行业标准出口动物源性食品中动物种类的定性检测T-RFLP方法编制
行业标准《出口动物源性食品中动物种类的定性检测T-RFLP方法》
编制说明
一、任务来源
根据国家认证认可监督管理委员会2009年《关于下达2009年度出入境检验检疫行业标准制（修）订计划的通知》下达的编写任务通知（计划编号2009B134），由北京出入境检验检疫局负责《出口动物源性食品中动物种类的定性检测T-RFLP方法》的起草工作。
本标准是按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则》的要求进行编写的。
二、标准编制的目的和意义
随着人们生活水平的提高和生活节奏的加快，人们对禽、肉、鱼等食品及其加工食品（如香肠、罐头等）的需求也在不断增加。对于一些凭肉眼难以辨认其来源的动物源性食品（尤其是经过加工的食品），某些商家在经济利益的驱使下，常常用比较廉价的动物品种替代比较昂贵的动物品种。现存比较常见的商业欺诈行为之一就是乱贴标签，标签上标明的原料成分与实际使用的原料成分不符。这种行为不仅损害了消费者的经济利益和健康，而且还有可能打乱正常的市场竞争秩序。
为了更好地保护消费者的身体健康，维护消费者的经济利益，也考虑到宗教信仰问题，世界各国都对食品标签的内容做了严格的规定。例如，在新加坡市场上，食品标签必须包括食品的品名（或对食品真实性的描述用语）和食品的成分，当食品由两种或多种成分构成时，对每一种成分应按它们的重量或所占比例给予恰当说明，其顺序应按照他们占有的重量百分比递减标示。我国的《预包装食品标签通则》（GB7718-2004）也对食品标签的具体内容作了明确规定。国家质检总局于早在2000年就颁布了《中华人民共和国进出口食品标签管理办法》。该办法第二章标签审核的第十一条明确规定“进出口食品标签审核的内容包括：标签的格式、版面以及标注的与质量有关的内容是否真实、准确”。对于乱贴标签现象，世界各国也在相关法规中作出明确规定。如瑞士《食品条例》(Food Ordinance)的第十九章中要求食品标签不允许欺骗消费者。我国的《预包装食品标签通则》（GB7718-2004）中也明确规定“食品标签的所有内容，不得以错误的、引起误解的或欺骗性的方式描述或介绍食品”。
法规已经明确规定食品必须加贴标签，而且食品标签不允许欺骗消费者。贯彻执行这类法规的条件之一就是食品监管机构必须具有判断食品标签是否存在欺诈行为的能力。对于动物源性食品而言，一个重要的判断依据就是检测其标签上标明的动物种类是否与实际使用的动物种类相符，即进行动物种类鉴定。因此，开展动物源性食品中动物种类鉴定方法的研究对于更好地保障我国进出口食品的质量和安全、加强对国内动物源性食品市场和生产企业的监管，从而保护消费者的切身利益具有重要意义。
目前，我国已颁布的与动物种类鉴定有关的国家标准和行业标准有：
1）GB/T 20190-2006 饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应（PCR）法2）GB/T 21101-2007 动物源性饲料中猪源性成分定性检测方法PCR方法
3）GB/T 21102-2007 动物源性饲料中兔源性成分定性检测方法实时荧光PCR法
4）GB/T 21103-2007动物源性饲料中哺乳动物源性成分定性检测方法实时荧光PCR
法
5）GB/T 21104-2007 动物源性饲料中反刍动物源性成分（牛、羊、鹿）定性检测方法PCR方法
6）GB/T 21105-2007 动物源性饲料中狗源性成分定性检测方法PCR方法
7）GB/T 21106-2007 动物源性饲料中鹿源性成分定性检测方法PCR方法
8）GB/T 21107-2007 动物源性饲料中马、驴源性成分定性检测方法PCR方法
9）GB/T 21110-2007 动物源性饲料中骆驼源性成分定性检测方法PCR方法
10）SN/T 1119-2002 进出口动物源性饲料中饲料中牛羊源成分检测方法PCR法11）SN/T 2051-2008 食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR 法
从已制定的标准可以看出，已建立的常用的动物种类鉴定方法主要是物种特异引物普通PCR法和实时荧光PCR法。如果是普通PCR法，PCR产物还需要经过测序或酶切进一步确定所含物种。
物种特异引物PCR或实时荧光PCR方法的检测灵敏度和特异性都很好，已建立的标准适用于鉴定猪、牛、羊、兔、狗、鹿、马、驴和骆驼9种动物成分。对于其他的动物种类，由于还没有提供特异性的引物和探针，目前所建立的标准还没有提供方法进行鉴定。而且对于牛和羊，所建立的标准不能鉴定是水牛还是奶牛，是山羊还是绵羊。
在没有特异引物和探针的情况下，根据文献资料的报道，国际上更多的是采用PCR-RFLP方法，这种方法使用通用引物而不是物种特异引物对提取的样品DNA进行扩增,扩增产物经适当的限制性内切酶酶切，通过产生的酶切图谱确定动物种类。当客户需要我们鉴定送检样品中有没有某种动物成分，而这种动物成分又不在已建立标准所能鉴定的动物种类的范围内时，PCR-RFLP也不失为一种很好的解决问题的方法。一般，只需要三种以上的限制性内切酶便可以确定动物种类。
对于普通的PCR-RFLP方法，PCR扩增后产物经酶切后用琼脂糖凝胶分析酶切结果。普通琼脂糖凝胶的分辨率有限，片段小于100bp时条带不仅容易弥散，而且不容易准确判断片段大小，因此这种方法的结果判断受主观影响较大。例如，我国现行的国家标准“饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应（PCR）法”（GB/T 20190-2006）中写到“PCR 扩增产物经Sau3A I限制性内切酶酶切后，牛源性成分酶切产物的长度是57bp和214bp，绵羊源性成分酶切产物的长度是91bp和204bp，山羊源性成分的酶切产物的长度是92bp和202bp”。实际用普通琼脂糖凝胶电泳判断这种短片段的酶切产物大小是很不准确的。
北京出入境检验检疫局技术中心于2008年向质检总局申报并立项了《食品中动物源性成分种类识别技术研究》（课题编号2008IK155）。该课题首次尝试采用荧光标记和毛细管电泳技术解决PCR-RFLP技术中普通琼脂糖电泳分辨率较低的问题。该课题于2009年2月经过专家鉴定并获得专家的一致好评。研究结果也得到国际同行的认可，文章发表在Meat Science 85 (2010): 265-269。
在此课题的基础上，课题组向国家认证认可监督管理委员会提出申请并立项了行业标准《出口动物源性食品中动物种类的定性检测T-RFLP方法》（计划编号2009B134）。本标准所建立的方法拓宽了我国已建立的动物种类鉴定的实验思路，可以有效完善我国已建立的动物种类领域的标准体系，为我国在动物源性食品鉴定方面提供新的技术手段和方法。
三、本标准的研究过程
1. 实验材料
北京出入境检验检疫局动检实验室为课题组提供了马、鹿、狗、猪、牛、绵羊、鸡等动物种类的血清样本。小鼠肌肉组织由北京师范大学生命科学学院提供。三文鱼、火鸡、水牛、绵羊和山羊样本从进口样本中采集。鲟鱼样本由水产科学研究院东海水产研究所提供。 2. 实验方法的建立 2.1 DNA 提取方法的确认 2.1.1 传统方法
选择最常用的SDS 方法提取动物组织。操作步骤详见标准。该方法能很好地提取出动物组织中的DNA 。 2.1.2 试剂盒法
