噬菌体展示技术操作步骤
筛选多肽
试剂及配制
（1）LB培养基：
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl 5g
溶于去离子水，至1L，高压灭菌，4℃保存。
（2）IPTG/Xgal：
称取1.25g IPTG，1.0g Xgal，溶于二甲基甲酰胺，至总体积25ml，-20℃避光保存。（3）LB/IPTG/Xgal平板：
1L LB培养基+15g琼脂粉，高压灭菌，冷却至70℃以下，加入1ml IPTG/Xgal，立即铺板，4℃避光保存。
（4）顶层琼脂糖凝胶：
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl 5g
MgCl2.6H2O 1g
琼脂糖7g
溶于适量去离子水中，至总体积为1L。高压灭菌，分装为50ml/份，室温保存，使用时于微波炉内融化。
（5）2×M9盐：
Na2HPO412g
KH2PO46g
NaCl 1g
NH4Cl 2g
溶于适量去离子水中，至终体积为1L。
（6）小型平板：
500ml 2×M9盐
500ml 3%琼脂粉
20ml 20%葡萄糖
2ml 1M MgSO4
0.1ml 1M CaCl2
1ml 硫胺素（10mg/ml）
在混合之前，将上述成分分别高压灭菌并冷却至70℃以下，葡萄糖和硫胺素采用过滤除菌。平板储存于4℃。
（7）封闭缓冲液：
0.1M NaHCO3(PH 8.6)
5mg/ml BSA
0.02% NaN3
过滤除菌，储存于4℃。
（8）TBS：
50mM Tris-HCl (PH 7.5)
150mM NaCl
高压灭菌，室温储存。
（9）PEG/NaCl：
20%（w/v）聚乙二醇-8000
2.5M NaCl
高压灭菌，室温储存。
（10）碘化物缓冲液：
10mM Tris-HCl (PH 8.0)
1mM EDTA
4M NaI
室温避光保存。
操作步骤：
1．第一天
（1）以0.1M NaHCO3(PH 8.6)制备 100μg/ml的靶分子溶液。如果需要稳定靶分子，可以用含有金属离子的相似离子强度缓冲液。
（2）在每孔内加入1.5ml 靶分子溶液，重复涡旋直至表面完全湿润（这一步要多注意，尽量避免溶液形成液珠）。
（3）在湿盒中，4℃温和振荡孵育过夜。4℃保存于湿盒中备用。
2．第二天
（4）将ER2537（滴度测定时用来铺板的细菌培养物）接种至10ml LB培养基中。如果是在同一天扩增洗脱的噬菌体，也可以将ER2537过夜培养物接种于含有20ml LB培养基的250ml锥形瓶中（比例为1：100）。37℃剧烈振摇。
（5）将平皿反扣在洁净的纸巾上，去除包被液，加满封闭液，4℃孵育至少1h。
（6）去除包被液。用TBST（TBS+0.1%Tween-20）快速洗涤6次。反复旋转确保孔底及孔侧面都被洗涤。按照步骤5的方法去除洗涤液（也可利用自动洗板机洗涤）。洗涤要迅速，避免平皿干燥。（注意每次更换纸巾，以避免交叉污染）。
（7）用1ml TBST稀释4×1010噬菌体（10μl原库），加至包被后的平皿内，室温下轻缓摇动10-60min。
（8）以步骤5的方法去除未结合的噬菌体。
（9）以步骤6的方法用TBST洗涤板子10次，每次换用洁净的纸巾，避免交叉污染。
（10）用1ml的洗脱缓冲液洗脱结合的噬菌体。洗脱液可以是含有配体（0.1-1mM）的TBS，或是含有靶蛋白（100μg/ml）的TBS以和固化在平皿上的靶蛋白竞争结合噬菌体。室温下轻缓摇动10-60min。将洗脱液转入微量离心管中。
（10a）或使用通用缓冲液，0.2M甘氨酸-盐酸（PH2.2），1mg/ml BSA。轻缓摇动不超过10min，将洗脱液转入微量离心管中，以150μl 1M Tris-HCl(PH 9.1)中和。
（11）取小量洗脱液（1μl）测定滴度，如果有必要，可将第一轮或第二轮测定滴度的噬斑进行测序（见后续操作）。（未用的洗脱物可4℃保存过夜，第二天进行扩增。在这种情况下，用LB过夜培养ER2537，第二天，用LB培养基以1：100将该培养物稀释至20ml，加入未扩增的洗脱液，在250ml的锥形瓶内，37℃剧烈振摇孵育4.5h，进入步骤13）。
