冷冻切片机

冷冻切片机
冷冻切片机

冷冻切片机操作方法

①取材。

②取出组织支承器,放平摆好组织,周边滴上包埋剂,速放于冷冻台上,冰冻。

③将冷冻好的组织块,夹紧于切片机持承器上,启动粗进退键,转动旋钮,将

组织修平。

④调好欲切的厚度,一般在5~10um间。

⑤调好防卷板。制作冰冻切片,关键在于防卷板的调节上,这就要求操作者要

细心,准确地将其调较好,调校至适当的位置。切片时,切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道,平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板,取一载玻片,将其附贴上即可。

注意事项:

①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净,需经常用毛笔挑除切片残余

和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方,如果有残余的包埋剂粘于刀或板上,将会破坏甚至撕裂切片,便切片不能完整切出。

②放置组织冰冻前,应视组织的形状及走势来放置,所谓“砍柴看柴势”,切片

也是如此,如果胡乱放置,就不能收到很好的效果。

③组织块不须经各种固定液固定。

④当切片时,如果发现冰冻过度时,可将冰冻的组织连同支承器取出来,在室

温停留片刻,再行切片,或者用口中哈气,或者用大拇指按压组织块,以此来软化组织,再行切片。另者,调高冰冻点。

⑤用于附贴切片的载玻片,不能存放于冷冻处,于室温存放即可。因为当附贴

切片时,从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差,当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时,由于两种物质间温度的差别,当它们碰撞在一起时,分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力,使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片,由于温度相同,没有发生上述的现象。

LeicaCM冰冻切片机使用说明

L e i c a C M1950冰冻切片机使用说明 一、开机 1.利用主机右侧的开关开启电源,用箱体温度设置按钮将切片机温度设置到切片所需温 度,当设置温度时温度显示窗口显示设置温度,设置停止5秒后显示实际温度。只要按下箱体温度设置按钮,即可随时检查设置温度。样品头温度设置按同样方法进行。 若样品头设为最低温度(-50度),则按样品头最低温度设置按钮即可。 二、切片 1.利用切片机的厚度调节按钮调节切片厚度,调整切片角度,安装切片刀。如是一次性 刀片,请利用刀架的左右移动来使用不同的刀口,勿移动刀片 2.将样品放到样品托上,利用包埋剂固定,放到冷台上冷冻,在即将完全冷透前用热交 换装置压平。 3.将冷却透的样品放到样品头上,设置样品头温度,用样品快进按钮将样品移近刀口, 调整要切的平面,利用慢进按钮开始修片,修好后即可放下防卷板切片,如有需要可调节防卷板的上下位置,使切出的样品平整的进入防卷板与刀片的狭缝,取出后染色观察。 三、注意事项 1.切片后为防止别人改变参数,可利用控制面板上的键盘锁定按钮将键盘锁定,即按下 键盘锁定按钮5秒钟左右,时间窗口中间的两个点停止闪烁,表示键盘锁定,此时再按键盘锁定按钮5秒钟即可解除键盘锁定。 2.当停机时,应将玻璃窗打开,再次开机前应先检查切片机内是否有水,如有应吹干后 再开机,并取出隔板检查切片机箱体底部是否有水,如有需拔开底部的塞子,将水排除,吹干后再开机。 3.如常年开机,夜晚可将切片机温度设到零下十度以下,不能高于零下十度。由于切片 机冷却到工作温度大约需两个小时,如关机后第二天有样品,应提前一天开机制冷,以免影响第二天的工作。 4.若要关闭压缩机,按一下锁定开关,再按一下样品头温度设置按钮,则样品头压缩机 关闭,若按箱体温度设置按钮则箱体压缩机关闭,重复以上步骤,压缩机又打开。

Leica CM1950冰冻切片机使用说明

Leica CM 1950冰冻切片机使用说明 一、开机 1.利用主机右侧的开关开启电源,用箱体温度设置按钮将切片机温度设置到切片所需温度,当设置温度时温度显示窗口显示设置温度,设置停止5秒后显示实际温度。只要按下箱体温度设置按钮,即可随时检查设置温度。样品头温度设置按同样方法进行。若样品头设为最低温度(-50度),则按样品头最低温度设置按钮即可。 二、切片 1.利用切片机的厚度调节按钮调节切片厚度,调整切片角度,安装切片刀。 如是一次性刀片,请利用刀架的左右移动来使用不同的刀口,勿移动刀片 2.将样品放到样品托上,利用包埋剂固定,放到冷台上冷冻,在即将完全冷透前用热交换装置压平。 3.将冷却透的样品放到样品头上,设置样品头温度,用样品快进按钮将样品移近刀口,调整要切的平面,利用慢进按钮开始修片,修好后即可放下防卷板切片,如有需要可调节防卷板的上下位置,使切出的样品平整的进入防卷板与刀片的狭缝,取出后染色观察。 三、注意事项 1.切片后为防止别人改变参数,可利用控制面板上的键盘锁定按钮将键盘锁定,即按下键盘锁定按钮5秒钟左右,时间窗口中间的两个点停止闪烁,表示键盘锁定,此时再按键盘锁定按钮5秒钟即可解除键盘锁定。 2.当停机时,应将玻璃窗打开,再次开机前应先检查切片机内是否有水,如有应吹干后再开机,并取出隔板检查切片机箱体底部是否有水,如有需拔开底部的塞子,将水排除,吹干后再开机。 3.如常年开机,夜晚可将切片机温度设到零下十度以下,不能高于零下十度。由于切片机冷却到工作温度大约需两个小时,如关机后第二天有样品,应提前一天开机制冷,以免影响第二天的工作。

4.若要关闭压缩机,按一下锁定开关,再按一下样品头温度设置按钮,则样品头压缩机关闭,若按箱体温度设置按钮则箱体压缩机关闭,重复以上步骤,压缩机又打开。

LeicaCM冰冻切片机使用说明

L e i c a C M冰冻切片机使 用说明 The latest revision on November 22, 2020

Leica CM 1950冰冻切片机使用说明 一、开机 1.利用主机右侧的开关开启电源,用箱体温度设置按钮将切片机温度设置到切片 所需温度,当设置温度时温度显示窗口显示设置温度,设置停止5秒后显示实际温度。只要按下箱体温度设置按钮,即可随时检查设置温度。样品头温度设置按同样方法进行。若样品头设为最低温度(-50度),则按样品头最低温度设置按钮即可。 二、切片 1.利用切片机的厚度调节按钮调节切片厚度,调整切片角度,安装切片刀。如是 一次性刀片,请利用刀架的左右移动来使用不同的刀口,勿移动刀片 2.将样品放到样品托上,利用包埋剂固定,放到冷台上冷冻,在即将完全冷透前 用热交换装置压平。 3.将冷却透的样品放到样品头上,设置样品头温度,用样品快进按钮将样品移近 刀口,调整要切的平面,利用慢进按钮开始修片,修好后即可放下防卷板切片,如有需要可调节防卷板的上下位置,使切出的样品平整的进入防卷板与刀片的狭缝,取出后染色观察。 三、注意事项