比较了三种常用的动物组织DNA 提取试剂盒的效果。三种试剂盒分别为Promega 公司生产的Wizard? Genomic DNA Purification Kit(Wizard? 基因组DNA 纯化试剂盒)、Qiagen 公司生产的DNeasy? Blood & Tissue Kit （血液和组织DNA 提取试剂盒）和天根公司生产的TIANamp Genomic DNA Kit （TIANamp 基因组DNA 提取试剂盒）。天根试剂盒和Promega 试剂盒提取DNA 的效果比较图见图1.1。天根试剂盒和Qiagen 试剂盒提取DNA 的效果比较图见图1.2。
从电泳结果可以看出，对于未经加工的肉制品，三个试剂盒都可以提取出完整的DNA 。
4 3 2 1 M 4 3 2 1
Tiagen Promega
图1.1 天根试剂盒和Promega 试剂盒DNA 提取效果比较。 1为牛奶样品，2为猪肉样品，3为鸡肉样品，4为牛肉样品，M 为分子量标准DL2000。
9 8 7 6 5 4 3 2 1 M
9 8 7 6 5 4 3 2 1 M
Tiagen Qiagen
图1.2 Tiagen 试剂盒与Qiagen 试剂盒提取效果比较。
M ，分子量标准DL2000；1，虫草牛肉（平遥，冠陶牌）；2，麻辣驴肉（平遥，冠陶牌）；3，生鸡肉；4，水果乳酪；5，胡椒乳酪；6，山羊奶酪；7，猪肉香肠；8，唐扬（鸡肉制品）；9，生牛肉。
对于加工过的食品，由于加工过程中DNA降解，只能看见弥散的核酸，并看不到明显的条带。三个试剂盒相比，Tiagen试剂盒的效果好于Promega试剂盒，与Qiagen试剂盒提取效果相当。但是Tiagen试剂盒比Qiagen试剂盒廉价很多。
2.2 目的基因的选择
2.2.1 引物合成
通过查阅文献，分别合成了cytb1，cytb2，cytb3和12S rRNA的通用引物，引物序列见表1.1。
表1.1 cytb和12S rRNA基因通用引物序列和扩增产物长度
2.2.2cytb1、cytb2、cytb3和12S rRNA扩增不同种类动物样品的扩增效果比较：
分别用cytb1、cytb2、cytb3和12S rRNA引物扩增提取出来的鸡、狗、马和牛的DNA。扩增产物电泳结果见图1.3。从电泳结果来看，12S rRNA能够从全部4种动物中扩增出目的条带。cytb1和cytb2扩增不出目的条带。Cytb3能从牛肉DNA中扩增出明显的目的条带。因此决定弃用cytb1和cytb2，将cytb3和12S rRNA引物用更多的物种做进一步的比较。比较结果见图1.4。从电泳结果来看，12S rRNA能够从全部18种动物中扩增出目的条带。而cytb3只能从8种动物中扩增出明显的目的条带。因此，选用12S rRNA基因作为扩增的靶基因。
图1.3 12S rRNA和cytb1、cytb2、cytb3扩增产物电泳图。A，12S rRNA；B，cytb1；
C：cytb2；D：cytb3。
18 17 16 15 14 13 NC M 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1
NC 18 17 16 15 14 13 M 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1
图1.4 12S rRNA 和cytb3 PCR 扩增产物电泳检测图。A ： 12S rRNA 扩增结果；B ： cytb 扩增结果。
1：猪；2：鸡，3：马；4：狗；5：鹿；6：鼠；7：山羊；8：火鸡；9：绵羊；10：牛；11：鲟鱼；12：三文鱼；13：金枪鱼；14：鲱鱼；15：鸵鸟；16：丹顶鹤；17：企鹅；18：阔耳狐；M ：DNA 分子量Marker ，DL2000；NC ：空白对照。
A
B
2.3 标记荧光的选择
常用的荧光标记为FAM 、HEX 和TAMRA 。为了比较这几种荧光的检测效果，设计了如下实验：取同一份鲟鱼DNA ，分别用三对使用不同荧光标记组合的引物进行扩增。引物对1为12S-F-FAM ，12-R-HEX ；引物对2为12S-F-FAM ，12S-R-TAMRA ；引物对3为12S-F-HEX ，12S-R-TAMRA 。扩增产物回收后分别用Tru9I 酶切，酶切产物用毛细管电泳检测，电泳条件如前所述。检测结果如图1.5所示。从图1.5可以看出，FAM 和HEX 荧光标记的整体效果最好。因此用FAM 、HEX 荧光分别标记上游和下游引物。
图1.5 不同标记荧光组合PCR 扩增产物Tru 9I 酶切产物毛细管电泳结果图。A 所标记荧光为FAM ，HEX 。B 所用标记荧光为FAM, TAMRA ；C 所用标记荧光为HEX A B C
2.4酶切反应时间的确定
在确定合适的酶切时间时，选用了2小时和酶切过夜（16小时）两个时间参数。以山羊样品为例，同一份PCR回收产物（浓度约为50ng/μL）用同样的酶进行酶切，酶切反应所加DNA的量为2μL。酶切时间分别设置成2小时和16小时。酶切结果如图所示。
2.4.1 Alu I酶切结果：
2.4.1.1 两小时酶切结果：
2.4.1.2 十六小时酶切结果：
2.4.2 Tru9 I酶切结果：
2.4.2.1 两小时酶切结果：
2.4.2.2 十六小时酶切结果：
从实验结果来看，2小时酶切和16小时酶切没有什么区别。Alu I在酶切2小时时已经将扩
增的目的DNA片段完全酶切。Tru9I在酶切2小时后有大量325bp的片段没有酶切完全，但是延长酶切时间后酶切图谱并没有什么改变。从项目组前期的经验来看，如果酶切位点很接近，都出现了酶切不完全的情况。综上，认为2个小时的酶切时间对于100ng左右的DNA已经足够，因此将酶切反应时间设定为2小时。
2.513种动物T-RFLP酶切图谱的建立
经过前期的实验摸索，项目组已经确定了T-RFLP方法的各个具体环节的操作方法。项目组用得到的经过测序验证已知种属名称的13种动物的DNA按照已经确定的实验步骤进行操作，建立了这13种动物的双末端荧光标记T-RFLP图谱。
2.5.1 理论结果：
项目组设定用Alu I和Tru9I鉴定所涉及13种动物。Tru9I和Alu I在13种动物12S rRNA基因片段中的酶切位点如表1.2所示。鉴定的实验思路如图1.6所示。
图1.6 Alu I和Tru9I鉴定13种动物的鉴定流程图。
2.5.2 实验结果
2.5.2.1实验步骤：
2.5.2.1.1 样品DNA的提取：使用Tiagen试剂盒，详细操作步骤见说明书。
2.5.2.1.2 12S rRNA靶基因的扩增：使用ABI9700 PCR仪。扩增条件体系和反应参数见表1.3和表1.4。
表1.2 Tru9I和Alu I在13种动物12S rRNA基因片段中的酶切位点
PCR反应循环参数见表1.4 ，不同仪器可根据仪器要求将反应参数作适当调整。
2.5.2.1.3 450bp 左右的目的条带。回收试剂盒使用天根公司生产的普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（目录号：DP209）。操作步骤见试剂盒说明书。
2.5.2.1.4 回收产物的酶切：
2.5.2.1.4.1 Alu I（Promega公司）酶切
2.5.2.1.4.1.1 酶切反应体系（10μL）：
