手工查杀木马病毒的一般详细步骤
手工查杀木马病毒的一般详细步骤其实，在平时一不小心中病毒或木马的时候，对于高手来说，都采用手动查杀的方式，因为一方面，对于互联网上新出现的病毒或其变种，大多数的杀毒厂商往往都是被动的，这样就给那些病毒木马提供了时间上的有利条件;另一方面，用杀毒软件查杀的话，是很浪费宝贵的时间的，你知道，高手们往往是不会去选择做傻事的，因为他们知道应该在这些傻事
中学到些什么,而对于我们普通菜鸟用户来说，怎么办呢,总不能坐以待毙吧～作为高手是不能容忍的，因此，手工查杀就从中起了重要作用。那么我们应该怎么办呢,我
们应该从中学到些什么呢,
首先，当我们感到机器变得比以前慢很多，或者鼠标有时会不自主的乱抖动，这时我们就应
该考虑是不是病毒或木马在作怪了。
这时，我们的第一步就是打开任务管理器，仔细查看有没有哪些异常或自己尚不清楚的进程，发现后，先不要急着结束它，先用纸和笔记录下来，这时我们可以在网上查下该进程的相关资料(比如*.exe)，这时如果上网不方便的话，可以在资源管理器中按F3打开“搜索”，首先确保将系统中的所有文件全部显示出来，包括重要的系统文件，并“所有文件和文件夹”搜索，看看它到底藏在了哪里，也许有时候你会发现，这个你不熟悉的进程名正是系统中正常的一个程序的进程。不过这也没关系，我们都是从不懂到懂得的一个过程，没什么指得可
笑的。
如果从网上找到的资料里，发现这个确是病毒或木马的话，则毫无疑问的进行下一步骤。如果是在“搜索”中找到的，则右击查看它的属性，看看它是具体什么
时间被建立的，如果与实际不符而相违背的，或明显带有迷惑用户性质的话，则可以肯定它们对我们是不利的。我
们只有将它们赶尽杀绝了!!!
下一步，我们就要毫不留情的在任务管理器中先结束其进程了。右击它选择“结束进程”，“确定”即可。如果中的病毒或木马很强的话，我们就要采取强制的方式结束它了。具体方法:首先“开始——运行”，输入CMD，打开命令提示符。输入“Tasklist”后就会看到我们各个程序的进程列表了，其中有一列叫
PID(进程标识符)的，这对我们强制关闭某个进程
时有用到。
它的命令是这样的:“ntsd -c q -p PID号”。
假如你看到我们刚才记下的可疑进程名，及其后面的PID号是1060(假如)，则可以，在提示符下输入“ntsd -c q -p 1060”就可以了。这是我们的第二步，其实按一般思路，结束可疑进程是第一步，这里，我们把判断作为了一个步骤，然而这对于我们这样的菜鸟来说，准确判断一个进程是不是可疑进程，是不是那么容易的，应该说什么都是靠积累的，如古人
云:不积跬步，无以至千里;不积小流，无以成江海。知识也不例外～
好了，废话不多说。下一步，我们就要对注册表进行“体检”了，不过新手建议先备份，以防不测，有的菜鸟说，不知道应该备份哪些内容，我说你需要修改哪些内容，你就首先将其备份好，以便系统被我们折腾的崩溃了，^_^，好有后悔药吃。你知道世上本没有后悔药，所以我们每一步都要很小心，这是很重要的。即使电脑老手也有失手的时候，不管做什么。
我好象说多了。。。。。^_^
对注册表进行编辑，使用regedit或regedt32命令。依次展开并找到以下几项，看有没有
不认识的可疑键值:
HKEY_CURRENT_USER\Software\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Run
HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\Microsoft\Windows\CurrentVersion\Run HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\Microsoft\Windows\CurrentVersion\RunOnce HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\Microsoft\Windows\CurrentVersion\RunOnce Ex
发现有与记录的相符的可疑键值，就可以右键选择删除，这样就取消了它们的开机自启动，
以便下一步操作。
接下来就可以重启计算机了。在开机时按F8，进入安全模式，进行下一步的查杀。启动到桌面后，在注册表中单击“编辑——查找”，输入可疑进程名，找到一处后，按F3进行进一步的查找，将查找到的所有可疑项删除。依次单击“开始——搜索”，再单击“所有文件和文件夹”按钮，在“全部或部分文件名”文本框中输入“*.exe”(*.exe指的是可疑进程名)。最后将找到的可疑文件(夹)全部选
中，同时按住shift键，右击直接删除，不进回收
站。
这样，基本上我们中的病毒或木马就被我们手工查杀了。为确保以防万一，还是建议使用杀
毒软件在进行全面的系统扫描一下，看看还有没有未清除干净或还有感染的地方。
其实手工查杀木马病毒并不是万能的，有时并不会这么简单。所以最后还是对各位网友们说一句，平时注意培养自己的安全防范意识，未来使用电脑的领域会更广，使用计算机的人会更多，年龄也会普遍降低。更重要的是在未来的某个时刻，一个很小的小孩使用一款很初级的黑客软件，就可能对我们造成巨大损失。注意这
方面的预防也很重要，有时间可以学一学系统的一些知识，这样在我们平时遇到困难的时候，至少不会变得很被动。再说，如果帮助身边的MM解决了她的烦心的问题，那么你在她心目中的地位必会上升了一大截。^_^^_^^_^
当然好处并不止这些哦!!!