1.切片后为防止别人改变参数,可利用控制面板上的键盘锁定按钮将键盘锁定, 即按下键盘锁定按钮5秒钟左右,时间窗口中间的两个点停止闪烁,表示键盘锁定,此时再按键盘锁定按钮5秒钟即可解除键盘锁定。 2.当停机时,应将玻璃窗打开,再次开机前应先检查切片机内是否有水,如有应 吹干后再开机,并取出隔板检查切片机箱体底部是否有水,如有需拔开底部的塞子,将水排除,吹干后再开机。 3.如常年开机,夜晚可将切片机温度设到零下十度以下,不能高于零下十度。由 于切片机冷却到工作温度大约需两个小时,如关机后第二天有样品,应提前一天开机制冷,以免影响第二天的工作。 4.若要关闭压缩机,按一下锁定开关,再按一下样品头温度设置按钮,则样品头 压缩机关闭,若按箱体温度设置按钮则箱体压缩机关闭,重复以上步骤,压缩机又打开。

CM1950冷冻切片机使用说明

Leica CM1950 冷冻切片机操作规程一. 控制键盘说明

二. 调节部件 1.切片厚度调节旋钮 2.调节切片平面的旋钮,松开后可调节切片平面切片时要拧紧 3.夹紧样品托的旋钮 4.调节切削刀口的压杆,松开后,刀架可左右移动,选择切片刀口 5.调节切片角度的压杆,松开后可调节切片角度,右侧有角度指示 6.刀座夹紧压杆,松开后刀座可前后移动 7.防卷板上下移动旋钮,移动时防卷板要离开刀刃 8.装卸刀片压杆 三操作说明 (一)开机 1.利用主机右侧的开关开启电源,用箱体温度设置按钮将切片机温度设置到切片 所需温度,当设置温度时温度显示窗口显示设置温度,设置停止5秒后显示实际温度。只要按下箱体温度设置按钮,即可随时检查设置温度。样品头温度设置按同样方法进行。若样品头设为最低温度(-50度),则按样品头最低温度设置按钮即可。

2.第一次开机时利用基准时间设置按钮设置一个基准时间,一般为北京时间,利 用除霜时间设置按钮设置一除霜时间,一般为晚上12时左右,如果在该时间切片,应将时间推迟,当设置除霜时,时间显示窗口显示除霜时间,5秒后显示基准时间。手动除霜时先按下手动除霜按钮,听到峰鸣音后,按箱体温度设置按钮,则箱体手动除霜;如按箱体温度设置按钮,箱体手动除霜,按此顺序再按一次可关闭手动除霜,如按样品头温度设置按钮,则样品头除霜,按此顺序在按一次关闭。 (二)切片 1.利用切片机的厚度调节按钮调节切片厚度,调整切片角度,安装切片刀。如是 一次性刀片,请利用刀架的左右移动来使用不同的刀口,勿移动刀片 2.将样品放到样品托上,利用包埋剂固定,放到冷台上冷冻,在即将完全冷透前 用热交换装置压平。 3.将冷却透的样品放到样品头上,设置样品头温度,用样品快进按钮将样品移近 刀口,调整要切的平面,利用慢进按钮开始修片,修好后即可放下防卷板切片,如有需要可调节防卷板的上下位置,使切出的样品平整的进入防卷板与刀片的狭缝,取出后染色观察。 (三)注意事项 1.切片后为防止别人改变参数,可利用控制面板上的键盘锁定按钮将键盘锁定, 即按下键盘锁定按钮5秒钟左右,时间窗口中间的两个点停止闪烁,表示键盘锁定,此时再按键盘锁定按钮5秒钟即可解除键盘锁定。 2.当停机时,应将玻璃窗打开,再次开机前应先检查切片机内是否有水,如有应 吹干后再开机,并取出隔板检查切片机箱体底部是否有水,如有需拔开底部的塞子,将水排除,吹干后再开机。 3.如常年开机,夜晚可将切片机温度设到零下十度以下,不能高于零下十度。由 于切片机冷却到工作温度大约需两个小时,如关机后第二天有样品,应提前一天开机制冷,以免影响第二天的工作。

CM1950冷冻切片机性能指标

徕卡CM1950冰冻切片机性能指标 1. 自动和手动除霜功能 *2. 全封闭设计,冷冻箱和样本头各自独立的除霜设置 *3. 双压缩机制冷,两个独立的制冷系统 *4. 单独一个压缩机供给样本头制冷,保持切片过程中样本温度,样本头温度-10 到-50 ° C 任意设定,以1K 递进,速冻台可放15 个样品 5. 加热的滑窗可移动 *6. UV紫外灯杀菌 *7. 机器表面银离子,抑菌 8.温度实时指示 9.记忆功能 10.切片范围:1-60um,连续设定 11.最大样本:直径55mm 12.水平进样:25mm 13.垂直幅度:59mm 14.电动粗进, 0.8mm/sec,可进行修块 *15. 8度精确样本定位 *16. 专业冷冻消毒剂,无毒副作用,可在低温下有效杀毒 *17.最优化的空气循环系统,专利的技术CryoZoneTM ; *18.全新的CE 刀架可兼容宽刀片和窄刀片,集成的红色安全护手,带取刀辅助装置; *19 .根据不同器官组织的推荐温度表,可以在用户手册中找到。 20.手轮安全锁定; *21.温度实时指示,高效明了容易看懂的LED 示意显示和操作,无需用多级菜单进行显示; *22 选配真空负压辅助切片,防止切片打卷,并吸走废屑

