病毒的主要成分

病毒的主要成分

一、病毒的结构

包膜：蛋白质、多糖、脂类

是某些病毒在成熟过程中穿过宿主细胞，以出芽方式向宿主细胞外释放时获得的，含有宿主细胞膜或核膜成分。

有包膜的病毒体称为包膜病毒，无包膜的称为裸露病毒。

包膜的主要作用：维持病毒体结构的完整性。

核衣壳：1、核心：核酸

2、衣壳：包绕在核酸外面的蛋白质外壳。衣壳具有抗原性，是病毒的主要抗原成分，可保护病毒核酸免受环境中核酸酶或其他影响因素的破坏，并能介导病毒进入宿主细胞。有以下类型：螺旋对称性，20面体对称性，复合对称性。

二、病毒的化学组成和功能

1、病毒核酸：DNA或RNA，是主导病毒感染、增殖、遗传、变异的物质基础。部分核酸偶感染性。

2、病毒蛋白质：病毒的主要成分，约占病毒体总重量的70%，由病毒基因组编码，具有病毒的特异性。

3、脂类和糖：脂质主要存在包膜中。

病毒的致病作用

一、病毒感染的传播方式

病毒感染的传播方式有水平传播和垂直传播

二、病毒感染的致病机制

㈠对宿主细胞的致病作用

1、杀细胞效应：

2、稳定状态感染：不具有杀细胞效应的病毒引起的感染

⑴细胞融合：其结果是形成多核巨细胞或合胞体。

⑵细胞表面出现病毒基因编码的抗原：病毒感染的细胞膜上常出现病毒基因编码的新抗原。

3、包涵体形成：

4、细胞凋亡：

5、基因整合与细胞转化：

㈡病毒感染的免疫病理作用

通过与免疫系统相互作用，诱发免疫反应损伤机体。

1、抗体介导的免疫病理作用：病毒的包膜蛋白、衣壳蛋白均为良好的抗原，能刺激机体产生相应抗体。

2、细胞介导的免疫病理作用：

3、致炎性细胞因子的病理作用：

4、免疫抑制作用：某些病毒感染可抑制免疫功能。

㈢病毒的免疫逃逸

病毒的免疫逃逸能力：病毒可能通过逃避免疫监视、防止免疫激活或阻止免疫反应发生的方式逃脱免疫应答。

三、病毒感染的类型

㈠显性感染与隐性感染

1、显性病毒感染：

2、隐性病毒感染：病毒进入机体不引起临床症状。隐性感染者称为病毒携带者。㈡急性病毒感染

㈢持续性病毒感染：1、潜伏感染：潜伏期查不出病毒。凡使机体免疫力下降的因素均可激活潜伏病毒使感染复发。

2、慢性感染：感染后未完全清除，在血中科持续检测出病毒。

3、满发病毒感染：慢性发展的进行性加重病毒感染。较为少见但后果严重。

4、急性病毒感染的迟发并发症：

呼吸道病毒

——正粘病毒

包括甲、乙、丙型流感病毒

一、生物学性状

㈠形态结构

1、核衣壳：由病毒分节段的单负链RNA与核蛋白(NP)组成。其上还附着有RNA

依赖的RNA复合酶复合体蛋白。

甲乙型流感病毒有8个节段。

流感病毒的核酸无感染性。

NP是主要的结构蛋白，抗原结构稳定，与M蛋白一起决定病毒的型特异性，很少发生变异，其抗体中无中和病毒的能力。

根据NP和MP的抗原性不同，可将流感病毒分为甲、乙、丙三型。

2、包膜：由内层基质蛋白（MP）和外层脂蛋白（LP）组成。其作用为：维持病毒外形和完整性。

MP蛋白抗原结构较稳定，呈型特异性，其抗体中无中和病毒的能力。

刺突：血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）。HA和NA的抗原结构很不稳定，易发生变异，是划分甲型流感病毒亚型的主要依据。

㈡抵抗力

流感病毒的抵抗力较弱。

㈢培养特性

1、细胞培养

2、动物接种

3、鸡胚尿囊腔培养

二、致病性和免疫性

㈠致病性

流感病毒抗原易变异，传播迅速，是引起流行性感冒的主要病毒。

丙型流感病毒只感染人类。

㈡免疫性

机体可形成特异性免疫应答。呼吸道粘膜局部分泌的sIgA抗体有阻断病毒感染的保护作用，但只能短暂存在几个月。

血清中抗HA特异性抗体为中和抗体，有抗病毒感染、减轻病情的作用，可持续数月至数年。

——副粘膜病毒

副粘膜病毒科包括：副流感病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺验病毒、尼派病毒、人偏肺病毒等。