好了，自己的成功要靠自己来完成!
成功，我还在路上呢!
病毒感染细胞实验整体流程及原理
病毒感染细胞实验整体 流程及原理 Standardization of sany group #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#
病毒感染细胞实验整体流程及原理 目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。 1、病毒的种类 病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒 慢病毒 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。 1）直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合 RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 2）可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。 3）可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。 4）无需任何转染试剂，操作简便。 5）可以根据客户需要制备多种标记。 1）含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。 2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3）培养 48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4）病毒的纯化和浓缩。 5）分装、- 80 ℃保存。 6）滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。 、腺病毒 原理
整理)慢病毒稳转细胞株步骤
稳转慢病毒 一、所需试剂 1、慢病毒载体（详细信息见附录及《质粒的扩增提取》）（大肠杆菌-80℃保存2-3年，质粒-20℃保存2-3年，病毒液-80℃保存1年） （1）载体质粒：两端的LTR、剪切位点、包装信号Ψ以及抗性或荧光基因、gag基因5′端350bp的序列及位于env序列中的RRE，含宿主RNA聚合酶识别部分 （2）包装质粒（psPAX2）：包含了pol、gag包装成分 （3）包膜质粒（pMD2.G）：用其他病毒的包膜蛋白代替了env基因. 三种质粒共同转染产生不具有自我复制能力的病毒载体。 2、包装细胞：293T细胞 3、菌株：大肠杆菌，用于提取质粒 4、转染试剂：XTREME-GENE（-20℃保存，不可分装），一种脂质与其他组份构成的混合物 5、浓缩试剂（配好后4℃保存，原材料室温保存）：5X PEG8000/NaCl溶液（聚乙二醇）：NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中，高压蒸汽灭菌 **也可直接从公司买来病毒液（-80℃封口膜封口冻存管保存，4℃保存3天）：滴度一般为108TU/ml 6、10mg/ml polybrene（-20℃分装保存）：溴化己二甲铵。是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene 能提高感染效率2～10 倍。有一定细胞毒性，需要摸索浓度（1～10μg/ml） 7、无血清培养基：optimen 8、贴壁细胞（复后3代以上的细胞） 9、puromycin：嘌呤霉素，用于筛选稳转细胞 二、具体步骤 <一>病毒包装与收集（中皿，转染步骤类似于瞬转） 第一天 1、种板，10×105个293T细胞，加入全培养基双抗DMEM 4-5ml，过夜 2、配制5X PEG8000/NaCl溶液 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃ 第二天 2、加入2ml全培养基DMEM 3、将1加入2，孵育10h，换成5ml全培养基
ARP病毒彻底清除方法
最近流行的ARP病毒彻底清除方法 1、删除”病毒(一种具有隐蔽性破坏性传染性的恶意代码)组件释放者”程序： “%windows%\System32\LOADHW.EXE”（window xp 系统目录为：“C:\WINDOWS\Syst em32\LOADHW.EXE”） 2、删除”发ARP欺骗包的驱动(驱动程序即添加到操作系统中的一小块代码，其中包含 有关硬件设备的信息)程序” (兼“病毒(一种具有隐蔽性破坏性传染性的恶意代码)守护程序”)： “%windows%\System32\drivers\n pf.sys”（window xp 系统目录为：“C:\WINDOWS\Syste m32\drivers\npf.sys”） 2、npf.sys病毒手工清除方法 3、病毒的查杀有很多种方式，下面就让我们来介绍一下手工查杀的方法。 4、npf.sys(%system32/drivers/npf.sys)是该npf病毒主要文件，病毒修改注册表创建系统服务 NPF实现自启动，运行ARP欺骗，在病毒机器伪造MAC地址时，不停地向各个机器发送ARP包堵塞网络，使得传输数据越来越慢，并且通过伪掉线来使用户重新登陆游戏，这样它就可以截取局域所有用户登陆游戏时的信息数据。 5、该病毒往往造成网络堵塞，严重时造成机器蓝屏!!!!。开始杀毒: 6、1.首先删除%system32/drivers/下的npf.sys文件 7、2.进入注册表删除 8、HKEY_LOCAL_MACHINE/SYSTEM/CurrentControlSet/Services/Npf服务。 9、同时删除 10、HKEY_LOCAL_MACHINE/SYSTEM/ControlSet001/Enum/Root/LEGACY-NPF 11、HKEY_LOCAL_MACHINE/SYSTEM/ControlSet002/Enum/Root/LEGACY-NPF 12、 3.