10×Buffer B 1μL
BSA 0.1μL
Alu I(10U/μL) 0.25μL
DNA 2.5μL
H2O 6.15μL
2.5.2.1.4.1.2 反应条件：37℃孵育2小时，4℃保存。
2.5.2.1.4.2 Tru9I（Promega公司）酶切
2.5.2.1.4.2.1 酶切反应体系（10μL）：
10×Buffer F 1μL
BSA 0.1μL
Tru 9I (10U/μL) 0.25μL
DNA 2.5μL
H2O 6.15μL
2.5.2.1.4.2.2 反应条件：65℃孵育2小时，4℃保存。
2.5.2.1.5酶切产物的变性：在96孔板上配制变性反应体系。变性反应体系为10μL，包括酶切产物0.5μL，PRISM GeneScan-500 ROX 0.3μL，去离子甲酰胺9.2μL。混匀后，95℃加热5min后立即置于冰上。
2.5.2.1.6毛细管电泳：将装有变性产物的96孔板放入测序仪的样品板上。按照操作说明书中片段分析功能部分进行操作。测序仪参数设置为：电泳电压为15000V，加样电压2000V，加样间隔时间22秒，温度为60℃，毛细管电泳长度为50厘米，毛细管电泳胶为POP6的胶。电泳时间为2.5小时。
2.5.2.2 13种动物T-RFLP酶切图谱及理论/实际末端酶切片段大小
2.5.2.2.1 鼠（Mus musculus）
样本量为5。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为48bp，实际末端片段大小为46.33±0.09bp。
Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为48bp和54bp，实际末端片段大小为42.5±0.04bp和49.0±0.04bp。
2.5.2.2.2 狗（Canis familiaris）
样本量为4。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为48bp，实际末端片段大小为46.6±0.02bp。
理论5’末端片段大小为88bp，实际末端片段大小为82.8±0.02bp。
Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为90bp，实际末端片段大小为84.3±0.07bp。
2.5.2.2.3 鸡（Gallus gallus)
样本量为5。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为48bp，实际末端片段大小为46.9±0.10bp。
理论5’末端片段大小为242bp，实际末端片段大小为240.6±0.54bp。Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为93bp，实际末端片段大小为87.7±0.02bp。
2.5.2.2.4 马(Equus caballus)
样本量为4。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为48bp，实际末端片段大小为46.8±0.04bp。Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为332bp，实际末端片段大小为330.5±0.01bp。
2.5.2.2.5猪（Sus scrofa）
样本量为3。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为163bp，实际末端片段大小为163.1±0.01bp。Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为439bp，实际末端片段大小为435.6±0.06bp。
2.5.2.2.6 火鸡（Meleagris gallopavo）
样本量为4。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为201bp，实际末端片段大小为202.0±0.29bp。Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为91bp，实际末端片段大小为86.2±0.08bp。
2.5.2.2.7 山羊(Capra hircus)
样本量为5。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为200bp，实际末端片段大小为200.7±0.06bp。
Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为315bp和325bp，实际末端片段大小为312.7±0.03bp和322.1±0.04bp。
2.5.2.2.8 绵羊(Ovis aries)
样本量为4。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为200bp，实际末端片段大小为200.6±0.02bp。
Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为325bp，实际末端片段大小为323.4±0.02bp。
2.5.2.2.9 鲟鱼（Acipenser oxyrhynchus）
样本量为3。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为224bp，实际末端片段大小为225.5±0.08bp。
Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为90bp，实际末端片段大小为83.1±0.09bp。
理论3’末端片段大小为273bp，实际末端片段大小为273.4±0.09bp。
2.5.2.2.10三文鱼（Salmo salar)
样本量为5。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为223bp，实际末端片段大小为224.2±0.02bp。
Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为90bp，实际末端片段大小为83.0±0.04bp。
理论3’末端片段大小为343bp，实际末端片段大小为342.7±0.03bp。
2.5.2.2.11 鹿(Cervus nippon)
样本量为3。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为350bp，实际末端片段大小为351.7±0.04bp。
Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为34bp，实际末端片段大小为26.0±0.03bp。
2.5.2.2.12 牛（Bos taurus）
样本量为5。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为350bp，实际末端片段大小为351.0±0.03bp。
Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为91bp，实际末端片段大小为85.2±0.07bp。