一、麻疹病毒

抗原性较稳定，只有一个血清型。

麻疹病毒的唯一自然储存宿主为人，主要通过费米传播，感染性极强，易感者接触后几乎全都发病。

二、腮腺炎病毒

主要引起腮腺肿胀、疼痛为主要症状的流行性腮腺炎。

腮腺炎病毒只有一个血清型。

人是腮腺炎病毒的唯一储存宿主，主要通过飞沫传播。

病后可获得持久免疫。

桃拉综合征病毒病

病原：桃拉综合症病毒(TSV)

属于RNA病毒，二十面体，无囊膜，有包涵体。

症状：身体从尾扇开始发红，发红部位逐渐前推，病虾不变软，病情后期身体出现黑斑。

感染对象：主要感染南美白对虾，主要发生在虾的蜕皮期

传播方式：主要是水平传播

我国由于引进南美白对虾并进行了规模养殖，该病在南美白对虾养殖密集区中已有发现。

病虾不吃食或少量吃食，在水面缓慢游动，在特急性到急性期，幼虾身体虚弱，外壳柔软，消化道空无食物，在附足上会有红色的色素沉着，尤其是尾足、尾节、腹肢，有时整个虾体体表都变成红色。较大规格的病虾步足末端有蛀断、溃疡现象，两根触须、尾扇、胃肠道均变红，胃肠道肿胀（肠内有少量食物），肝胰脏肿大，变白。透过部分病虾的甲壳，发现肌肉由原来的半透明变成白浊，尤其是腹部末端，似甲壳与肌肉分离状。部分病虾的头胸甲处出现白区，镜检发现甲壳和胃肠壁压片红色素细胞扩散。染病初期大部分病虾头胸甲有白斑，久病不愈的病虾甲壳上有不规则的黑斑。

由于病毒病的来势较快，感染率较高，死亡率较大，因此，对病毒病的预防工作尤其重要：

1、生石灰，一次量，每667m3水体，100～150kg，彻底清塘、曝晒池底。

2、生石灰，一次量，每1m3水体，0.1～0.2g或15～20g，全池泼洒，15～20天1次。

3、聚维酮碘对受精卵浸浴消毒。

4、养殖过程中一般采用益水宝、高能氧、亚硝酸盐降解灵等，保持水体的

相对稳定，定期进行池塘消毒，杀灭抑制水体中病原微生物的繁殖，饲料中添加维C、免疫多糖、生物酶添加剂等提高虾体的免疫力，改善肠胃的微循环；同时添加对虾病毒净、氟苯尼考等抗菌药物控制虾体内病原微生物的繁殖。

5、投优质饵料，定时定量投喂。

双生病毒科

双生病毒科的病毒粒子为双联体结构，无包膜，由两个不完整的二十面体组成。双生病毒科的病毒一般发生在热带和亚热带地区。该科下共有3个属。

中文学名：双生病毒科

拉丁学名：Geminiviridae

界：病毒界

科：双生病毒科

特征

病毒粒子为双联体结构，每个粒子大小为18nm×30nm，无包膜，由两个不完整的二十面体组成（T=1），共有22个五聚体壳粒。病毒的外壳蛋白由单个多肽组成，分子质量为28~34kDa，每个壳粒结构估计有5个外壳蛋白分子。

该科是植物病毒中惟一具有单链DNA的单分体或二分体基因组病毒。病毒包裹单分子或两分子闭环状ssDNA，每分子DNA长2.5~3.0kb，总基因长约2.5~5.2kb。编码区分布于DNA的病毒链和互补链，其中间为基因间隔区。病毒复制是经一个双链复制中间体，通过滚环复制，ssDNA合成起始于基因间隔

区的一段保守序列TAATATT/AC，病毒基因双向转录，在基因间隔区具有转录起始点。大多数双生病毒的增殖部位局限于植物韧皮部组织，在细胞核中形成病毒粒子聚集体，细胞核膨大并形成颗粒状结构和纤维状结构，纤维状环可能是病毒复制装配的场所。