删这两键时，会提示无法删除，便右键，权限，设everyone控制，删除。 13、 14、 a. 在设备管理器中, 单击”查看”-->”显示隐藏的设备” b. 在设备树结构中,打开”非即插即用….” c. 找到“NetGroup Packet Filter Driver”或“NetGroup Packet Filter” ,若没找到,请先刷新设 备列表 d. 右键点击“NetGroup Packet Filter Driver”或“NetGr oup Packet Filter”菜单,并选择”卸 载” e. 重启windows系统 f. 删除“%windows%\System32\drivers\npf.sys”（window xp系统目录为：“C:WINDOWS\ System32\drivers\npf.sys”） 3、删除”命令驱动(驱动程序即添加到操作系统中的一小块代码，其中包含有关硬件设 备的信息)程序发ARP欺骗包的控制者”
2020年整理)慢病毒稳转细胞株步骤
作者：空青山 作品编号：89964445889663Gd53022257782215002 时间：2020.12.13 稳转慢病毒 一、所需试剂 1、慢病毒载体（详细信息见附录及《质粒的扩增提取》）（大肠杆菌-80℃保存2-3年，质粒-20℃保存2-3年，病毒液-80℃保存1年） （1）载体质粒：两端的LTR、剪切位点、包装信号Ψ以及抗性或荧光基因、gag基因5′端350bp的序列及位于env序列中的RRE，含宿主RNA聚合酶识别部分 （2）包装质粒（psPAX2）：包含了pol、gag包装成分 （3）包膜质粒（pMD2.G）：用其他病毒的包膜蛋白代替了env基因. 三种质粒共同转染产生不具有自我复制能力的病毒载体。 2、包装细胞：293T细胞 3、菌株：大肠杆菌，用于提取质粒 4、转染试剂：XTREME-GENE（-20℃保存，不可分装），一种脂质与其他组份构成的混合物 5、浓缩试剂（配好后4℃保存，原材料室温保存）：5X PEG8000/NaCl溶液（聚乙二醇）：NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中，高压蒸汽灭菌 **也可直接从公司买来病毒液（-80℃封口膜封口冻存管保存，4℃保存3天）：滴度一般为108TU/ml 6、10mg/ml polybrene（-20℃分装保存）：溴化己二甲铵。是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene 能提高感染效率2～10 倍。有一定细胞毒性，需要摸索浓度（1～10μg/ml） 7、无血清培养基：optimen 8、贴壁细胞（复苏后3代以上的细胞） 9、puromycin：嘌呤霉素，用于筛选稳转细胞 二、具体步骤 <一>病毒包装与收集（中皿，转染步骤类似于瞬转） 第一天 1、种板，10×105个293T细胞，加入全培养基双抗DMEM 4-5ml，过夜 2、配制5X PEG8000/NaCl溶液 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃ 第二天
脂质体转染的实验原理与操作步骤大全
脂质体转染的实验原理与操作步骤大全 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 脂质体(lipofectin regeant，LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy，Propyl]-n， n，n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1：1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1~5μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间(2~24小时)。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。 细胞种类：COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。 一、脂质体(liposome)转染方法原理 脂质体(liposome)转染方法原理：脂质体((Iiposome)作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹DNA，同样可以通过融合而进人细胞。使用脂质体将DNA带人不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性。 中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。 二、脂质体转染操作步骤 1、操作步骤[方法一]： (1)细胞培养：取6孔培养板(或用35mm培养皿)，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃CO2培养至40%~60%汇合时(汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL，B液：用不含血清培养基稀释2-50μgLR，终量100μL，轻轻混合A、B液，室温中置10-15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染(如出现沉淀可能因LR或DNA浓度过高所致，应酌情减量)。 (3)转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入1mL不含血清培养液。
手工清理病毒原来可以如此简单