（12）将剩余的洗脱物进行扩增：将洗脱物加入20ml ER2537培养物中（对数早期），37℃剧烈振摇孵育4.5h。
（13）将培养物转入微量离心管中，4℃，10000转离心10min，将上清转入新的离心管中，再次离心。
（14）将80%的上清转入新的离心管中，加入1/6体积的PEG/ NaCl。4℃沉淀噬菌体至
少60min或过夜。
3．第三天
（15）4℃，10000转离心PEG的沉淀物15min，倾去上清，再次离心，吸去多余的上清。
（16）用1ml TBS悬浮沉淀物并转入微量离心管中，4℃离心5min使残留的细胞沉淀。
（17）将上清转入新的离心管中，用1/6体积的PEG/NaCl再次进行沉淀，冰上孵育15-60min。4℃离心10min，弃上清，再次短暂离心，用微量枪头吸去残留的上清。
（18）用200μl TBS，0.02%NaN3悬浮沉淀物，离心1min，将上清转入新管中，即为扩增的洗脱液。
（19）测定洗脱物在扩增后的浓度，贮存于4℃。
（20）包被平皿进行第二轮筛选，同步骤1-3。
4．第四天和第五天
（21）计数蓝色噬斑，确定噬菌体的滴度，计算对应于1×1011-2×1011pfu的噬菌体体积。如果滴度太低，在筛选时可采用对应于109 pfu的噬菌体体积。
（22）进行第二轮筛选：重复步骤4-18，用含1×1011-2×1011 pfu噬菌体的第一轮扩增洗脱液进行筛选，将洗涤液中的Tween 20浓度增至0.5%。
（23）测定第二轮筛选扩增洗脱液的滴度。
（24）包被平皿进行第三轮筛选，步骤1-3。
5.第六天
（25）进行第三轮筛选：用第二轮扩增洗脱液中1×1011-2×1011 pfu噬菌体进行筛选，洗涤时，Tween 20的浓度仍为0.5%。
（26）测定未扩增的第三轮洗脱液的滴度。如果不进行第四轮筛选则不必扩增第三轮的筛选洗脱物。滴度测定时的蓝色噬斑可用于测序：平板的孵育时间不得长于18h，因为时间过长可能造成噬菌体感染率下降。将剩余得洗脱物保存于4℃。
（27）选取单克隆ER2537 过夜培养。
噬菌体滴度的测定
材料和试剂
（1）微波炉。
（2）LB/IPTG/Xgal培养板。
（3）LB培养基。
（4）顶层琼脂糖凝胶。
操作步骤
（1）在5-10ml LB培养基中接种单个ER2537克隆，振摇孵育直至对数生长中期（OD600=0.5）（2）在细胞生长时，微波融化顶层琼脂糖凝胶，分装至无菌培养管内，每管3ml。维持在45℃备用。
（3）37℃预热LB/IPTG/Xgal培养板，备用。
（4）以LB培养基10倍比稀释噬菌体。
建议稀释范围：对扩增的噬菌体培养上清，108-1011；对未扩增的筛选洗脱液，101-104。每次稀释都换用新的加样枪头，最好使用气溶胶阻隔枪头以避免交叉污染。
（5）一旦ER2537培养物长至对数生长中期，分装至微量离心管中，每管200μl。
（6）将倍比稀释的噬菌体上清加入含细菌培养物的微量离心管中，一支微量离心管中仅加入一种稀释液10μl，快速涡旋，室温孵育1-5min。
（7）转移至含有45℃顶层琼脂糖凝胶的管中，快速涡旋混匀，立即倾倒至预热的
LB/IPTG/Xgal平板上，轻缓摇动平板使顶层胶均匀分布。
（8）冷却平板5min，37℃倒置培养过夜。
（9）噬斑计数以噬斑数为100左右的平皿为准，噬斑数乘以稀释度即可获得每10μl噬菌体的滴度-噬斑形成单位（pfu）。
噬斑的扩增
材料和试剂
（1）恒温摇床
（2）培养管
（3）LB培养基
（4）甘油
操作步骤
（1）以LB培养基稀释ER2537过夜培养物。1ml分装至培养管，每管中接种一个克隆。
第三轮筛选后，每10个克隆就可能获得一个共同序列。
（2）使用消毒牙签或枪头，穿刺噬斑，接种至上述培养管中。注意：要挑选噬斑数不超过100的平板上的噬斑，从而保证每一个噬斑仅包含单个DNA序列。
（3）37℃振摇孵育4.5-5h（不能过长）。
