细胞迁移-划痕实验 (1)

细胞迁移实验技术

—划痕实验

一、基本原理

细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间（例如72h），取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

二、操作步骤

1．先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

2．在孔中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同，接种原则为过夜后融合率达到100%。

3．第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。

4．PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。

5．放入37℃5% CO2培养箱，培养。可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。

6.统计方法：使用Image J软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值。

三、注意事项：

1.在用PBS 缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。

2.一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（<2%）否则细胞增殖就不能忽略。

3.按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。