双生病毒科的病毒一般发生在热带和亚热带地区。该科中的玉米线条病毒属主要限于侵染禾本科单子叶植物，菜豆金色花叶病毒属和曲顶病毒属侵染双子叶植物。自然界中，玉米线条病毒属和曲顶病毒属通过叶蝉以持久方式传播，菜豆金色花叶病毒属通过粉虱以持久方式传播，病毒在介体昆虫中不繁殖，虫卵不带毒。有些种也可以通过机械传毒，但通常较难。病毒具有效的免疫原性，菜豆金色花叶病毒属内病毒之间有血清学关系，曲顶病毒属与菜豆金色花叶病毒属的一些病毒有远缘血清学关系。

玉米线条病毒属（单分体基因组、叶蝉传播、单子叶植物寄主）曲顶病毒属（单分体基因组、叶蝉或角蝉传播、双子叶植物寄主）

菜豆金色花叶病毒属（多为二分体基因组、粉虱传播、双子叶植物寄主）

病毒的分类地位

病毒(VIRUS) 被认为是一种无细胞结构的低等生物,长期以来,病毒的分类地位一直很不清晰,生物界大约有两种大相径庭的分类方法: 1.认为病毒结构简单,并

且大多数以RNA为遗传物质,起源于最原始的有机化学结构,是产生于细胞之前的原始地球的一种生命形式.因此,按此学说,其产生从发生时间看,要早与细胞生物. 2.认为病毒缺乏自主的生命活动,只有在细胞内才能体现生命现象,并且全部为胞内寄生,依靠寄主合成自身物质.因而,病毒的发生应晚于细胞,它们可能是细胞在进化中扔掉的核酸片断.

近年来,因对病毒的了解进一步深入,发现了大量证据支持第二种学说,因而现在一般把病毒的起源定在细胞生命体之后.以上是前人关于病毒的看法,下面使我的观点.

在下对于物理学略有研究的基础上,又接触到了DR.考夫曼的著作,其上病毒被认为是一种趋于最低能量的稳定结构,其遗传物质的排布几乎都达到了最低能量水平,病毒体就成为了一个低熵物质,这就带来两个结果,一个是使病毒可以耐受极为苛刻的环境,二是使其不具有主动的生命活动. 而一切细胞生物——包括我们自己——都是一个不断在向外排熵的物体,我们的熵是无时无刻不在增大的,只是我们在不停的将其转移到环境中去,我们自身才保持了一个动态平衡,疾病从本质上来讲,就是此平衡遭破坏,因而,我们乃至整个生物圈实际上都是一种耗散结构,不断得注入能量,不断的消耗,才能不断的生息繁衍. 由此,我们大概也能看出其中不同了.从本质上来说,病毒是与我们完全不同的生命形式!

因而,细胞与病毒有可能并没有先后问题,它们完全有可能是平行进化的.只是它们走得是两条截然不同的路,是主动的稳定与被动的稳定.而两者都达到了生存的

目的.两者都是自然选择的成功者.

EB病毒

概述

EB病毒（epstein-barr virus，EBv）是epstein和barr于1964年首次成功地将burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，故名。EB病毒的形态与其他疱疹病毒相似，圆形、直径180nm，基本结构含核样物、衣壳和囊膜三部分。核样物为直径45nm 的致密物，主要含双股线性dna，其长度随不同毒株而异平均为17.5×104bp 分子量108.衣壳为20面体立体对称，由162个壳微粒组成。囊膜由感染细胞的核膜组成，其上有病毒编码的膜糖蛋白，有识别淋巴细胞上的EB病毒受体，及与细胞融合等功能。此外在囊膜与衣壳之间还有一层蛋白被膜。

EB病毒仅能在b淋巴细胞中增殖，可使其转化，能长期传代。被病毒感染的细胞具有EBv的基因组，并可产生各种抗原，已确定的有：EBv核抗原（EBna），早期抗原（ea），膜抗原（ma），衣壳抗原（vca），淋巴细胞识别膜抗原（lydma）。除lydma外，鼻咽癌患者EBna、ma、vca、ea均产生相应的lgg和lga抗体，研究这些抗原及其抗体，对阐明EBv与鼻咽癌关系及早期诊断均有重要意义。EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内，以环状dna形式游离在胞浆中，并整合天染色体内。EB病毒在人群中广泛感染，根据血清学调查，我国3～5岁儿童EB病毒vca-lgg抗体阳性率达90%以上，幼儿感染后多数无明显症状，或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。青年期发生原发感染，约有50%出现传染性单核细胞增多