2.5.2.2.13 水牛（BubAlus bubalis)
样本量为4。
Alu I酶切：理论3’末端片段大小为440bp，实际末端片段大小为440.3±0.38bp。
Tru9I酶切：理论5’末端片段大小为53bp，实际末端片段大小为47.9±0.03bp。
2.5.2.3 结果分析：
理论分析，研究所涉及的13个物种可以用Alu I和Tru9I两个酶区分。如图1.6所示，经过Alu I酶切后，通过Alu I 3’末端片段长度可以将13个物种分成6组，鸡-狗-鼠-马组的Alu I 3’末端片段长度为48bp，山羊-绵羊-火鸡组的Alu I 3’末端片段长度为200bp，三文鱼-鲟鱼组的Alu I 3’末端片段长度为224bp，牛-鹿组的Alu I 3’末端片段长度为350bp。猪和水牛经过酶切后可以与其他11种物种分开。猪的Alu I 3’末端片段为163bp。水牛因为没有酶切位点，Alu I 3’末端片段长度为全长（440bp）。
经Alu I 3’末端片段长度分不开的四个组（山羊-绵羊-火鸡组、鸡-狗-鼠-马组、三文鱼-鲟鱼组、牛-鹿组）各组的物种可以通过Tru9I的5’末端片段长度进一步区分。如山羊-绵羊-火鸡组中，山羊的Tru9I的5’末端片段长度为315bp，绵羊的Tru9I的5’末端片段长度为325bp，火鸡的Tru9I的5’末端片段长度为90bp。虽然山羊和绵羊的Tru9I的5’末端片段长度仅相差10个碱基，但是毛细管电泳技术足以区分10个碱基的差异。鸡-狗-鼠-马组，鼠的Tru9I的5’末
端片段长度为48bp，马的Tru9I的5’末端片段长度为332bp。鸡和狗的Tru9I的5’末端片段长度同为90bp。这两个物种可以进一步通过Alu I 5’末端片段长度加以区分（分别为88bp和242bp）。三文鱼和鲟鱼组中，三文鱼和鲟鱼的Tru9I的5’末端片段长度同为90bp，这两个物种可以进一步通过Tru9I的3’末端片段长度区分（鲟鱼为273bp，三文鱼为343bp）。牛-鹿组中，鹿的Tru9I 的5’末端片段长度为34bp，牛的Tru9I的5’末端片段长度为90bp。至此，通过Alu I和Tru9I两个酶的相关末端将13种动物分开。
从实验结果来看，实验得到的末端片段图谱与理论预期结果一致。按照预期的实验思路分析实验所得T-RFLP图谱，可以很容易鉴定出这13个物种。虽然理论长度和实际长度存在差异（根据现有的文献资料分析，荧光标记可能是造成这种片段长度差异的原因之一），但是只要实验条件一定，同一物种的不同个体间酶切片段长度的差值很小，都在1bp以内，而且T-RFLP图谱具有很好的重复性。因此，与单末端荧光标记得到的结论相同，只要建立了标准图谱，理论长度和实际长度的差异并不会影响对实验结果的判断。另外，当酶切位点非常接近时，通常不能只得到最末端的片段（如鼠和山羊的Tru9I酶切结果）。但是相比PCR-RFLP，其结果分析还是相对简单。
3. 实际样品检测
在项目完成过程中，项目组用选定的DNA提取方法提取了64个样品的DNA。样品种类主要为奶制品（包括奶酪、鲜奶、奶粉等）、肉制品（香肠、熟肉制品）和罐头制品（各种鱼罐头）。样品DNA提取后进行PCR扩增，对扩增产物的电泳检测显示奶制品和肉制品中提取的DNA绝大部分都能扩增出450bp的目的条带，但是罐头制品中提取出的DNA只有个别能扩增出目的条带。这与已有文献的报导一致。因为罐头制品经过处理后，DNA降解非常严重，所提取出的DNA的长度基本都在200bp以下。由此得出项目组目前建立的方法（主要是靶基因的扩增产物太长）不适用于罐头制品的种类鉴定，但是适用于大部分奶制品和肉制品的种类鉴定。
对能够扩增出目的条带的48个样品用T-RFLP方法进行了种类鉴定。鉴定结果如下表所示：
鉴定结果显示，48个样品中有一个样品存在标签与实际成分不同的现象（标签为格尔巴尼马苏里拉水牛奶酪，实际奶源并不是水牛奶而是奶牛奶）。将此样品扩增产物测序，序
列比对结果表明确实是奶牛成分（结果未显示）。另外，项目组检测的结果还显示目前市场上销售的羊肉制品基本上都是绵羊肉制品。应该由水牛奶制成的马苏里拉奶酪如果没有特殊说明，多数是由奶牛奶制成。
4. 混合样品的检测
T-RFLP方法与普通PCR-RFLP方法相比，其优势在于该方法结果判断简单准确，这应该是攻克混合样品检测的一个很好的前提。因此，项目组对T-RFLP方法分析肉类混合物进行了简单地尝试。
4.1 实验设计
将猪和牛的DNA的浓度都调整到20μg/mL。按照不同比例混合制成11个样品作为PCR 的模板。按照已经建立好的实验方法进行检测。猪和牛的DNA的混合比例如下表。
4.2实验结果
理论上样品中如果含有猪肉和牛肉成分，经过Alu I酶切应在3’末端片段（HEX标记）分别检测到长度为163bp和350bp的峰。经过Tru9I酶切应在5’末端片段（FAM标记）分别检测到长度为439bp和91bp的峰。
从实验结果来看，经过Alu I酶切，当猪肉和牛肉的DNA含量比为15:1、9:1、7:1、5:1、3:1、1:1和1:3时，可以检测到两个特征峰，而且随着DNA含量比的变化，两个峰的峰高也呈现有规律的变化。如当猪肉和牛肉的含量比为15:1时，猪的163bp的特征峰很强，牛的350bp的特征峰很弱。随着牛肉含量的增加，牛的350bp的特征峰逐渐增强。当猪肉和牛肉的含量比为1:3时，猪肉的163bp的特征峰很弱，基本上都是牛的350bp的特征峰了。当猪肉和牛肉的DNA含量比为1:5、1:7、1:9、1:15时，已检测不到猪肉的特征峰。
经过Tru9I酶切，所有酶切结果中均显示439bp和91bp的两个特征峰。同样，两个峰的峰高随着DNA含量比的变化呈现有规律的变化。综合上述结果，不考虑DNA定量的误差，当猪牛肉混合物中猪肉的比例低至25%或牛肉比例低至5%时，T-RFLP方法能够鉴定出两个物种。
不考虑DNA定量的误差，此次实验结果也清晰显示了通用引物扩增混合模板时PCR扩增效率不一致的现象，这种情况在先前的文献资料中也有报导。这一现象可能也是PCR-RFLP方法不适用于分析混合样品的重要原因之一。从项目组的实验结果看，现有引物对牛肉模板的扩增效果明显好于对猪肉模板的扩增效果。如何调整PCR扩增条件，使得反应过程中通用引物对不同模板的扩增效率相当，将是解决用T-RFLP方法或PCR-RFLP方法
鉴定肉类混合物的根本。由于当前实验条件下还没有解决引物对不同模板扩增效率不一致的情况，因此，目前建立的实验方法还不适用于分析肉类混合物。
四、验证实验情况
本检测方法经珠海出入境检验检疫局、华东师范大学、北京师范大学、中国科学院、浙江出入境检验检疫局五家单位进行验证，结果均表明：本标准建立的方法技术路线清晰、简单、可靠。重复性和稳定性高、结果准确客观，易于判断。
五、参考文献
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PCR-RFLP authentication of meats from red deer (Cervus elaphus), fallow deer (Dama dama), roe deer (Capreolus capreolus), cattle (Bos taurus), sheep (Ovis aries), and goat (Capra hircus).