（4）可做可不做。除了测定单个克隆的序列，也可将筛选到的全部噬菌体进行测序，一步就可能获得12个残基中的共有序列。取10μl未扩增的洗脱物加至1ml宿主菌稀释液中37℃振摇孵育4.5-5h。
（5）将培养物转至微量离心管，离心30s，取上清转入新的离心管中再次离心，取上部约80%的上清转至新的离心管。这是扩增的噬菌体贮存液，能4℃保存数周，若需长期保存，以无菌甘油1：1稀释后，-20℃保存。
测序模板的快速纯化
材料和试剂
（1）真空泵
（2）PEG/ NaCl溶液
（3）碘化物缓冲液
（4）70%乙醇
（5）TE缓冲液：10mM Tris-HCl ，PH 8.0
1 mM EDTA
操作步骤
（1）扩增噬斑（见上述），在第一次离心后，将500μl含有噬菌体的上清转入新的离心管中。
（2）加入200μl PEG/ NaCl，颠倒混匀，室温静置10min。
（3）离心10min，倾去上清。
（4）再次短暂离心，仔细吸去残留上清。
（5）用100μl碘化物缓冲液完全重悬沉淀物，加入250μl乙醇。室温孵育10min，室温短暂孵育将选择性沉淀单链噬菌体DNA，而大部分噬菌体蛋白保留在溶液中。（6）离心10min，倾去上清，用70%乙醇洗涤沉淀物，真空吸干。
（7）用30μl TE缓冲液重悬沉淀物。
（8）取5μl作为测序模板，或根据需要增减。
ELISA检测筛选到的靶分子结合肽
材料和试剂
（1）酶标板，酶标仪。
（2）湿盒。
（3）吸水纸。
（4）LB培养基。
（5）PEG/ NaCl。
（6）TBS。
（7）0.1M NaHCO3(PH 8.6)。
（8）HRP底物缓冲液。
ABTS贮存液：在100ml 50mM的柠檬酸钠溶液（PH 4.0）中溶解22mgABTS，过滤除菌贮存在4℃。
操作步骤
（1）噬斑扩增上清部分用于DNA序列测定，其余保存于4℃。
（2）将ER2537接种至20ml LB培养基中，37℃孵育至轻微混浊，或将过夜培养的ER2537按1：100稀释至20ml。
（3）加入5μl噬菌体上清，37℃剧烈通气培养4.5h。
（4）将培养物转入离心管，10000转离心10min。取上清转入新的离心管，再次离心。（5）吸取上层80%的上清转入新离心管中，加入1/6体积的PEG/ NaCl，4℃沉淀1h或过夜。
（6）4℃，10000转离心PEG沉淀物15min。倾去上清，再次短暂离心，吸去残留上清。（7）用1ml TBS悬浮沉淀物，并转至微量离心管中，4℃离心5min以沉淀残留细胞。（8）将上清转至新离心管中，再次用1/6体积的PEG/NaCl沉淀噬菌体。冰上孵育15-60min，4℃离心10min。倾去上清，再次短暂离心，吸去残留上清。
（9）用50μl TBS悬浮沉淀物。测定滴度，贮存于4℃。
（10）取100-200μl溶于0.1M NaHCO3(PH 8.6)的100μg/ml靶蛋白包被酶标板的加样孔，在密封的湿盒内4℃孵育过夜。每一个克隆包被一列。
（11）倾去靶溶液，并将板子反扣在吸水纸上尽量吸干。在每一个孔中加满封闭缓冲液。
另外，每个克隆都需要封闭一列未包被的加样孔，以检测其与BSA包被板子的结合。
封闭另一个酶标板用来稀释噬菌体，这样可以保证稀释过程中噬菌体不被靶蛋白吸收。4℃封闭1-2h。
（12）倾去封闭液，用1（TBS/Tween 洗涤板子6次，每次都将酶标板反扣在吸水纸上尽量吸干。Tween的浓度应该与筛选洗涤步骤的浓度相同。
（13）用TBS/Tween 4倍比稀释噬菌体，200μl/孔，第一孔为1012颗粒，第十二孔为2×105颗粒。
（14）用多道加样枪，将每一列倍比稀释的噬菌体转至靶蛋白包被的酶标板内。室温振荡孵育1-2h。
（15）用1×TBS/Tween洗板6次。
（16）用封闭缓冲液稀释HRP标记的抗M13抗体，稀释度为1：5000，每孔加入200μl，室温振荡孵育1h。
（17）用1×TBS/Tween洗板6次。
（18）制备HRP底物缓冲液。ABTS贮存液：在100ml 50mM的柠檬酸钠溶液（PH 4.0）中溶解22mgABTS，过滤除菌贮存在4℃。使用液要新鲜配制，在21ml ABTS贮存液中加入36μl 30% H2O2，用于一个酶标板。