症。主要通过唾液传播，也可经输血传染。EB病毒在口咽部上皮细胞内增殖，然后感染b淋巴细胞，这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染。并可长期潜伏在人体淋巴组织中，当机体免疫功能低下时，潜伏的EB病毒活化形成得复发感染。人体感染EBv后能诱生抗EBna抗体，抗ea抗体，抗vca抗体及抗ma抗体。已证明抗ma抗原的抗体能中和EBv.上述体液免疫系统能阻止外源性病毒感染，却不能消灭病毒的潜伏感染。一般认为细胞免疫（如t淋巴细胞的细胞毒反应）对病毒活化的“监视”和清除转化的b淋细胞起关键作用。由EBv 感染引起或与EBv感染有关疾病主要有传染性单核细胞增多症、非洲儿童淋巴瘤（即burkitt淋巴瘤）、鼻咽癌。

所有的病毒感染都是不可能根除的，也就是从体内彻底清除，只能加强锻炼，加强营养，提高免疫力。

一、免疫性

人体感染EBV后能诱生抗EBNA抗体，抗EA抗体，抗VCA抗体及抗MA 抗体。已证明抗MA抗原的抗体能中和EBV.上述体液免疫系统能阻止外源性病毒感染，却不能消灭病毒的潜伏感染。一般认为细胞免疫（如T淋巴细胞的细胞毒反应）对病毒活化的“监视”和清除转化的B淋细胞起关键作用。

二、微生物学诊断

EBV分离培养困难，一般用血清学方法辅助诊断。在有条件实验室可用核酸杂交和PCR等方法检测细胞内EBV基因组及其表达产物。

（一）EBV特异性抗体的检测用免疫酶染色法或免疫荧光技术检出血清中EBVlgG抗体，可诊断为EBV近期感染。在鼻咽癌血清中可测出VCA-lgG抗体达90%左右，病情好转；抗体效价不降，因此对鼻咽癌诊断及预后判断有价值。

尤其我国学者大规模人群调查，发现抗EA-lgA效价上升，极大地增加了得鼻咽癌的危险性，为该癌肿的早期诊断，提供了重要手段。

（二）嗜异性抗体凝集试验主要用于传染性单核白细胞增多症的辅助诊断，患者于发病早期血清可出现lgM型抗体，能凝集绵羊红细胞，抗体效价超过1：100有诊断意义，但只有60～80%病例呈阳性，且少数正常人和血清病病人也含有此抗体，不过正常人和血清病人的抗体经豚鼠肾组织细胞吸收试验，可变为阴性。

三、临床表现

CAEBV发生在非免疫缺陷个体，CAEBV不是一种独立的疾病，可发生在任何年龄 .由于EBV可使不同部位各种类型淋巴细胞感染及克隆增生，临床表现多种多样，其病理改变几乎可涉及到各个器官。T细胞类型的CAEBV主要表现为发烧、VCA-IgG及EA-IgG抗体滴度升高；NK细胞类型的CAEBV主要表现为蚊虫过敏及相应的皮肤损害，骨髓或外周血中大颗粒细胞增多及IgE滴度升高。

四、主要症状和体征

发烧（92.7%），可呈现低烧、中等度烧及高烧，合并HLH时常常出现高烧不退。发热原因主要与CAEBV时IFN-γ、肿瘤坏死因子（TNF-α）及白介素等细胞因子的异常分泌有关，也可能和继发感染有关。

肝脏肿大（79.3% ），脾脏肿大（73.2% ），肝功能异常（67.1% ），血小板减少症（45.1% ），贫血（43.9%），淋巴结病（40.2%）。蚊虫过敏，表现为蚊虫叮咬后局部皮肤的红斑、水疱及溃疡形成，并且伴有高烧。皮疹，皮肤牛痘样水疱，腹泻及视网膜炎。

其他少见表现Ohga S等报道1例在14个月龄时诊断为CAEBV的患儿，8

岁时出现肌无力和感觉异常，脑组织活检显示大脑广泛分布EBV感染的T淋巴细胞，证实EBV引起的淋巴组织增殖性疾病（lymphoproliferative disorders，LPD）可发生在中枢神经系统。其他表现还有结肠炎、皮肤肌炎、T细胞型多肌炎、肾脏损害等。另有报道8岁男孩因眼内直肌NK细胞浸润造成双侧眼球突出。

