价的受试物进行重新评价，做出新的科学结论。

第三节保健食品功能学评价的基本要求

对保健食品进行功能学评价是保健食品科学研究的核心内容，主要针对保健食品所宣称的生理功效进行动物学甚至是人体实验。本节中述评价保健食品的统一程序和试规程

一，保健食品功能学评价的动物试验规程

一)对受试样品要求

1.应提供受试样品的原料组成或尽可能提供受试样的物理，化学性质（包括化学结构、纯度、稳定性等)有关资料。

2.受试样品必须是規格化的定型产品，必须是在保健食品GMP认证车间生产的中试規以上的样品，符合既定的配方、生产工艺及质量标准。

3.提供受试样品的安全性毒理学评价的资料以及卫生学验报告，受试样品必须是已经过食品安全性毒理学评价确认为安全的食品。功能学评价的样品与安全性毒州学评价、卫生学检验的样品必须为同一批次(安全性毒理学评价和功能学评价实验周期超过受试样品保质期的除外)。

4.就提供功效成分或特征成分、营养成分的名称及含量。

5.如需提供受试样品违禁药物检测报告时，应提交与功能学评价同一批次样品的违禁药物检测报告。

(二)对实验动物要求

1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系动物。

2，动物的性别、年依实验需要进行选择。实验动物的数量要求为小鼠每组10-15只(单一性別)大鼠每組8-12只(单一性别)

3.动物应符合国家对实验动物的有关规定。

(三)对给受试样品剂量及时间要求

1.各种动物实验至少应设3个剂量组，另设阴性对照组，必要时可设阳性对照组或空白对照组。剂量选择应合理，尽可能找出最低有效剂量。在3个剂量组中，其中一个剂量应相当于人体推荐摄入量(折算为每公斤体重的剂量)的5倍(大鼠)或10倍(小，且最高剂量不得超过人体推荐摄入量的30倍(特殊情况除外)，受试样品的功能实验剂量必须在毒理学评价确定的安全剂量范围之内。

2.给受试样品的时间应根据具体实验而定，原则上至少1个月。当给予受试样品的时间已达30天而实验结果仍为阴性时，则可终止实验。

四)受试样品处理要求

1.受试样品推荐量较大，超过实验动物的灌胃量、接入饲料的承受量等情况时，适当少受试样品的非功效成分的含量。

2.对于含乙醇的受试样品，原则上应使用其定型的产品进行功能实验，其三个剂量组的乙醇含量与定型产品相同。如受试样品的推荐量较大，超过动物最大灌冒量时，允许将其进行浓缩，但最终的浓液体应恢复原乙醇含量，如乙醇含量超过15％，允许将其含量降至15％。调整受试样品乙醇含量应使用原产品的酒基。

3.液体受试样品需要浓缩时，应尽可能选择不破坏其功效成分的方法。一般可选择60-70℃减压进行浓缩。浓缩的倍数依具体实验要求而定。

4.对于以冲泡形式饮用的受试样品(如袋泡剂)，可使用该受试样品的水提取物进行功能实验，提取的方式应与产品推荐饮用的方式相同。如产品无特殊推荐饮用方式，则采用下述提取的条件:常压，温度80-90℃，时间30-60分钟，水量为受试样品体积的10倍以上，提取2次，将其合并浓缩至所需浓度。

(五)给受试样品方式要求

必须经口给予受试样品，加入饮水或入词料中，计算受试样品的给予量。不能加入饮水或入饲料的可选择灌胃。

(六)合理设置对照组要求

以载体和功效成分(或原料)组成的受试样品，当载体本身可能具有相同功能时，应将该载体作为对照。

二，保健食品功能学评价的人体试食试验规程

人体实验必须在完成毒理试验后进行，评价食品保健作用时要考虑的因素如下:

1.人的可能摄入量除一般人群的摄入量外，还应考虑特殊的和敏感的人群(如几童、孕妇及

高摄入量人群)。

2.人体资料由于存在动物与人之间的种属差异、在将动物试验结果外推到人时，应尽可能收集人群服用受试物的效应资料及已完成的安全性毒理学评价资料，若体外或体内动物试验未观察到或不易观察到食品的保健效应或观察到不同效应而有关资料提示对人有保健作用时，在保证安全的前提下，应进行必要的人体试食试验。

3.结果的重复性和剂量-反应关系在将评价程序所列试验的阳性结果用于评价食品的保健作用时，应考虑结果的重复性和剂量反应关系，并由此找出其最小有作用剂量

4.食品保健作用的检测及评价应由国家认定的保健食品功能学检验机构承担。