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动物性食品卫生检验试题与复习资料
动物性食品卫生检验试题+复习资料（全） 一、单项选择题 1.恩格尔系数是指食品支出总额占个人消费品支出总额的比重，实际上反映了居民消费水平的变化。一般而言，恩格尔系数在（ D ）以上生活为贫困。 A.50-59％ B.45-50％ C.20-40％ D.59％以上。 2.屠宰加工企业的平面布局总的设计原则不包括（ D ）。 A.符合科学管理 B.方便生产 C.清洁卫生 D.地势 应高燥﹑平坦﹑有一坡度 3.屠畜收购前的准备不包括（ D）。 A.了解疫情 B.物质准备 C.人员分工 D.严格检疫 4.宰前检验的个体检查包括（D ）。 A.静态的检查 B.动态的检查 C.饮食状态的检查 D.看、听、摸、检 5.宰后检验的“白下水”检验不包括（ D ）。 A.胃、肠及相应淋巴结 B.胰及相应淋巴结 C.脾及相应淋巴结 D.肾及相应淋巴结 6.猪头部检验检验要点不包括（D ）。 A.颌下淋巴 B.咬肌 C.鼻盘、唇、齿龈 D.腹股沟浅淋巴结 7.肌肉僵直的根本原因为肌肉中B ）含量的多少。 A.糖酵解酶 B. ATP C.糖原 D.葡萄糖 8.在集贸市场上对动物产品进行监督检查的工作程序是（B ）。 A.验章，查证，感官检验，处理 B.查证，验章，感官检验，处理 C.查证，感官检验，验章，处理 D.感官检验，查证，验章，处理 9.腌腊制品的盐卤浓度为（B ）。 A.15%饱和盐溶液 B.25%饱和盐溶液 C.35%饱和盐 溶液 D.45%饱和盐溶液 10.罐头类食品的外销检验取样其取样基数不得少 于（C ）罐，采取的检样全部进行感官、理化检验及细菌学检验，化学检验不得少于取样数的1/10，且每批不得少于2罐。 A.3 B.4 C.5 D.6 11.无论发生次数还是中毒人数，在我国占食物中毒总数第一位的是（A ）。 A. 细菌性食物中毒 B.有毒动、植物食物中毒 C.化学性食物中毒 D.霉变食物引起的食物中毒 E.真菌毒素 12.细菌性食物中毒多见于夏秋季，主要是由于 (D )。 A.夏季食物易受污染 B.进食熟肉类食品多 C.人口流动性大 D.气温较高，微生物易于生长繁殖 E.生熟交叉污染 13.在我国，引起肉毒梭菌中毒最常见的食品是 ( D )。 A.肉制品 B.豆制品 C.罐头食品 D.自制发酵食品 E.鱼制品 14.发生食物中毒后，恶心、呕吐症状较为明显的是( E )。 A.沙门菌属食物中毒 B.副溶血性弧菌食物中毒 C.致病性大肠杆菌食物中毒 D.肉毒食物中 毒E.葡萄球菌食物中毒 15.植物性食物(如剩饭、米粉)引起的食物中毒最 可能原因是(C )。 A.沙门菌属 B.副溶血性弧菌 C.葡萄球菌肠毒 素 D.肉毒梭菌毒素 16．以下哪项不属于屠畜运输中的兽医卫生监督的 内容（C） A及时检查畜群，妥善处理死畜； B做好防疫及消 毒工作和饮喂工作； C防治违章宰杀，避免购入患病畜；D加强饲养管 理，防止压、热、冷等。 17．宰前检验的步骤不包括（D） A入场验收 B 住场查圈C 送宰检查D了解疫情 18．屠畜收购检疫的方法不包括（D） A外貌检查B逐头测温C实验室检查D个体诊断 19．屠畜宰前检验后的处理不包括（A ） A冷宰 B禁宰 C急宰 D 准宰 20．胴体的整理方法包括干修、湿修两种，其卫生 要求是肉尸应平平整整、干干、净净，摘除三腺一 体，做到四不带。“三腺”指的是（A） A甲状腺、肾上腺、病变淋巴。B甲状腺、肾上腺、 前列腺C唾液腺、肾上腺、病变淋巴腺D甲状腺、 肾上腺、脑垂体 21．宰后检验的“白下水”检验不包括D） A胃、肠及相应淋巴结。B胰及相应淋巴结C脾及 相应淋巴结D肾及相应淋巴结 22.传染病流行过程的要素不包括包括（B ） A传染源B中间宿主C易感人群D传播途径。 23．不是寄生虫与宿主共存关系（D ） A共栖 B互利共生C寄生D以上都不是 24．囊尾蚴病又名囊虫病，来自患囊虫病猪的肉俗 称（A ），是由有钩或无钩绦虫的幼虫所引起的一 种经肉感染人的人畜共患寄生虫病，多种动物均可 感染此病。是肉品卫生检验的重点项目之一。 A“米猪肉”B“DFD肉”C“白肌肉”D“水煮肉” 25．肌肉僵直过程中的微观变化不包括（C ） A．次黄嘌呤核苷酸的形成 B．酸性极限PH值的形 成 C．次黄嘌呤的形成 D．WHC的变化 26.肉解冻的。注意事项以下那个是错误的（A ） A解冻介质的温度应尽量低，最高不能超过产品温 度的30℃， B解冻介质的数量要充足，应尽量流动， C采用空气解冻时，湿度要大，否则，升温慢，干 耗大， D解冻的单元应尽量小，以增大接触面。 27．腌腊制品的感官检查不包括（ C） A 看 B扦 C听 D斩 28.食物中毒的发病条件不包括（A ） A感染B食物被中毒物污染C进食数量正常D食物 食用前未彻底加热 29. 食物中毒是由于进食了下列哪种食物而引起 的（C ） A. 有毒食物 B. 腐败变质 的食物 C. 正常数量可食状态的有毒食物 D. 动物性食 品 30. 食物中毒与流行性传染病的根本区别在于 （A ） A．人与人之间有无传染性 B．较短时间内有大量的 病人出现 C．有一定潜伏期 D．