I. 下述情况持续6月以上：a）从EBV原发感染开始症状一直持续b）EBV 抗体滴度异常（包括抗VCA-IgG≥1：5120，抗EA抗体≥1：640或EBNA抗体<1：2. II.主要脏器受损的组织学标志：a）淋巴结炎b）噬血现象c）脑膜脑炎d）持续性肝炎e）脾肿大f）间质性肺炎g）骨髓增生不良h）视网膜炎III.证实受损组织或外周血中EBV数量增多：a）受损组织中EBV的DNA、RNA 或蛋白增多b）外周血中EBV的DNA水平增高。

诊断CAEBV需满足上述每一项中的至少一条并排外任何免疫缺陷包括HIV 感染CAEBV并不是一种独立的疾病，诊断CAEBV的同时需要加上主要病理损害器官的疾病，如：恶性淋巴瘤、HLH、冠状动脉瘤、心肌炎等。如果临床疾病与EBV相关，但外周血中抗体滴度或EBV的DNA拷贝数不增高，则只能诊断为慢性EB病毒感染（CEBV）。合并严重合并症的CAEBV称为严重慢性EB病毒活动性感染（SCAEBV），包括淋巴瘤、心肌病、冠状动脉瘤、HLH及肝功能衰竭等。

EB病毒感染首发症状及其相关性疾病，以加强对本病的认识，提高临床诊断水平。方法：对255例小儿EB病毒感染患儿进行回顾性分析及总结。结果：EB病毒感染多数以发热为首发症状（占63.1%），其次以咳嗽（占13.7%）、颈部肿块（占4.7%）、眼睑浮肿（占3.5%）、肝脾肿大（占3.1%）、咽痛（占2.7%）、皮疹（占2.0%）为首发的亦有较多，较少见的尚有以头痛（占1.6%）、黄疸（占

1.2%）、口腔溃疡（占0.8%）、肝炎（占0.8%）、皮肤出血点（占0.8%）、腹胀（占0.4%）、心律失常（占0.4%）、腮腺肿大（占0.4%）、惊厥（占0.4%）、声嘶（占0.4%）为首发症状的。EB病毒感染大多数引起传染性单核细胞增多症（占51.8%），其他相关性疾病包括呼吸道感染（占2

2.4%）、扁桃体炎（占9.0%）、淋巴结炎（占4.3%）、病毒性心肌炎（占2.0%）、病毒性脑炎（占1.6%）、噬血细胞综合征（占1.6%）、肝炎（占1.6%）、川崎病（占1.2%）、镜下血尿（占1.2%）、恶性淋巴瘤（占0.8%）、溃疡性口炎（占0.8%）、腮腺炎（占0.4%）、喉炎（占0.4%）、组织细胞增生症（占0.4%）、恶性网状细胞增生症（占0.4%）和血小板减少性紫癜（占0.4%）。结论：EB病毒感染可累及全身各个系统，临床表现多种多样，临床医生应综合分析，结合相关实验室检查，尽早明确诊断，减少误诊。

五、防治原则

目前有二种疫苗问世，其中之一为我国用基因工程方法构建的同时表达EBV gp320和HBsAg的痘苗疫苗，重点使用在鼻咽癌高发区。另一为提纯病毒gp320膜蛋白疫苗，正在英国大学生患者中作小规模接种，以期观察该疫苗是否能降低传染性单核细胞增多症的发病率。

无环鸟苷（AC）和丙氧鸟苷（DHPG）可抑EBV复制，均有一定疗效。

病毒的致瘤机制

人乳头瘤病毒为例

HPV能引起人类皮肤和粘膜的多种良性乳头状瘤或疣，某些型别感染还具潜在

的致癌性。HPV与生殖道肿瘤的发生有密切关系，并与口腔、咽、喉、气管等处的乳头状瘤和皮肤的疣等良性病变有关，其中与宫颈癌发生的关系最引人关注。随着分子生物学和分子流行病学的迅速发展，病毒感染与肿瘤的关系受到广泛重视。自Durst等应用核酸杂交技术在宫颈癌组织中检测到HPV16型和18型DNA以来，众多学者从临床到分子生物学等不同方面对HPV与宫颈癌的相关性进行了大量研究。其与宫颈肿瘤的病因学关系也日益明了，WHO于1992年宣布HPV是引起宫颈癌的首要因素,是仅次于乙肝病毒与肝癌相关强度的一个病毒致癌因子。