CM1950是最新一代的临床冰冻切片机,和以往的冰冻切片机相比,在用户安全性、切片质量和工作流程优化几方面CM1950都有超乎寻常的出色表现。专利技术的箱体低温紫外线消毒技术可以杀灭或抑制绝大多数病原体,例如SARS,HIV,乙肝等多种病毒。且消毒的操作仅一键控制,可以随时开启或关闭。箱体探测器可以侦测滑窗状态,如果箱体未处于密闭状态,紫外灯可自动熄灭防止危害到人员。机器的面板和扶手上均带有专利的银离子涂层,有效抑菌,进一步保护操作者的安全。 主要功能 ?对患者的好处: ?样品可以迅速冷却到最适宜的温度,缩短切片时间。 ?优化的制冷效果,不仅提升切片速度更提高了切片的质量。 ?切片废屑处理系统可以同步除去切片碎屑,防止切片的污染。 详细介绍 Leica的双压缩技术在CM1950上得以传承,样品头和箱体温度的独立控制可以更好适应不同组织所需的理想切片温度,改良的样品头制冷系统可以让样品的温度下降更迅速。且改良的制冷技术确保冰冻切片机的工作区温度恒定。专利的负压展片功能,可以帮助操作人员得到高质量的切片。增大负压力度可以在每次工作结束后轻松吸走箱体内的废屑。改良的样品托设计可提高样品的制冷效果,并增强样品和样品头之间的贴附能力。在秉承徕卡切片机一贯出色表现的基础上,全新设计的刀架使切片效果更好,操作更符合人机工程学。电动切片功能不仅节省人力也保持切片质量的恒定。CM1950独有的最优化的空气循环系统CryoZoneTM,冷空气从蒸发器上直接向下吹到刀片架/刀架上。刀片架和防卷板得到“间接”制冷,且冷空气吹拂过样品的表面。这种目前独一无二的制冷技术可以确保切片的最佳质量。切片机箱体宽敞,内部部件的分配更合理。控制面板避免使用复杂的文字菜单而保持了徕卡传统的图形标识,按键位置更合理,使用者可以在最快时间熟悉并掌握机器的使用,更大程度上提高整个切片的效率,便于工作流程的合理分布。

冰冻切片机的使用指南及注意事项修订稿

冰冻切片机的使用指南 及注意事项 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-

冰冻切片机使用步骤 1、按电源开关I/O侧的I(开)侧,接通仪器电源。待仪器进行短暂时间的初 始化(屏幕上将显示一个沙漏标志)后,请检查上方显示屏是否亮起,是否显示语言选择菜单。 2、请检查速冻台、冷冻箱及其切片厚度是否为实验所需要的相关数据,通 常速冻台为-35℃,冰冻箱为-20℃,切片厚度为6μm。如若不是,在屏幕 或调节到需要的数据。调节好后,等待机器降到所调节的温度。 3、将手轮手柄旋转到12点钟的位置,然后进行制动。将样品利用冰冻胶固定 在样本托上,并放于速冻台上降温。10min后,将带样品的样本托从速冻台取出,然后用样本夹钳将其固定在切片机头上。 4、取下护刀架,如果样本运行指示器上显示有足够“剩余移动距离”,那么, 您可以使用仪器左侧控制面板上的样本推进按键,使样本向刀架方向前 进。另外您也可以采用,将手轮旋转到3点钟,并且将其锁定在该位置。 将刀架左下方(黑色)的操控杆拉向你,然后小心地将刀架底座沿着滑槽向远离你的方向(前方)滑动,直至刀片快要接触到样本。将操控杆沿着远离你的方向推动,将刀架锁定在适当位置上。如果需要,可使用控制旋钮将样本精确定位在靠近刀架的位置。每旋转控制钮一个刻度,可将样本移动8μm。 5、打开手轮柄锁,顺时针(朝前)均力旋转摇手柄轮一圈,即出一张相应厚 度的切片。待切到样品位置时,放下防卷板再次切片。切好后,请将手轮锁定在6点或12点位置,使样本头移动到最低或最高位置便于取出切 片,掀起玻璃防卷板用载玻片上靠,切片立即附着在载玻片上。玻璃防卷板可以用螺丝左右调节平行。如刀上或防卷板上粘有脏东西,可用冷冻台内的毛笔刷干净。 6、当把最后一个组织切片取走后,请放好刀片护刀架,然后握住样本托的手 柄将其从夹钳处取出。锁定手轮,使用冰冻台内的刷子扫除多余组织碎 片,将其清扫到后面的废物铲上,并清理出冰冻箱体。

冷冻切片机

冷冻切片机操作方法 ①取材。 ②取出组织支承器,放平摆好组织,周边滴上包埋剂,速放于冷冻台上,冰冻。 ③将冷冻好的组织块,夹紧于切片机持承器上,启动粗进退键,转动旋钮,将 组织修平。 ④调好欲切的厚度,一般在5~10um间。 ⑤调好防卷板。制作冰冻切片,关键在于防卷板的调节上,这就要求操作者要 细心,准确地将其调较好,调校至适当的位置。切片时,切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道,平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板,取一载玻片,将其附贴上即可。 注意事项: ①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净,需经常用毛笔挑除切片残余 和用柔软的纸张擦。有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。因为这个地方是切片通过和附贴的地方,如果有残余的包埋剂粘于刀或板上,将会破坏甚至撕裂切片,便切片不能完整切出。 ②放置组织冰冻前,应视组织的形状及走势来放置,所谓“砍柴看柴势”,切片 也是如此,如果胡乱放置,就不能收到很好的效果。 ③组织块不须经各种固定液固定。 ④当切片时,如果发现冰冻过度时,可将冰冻的组织连同支承器取出来,在室 温停留片刻,再行切片,或者用口中哈气,或者用大拇指按压组织块,以此来软化组织,再行切片。另者,调高冰冻点。 ⑤用于附贴切片的载玻片,不能存放于冷冻处,于室温存放即可。因为当附贴 切片时,从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差,当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时,由于两种物质间温度的差别,当它们碰撞在一起时,分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力,使切片与载玻片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片,由于温度相同,没有发生上述的现象。