（19）每孔加入200μl底物缓冲液，室温孵育10-60min。
（20）酶标仪检测405-415nm处的OD值。
噬菌体展示总结技术
噬菌体展示总结技术 各位读友大家好，此文档由网络收集而来，欢迎您下载，谢谢篇一：噬菌体展示技术 噬菌体展示技术 关键词：噬菌体展示组装融合蛋白2008-07-21 00:00 来源：互联网点击次数：3662 噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时,外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。本文主要概述了噬菌体展示技术的基本原理、噬菌体展示系统研究以及技术特点等，并跟踪了目前该领域的最新研究进展和发展前景。 关键词：噬菌体展示；组装；融和
蛋白 1985年，Smith G P[1]第一次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基因Ⅲ，使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面，从而创建了噬菌体展示技术。该技术的主要特点是将特定分子的基因型和表型统一在同一病毒颗粒内，即在噬菌体表面展示特定蛋白质，而在噬菌体核心DNA中则含有该蛋白的结构基因。 另外，这项技术把基因表达产物与亲和筛选结合起来，可以利用适当的靶蛋白将目的蛋白或多肽挑选出来。近年来，随着噬菌体展示技术的日益完善，该技术在众多基础和应用研究领域产生的影响已日渐明显。 一、噬菌体展示技术的原理 噬菌体展示技术是将多肽或蛋白质的编码基因或目的基因片段克隆入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框正确且不影响其他外壳蛋白正常功能的情况下，使外源多肽或蛋白与外壳
蛋白融合表达，融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面。思想汇报专题被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性，以利于靶分子的识别和结合。肽库与固相上的靶蛋白分子经过一定时间孵育后，洗去未结合的游离噬菌体，然后以竞争受体或酸洗脱下与靶分子结合吸附的噬菌体，洗脱的噬菌体感染宿主细胞后经繁殖扩增，进行下一轮洗脱，经过3轮～5轮的“吸附-洗脱-扩增”后，与靶分子特异结合的噬菌体得到高度富集 [2]。所得的噬菌体制剂可用来做进一步富集有期望结合特性的目标噬菌体。 二、噬菌体展示系统 单链丝状噬菌体展示系统 （1）PⅢ展示系统。 丝状噬菌体是单链DNA病毒，PⅢ是病毒的次要外壳蛋白，位于病毒颗粒的尾端，是噬菌体感染大肠埃希菌所必须的。每个病毒颗粒都有3个～5个拷贝
噬菌体展示技术操作步骤
筛选多肽 试剂及配制 （1）LB培养基： 胰蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 5g 溶于去离子水，至1L，高压灭菌，4℃保存。 （2）IPTG/Xgal： 称取1.25g IPTG，1.0g Xgal，溶于二甲基甲酰胺，至总体积25ml，-20℃避光保存。（3）LB/IPTG/Xgal平板： 1L LB培养基+15g琼脂粉，高压灭菌，冷却至70℃以下，加入1ml IPTG/Xgal，立即铺板，4℃避光保存。 （4）顶层琼脂糖凝胶： 胰蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 5g MgCl2.6H2O 1g 琼脂糖7g 溶于适量去离子水中，至总体积为1L。高压灭菌，分装为50ml/份，室温保存，使用时于微波炉内融化。 （5）2×M9盐： Na2HPO412g KH2PO46g NaCl 1g NH4Cl 2g 溶于适量去离子水中，至终体积为1L。 （6）小型平板： 500ml 2×M9盐 500ml 3%琼脂粉 20ml 20%葡萄糖 2ml 1M MgSO4 0.1ml 1M CaCl2 1ml 硫胺素（10mg/ml） 在混合之前，将上述成分分别高压灭菌并冷却至70℃以下，葡萄糖和硫胺素采用过滤除菌。平板储存于4℃。 （7）封闭缓冲液： 0.1M NaHCO3(PH 8.6) 5mg/ml BSA 0.02% NaN3 过滤除菌，储存于4℃。 （8）TBS： 50mM Tris-HCl (PH 7.5) 150mM NaCl