E5蛋白

HPV16的E5蛋白是一个含84个氨基酸的疏水膜蛋白，主要散在分布在内质网及高尔基体上。HPV16E5不能永生化原始的人角质细胞C；但能协同E6和E7，发挥很重要的补充作用。

E5蛋白主要生物活性是通过结合溶酶体ATP酶上16 kD的脂蛋白l2o J，抑制H 通过，使EGFR降解受阻，EGFR数目增多，EGF与EGFR作用后所激活的各种信号通路兴奋时间延长。如表达HPV16E5的细胞在予以EGF后，可观察到MAP激酶活性增强，C·Fos和C-Jun的表达增加。这提示E5可能通过MAP激酶途径来发挥其致癌作用。大多数HPV的上游调节区域包括AP．1的结合位点，并存在于表达E5的细胞中，由于C．Fos和C—Jun的表达增加，HPV的上游调节区启动子转录水平有所增加，因此HPV E5蛋白对于E6和E7蛋白的产生非常重要。另外，EGF是人角质细胞通过G 期所必需的细胞因子，

E5的活性提示它可通过EGF来促进细胞周期进展。

HPV11和16 E5蛋白在N1H3T3细胞株中能抑制p21抑癌基因的表达，并使人角质细胞永生化。提示p21基因的表达受抑可能是癌基因所介导的生长刺激的机制之一[21]。

E6蛋白

E6蛋白是一个含151个氨基酸的蛋白，包括2个锌指状结构。E6蛋白能有效地使人乳腺上皮细胞永生化，与E7协同作用使人包皮角质细胞(HFK)永生化。

E6的主要功能是通过与p53和一种泛素连接酶E6．AP形成复合物，使p53泛素化分解而失去作用。E6还能通过将p53阻滞在胞浆内来阻止p53作用。E6对p53的抑制作用在HPV感染过程中非常重要，因为HPVE7单独表达时，可以提高p53含量；HPVE2能诱导依赖p53的凋亡作用。p53升高以及诱导依赖p53的凋亡很可能在病毒复制前即可杀死感染细胞。表达E6的细胞能阻滞p53所诱导的细胞周期停滞及凋亡，因此，E6对p53的作用是增殖感染的重要部分，它的这一功能使有基因异常的细胞得以持续增殖。有文献报道，HPV16E6蛋白能通过抑制p53的联合兴奋因子CBP／p300来抑制p53的作用。由于p3O0，CBP的一些目标基因参与细胞因子及免疫信号的产生，如IL-6，IL-8。HPVE6对0300／CBP的抑制作用，是HPV感染的免疫抑制机制之一

除了与p53作用，HPV18E6还能通过E6-AP蛋白泛肽作用降解凋亡前蛋白Bak，这种与Bak的作用可能是不依赖p53的凋亡抑制作用。另有实验表明E6通过形成C—myc—E6一E6．AP复合物来阻止C．myc所介导的凋亡，以保证病毒感染的持续存在。

与E7类似，E6同样也能绕过多种细胞周期负性因子的调控，如pl6和p27所致的G 期细胞周期停滞，使细胞进入DNA合成期(S期)。[22-25]

E7蛋白

E7蛋白是包括98个氨基酸的磷酸化核酸蛋白，共分为3个功能区CR1，CR2，CR3。E7通过位于c末端的锌指状结构形成二聚体；N末端的CR1和CR2区对E7蛋白的体外转化有重要作用。E7是HPV的主要致癌蛋白，高危型HPV(16、18、31)E7单独即能使人角质细胞(HFK)永生化。

E7通过CR2区的LXCXE结构特异地与Rb第649—772位氨基酸的口袋结构结合，并释放核转录因子E2F，使细胞进入DNA合成期。有趣的是LXCXE 结构的氨基酸序列在许多病毒蛋白及细胞内Rb结合蛋白中亦存在?，如腺病毒的E1A蛋白、猿病毒40大T抗原(SV40LTAG)、CyclinD和组氨酸去乙酰化酶(HDAC)等。这个区域的高度保守性提示，病毒蛋白与pRb结合在其致病过程中具有重要作用，且E7能与细胞内蛋白竞争结合pRb。最近的研究表明，E7 c 末端区域(CR3)能与pRb的第803位氨基酸至第841位氨基酸之间的区域相作