冷冻切片操作指南

超薄切片机操作指南 超薄切片为透射电子显微镜观察提供超薄高分子和生物材料样品的专门技术。针对高分子和生物材料,由于电子束穿透能力的限制,必须把样品切成厚度小于100 nm,即采用超薄切片机进行切片。 一、切片类型 材料的超薄切片分为两大类,一类是常温超薄切片:主要应用于一般的高分子材料;另一类是冷冻超薄切片(Cro-Ultramicrotomy):主要应用于软材料如软塑胶和橡胶等,在低于其玻璃转变温度时进行切片(温度越低、块越硬)。 二、切片原理 采用机械推进式。即刀固定,样品每上下运动一次时向前推进一小段距离,进行切片。特点:在设定的切削行程区间,样品以可控速度切片。 三、衡量超薄切片的质量 3.1样品结构保存良好; 3.2切片厚度为70nm左右; 3.3切片均匀,无污染,表面无褶皱,无刀痕、无震颤及染色沉淀等现象; 3.4样品支持膜耐受电子束轰击,观察时无膜的漂移和破裂现象。 四、常温切片的一般操作流程: 1、包埋 2、修样 3、制刀槽 4、装样品 5、装刀 6、注水 7、定位 8、设定参数,切片 9、捞取样品 10、复位 11、关机 4.1 包埋 包埋的目的:用包埋剂支持整个样品结构,并形成特定的机械性能,以便于切片。 4.1.1 一般选用Spurr树脂环氧树脂进行包埋 标准硬度的配方(试剂可以按比例增减)

DMAE 聚合时间0.4 8 0.4 8 0.4 8 0.4 8 1.0 3 0.2 16 * ERL-4221:二氧化乙烯基环,分子小,粘度低,聚合块硬度大。 *DER-736:聚丙二醇二缩水甘油醚,增韧剂,分子小,有低粘度性质,可调节包埋块硬度。*NSA:壬烯基琥珀酸酐,一种特殊硬化剂,应避免暴露在潮湿的大气中,以防环氧或酐链的水解作用。 *DMAE:二甲基氨基乙醇(DMAE),固化加速剂,使树脂混合物的使用期限延长。调整DMAE 的量,可调整固化时间。 ·Spurr树脂最终硬度可用DER-736量调节;调整固化时间,可调整DMAE的量。 4.1.2 包埋方法:前三种试剂依次称量,均匀混合后加入加速剂DMAE,再搅拌均匀,保证没 有气泡。包入样品,放入烘箱,一般固化7-8h,烘烤温度为75度。 4.1.3 注意事项: (1)所有试剂要防潮; (2)配包埋剂时,每加入一种试剂要搅拌均匀; (3)包埋时动作要轻巧,防止产生气泡。 4.2 修样 包埋完成后的样品块须先经过修整,降样品块尖端修整长适当大小及形状,并将要观察的部分露出。习惯上将样品块修成金字塔形(从侧面观察),顶面修成梯形或长方形,每边长度大小应小于0.5 mm(一般0.2~0.3mm),金字塔高度不宜超过0.2 mm。将样品块修成平顶的金字塔型,是为了让样品在切片过程中得到最佳的支持力。高度过大,切片时容易发生震动,在切片上留下深浅交替的平行条纹,或导致样品块前端断裂。较小的样品块较容易进行切片,但过小的切片在电子显微镜下可观察到的东西较少。 修样步骤: 4.2.1固定样品:把烘好的环氧树脂取出,固定在修样台上; 4.2.2修样 (1) 削去表面的包埋剂,露出样品; (2) 用双面刀片在样品的四周削去包埋剂,将样品块修成金字塔形(从侧面观察),顶面修成梯形或长方形

冰冻切片机的使用指南及注意事项

冰冻切片机使用步骤 1、按电源开关I/O侧的I(开)侧,接通仪器电源。待仪器进行短暂时间的初始化(屏幕上将显示一个沙漏标志)后,请检查上方显示屏是否亮起,是否显示语言选择菜单。 2、请检查速冻台、冷冻箱及其切片厚度是否为实验所需要的相关数据,通常速冻台为-35℃,冰冻箱为-20℃,切片厚度为6μm。如若不是,在屏幕上点击要修改的事项,用或调节到需要的数据。调节好后,等待机器降到所调节的温度。 3、将手轮手柄旋转到12点钟的位置,然后进行制动。将样品利用冰冻胶固定在样本托上,并放于速冻台上降温。10min后,将带样品的样本托从速冻台取出,然后用样本夹钳将其固定在切片机头上。 4、取下护刀架,如果样本运行指示器上显示有足够“剩余移动距离”,那么,您可以使用仪器左侧控制面板上的样本推进按键,使样本向刀架方向前进。 另外您也可以采用,将手轮旋转到3点钟,并且将其锁定在该位置。将刀架左下方(黑色)的操控杆拉向你,然后小心地将刀架底座沿着滑槽向远离你的方向(前方)滑动,直至刀片快要接触到样本。将操控杆沿着远离你的方向推动,将刀架锁定在适当位置上。如果需要,可使用控制旋钮将样本精确定位在靠近刀架的位置。每旋转控制钮一个刻度,可将样本移动8μm。 5、打开手轮柄锁,顺时针(朝前)均力旋转摇手柄轮一圈,即出一张相应厚 度的切片。待切到样品位置时,放下防卷板再次切片。切好后,请将手轮锁定在6点或12点位置,使样本头移动到最低或最高位置便于取出切片,掀起玻璃防卷板用载玻片上靠,切片立即附着在载玻片上。玻璃防卷板可以用螺丝左右调节平行。如刀上或防卷板上粘有脏东西,可用冷冻台内的毛笔刷干净。 6、当把最后一个组织切片取走后,请放好刀片护刀架,然后握住样本托的手

冷冻切片技术实验及冷冻切片机的基本操作

冷冻切片技术实验及冷冻切片机的基本操作 实验目的 1 掌握冷冻切片的方法 2 掌握冷冻切片的用途 实验原理 冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度并通过冰起支撑作用来进行切片的一种方法。 速冻可减小冰晶直径,避免组织细胞损伤。 制冷压缩机佛里昂制冷、半导体温差电制冷

实验材料 新鲜动物肝脏 实验方法 1 准备将仪器打开,样品台温度调至-40 ℃。 2 取材组织必须新鲜,尽可能不经水洗。取材时应避免组织挤压,防止人为假象。样品大小5X5X3mm。 3 速冻将样品放在样品台上,样品四周加水加固,冷冻5-10min. 4 切片升高温度至-15℃(视样品而定),约5min后开始切片,厚度6-15um。 5 制片将切片直接放在载波片上或先放在盛水(固定液)的培养皿中再转移到载波片上。 6 染色观察吸干水,加一滴苏木精,加盖玻片,用显微镜观察。 7 记录将观察的结果绘于实验报告上,整理自己用过的物品。 附:切片温度的设定 脑 -12℃ 肝脏 -14℃ 肾脏 -16℃ 肌肉 -20℃ 皮肤 -25℃ 多脂肪组织 -30℃ 经过固定的组织 -5℃~-10℃ 附:快速永久制片 1 固定 70%乙醇5~10min; 2 水洗 2min; 3 苏木精染色 5~10min;