手工清理病毒原来可以如此简单 2007-12-14来源: 进入论坛 编者按：当大家看到这个题目的时候一定会觉得手工杀毒真的很简单吗？笔者写这个文章的目的就是让所有菜鸟在面对病毒的时候能轻而易举的狙杀掉它，而不是重装系统，或者在重装N次系统以后无奈的选择格式化，结果却依然无法将讨厌的病毒驱逐出你可怜的电脑。今天我们以今年泛滥比较严重的病毒之一的“AV终结者”的手工清理方法来像大家讲述如何手工清理这类非感染exe文件类型的病毒（本次讲述的办法在清理完病毒源头以后借助专杀工具依然可以适用于清理感染exe类病毒）。 第一步：知己知彼，百战百胜 要战胜AV终结者，我们先要了解自己的处境和它的特性还有弱点。首先我们来了解下AV终结者的执行以后的特征： 1.在多个文件夹内生成随机文件名的文件 旧版本的AV终结者在任务管理器里可以查看2个随机名的进程，新的变种文件名格式发生变化，目前我遇到过2种。 一种是随机8个字母+数字.exe和随机8个字母+数字.dll；另一种是6个随机字母组成的exe文件和inf文件。不管变种多少它们保存的路径大概都是如下几个： C:\windows C:\windows\help C:\Windows\Temp C:\windows\system32 C:\Windows\System32\drivers C:\Program Files\ C:\Program Files\Common Files\microsoft shared\ C:\Program Files\Common Files\microsoft shared\MSInfo C:\Program Files\Internet Explorer 以及IE缓存等 这个是我个人总结出来的，随着病毒的变种。获取还有其他的。我这里只提供参考。 2.感染磁盘及U盘 当你的系统中了AV终结者，你会发现你的磁盘右键打开时将出现一个”Auto”也就是自动运行的意思，此时你的电脑已经中毒了，而且如果你这个时候企图插入移动硬盘、U盘，或者刻录光盘以保存重要资料，都将被感染。这也就为什么许多用户重装完系统甚至格式化磁盘以后病毒依然的原因。 当你重装完系统，必定会有双击打开硬盘寻找软件或者驱动的时候，这个时候寄生在你磁盘根目录内的Autorun.inf文件就起到让病毒起死回生的功能了。这绝对不是耸人听闻哦！ 3.破坏注册表导致无法显示隐藏文件 我们一起来看看磁盘里的Autorun.inf，因为此时你的系统已经无法显示隐藏文件了。这个也是AV终结者的一个特征，所以我们这里用到几条简单的dos命令。 开始菜单-运行-输入“cmd”来到cmd界面，输入“D:” 跳转到D盘根目录，因为AV是不感染C盘根目录的，再输入“dir /a”显示D盘根目录内的所有文件及文件夹。“/a”这个参数就是显示所有文件，包含隐藏文件。如图：
转染步骤及经验(精华)
转染步骤及经验（精华） 一、基础理论 转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分类：物理介导方法：电穿孔法、显微注射和基因枪；化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法：有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节（见后文）。 二、转染操作流程（以常用的6孔板为例） (1) 细胞培养： 取6孔培养板，以3x104/cm2密度铺板，37℃5%CO2培养箱中培养至70%～90%汇合。(不同细胞略有不同，根据实验室优化的条件进行，汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备： 在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量) A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL， B液：用不含血清培养基稀释对应量的转染试剂，终量100μL； 轻轻混合A、B液（1:1混匀），室温中置15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。 (3) 转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入2mL不含血清及PS的培养液。 (4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中（缓慢滴加），轻轻摇匀，37℃温箱置6～8小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。 三、转染注意事项 1. 血清 A. DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。 B．一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。 C. 对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一种营养丰富的无血清培养基OPTI-MEMⅠ培养基， 或者在转染培养基中使用血清。对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。 2.抗生素（PS） 抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血
常见木马病毒清除的方法