有相似的临床表现,有无体温 升高 31．宰后检验的要求包括不包括（C） A检验人员要熟练掌握病理解剖知识，下刀准确， 对病变反应迅速，判断无误， B按一定检验顺序进行，防止漏检， C要保持商品的完整性，不得随意下刀，淋巴结要 横切，肌肉要纵切。 D做好疫病检出的原始纪录， 32.猪头部检验检验要点不包括（D） A颌下淋巴 B咬肌 C鼻盘、唇、齿龈D腹股沟浅淋 巴结 33．猪肉尸宰后检验必检淋巴结不包括（C） A腹股沟浅淋巴结，B髂淋巴结，C颌下淋巴结，D 各内脏器官淋巴结 34．肌肉僵直过程中的微观变化不包括（C） A．次黄嘌呤核苷酸的形成 B．酸性极限PH值的形成 C．次黄嘌呤的形成 D．WHC的变化 35．腌腊制品原料的卫生要求不包括（B） A原料必须来自健康畜禽，并经兽医卫生检验 合格新鲜肉或冻肉， B使用鲜肉原料必须充分风凉或加热解冻， C选用的肠衣或膀胱皮子应有弹性，新鲜，无 污垢，无孔洞，使用纤维素肠衣，成本底，使用方 便。 D 腌制用具要及时用热水清洗、消毒后才能 再次使用。 36.腌腊制品的盐卤浓度为（B） A 15%饱和盐溶液， B 25%饱和盐溶液，C35%饱和盐 溶液，D45%饱和盐溶液， 37.食物中毒的发病条件不包括（A） A感染B食物被中毒物污染C进食数量正常D食物食 用前未彻底加热 38.二噁英事件属于食物的（ A ） A. 化学性污染 B. 微生物污染 C. 放射性污 染 D. 昆虫污染 39.食物中毒是由于进食了下列哪种食物而引起的 （C ） A. 有毒食物 B. 腐败变质的食物 C. 正常 数量可食状态的有毒食物 D. 动物性食品 E. 植物性食品 40.沿海喜食海产品的地区发生的细菌性食物中毒 以下列哪项较为多见（ D ） A. 沙门菌食物中毒 B. 肉毒杆菌食物中毒 C. 河豚鱼中毒 D. 副溶血性弧菌 E. 葡萄球菌中毒 41.煎炸食物时油温不宜过高的原因是（ B ） A. 油温过高容易使油产生“哈喇味” B. 油温过高 使油产生对人体有害的特质 C. 容易使被煎炸食物的口感不好 D. 以上说法均不正确 42.从临床表现来看，感染型与中毒型食物中毒最大 的区别在于（D） A.有无恶心、呕吐 B.有无腹痛、腹泻 C.病死率不同 D.有无体温升高
动物性食品卫生学考题
动物性食品卫生学试题范围 一、名词解释 1.动物性食品卫生学 以兽医学和公共卫生学的理论为基础，从预防观点出发，研究肉、蛋、乳和水产等动物性食品的预防性和生产性卫生监督，产品卫生质量的鉴定、控制以及最合理的加工利用，保证生产、经营的正常运行和保障人畜的健康，预防疾病传播和增进人类福利的综合性应用学科。 2.肉的僵直 屠宰后的畜禽肉，随着肌糖原的酵解和各种生化反应的进行，肌纤维发生强直性收缩，使肌肉失去弹性，变得僵硬，这种状态称为肉的僵直。特点：肌肉收缩变硬；肌肉变得迟钝、不透明；pH值降低；保水性低；适口性差。 3.肉的成熟 屠宰后的动物肉在一定温度下贮存一定时间，继僵直之后肌肉组织变的柔软而有弹性，切面富于水分，易于煮烂，肉汤澄清透明，肉质鲜嫩可口，具有愉快的香气和滋味，这种食用性质得到改善的肉称为成熟肉，其变化过程称为肉的成熟。 4.挥发性盐基氮（TVBN） 系指肉品水浸液在碱性条件下能与水蒸气一起蒸馏出来的总氮量，即在此条件下能形成氨的含氮物的总称。在肉品腐败过程中，其蛋白质分解产生的胺及氨等碱性含氮物可以与在腐败过程中同时分解产生的有机酸结合，形成一种称为盐基态氮的物质积聚在肉品中，这种物质具有挥发性，因此称为挥发性盐基氮。 5.肉的冻结 肉中所含的水分，部分或全部变成冰，肉中心温度降至—15℃以下的过程，成为肉的冻结，冻结后的肉称为冷冻肉。加工冻肉的目的是为了做长期保藏。冻结的肉，虽然其色泽、香味都不如鲜肉或冷却肉，但能较长期贮藏，也能做较远距离的运输，因而仍被世界各国广泛采用。 6.平酸菌 罐头工业上把能引起罐头食品变质酸败而又不胖听（即产酸不产气）的细菌称为平酸菌。从微生物学分类上看主要有两种，即嗜热脂肪芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌。 7.90%递减时间 在一定温度和条件下，能杀死90%的微生物所需要的时间，叫该微生物在该温度下的90%递减时间，简称D，并以Dt℃表示。 8.加热致死时间曲线 发现在半对数纸上将加热杀死全部微生物所需的最少时间和对应的温度坐标点联会，结果大致成一直线。 9.F值 在某一温度下完全杀灭某种微生物所需的时间。 10.Z值 当温度按直线刻度标绘，时间（或D值）按对数刻度标绘时，要求越过一个对数周期的加热时间所需降低或提高的杀菌温度差。 11.HACCP HACCP是危害分析和关键控制点的英文缩写，是对食品安全有显着意义的危害加以识别、评估和控制的体系。该体系以科学性和系统性为基础，涉及食品安全的所有方面，着重强调对危害的预防，可将食品安全控制方法从滞后型的最终产品检验方法转变为预防性的质量保证方法。 HACCP是一个确认、分析、控制生产过程中可能发生的生物、化学、物理危害的系统方法，是一种新的质量保证系统，是一种生产过程各环节的控制。包括范围：危害分析HA，以及关键控制点CCP。适用于评价动物性食品卫生质量的评价体系。 12.细菌菌相 动物性食品的细菌菌相：是指动物性食品被细菌污染后共存于食品中的细菌种类及其相对数量的构成。其中相对数量较大的细菌称之为优势菌种(属、株)。影响菌相的因素：a、细菌污染来源；b、食品的理化性质；c、环境条件；d、细菌间共生与抗生的关系。 13.菌落总数