4 脱色 0.1%HCl 至变红; 5 蓝化0.1NaOH 变蓝; 6 水洗 5~10s ; 7 脱水 70% 2min ; 8 伊红染色 5~10min ; 9 脱水 100%乙醇2minX2; 10 透明二甲苯 3min; 11 封片中性树胶封片。 冷冻切片机的基本操作: 1.在使用前2小时开启电源,并将温度设定在-25℃; 2.将适当大小和厚度的标本放在蘑菇状杯上,加上冷冻蜡,夹在切片机的固定槽内; 3.准备好玻片,选择切片厚度,摇动手柄,即可做成切片; 4.将做成的切片小心的吸附在玻璃片上; 5.使用结束后关闭电源,清洁腔体和擦干水气, 做好使用记录。 6.为让水蒸气蒸发,请不要马上关闭切片机的上盖移门,应到第二天再关。如需详细说明,请借阅说明书。

冰冻切片机使用说明

CMI85O操作规程 一控制键盘说明 快速制冷时间显示箱体温度显示时间显示 半导体快速设置标准设置除霜手动除霜灯开关 制冷按钮温度按钮时间按钮键盘锁定按钮 样品头快退按钮按以下一次后样品头一直退到限位处, 样品头慢退按钮按住时样品头向退,松开即停止 样品头慢进按钮按住时样品头才能快速向前迸 样品头快进按钮按住时样品头才慢速向前迸,可用于修片 二调节部件 1,切片厚度调节按钮 2,调节切片平面的旋钮,松开后可调节切片平面,切片时要拧紧 3,夹紧样品托的旋钮` 4,调节切削刀口的压杆,松开后,刀架可左右移动,选择切片刀口 5.调节切片角度的压杆.松开后可调节切片角度,右侧有角度指示 6 刀座夹紧压杆,松开后刀座可前后移动 7 防卷板上下移动旋钮,移动时防卷板要离开刀刃 8.半导体快速制冷部件 9.装卸刀片压杆 三操作说明 (一)开机 1 利用主机右侧的开关开启电源,用箱体温度设置按钮将切片机温度设置到切片所需温度,当设置温度时温度显示窗口显示设置温度,设置停止5秒后显示实际温度。只要按下箱体温度设置按钮,即可随时检查设置温度。 2 第一次开机时利用基准时间设置按钮设置一个基准时间,一般为北京时间,利用除霜时间设置按钮设置一除霜时间,一般为晚上10时左右,如果在该时间切片,应将时间推迟,:当设置除霜时,时间显示窗口显示除霜时间,5秒后显示基准时间,手动除霜时先按下手动除霜按钮,听到蜂鸣音后,如按快速制冷按钮,冷冻台手动除霜;如按箱体温度设置按钮,箱体手动除霜,按此顺序再按一次可关闭手动除霜 (二)切片 1 利用切片机的厚度谓节旋钮调节切片厚度,调整切片角度,安装切片刀。如是一次性刀片请利用刀架的左右移动来使用不同的刀口,勿移动刀片 2.将样品放到样品托上,利用包埋剂固定,放到冷台上冷冻,在即将完全冷透前用热交换装置压平,如果样品怕脱水可启动半导体快速冷冻装虽冷却,即按下快速冷冻按钮冷却,冷却时倒计时,有10分钟计到结束,计到4分钟时可再按一次该开关关闭快速冷冻功能。 3,将冷却透的样品放到切片机上,用样品快进按钮将样品移近刀口,调整要切的平面,利用慢进按钮开始修片,修好后即可放下防卷板切片,如有需要可调节防卷板的上下位置,使切出的

冷冻切片机操作规程与维护保养

操作流程及维护保养 类别医学装备科—设备操作流程及保养编号YXZB 名称Leica CM1950冷冻切片机操作流 程及保养 生效日期2017-01-01 制定单位医学装备科责任人晁岱明修订日期2016-12-25 定期更新每一年总页码 1 版本第1版 一制定目的 完善科室设备使用流程,规范设备操作,确保设备运行的可靠、安全,降低故障率,延长设备使用寿命。 二适用范围 病理科 三主要内容 1.使用前五小时提前打开仪器右侧电源开关 2.设置冷冻箱温度,短暂按下“+”或“—”按钮,将显示目标温度,按住“+”或“—”按钮超过1秒,冷冻箱温度将连续增大或减少,完成设定5秒后将显示实际值 3.设定样品温度,使用“+”“—”按钮调整设定样品温度 4.设置时间,可用标有时钟图标的控制面板上的+/-按钮设置时钟时间 5.设定除霜周期,用带有正在融化的雪花为标记的“+”/“—”键设定 6.输入修块厚度,按下TRIM/SECT(修块/切片)按钮,使右上方的LED亮起,使用控制面板区2中的“+”“—”按钮,设定所需的修块厚度 7.输入切片厚度,按下TRIM/SECT(修块/切片)按钮,使右下方的LED亮起,使用控制面板区2中的“+”“—”按钮,设定所需的切片厚度 8.将手轮锁定在顶部位置,在冷冻切片机外将样品切割至一定大小,选择预冷过的样品托,覆上冷冻包埋剂,然后添加样品并定位 9.轻轻转动手轮检查吸嘴固定是否理想 10.启动修块模式选择修块厚度 11.开启VAC,选择较低的抽吸及别(1或2) 12.用手转动手轮启动修块,或同时按RUN/STOP(运动/停止)和ENABLE(启用)键启动电动切片 13.用毛笔把切片贴到预冷的样品玻片上,然后用手指接触玻片的反面,从而温热切片,取出切片后,向前移动护刀器 14.使用退刀器拆下切片刀或一次性刀片,将切片刀插入刀盒 15.关闭VAC,从修块模式切换到切片模式,选择所需的切片厚度,从等级1开始,开启VAC,如果切片未正确伸展,转动VAC旋钮,以稍小的增量稍稍调高,一旦所需切片抽吸到压板上,立即关闭VAC!将防卷板小心翻折到一边,从该侧取出切片。 16.修块或切片后,松开并解冻样品,浸入固定液中,等待进一步处理 四、维护保养 一级保养 1.用刷子刷去切片废屑,并从机器中清除 2.取下切片废物槽进行清空 3.取下储物架和刷子架进行清洗 4.查看废液瓶的液位