常见木马病毒清除的方法 来源：互联网 | 2009年09月23日 | [字体：小大] | 网站首页 由于很多新手对安全问题了解不多，所以并不知道自己的计算机中了“木马”该怎么样清除。虽然现在市面上有很多新版杀毒软件都可以自动清除“木马”，但它们并不能防范新出现的“木马”程序，因此最关键的还是要知道“木马”的工作原理，这样就会很容易发现“木马”。相信你看了这篇文章之后，就会成为一名查杀“木马”的高手了。 “木马”程序会想尽一切办法隐藏自己，主要途径有:在任务栏中隐藏自己，这是最基本的只要把Form的Visible属性设为False、ShowInTaskBar设为False，程序运行时就不会出现在任务栏中了。在任务管理器中隐形:将程序设为“系统服务”可以很轻松地伪装自己。当然它也会悄无声息地启动，你当然不会指望用户每次启动后点击“木马”图标来运行服务端，，“木马”会在每次用户启动时自动装载服务端，Windows系统启动时自动加载应用程序的方法，“木马”都会用上，如:启动组、win.ini、system.ini、注册表等等都是“木马”藏身的好地方。下面具体谈谈“木马”是怎样自动加载的。 在win.ini文件中，在[WINDOWS]下面，“run=”和“load=”是可能加载“木马”程序的途径，必须仔细留心它们。一般情况下，它们的等号后面什么都没有，如果发现后面跟有路径与文件名不是你熟悉的启动文件，你的计算机就可能中上“木马”了。当然你也得看清楚，因为好多“木马”，如“AOL Trojan 木马”，它把自身伪装成command.exe文件，如果不注意可能不会发现它不是真正的系统启动文件。 在system.ini文件中，在[BOOT]下面有个“shell=文件名”。正确的文件名应该是“explorer.exe”，如果不是“explorer.exe”，而是“shell= explorer.exe 程序名”，那么后面跟着的那个程序就是“木马”程序，就是说你已经中“木马”了。 在注册表中的情况最复杂，通过regedit命令打开注册表编辑器，在点击至:“HKEY-LOCAL-MACHINESoftwareMicrosoftWindowsCurrentVersionRun”目录下，查看键值中有没有自己不熟悉的自动启动文件，扩展名为EXE，这里切记:有的“木马”程序生成的文件很像系统自身文件，想通过伪装蒙混过关，如“Acid Battery v1.0木马”，它将注册表 “HKEY-LOCAL-MACHINESOFTWAREMicrosoftWindowsCurrentVersionRun”下的Explorer 键值改为Explorer=“C:WINDOWSexpiorer.exe”，“木马”程序与真正的Explorer之间只有“i”与“l”的差别。 当然在注册表中还有很多地方都可以隐藏“木马”程序， 如:“HKEY-CURRENT-USERSoftwareMicrosoftWindowsCurrentVersionRun”、“HKEY-USERS****SoftwareMicrosoftWindowsCurrentVersionRun”的目录下都有可能，最好的办法就是在
细胞转染的详细过程
细胞转染的详细过程 1、准备工作如下： 1)从pFastBacTM construct中纯化重组的bacmind DNA(500ng/μl溶于TE中) 从相应的pFastBacTM construct对照中纯化bacmind DNA(500ng/μl溶于TE中)。 细胞培养在适合的培养基中。 细胞转染剂Cellfectin（4℃储存）无任何添加物（例如：FBS，抗生素等）的细胞培养基。用于细胞培养的完全生长培养基（例如：Sf-900ⅡSFM TNMFH 或其他适合的培养基）。2)在6孔板或是35毫米dish上，每孔培养9*105Sf9细胞，细胞培养于2ml含抗生素的生长培养基中。 3)细胞在27℃孵育至少一小时。 4)对于每一个转染的样品，准备bacmid DNA：与细胞转染剂在12*75mm消毒管中进行如下混合： 用100μl无血清培养基稀释1μl纯化的bacmid DNA。 用100μl无血清培养基稀释6μl 细胞转染剂。 将bacmind DNA与细胞转染剂进行混合，动作要轻柔，混合物在室温下孵育45分钟。 5)当DNA与脂质体进行孵育时，移去细胞原有的培养基并用2ml无血清培养基洗一次，移去用来清洗的无血清培养基。 6)在每一个含有DNA与脂质体混合物的管子中加入0.8ml无血清培养基，轻柔混合，分别把DNA与脂质体混合物加入含有细胞的孔中。 7)细胞在27℃孵育5小时。 8)从细胞中移去DNA与脂质体混合物加入2ml完全生长培养基。 9)将细胞在27℃进行孵育，实验人员必须每日观察，记录转染细胞的生长状态，细胞在转染后48小时长势应该比较良好，但72小时后直至可以看到明显的病毒感染的细胞病变。 2、第一代代病毒的收集与保存 1)当转染的细胞呈现出感染后期的形态时，收集每孔含有病毒的上清，转移到灭菌的15ml 压盖管中。 2)以500*g离心5分钟，从而移去上清中所含有的细胞及大的碎片。 3)将离心后的上清移到新的15ml压盖管中，用来保存第一代病毒，存放于4℃避光保存。 3、病毒的保存 1)病毒存放于4℃避光保存。 2)如果用的是无血清培养基，则加入终浓度为2%的FBS 。血清蛋白可以作为蛋白酶的底物。 3)长期保存时将一部分病毒储存在-80℃用于病毒的重新扩增。 4)病毒的常规储存不要低于4 ℃.病毒经过反复冻融会使其滴度下降10 到100倍。 4、杆状病毒的扩增 1)准备sf9细胞，2*106/孔，在室温孵育1小时。 2)在孵育1小时以后，用倒置显微镜观察昆虫细胞的贴壁情况。 3)在每孔中加入适量的P1代病毒。 4)在27℃进行孵育48小时。 5)在感染后48小时，收集每孔含有病毒的上清，转移到灭菌的15ml压盖管中。以1000*g 离心5分钟，从而移去上清中所含有的细胞及大的碎片。 5、病毒空斑分析 1)准备工作如下： 澄清的杆状病毒保存于4℃ 培养在适当培养基中的sf9细胞（30ml 5*105/ml对数生长期的细胞用于每一个滴度的杆状
恶意插件务必清除,介绍几种手工清除方法