高压灭菌，室温储存。 （9）PEG/NaCl： 20%（w/v）聚乙二醇-8000 2.5M NaCl 高压灭菌，室温储存。 （10）碘化物缓冲液： 10mM Tris-HCl (PH 8.0) 1mM EDTA 4M NaI 室温避光保存。 操作步骤： 1．第一天 （1）以0.1M NaHCO3(PH 8.6)制备 100μg/ml的靶分子溶液。如果需要稳定靶分子，可以用含有金属离子的相似离子强度缓冲液。 （2）在每孔内加入1.5ml 靶分子溶液，重复涡旋直至表面完全湿润（这一步要多注意，尽量避免溶液形成液珠）。 （3）在湿盒中，4℃温和振荡孵育过夜。4℃保存于湿盒中备用。 2．第二天 （4）将ER2537（滴度测定时用来铺板的细菌培养物）接种至10ml LB培养基中。如果是在同一天扩增洗脱的噬菌体，也可以将ER2537过夜培养物接种于含有20ml LB培养基的250ml锥形瓶中（比例为1：100）。37℃剧烈振摇。 （5）将平皿反扣在洁净的纸巾上，去除包被液，加满封闭液，4℃孵育至少1h。 （6）去除包被液。用TBST（TBS+0.1%Tween-20）快速洗涤6次。反复旋转确保孔底及孔侧面都被洗涤。按照步骤5的方法去除洗涤液（也可利用自动洗板机洗涤）。洗涤要迅速，避免平皿干燥。（注意每次更换纸巾，以避免交叉污染）。 （7）用1ml TBST稀释4×1010噬菌体（10μl原库），加至包被后的平皿内，室温下轻缓摇动10-60min。 （8）以步骤5的方法去除未结合的噬菌体。 （9）以步骤6的方法用TBST洗涤板子10次，每次换用洁净的纸巾，避免交叉污染。 （10）用1ml的洗脱缓冲液洗脱结合的噬菌体。洗脱液可以是含有配体（0.1-1mM）的TBS，或是含有靶蛋白（100μg/ml）的TBS以和固化在平皿上的靶蛋白竞争结合噬菌体。室温下轻缓摇动10-60min。将洗脱液转入微量离心管中。 （10a）或使用通用缓冲液，0.2M甘氨酸-盐酸（PH2.2），1mg/ml BSA。轻缓摇动不超过10min，将洗脱液转入微量离心管中，以150μl 1M Tris-HCl(PH 9.1)中和。 （11）取小量洗脱液（1μl）测定滴度，如果有必要，可将第一轮或第二轮测定滴度的噬斑进行测序（见后续操作）。（未用的洗脱物可4℃保存过夜，第二天进行扩增。在这种情况下，用LB过夜培养ER2537，第二天，用LB培养基以1：100将该培养物稀释至20ml，加入未扩增的洗脱液，在250ml的锥形瓶内，37℃剧烈振摇孵育4.5h，进入步骤13）。 （12）将剩余的洗脱物进行扩增：将洗脱物加入20ml ER2537培养物中（对数早期），37℃剧烈振摇孵育4.5h。 （13）将培养物转入微量离心管中，4℃，10000转离心10min，将上清转入新的离心管中，再次离心。 （14）将80%的上清转入新的离心管中，加入1/6体积的PEG/ NaCl。4℃沉淀噬菌体至
噬菌体展示技术的原理及应用
噬菌体展示技术的原理及应用 将编码多肽的外源DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合（插入信号肽与衣壳蛋白基因间）后，以融合蛋白的形式呈现在噬菌体的表面，每个噬菌体只含1个外源基因，被展示的多肽或蛋白可保持相对的空间结构和生物活性，展示在噬菌体的表面。导入了各种各样外源基因的一群噬菌体，就构成一个展示各种各样外源肽的噬菌体展示库。 当用一个蛋白质去筛查一个噬菌体展示库（展示文库为流动相，被筛蛋白为固定相）时，就会选择性地同与其有相互作用的某个外源肽相结合，从而分离出展示库里的某个特定的噬菌体，研究该噬菌体所含外源基因的生物学功能。 技术发展 噬菌体展示优越性 1、将蛋白与其遗传信息之间提供了直接的物理联系，可有效的对所需功能的克隆进行反复筛选并扩增。 2、被展示多肽或蛋白结构功能与天然状态接近，可简便快速筛选得到与靶分子高亲和力的被展示物。 3、筛选过程中，特定的噬菌体克隆由于对其配体的特意亲和性而不断的得到富集，从而使相对稀少的可以结合配体的克隆能够快速、有效地从一个大文库中被筛选出来。 4、与其它技术相比，容易对库容量较大的文库进行筛选。