冷冻切片机操作指南

冷冻切片机操作 使用前请阅读该守则,请严格按照下列顺序进行操作 1.实验前,请先在记录本上登记使用者和开始使用时间。 2.打开样品头温度开关(钥匙按钮+“+”键),设定好冷冻 箱和样品所需要的温度,待温度稳定后才可进行实验(样品需提前半个小时放入机箱)。 打开照明灯,固定好刀片,在样品托上覆上OCT,然后添加样品并定位,将样品和样品托固定在速冻架上,可启动Peltier 原件也可不启动大概5min左右就可以完全冷冻。 将样品托插入样品头,调好方向。(注:在切片之前手柄一直锁定在12点钟方向) 修片打开手轮柄锁,顺时针(朝前)均力旋转摇手柄轮一圈,即出一张相应厚度的切片(修片时厚度不要超50微米),知道切到所需要的位置时停止,清扫防卷板上的oct。切片待切到样品位置时,放下防卷板再次切片。切好后,请将手轮锁定在6点或12点位置,使样本头移动到最低或最高位置便于取出切片,掀起玻璃防卷板用载玻片上靠,切片立即附着在载玻片上。玻璃防卷板可以用螺丝左右调节平行。如刀上或防卷板上粘有脏东西,可用冷冻台内的毛笔刷干净 当把最后一个组织切片取走后,请放好刀片护刀架,然后握住样本托的手柄将其从夹钳处取出。锁定手轮,使用冰冻台

内的刷子扫除多余组织碎片,将其清扫到后面的废物铲上,并清理出冰冻箱体。 所有拿出来的东西放回去之前都需要用酒精擦拭一遍,才能放回去。 关闭样品头温度(钥匙按钮+“-”键),锁好手柄,关闭照明。记录实验结束时间,及仪器状态。清理桌面,带走样品及实验所产生的垃圾。 注意事项 速冻台温度非常低,请小心操作勿徒手接触。 使用刷子扫除多余组织碎片时,请不要刷刀片顶部的刀刃,同时由下到上顺着刀面轻刷。 切片过程中请将冷冻箱窗口留个小缝即可,不可大敞着口进行切片。 切片完毕后务必将刀片护刀架放好,将手轮锁死在12点位置。 每次使用完毕一定要将切片机冷冻箱内清理干净,保持切片机的整洁。 使用过程如有问题,不要自己处理,请联系负责人。新手使用必须告知负责人。 使用前需把冷冻切片机(Leica CM1950)使用说明书浏览一遍

冰冻切片步骤很全面

冰冻切片步骤很全面文档编制序号:[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]

冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。它实际上是以水为包埋剂,将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程,大大缩短了制片时间。同时,由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤,因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片,并作为快速切片的方法应用在临床诊断。 1. 取材: 应尽可能快地采取新鲜的材料,防止组织发生死后变化。 2. 速冻: 为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需要,一般在取材后就要立刻对组织块进行速冻,使组织温度骤降,缩短降温的时间,减少冰晶的形成。 液氮速冻切片法是实验室最常用的速冻切片方法。具体做法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内(直径约2cm),如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织,然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内,当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾,此时小盒保持原位切勿浸入液氮中,大约10-20s组织即迅速冰结成块。在制成冻块后,即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。若需要保存,应快速以铝箔或塑料薄膜封包,立即置入-80℃冰箱贮存备用。 3.固定: 样品托上涂一层OCT包埋胶,将速冻组织置于其上,4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织。 取下组织置于锡箔或者玻片上,样品托速冻。

组织置于样品托上,其上再添一层OCT胶,以完全覆盖为宜,速冻架(PE)上30min。 4.切片: 恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机,其基本结构是将切片机置于低温密闭室内,故切片时不受外界温度和环境影响,可连续切薄片至5- 10μm。切片时,低温室内温度以-15℃~-20℃为宜,温度过低组织易破碎,抗卷板的位置及角度要适当,载玻片附贴组织切片,切勿上下移动。切好室温放置30min后,入4℃丙酮固定5~10min,烘箱干燥20min。PBS 洗5min×3。进行抗原热修复,微波热修复也可,室温自然冷却。可用 3%H2O2孵育5~10min,消除内源性过氧化物酶的活性。 5.免疫荧光染色: 冰冻切片室温晾干15min,可用含10%正常山羊血清的PBS室温封闭切片1 小时(此步可不洗) 滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液(抗体的量视组织大小而定,原则是可以均匀覆盖组织面,且保证整个过程中不会使组织干涸),将切片放在加了PBS的免疫组化湿盒,室温孵育2小时或4℃过夜。 第二天先将湿盒放到37℃回温1h,然后吸取片上的一抗进行回收,将切片插入到小染缸PBS冲洗。 滴加用PBS稀释好的二抗(避光)置于分子杂交箱中37℃孵育1小时。 回收二抗,切片置于染缸内,PBS洗5min×3次。 滴加DAPI工作液染核,室温10-20min(工作浓度%染色15min)。

冻肉切片机操作规程

切片机安全操作规程 为满足车间生产的需要,确保人身安全和设备安全,特对切片机操作做以下规定:注意:只有经过培训合格的人员才能操作本机。 一、开机前的检查 检查刀具是否损坏。关闭气缸护罩和主轴护罩,检查设备螺丝是否松动。 二、设备运转 1、打开切片机电源开关,电源指示灯亮。 2、插上空压机插头,拉起电源启动开关,打开进气口开关,并将空气压力调节到4kg-5kg/cm2,不允许超过5kg/cm2,调整节流阀使推料器到适当的速度。(调节节流阀2可以调节推料速度,调节节流阀1可以调节推料器返回速度) 3、将【工作/停止/清洗】开关旋至【工作】状态,按启动按钮使刀组旋转后,才能按【送料】按钮使气缸动作。 4、将原材料放入工作台,处理好后推入切料仓。 5、启动推送按钮进行切片,送料到位,气缸自动返回。 6、若中途需要停车,请按停止按钮。需要停止送料时,请按返回按钮。下次送料时需再按送料按钮。 7、自动工作时,请按下自动按钮,在工作时每次送料后自动返回到位时开始计时,时间到后开始自动送料。再按一次自动按钮取消自动。(时间继电器的调整:按拨码开关调整时间单位,S(秒)、M(分)、H(小时),再按相应的拨码开关调整时间数值。) 三、清洗 1、每班次生产结束后,按停止按钮,待机器停下来再清理肉渣。