20种恶意插件手工清除方法 如今，恶意软件及插件已经成为一种新的网络问题，恶意插件及软件的整体表现为清除困难，强制安装，甚至干拢安全软件的运行。下面的文章中就给大家讲一部份恶意插件的手工清除方法，恶意插件实在太多，无法做到一一讲解，希望下面的这些方法能为中了恶意插件的网友提供一定的帮助。 1、恶意插件Safobj 相关介绍： 捆绑安装,系统速度变慢,没有卸载项/无法卸载,强制安装,干扰其它软件正常运行, 清除方法： 重新注册IE项，修复IE注册。从开始->运行 输入命令 regsvr32 actxprxy.dll 确定 输入命令 regsvr32 shdocvw.dll 确定 重新启动，下载反间谍专家查有没有ADWARE，spyware，木马等并用其IE修复功能修复IE和注册表，用流氓软件杀手或微软恶意软件清除工具清除一些难卸载的网站插件。 到https://www.360docs.net/doc/3f974818.html,下载KillBox.exe。在C:\Program Files\Internet Explorer\目录下，把LIB 目录或Supdate.log删除。 跳窗网页可能保留在HOSTS，一经上网就先触发该网址为默认，就会自动打开，检查HOSTS： 用记事本在C:\WINDOWS\system32\drivers\etc\目录下打开HOSTS 在里面检查有没有网址，有则删除。 或在前面加 127.0.0.1 保存后屏蔽掉。 如果是弹出的信使： 从开始->运行，输入命令： net stop msg net stop alert 即终止信使服务。 2、恶意插件MMSAssist 相关介绍： 这其实是一款非常简便易用的彩信发送工具，但它却属于流氓软件!并采用了类似于木马的Hook(钩子)技术，常规的方法也很难删除它，而且很占用系统的资源。 清除方法： 方法一：它安装目录里第一个文件夹有个.ini文件，它自动从 https://www.360docs.net/doc/3f974818.html,/updmms/mmsass.cab下载插件包，包里有albus.dll文件，UPX 0.80 - 1.24的壳，脱掉用16位进制软件打开发现这个垃圾插件利用HOOK技术插入到explorer和iexplore中，开机就在后台自动运行。 安全模式下，右键点击我的电脑-管理-服务-禁用jmediaservice服务，删除C:\windows\system32下的Albus.DAT，删除C:\WINDOWS\SYSTEM32\DRIVERS下的Albus.SYS，删除彩信通的安装文件夹，开始-运行-regedit-查找所有MMSAssist并删除，如果怕注册表还有彩信通的垃圾存在，下载个超级兔子扫描下注册表再一一删除，你也可以试试超级兔子的超级卸载功能。 要阻止它再次安装，也很简单。彻底删除它之后，你在它原来的位置新建一个与它同名的文件夹，
手工清除ms-dos。com病毒的方法
手工清除https://www.360docs.net/doc/3f974818.html,病毒的方法 中毒现象：每隔30秒飞出一个飘动的图片，写着“your computer is being attacked”（您的计算机受到攻击），还不停地发出噔噔的声音。有时开机有一个进程借“regedit.exe"（注册表编辑器）发作，跳出一个象枫叶样的窗口在屏幕上晃来晃去。不能切换中英文输入，输入法失效和优盘文件夹丢失。查看各盘符根目录下有https://www.360docs.net/doc/3f974818.html, 文件；查看进程有：Global.exe、keyboard、fonts.exe等进程，即可确定电脑已被此病毒感染。由于其他盘上还有病毒（如优盘上的220K病毒文件），即使格式化C盘，重装系统，稍不留意仍然会死灰复燃，前功尽弃。我单位最近因为此病毒大面积泛滥造成人人自危，由于没有专杀软件，防毒、杀毒苦不堪言，严重影响正常工作。 杀毒需要的文件： 一共有四个文件：sreng-2，冰刃IceSword122cn ，yereg-rd.bat ，yereg-rd.bat。 第一步运行“冰刃IceSword122cn”，中止该死的进程。 第二步运行“yereg-rd.bat”，删除所有病毒文件，建立免疫文件夹。
第三步运行“sreng-2”，修复注册表编辑器的关联。打开sreng-2（可能有已经过期的提示，不要紧，把系统日期修改成2007年照样可用），别的都不用做，只把“系统修复--文件关联”做一下就可以了。重复点几下，当发现 .reg 的关联变成“regedit.exe”就正常了（如果第一步没有中止进程，这里也不可能恢复）。 第四步运行“killms.reg”，导入注册表，清除注册表启动项和清除映像劫持项以及清除一些病毒残留。 总结一下几个关键点：必须先中止进程，否则根本没办法继续往下做第二步；然后是修复regedit注册表编辑器的关联，这是为做第四步创造前提条件。环环相扣，不能省略也不能提前做。 具体的杀毒方法和原理分析 关键字：global.exe、fonts.exe、keyboard.exe、https://www.360docs.net/doc/3f974818.html,、tskmgr.exe、remoteabc.exe、autorun.inf、输入法丢失、找回输入法、220K文件夹、映像劫持、regedit 关联、病毒防御、病毒免疫。
细胞转染的操作步骤
细胞转染的操作步骤 转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。红外碳硫仪理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。 >需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑。 一、细胞传代 1. 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。 2. 弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。 3. 用Tip头加入1ml Trypsin液，消化1分钟。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。 4. 加入1ml的含血清培养基终止反应。 5. 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。 6. 将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。 7. 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。8. 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。 9. 将培养皿转入培养箱中培养，第二天转染。 二、细胞转染 1. 