食品理化检验汇总
食品理化检验 加粗下划线的为老师上课要求掌握的，仅供参考 第一章绪论 1.食品理化检验的内容：食品的感官检查、食品营养成分的检查、保健食品的检验、食品添加剂的检验、 食品中有毒有害成分的检验、食品容器和包装材料的检验、化学性食品中毒的快速鉴定、转基因食品的检验。 2.食品理化检验常用的方法：感官检查（视觉、嗅觉、味觉、听觉、触觉）、物理检测 比重：现称相对密度，是物质的质量与同体积同温度下的纯水质量的比值。我国规定标准温度是20℃。 1）比重瓶法：环境温度不能超过20 ℃ 2）比重计法①酒精比重计：测定酒中酒精的含量（V/V）； ②乳稠度计：测定牛乳的比重 ③锤度计：测定蔗糖的浓度（注：比重计法测定结果不如比重瓶法准确） 3.薄层色普法；将适当细度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，把试样点在薄板上，然后用溶剂展开 4. 标准分析方法的制定 （一）分析方法的建立 1、检测条件的优化 2、校准曲线的绘制 3、样品前处理条件的优化 4、干扰试验 5、实际样品的测定 6、方法性能指标的评价 （二）标准分析方法的研制程序立项、起草、征求意见、审查 （4.5.6．7为ppt上补充内容） 4.极性大的被分离物，要选吸附能力小的吸附剂，但展开剂的极性应选大的。 5.死时间(tM )：不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间 6.保留时间tR 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间. 7.调整保留时间tR′：某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，即： tR′= tR-tM
第二章食品样品的采集、保存和处理 8. 食品样品的采样原则：1）样品对总体应该有充分的代表性。2）采样过程中要设法保持原有食品的理化性质，防止待测成分的损失或污染。 9、食品样品的采集方法(具有相同属性的食品样品的采集)：袋装样品按 (袋数 /2 ）^ 1/2进行抽样，采用四分法缩分 四分法 1)固体颗粒或粉体混匀后采用三层（上、中、下）五点（周围四点和中心）法采样 2)液体或半流体混匀后采样 3)组成不均匀固体食品采样 采样量：1.5Kg, 供检验、复查、备查用 10.食品样品的保存原则：防止污染、防止腐败变质、稳定水分、固定待测成分 11.食品样品的保存应做到净、密、冷、快。 12.食品样品的前处理： 一、食品样品的常规处理：除去非食用部分、除去机械杂质、均匀化处理 二、食品样品的无机化处理 （一）湿法消化法（wet digeation) ： 1）原理:在适量的食品样品中加入硝酸、高氯酸、硫酸等氧化性强酸，结合加热来破坏有机物，有时还要加入一些氧化剂（如高锰酸钾、过氧化氢等），或催化剂（如硫酸铜、硫酸汞、 二氧化硒等），以加速样品的氧化分解，完全破坏样品中的有机物，使待测的无机成分释放出来， 并形成各种不挥发的无机化合物。 2)注意事项：消化试剂应纯净，器皿及用具应不含待分析成分；加玻璃珠防止暴沸，注意 不要产生大量泡沫；补加酸或其他氧化剂时，应待消化液冷却后再沿内壁缓缓加入 3）优点→分解有机物的速度快，所需时间短，加热温度较干灰化法底，可以减少待测成分的挥发损失。缺点→消化过程中，产生大量的有害气体，操作时必须在通风橱中进行，试剂 用量较大，有时空白值较高。在消化初期，消化液反应剧烈产生大量的泡沫，可能溢出消化瓶， 消化过程中也可能出现碳化，这些都易造成待测物的损失，所以需要细心操作。 （二）干灰化法（dry ashing) 1）原理：将样品放在坩埚中，在高温下灼烧使食品样品脱水，焦化，并在空气中氧的作用下，使有机物氧化分解成二氧化碳、水和其他气体而挥发，剩下无机物供分析测试用。
影响动物源性食品安全的因素及预防措施(新版)
( 安全管理 ) 单位：_________________________ 姓名：_________________________ 日期：_________________________ 精品文档 / Word文档 / 文字可改 影响动物源性食品安全的因素 及预防措施(新版) Safety management is an important part of production management. Safety and production are in the implementation process
影响动物源性食品安全的因素及预防措施 (新版) 近些年来，食品安全事件频发，给人民健康带来严重危害和潜在威胁，国内相继发生的“瘦肉精”,“三聚氰胺”,兽药残留等问题日益受到关注,对畜产品的生产和销售产生了很大的负面影响.人类不应以牺牲自身健康为代价，换取畜产品量的增加，生产安全动物源性食品是保障人民健康的需要。 在全球经济一体化的今天，如不能保障动物源性食品质量安全，就无法参与国际市场的竞争，连国内市场也将失去立足之地。美国从1998年1月开始，实施危害分析关键控制点（HACCP），明确规定了食品中的有害物质（包括细菌，药物等）的临界值，超标的一律不准上市，在动物源性食品中残留量的检出，已成为世界肉类贸易中重要的技术指标和技术壁垒之一，目前已成为制约我国动物产品