2、清洗时,首先将电源指示灯下面的开关旋至【清理】位置,按推料按钮,推料器可停在终端位置,待料道清理干净,按下返回按钮推料器返回原始位置。 四、注意事项 1、生产过程中员工不可以把手伸入切料仓。 2、生产过程中遇到异常情况应按下紧急停止按钮,并告知维修人员。 3、每班次生产结束后要把刀仓、切料仓、出料仓清洗干净。 4、不使用时应及时把旋钮旋至【停止】,关闭电源。 5、本设备不能切牛皮、带蹄子或骨头的猪皮和有硬骨头的鸡鸭肉,物料切片前应清除杂物,严禁铁质及碎石颗粒等硬物进入机体,以防损坏机器。 编辑:审核:批准:

冷冻切片机招标参数

冷冻切片机招标参数 一,设备总体要求 1.设备名称:冷冻切片机; 2.采购数量:1台; 3.品牌要求:进口品牌; 4.所投机型必须获得CFDA等相关认证并提供相关证明资料。 二,技术参数要求 1.压缩机制冷箱体、样品头(双压缩机) 2.冷冻箱制冷温度:0℃~-35℃ 3.冷冻箱自动除霜功能:每24小时一次 4.带冷冻箱手动除霜功能 5.速冻架冷冻位点:不低于15+2个 6.Peltier位点:不低于2个 7.速冷架制冷温度最低可达:-42℃ 8.切片厚度范围:1-100 um 9.切片厚度调节:箱体外部,保护操作者安全 10.电动粗进速度:2档;快:0.9mm/s,慢:0.3mm/s 11.电动切片,样品头进样系统配备精准的步进马达 12.切片时带样品回缩功能 13.样品定位:8°定位及360°旋转,自动中心定位和精确0位指示确保样本定位顺利进行 14.经过有效性认证的并且可在任何时间和任何温度下进行紫外线表

面消毒 三,其他要求 1.投标人应对所提供的设备提供≥12个月的质保服务; 2.开机率≥ 95 %,仪器故障时要求24小时内售后维修人员到达,48小时内解决; 3.投标人(制造商或销售商)需在山东省内设有售后服务机构和设施,并配备受过专业培训的售后服务人员; 4.提供操作手册,提供400全国免费电话。 轮转式切片机招标参数 一,设备总体要求 1.设备名称:轮转式切片机; 2.采购数量:1台; 3.品牌要求:进口品牌; 4.所投机型必须获得CFDA等相关认证并提供相关证明资料。 二,技术参数要求 1.粗进轮的位置需要接近操作者,使用舒适,有专门的修块功能键,修快时可以不用转动粗进轮。 2.样品回缩:200μm 3.切片厚度:

CM 冷冻切片机使用说明

Leica CM1950 冷冻切片机操作规程 一. 控制键盘说明 二. 调节部件 1.切片厚度调节旋钮 2.调节切片平面的旋钮,松开后可调节切片平面切片时要拧紧 3.夹紧样品托的旋钮 4.调节切削刀口的压杆,松开后,刀架可左右移动,选择切片刀口 5.调节切片角度的压杆,松开后可调节切片角度,右侧有角度指示 6.刀座夹紧压杆,松开后刀座可前后移动 7.防卷板上下移动旋钮,移动时防卷板要离开刀刃 8.装卸刀片压杆

三操作说明 (一)开机 1.利用主机右侧的开关开启电源,用箱体温度设置按钮将切片机温度设置到切片所需 温度,当设置温度时温度显示窗口显示设置温度,设置停止5秒后显示实际温度。 只要按下箱体温度设置按钮,即可随时检查设置温度。样品头温度设置按同样方法进行。若样品头设为最低温度(-50度),则按样品头最低温度设置按钮即可。 2.第一次开机时利用基准时间设置按钮设置一个基准时间,一般为北京时间,利用除 霜时间设置按钮设置一除霜时间,一般为晚上12时左右,如果在该时间切片,应将时间推迟,当设置除霜时,时间显示窗口显示除霜时间,5秒后显示基准时间。 手动除霜时先按下手动除霜按钮,听到峰鸣音后,按箱体温度设置按钮,则箱体手动除霜;如按箱体温度设置按钮,箱体手动除霜,按此顺序再按一次可关闭手动除霜,如按样品头温度设置按钮,则样品头除霜,按此顺序在按一次关闭。 (二)切片 1.利用切片机的厚度调节按钮调节切片厚度,调整切片角度,安装切片刀。如是一次 性刀片,请利用刀架的左右移动来使用不同的刀口,勿移动刀片

2.将样品放到样品托上,利用包埋剂固定,放到冷台上冷冻,在即将完全冷透前用热 交换装置压平。 3.将冷却透的样品放到样品头上,设置样品头温度,用样品快进按钮将样品移近刀 口,调整要切的平面,利用慢进按钮开始修片,修好后即可放下防卷板切片,如有需要可调节防卷板的上下位置,使切出的样品平整的进入防卷板与刀片的狭缝,取出后染色观察。 (三)注意事项 1.切片后为防止别人改变参数,可利用控制面板上的键盘锁定按钮将键盘锁定,即按 下键盘锁定按钮5秒钟左右,时间窗口中间的两个点停止闪烁,表示键盘锁定,此时再按键盘锁定按钮5秒钟即可解除键盘锁定。 2.当停机时,应将玻璃窗打开,再次开机前应先检查切片机内是否有水,如有应吹干 后再开机,并取出隔板检查切片机箱体底部是否有水,如有需拔开底部的塞子,将水排除,吹干后再开机。