转染试剂的准备 ①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。 ②震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。 2. 选择合适的混合比例（1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。 3. 将混合液在室温放置10―15分钟。 4. 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。 5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。 6. 到时后，红外碳硫仪根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。三、第二次细胞传代1. 在转染后24小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。 2. 再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度0.8X10 个细胞/35mm培养皿将细胞重新转入培养皿中。 3. 在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。
脂质体转染实验原理与操作步骤总
脂质体转染的实验原理与操作步骤大全 日期：2012-06-25 来源：互联网作者：青岚点击：3644次 摘要： 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 找产品，上生物帮>> >> 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 脂质体(lipofectin regeant，LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy，Propyl]-n，n，n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1：1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1~5μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间(2~24小时)。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。 细胞种类：COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。 一、脂质体(liposome)转染方法原理 脂质体(liposome)转染方法原理：脂质体((Iiposome)作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹DNA，同样可以通过融合而进人细胞。使用脂质体将DNA带人不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性。 中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。 二、脂质体转染操作步骤 1、操作步骤[方法一]：
清理病毒的终极方法
清理病毒的终极方法 【摘要】计算机病毒的泛滥与层出不穷，往往使普通用户深受其害，有时候更是束手无策，也使学生如临深渊，教材中也缺少系统的解决方案。寻找反击病毒的通用方法，尽最大可能恢复系统的正常，使普通用户也能在危机的时候凭最基本的操作能自己处理此类问题，为病毒防杀软件提供纯净平台。 【关键词】病毒可疑进程 DOS 运行权 PE系统釜底抽薪备份忠告 你已经明显的感觉到你的系统出现了问题，比如打开程序缓慢，移动鼠标困难，浏览网页不顺畅，莫明其妙的跳出些窗口，正常的程序不能运行，硬盘上出现了一些你不清楚的文件与目录，但是你却束手无策，因为你的杀毒软件已经不能正常运行，你的各种流氓软件清理工具也已经失灵，甚至你想登录到一些病毒防杀治理的网站都不可能。这个时候的病毒已经一手遮天，对它产生“危害”的程序及操作它都要想方设法阻止，它在大模大样的狞笑，怎么办？去找“高人”吗，好象也可以，但恰巧“高人”有事去了，你却心急如焚；去重装系统吗，好像绝大部分人不想这么做，恐怕你也不想这么做。怎么办？自己办！ 一点预备知识。病毒本质上也是一个计算机程序，它再厉害还不能达到你对它不能进行任何操作的程度，脱离了系统环境，它的一切功能就将消失，随你来“修理”它。得不到系统的支持它没有任何威胁，只要我们不让它运行，就为我们来清理它创造了有利的条件。 病毒要挟持系统，无外乎是在杀毒软件及流氓软件清理工具掌管系统之前优先占领系统，在系统的制高点上来狙击对它自身产生“危害”的程序及操作，从而获得系统至高无上的权利，使自己随时处于保护与传播及破坏的状态。要想抢先运行，无外乎依赖系统提供的方式，都要在系统启动的时候加载自己，尽可能的利用系统存在的漏洞，既要保证系统工作又要使自己隐身其中，都要在内存及系统的关键位置留下蛛丝马迹，这就为我们消灭它提供了线索。摧毁其“政权”，支解它的体系，反其道而行之就是我们来发现它、战胜它的途径。下面我们就来见招拆招，练就清理病毒的终极方法。
慢病毒包装实验步骤PDF.pdf