用，导致E2F因子游离，游离的E2F因子进入核内，与一系列具有共同特殊序列的基因启动子结合，如C．Myc，C．Myb，CDC．2，腺苷酸激酶，二氢叶酸还原酶和DNA聚合酶．Or．基因，结合后的复合物不仅能诱发DNA复制(S 期)所需基因的转录；同时能诱导产生G 期调节因子，包括CyclinA和CyclinE，进一步对pRb磷酸化，导致G 期的调节失控。E7对CyclinE和CyclinA的影响。能延长宿主细胞终未分化时间，有利于病毒自身复制。

高危型HPV和低危型HPV E7与Rb的结合力是不同的E2。这与LXCXE结构附近的序列有关，HPV6E7蛋白第20位氨基酸是甘氨酸，而HPV16E7蛋白在相应位置则为天冬氨酸。

E7对E2F的影响，除了依赖pRb途径，E7还能直接结合E2F，并兴奋其转录活性E2。E7还能通过结合组氨酸去乙酰化酶复合物(HDAC．1)组成部分Mi2．B来抑制HDAC．1作用E4，HDAC．1能与pRb协作抑制E2F转录因子活性，在细胞周期调控中有重要作用。E7与HDAC之间的作用提供了E7能减弱基因转录抑制的另一个机制。

除了对E2F转录因子的作用，E7能与AP-1(acti．vator protein-1)转录因子家族作用。AP-1转录因子家族包括C-Jun，JunB，C-Fos等，AP-1转录因子介导早期有丝分裂。有研究发现，一方面E7锌指状结构能与C．Jun的第224—249位氨基酸结合，激活细胞周期早期进展基因，在E7转化过程中起重要作用。另一方面E7的LXCXE结构能抑制pRb对C．Jun转录的兴奋，使细

胞分化脱离细胞周期进展。HPVE7对细胞分化及细胞周期进展的影响是通过一个复杂的模式进行的。E7还能与一些基本的转录因子结合(如TATA结合蛋白TBP 和TBP相关因子-110)来介导它对基因转录的影响。

E7蛋白的表达导致多种细胞周期负性调控的信号失效，包括p53介导的生长停滞，TGF-p介导的生长抑制、p16所介导的细胞周期停滞p21和p27所介导G ／S期阻滞等。体外实验表明，HPVE7能结合并灭活p21，克服p21介导的对CyclinE和CyclinA相关激酶CDK2的抑制，并能阻滞p21对依赖增殖细胞核抗原(PCNA)DNA复制的抑制作用，从而减弱p21的双重抑制作用。由于p21也可不依赖pRb来抑制E2F活性，因此导致p21抑制作用的进一步丧失。尽管E7能使细胞免于p53所介导的细胞周期阻滞，但表达E7细胞凋亡水平升高，这可能与DNA复制末期E7直接与CyclinA作用，导致依赖CyclinA的E2F失活过程的失效有关[26-29]。

噬菌体MOI值及其意义

MOI 是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI 是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。

然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如腺病毒、单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu 表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。而对于某些病毒如AAV病毒，无法用pfu表示病毒的数量，而是采用TU、IU、病毒颗粒（viral particles, v.p）或基因组数量（vector genome,v.g.）来表示病毒数量，因此其MOI就有了不同含义。采用TU或IU，MOI的含义便是TU number/cell 或IU number/cell。采用v.p.，MOI的含义便是v.p. number/cell 。采用v.g，MOI的含义便是v.g. number/cell。

可以将上述不同的MOI 表示方式分为2种：

1）以活性单位表示病毒数量，如pfu, TU, IU。这时MOI的含义是指平均每个细胞感染病毒的活性单位数。

2）以病毒颗粒或基因组数表示病毒数量，如v.p. 或v.g. 。这时MOI的含义是指平均每个细胞感染病毒的病毒颗粒或基因组数。值得一提的是，上述2种不同的MOI 表示方式在含义和数值上都有所不同。前一种是传统意义上的MOI，后一种MOI表示方式的含义更为简化和直观，也逐步被一些研究者采用。传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI）。其公式为：P(k) = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP（0）。其中：P(k) 为被感