Leica冷冻切片机操作流程

Leica 冷冻切片机操作流程 一.开机 1. 利用主机右侧的开关开启电源,用箱体温度设置按钮将切片机温度设置到切片所需温度,当设置温度时温度显示窗口显示设置温度,设置停止5 秒后显示实际温度。只要按下箱体温度设置按钮,即可随时检查设置温度。样品头温度设置按同样方法进行。若样品头设为最低温度(-50 度),则按样品头最低温度设置按钮即可 2. 第一次开机时利用基准时间设置按钮设置一个基准时间,一般为北京时间,利用除霜时间设置按钮设置一除霜时间,一般为晚上12 时左右,如果在该时间切片,应将时间推迟,当设置除霜时,时间显示窗口显示除霜时间,5 秒后显示基准时间。手动除霜时先按下手动除霜按钮,听到峰鸣音后,按箱体温度设置按钮,则箱体手动除霜;如按箱体温度设置按钮,箱体手动除霜,按此顺序再按一次可关闭手动除霜,如按样品头温度设置按钮,则样品头除霜,按此顺序在按一次关闭 二.切片 1. 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度,调整切片角度,安装切片刀。如是一次性刀片,请利用刀架的左右移动来使用不同的刀口,勿移动刀片

2. 将样品放到样品托上,利用包埋剂固定,放到冷台上冷冻,在即将完全冷透前用热交换装置压平 3. 将冷却透的样品放到样品头上,设置样品头温度,用样品快进按钮将样品移近刀口,调整要切的平面,利用慢进按钮开始修片,修好后即可放下防卷板切片,如有需要可调节防卷板的上下位置,使切出的样品平整的进入防卷板与刀片的狭缝,取出后染色观察 注意事项:1. 切片后为防止别人改变参数,可利用控制面板上的键盘锁定按钮将键盘锁定,即按下键盘锁定按钮5 秒钟左右,时间窗口中间的两个点停止闪烁,表示键盘锁定,此时再按键盘锁定按钮5 秒钟即可解除键盘锁定2. 当停机时,应将玻璃窗打开,再次开机前应先检查切片机内是否有水,如有应吹干后再开机,并取出隔板检查切片机箱体底部是否有水,如有需拔开底部的塞子,将水排除,吹干后再开机3. 如常年开机,夜晚可将切片机温度设到零下十度以下,不能高于零下十度。由于切片机冷却到工作温度大约需两个小时,如关机后第二天有样品,应提前一天开机制冷,以免影响第二天的工作4. 若要关闭压缩机,按一下锁定开关,再按一下样品头温度设置按钮,则样品头压缩机关闭,若按箱体温度设置按钮则箱体压缩机关闭,重复以上步骤,压缩机又打开。

冰冻切片机

冰冻切片机 品牌:徕卡 型号:CM1950 技术参数: 1、自动和手动除霜功能 2、高精度的切片机配备精确的样品头进样步进马达。 *3、双压缩机制冷:切片室和样本头有独立的压缩机制冷。其中有一个压缩机可直接控制样品头温度实现快速制冷。 *4、空气循环系统CryoZoneTM让冷空气从蒸发器上直接向下吹到刀片架/刀架上实现对样品间接制冷。 5、使用带色彩的样品托实现样品识别 6、通过清晰的标识的0位进行快速有效的样品定位。 7、宽窄刀片都适用的一次性刀片架。刀架燕尾槽固定系统进一步增加稳定性并延长工作距离。 8、样本头温度最低可达-50?C 9、单锁杆操作样本夹更换容易。 10、手轮安全锁定 11、温度实时指示 12、操作界面及其简单,用简单的图标标示 13、切片范围:1-100um,切片范围大。 14、修块可设定临床10-40 um共4种模式设定。也可设定科研1-600 um连续设定。 15、最大样本:直径55mm,水平进样:25mm,垂直幅度:59mm。样品回缩20 um或者关闭。 16、电动进样有两种速度,慢:300 um/S,以20 um递进;快:900 um/S 17、冷冻箱温度可达-35?C 18、快速冷冻台温度可达-45?C,有多达15个样品置放点和2个半导体制冷位点。 *19、消毒方式:经认证的UVC紫外线消毒-无冷凝水或污染性残留物产生,可随时终止以便处理紧急病例。有30或180分钟方式供用户选择。 20、密封的不锈钢材质高精度冷冻切片机防溅设计,易清洗,消毒时无需要从冷冻室取出。 *21、机器表层带AgProtect纳米银离子涂层技术进行有效抗菌。 *22、有厂家直接授权

冰冻切片步骤很全面

冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。它实际上是以水为包埋剂,将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程,大大缩短了制片时间。同时,由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤,因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片,并作为快速切片的方法应用在临床诊断。 1. 取材: 应尽可能快地采取新鲜的材料,防止组织发生死后变化。 2. 速冻: 为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需要,一般在取材后就要立刻对组织块进行速冻,使组织温度骤降,缩短降温的时间,减少冰晶的形成。 液氮速冻切片法是实验室最常用的速冻切片方法。具体做法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内(直径约2cm),如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织,然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内,当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾,此时小盒保持原位切勿浸入液氮中,大约10-20s组织即迅速冰结成块。在制成冻块后,即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。若需要保存,应快速以铝箔或塑料薄膜封包,立即置入-80℃冰箱贮存备用。 3.固定: 样品托上涂一层OCT包埋胶,将速冻组织置于其上,4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织。

取下组织置于锡箔或者玻片上,样品托速冻。 组织置于样品托上,其上再添一层OCT胶,以完全覆盖为宜,速冻架(PE)上30min。 4.切片: 恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机,其基本结构是将切片机置于低温密闭室内,故切片时不受外界温度和环境影响,可连续切薄片至5-10μm。切片时,低温室内温度以-15℃~-20℃为宜,温度过低组织易破碎,抗卷板的位置及角度要适当,载玻片附贴组织切片,切勿上下移动。切好室温放置30min后,入4℃丙酮固定5~10min,烘箱干燥20min。PBS洗5min×3。进行抗原热修复,微波热修复也可,室温自然冷却。可用3%H2O2孵育5~10min,消除内源性过氧化物酶的活性。 5.免疫荧光染色: 冰冻切片室温晾干15min,可用含10%正常山羊血清的PBS室温封闭切片1 小时(此步可不洗) 滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液(抗体的量视组织大小而定,原则是可以均匀覆盖组织面,且保证整个过程中不会使组织干涸),将切片放在加了PBS的免疫组化湿盒,室温孵育2小时或4℃过夜。 第二天先将湿盒放到37℃回温1h,然后吸取片上的一抗进行回收,将切片插入到小染缸PBS冲洗。 滴加用PBS稀释好的二抗(避光)置于分子杂交箱中37℃孵育1

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