慢病毒包装实验的要点： 1：良好的293FT细胞状态是转染成功的首要因素，细胞代数不宜超过30代； 2：细胞铺板需均匀，避免细胞成团，影响转染效率；尽量多的细胞转入质粒，产生的病毒就越多； 3：细胞换液和共转染时，动作要轻柔避免细胞漂浮。尽量少的细胞死亡，产生的病毒就越多； 实验前要准备的、耗材和； 试剂准备：10%灭活胎牛血清+90%DMEM配好的完全培养基,0.25%胰酶，PBS,TRL 转染试剂，包装质粒，目的质粒，无血清培养基。 耗材准备：10cm细胞培养皿，6孔细胞培养板，吸头规格1ml、200ul、10ul，10ml移液管，离心管规格15ml、5ml、1.5ml，0.22um PVDF滤膜和10ml无菌注射器，试管架。 仪器准备：倒置荧光显微镜，普通光学倒置显微镜，电动移液器，吸引器，移液枪，二级生物安全柜，二氧化碳细胞培养箱。 第一天：上午（病毒包装质粒共转染前，293FT细胞复苏后至少让其传代两次以上，293FT 细胞能成倍的增长，确定细胞状态好）； 实验前准备： 安全柜开紫外灯照30分钟； 把培养基和试剂放置常温； 消化细胞： 从37 5%的co2细胞培养箱拿出细胞状态良好的293FT细胞，吸出原培养基，加入PBS 1ml略洗之后吸出，加入1ml胰酶消化1-2min，轻轻拍打培养皿，再加入3ml新鲜培养基终止消化，将培养皿中的细胞转移至15ml离心管内离心1000r /5min,吸出上清液，加入10ml PBS吹打混匀后，离心1000r /5min, 吸出上清液。 细胞铺板： 在10cm细胞培养皿上标记细胞名称、细胞代数、时间和操作人，将计数好大约2.5×106个293FT细胞吸入15ml离心管，再加入完全培养基至10ml充分混匀，然后把混匀的293FT细胞移入10cm培养皿）。放置培养箱中培养48h。 插入铺板后图片 刚铺板后 铺板1天后 第三天：上午 细胞转染： 细胞铺板48h后，从培养箱取出293FT细胞，倒置显微镜观察，细胞密度达90%左右； 吸出原有培养基，沿皿壁缓慢加入8ml完全培养基，放置于培养箱中，待转染。 取出2个1.5ml的离心管，一份加入142ul的无血清培养基和58ulTRL转染试剂，吹打混匀。另一份加入包装质粒18ul、目的质粒10ul和无血清培养基总体积200ul充分混匀。 将2个离心管液体吹打混匀，室温静置20分钟
常见病毒手动查杀
常见病毒手动查杀 计算机现在已经成为我们日常生活的不可或缺的一部分，但同时计算机病毒的泛滥也给我们的生活带来了不可估量的损失 和影响。如果计算机中了病毒，但没有联网或者杀毒软件失效时，我们该怎么应对呢，我们可以先尝试手动处理清除这些病毒，实在不行就只能重装系统了。这里我们简要介绍一下常见病毒的症状和清除方法。 本文主要介绍以下几种常见病毒的清除，其他的额可以举一反三：I－WORM/Badtrans.b病毒的清除、恶性蠕虫病毒 “I-Worm.Aliz”清除、Nimda.e病毒、I－WORM/Badtrans.b，病毒的清除、清除Sircam蠕虫病毒、清除“快乐时光”病毒、清除圣诞节病毒的方法、Win32/MTX.A.Worm病毒的清除方法、如何自行将MSIE.HTA（网路害虫）清除。 具体内容： 手工删除BackOrifice2000的方法： 首先用最新DOS版的杀毒软件开机杀毒，然后将邮箱中的带毒邮件一一删除，否则又会重复感染，该病毒传播能力极强，必须加强防范，为了预防该病毒在浏览该带毒信笺可以自动执行的特点，必须下载微软的补丁程序。 恶性蠕虫病毒“I-Worm.Aliz” 又出现Nimda.e病毒，再次更新详细解毒方案
清除方法： 1．使用干净DOS软盘启动机器。 2．执行vrvdos,查杀所有硬盘。 3．在SYSTEM.INI文件中将LOAD.EXE的文件改掉，如没有变，就不用改。正常的[boot]下的应该是shell=explorer.exe.必须修改该文件中的shell项目，否则清除病毒后，系统启动会提示有关load.exe的错误信息。 4．开启实时监测病毒防火墙。 5．为了预防该病毒在浏览该带毒信笺可以自动执行的特点，必须下载微软的补丁程序。 6．WINDOWS2000如果不需要可执行的CGI，可以删除可执行虚拟目录,例如/scripts等等。 7．如果确实需要可执行的虚拟目录，建议可执行虚拟目录单独在一个分区。 8．下载补丁。 9．病毒被清除后,在windows的system目录下的文件riched20.dll将被删除，请从WINDOWS的安装盘上或再无毒机中拷贝一份干净的无病毒的该文件，否则的话，写字板和OFFICE,WORD等程序将不能正常运行。在WINDOWS98系统下的该文件大小是：431376字节。或重装office。 Nimda病毒解决方案
整理)慢病毒稳转细胞株步骤
稳转慢病毒 令狐采学 一、所需试剂 1、慢病毒载体（详细信息见附录及《质粒的扩增提取》）（大肠杆菌-80℃保存2-3年，质粒-20℃保存2-3年，病毒液-80℃保存1年） （1）载体质粒：两端的LTR、剪切位点、包装信号Ψ以及抗性或荧光基因、gag基因5′端350bp的序列及位于env序列中的RRE，含宿主RNA聚合酶识别部分 （2）包装质粒（psPAX2）：包含了pol、gag包装成分 （3）包膜质粒（pMD2.G）：用其他病毒的包膜蛋白代替了env 基因. 三种质粒共同转染产生不具有自我复制能力的病毒载体。 2、包装细胞：293T细胞 3、菌株：大肠杆菌，用于提取质粒 4、转染试剂：XTREME-GENE（-20℃保存，不可分装），一种脂质与其他组份构成的混合物 5、浓缩试剂（配好后4℃保存，原材料室温保存）：5X PEG8000/NaCl溶液（聚乙二醇）：NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中，高压蒸汽灭菌 **也可直接从公司买来病毒液（-80℃封口膜封口冻存管保存，
4℃保存3天）：滴度一般为108TU/ml 6、10mg/ml polybrene（-20℃分装保存）：溴化己二甲铵。是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene能提高感染效率2～10 倍。有一定细胞毒性，需要摸索浓度（1～10μg/ml） 7、无血清培养基：optimen 8、贴壁细胞（复苏后3代以上的细胞） 9、puromycin：嘌呤霉素，用于筛选稳转细胞 二、具体步骤 <一>病毒包装与收集（中皿，转染步骤类似于瞬转） 第一天 1、种板，10×105个293T细胞，加入全培养基双抗DMEM 4-5ml，过夜 2、配制5X PEG8000/NaCl溶液 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度30min 湿热灭绝30min；保存在4℃ 第二天 1、配管 A+B混合室温静置20min