噬菌体展示局限性： 1、肽库容量受大肠杆菌转化效率影响，容量一般在109，高于此限制的较多基因将难以表达； 2、编码多肽的基因带有一定的密码子偏爱性，限制了肽库的复杂度； 3、噬菌体宿主大肠杆菌的生物合成系统有自身的限制因素，如缺乏氨基酸修饰、蛋白糖基化、不能合成D型氨基酸。 4、在噬菌体展示过程中必须经过细菌转化、噬菌体包装，有的展示系统还要经过跨膜分泌过程，这就限制了所建库的分子多样性。 5、不是所有的序列都能在噬菌体中获得很好的表达，因为有些蛋白质功能的实现需要折叠、转运、膜插入和络合，导致在体内筛选时需外加选择压力。 应用范围 肿瘤研究及药物靶向治疗 诊断用疫苗研发 酶抑制剂筛选 构建抗体/cDNA文库 研究蛋白质与核酸相互作用的生物学过程 研究新型的基因导向系统 Eg1：从HBx（肝癌相关抗原）单抗细胞中克隆重链可变区基因，重组入M13噬菌体，验证表达产物具有活性，然后表达出单链抗体、单域抗体或嵌合抗体，为肝癌导向治疗研究提供基础。 Eg2：为解决非典型嗜血流感杆菌毒力因子表面蛋白混合寡糖LOS制备疫苗遇到的免疫原型弱的问题，用兔抗LOS筛选肽库，得到4个一致性序列，其中3个与兔抗亲和力高。用筛选得到的3个高亲和力肽免疫兔得到的抗体对染病小鼠模型具有抗体保护性作用。
噬菌体展示技术解析
噬菌体展示技术解析 噬菌体展示技术经过近20年的发展和完善，已被广泛应用于抗原抗体库的建立、药物设计、疫苗研究、病原检测、基因治疗、抗原表位研究及细胞信号转导研究等。噬菌体展示系统模拟了自然免疫系统，使我们有可能模拟体内抗体生成过程，构建高亲和力抗体库。由于噬菌体展示技术实现了基因型和表型的有效转换，使研究者在基因分子克隆基础上实现了蛋白质构象体外控制，从而为获取具有良好生物学活性的表达产物提供了强有力手段。另外，噬菌体展示技术已成为不经过免疫获取特异性人源抗体的新途径，为获取对人类和动物疾病有诊断和治疗价值的单克隆抗体提供了重要手段。 应用面这么高大上，那么原理到底是什么呢？那接下来将由小编为您揭开其神秘的面纱！ 一、噬菌体展示技术的原理 噬菌体展示技术（phage display）是将多肽或蛋白质的编码基因插入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框正确且不影响其他外壳蛋白正常功能的情况下，使外源多肽或蛋白与外壳蛋白融合表达，融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面。展示到噬菌体表面的多肽或蛋白保持相对独立的空间结构和生物活性，可以与靶分子结合和识别。噬菌体展示的肽库或蛋白库与固相抗原结合，洗去未结合的噬菌体，然后用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体，中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增，经过3-5轮的富集，逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例，最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。下图粗略展示了技术筛选的过程： 二、噬菌体展示系统的分类 1.M13噬菌体展示系统 M13噬菌体属于单链环状DNA病毒，其基因组为6.4 kb，编码10种蛋白，其中5种为结构蛋白，包括主要衣壳蛋白的PⅧ和次要衣壳的pⅢ、pⅥ、PⅦ和PⅨ。其中，p