出口的瓶颈。我国仅2000年上半年就有634批出口食品因药残，食品卫生问题被美国FOA扣留；近几年，我国出口到俄罗斯，日本等国的鸡肉中常有被检出违禁药物超标事件；2002年初，欧盟从中国进口的虾、对虾中发现强力抗生素的药物残留，其后不久，欧盟委员会有关机构通过了全面禁止进口中国动物源食品的决议。该决议称：近期欧盟食品兽医局所做的调查显示，中国对药物残留的控制体系存在严重缺陷，问题出在兽医使用了受禁的药物。因此，只有生产安全动物源性食品，才能提高我国畜禽产品的国际竞争力，保障我国畜牧业长期持续发展。 畜产品安全生产隐患主要来自于动物疫病传播微生物污染、滥用抗生素、饲料添加剂、兽药残留、化学物质污染和残留等，同时还包括如营养、食品质量、安全教育等问题。涉及畜禽养殖环节，畜禽运输，流通环节以及畜产品的加工环节。本文仅就畜产品生产阶段不安全动物源性食品产生的原因及对策加以探讨。 1畜产品生产过程中的不安全因素 1.1饲草、饲料的污染饲草、饲料安全是畜产品安全的前提和保
动物性食品卫生学考试复习题
动物性食品卫生学 一、名词解释 1、食品污染答：按世界卫生组织规定，是指食物中原来含有或者加工时人为添加的生物性或化学 性物质。其共同特点是，对人体健康有急性或慢性的危害。 2、细菌菌相答：是指动物性食品被细菌污染后共存于食品中的细菌种类及其相对数量的构成。其 中相对数量较大的细菌称为优势菌种（株）。 3、细菌总数答：细菌总数是指单位数量（g，ml和cm2面积）的动物性食品中细菌的数量。 4、冷却答：是指将热鲜肉深层的温度快速降低到预定的适宜温度而又不使其结冰的过程。 5、食物中毒答：是指人类经口食进可食状态的有毒物质而发生的一类急性疾病的总称。 6、DFD猪肉答：是指由于宰前长时间处于紧张状态，使肌肉中的糖元大量消耗，宰后肌肉的PH值 偏高。肌红蛋白携带的氧被夺走，导致肌肉颜色暗红、质地硬实、切面干燥，这种类型猪肉称之为DFD猪肉。 7、肉罐头答：是将肉类原料经过严格的选择和适当处理，或采用专门的烹调方法，使之具有独特 的风味，经装入罐头容器后，适当排气密封，再加热杀菌而制成的一种罐头食品。 8、β-兴奋剂答：β-兴奋剂全称为b-肾上腺素能兴奋剂（β-Adrenergic Agonist，β-AA），又 叫β-激动剂。β-兴奋剂是一类化学结构和生理功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍 生物的总称。 二、填空题 1. 动物性食品污染，根据污染源的性质可分为(1)生物性污染；(2)化学性污染；(3)放射性污染。 2. 一般说来，常温下放置的肉类，早期常以需氧芽胞杆菌；微球菌属和假单胞菌属；为主，且局限于肉品的浅表，到中后期，以4)变形杆菌；(5)厌氧性芽胞杆菌。占了主要的比例，且蔓延到肉品的深部。 3. 食品添加剂卫生管理有三个基本原则，分别是1)所有食品添加剂必须符合《食品添加剂使用卫生标准》，按《食品添加剂卫生管理办法》进行管理。 (2)不得检出有毒有害物质或致病微生物。 (3)不得掺假作伪。 4. 肉新鲜度的检查，一般从 (1)感官性状；(2)肉尸腐败分解的产物的特性和数量；(3)细菌的污染程度。等三个方面来进行的。 5. 肉类腌制的方法主要有(1)干腌法；(2)湿腌法；(3)混合腌法。 6. 目前国内外对于罐头灭菌的方法主要是 (1)加热灭菌；，可分为两种情况，对于低酸性和非酸性罐头食品，采用(2)高温灭菌法；；对于强酸性罐头食品，采用(3)低温间歇多次灭菌。 7. 鲜乳的理化检验指标主要有(1)乳密度测定；(2)乳含脂率的测定； (3)干物质的测定；(4)汞、有机氯农药残留的测定。 8. 屠畜的宰前管理一般包括 (1)宰前休息管理；(2)宰前停饲管理；(3)宰前淋浴净体。三个部
动物性食品卫生检验-实验指导
黄淮学院 动物性食品卫生检验实验 实验一肉新鲜度的卫生检验 一、目的要求 掌握新鲜肉卫生的各项指标判定。 二、主要仪器耗材 扩散皿，微量滴定管，滤纸，漏斗，天平，剪刀，镊子，锥形瓶，量筒，pH 试纸 三、实验原理 1挥发性盐基氮的测定 挥发性盐基氮在测定时遇弱碱剂氧化镁即被游离而蒸馏出来，馏出的氨被硼酸吸收，生成硼酸铵。其反应式为： 2NH 3+4H 3 BO 3 →(NH 4 ) 2 B 4 O 7 +5H 2 O 使吸收液由酸性变为碱性，混合指示剂由紫色变为绿色，然后用盐酸标准溶液滴定，使混合指示剂再由绿色反至紫色即为终点。根据盐酸标准溶液消耗量计算挥发性盐基氮含量。 2硫化氢反应 肉类在腐败过程中，含硫氨基酸进一步分解，释放出硫化氢，硫化氢在碱性条件下与可溶性铅盐发生反应，生成黑色的硫化铅。 H2S＋Pb(CH3COO)2→PbS（黑色沉淀）＋2CH3COOH 四、实验内容 （一）感官检查运用视觉、嗅觉、味觉和触觉，对待检肉进行色泽、组织状态、粘度、气味、肉汤滋味等个方面的检查，以判定肉的新鲜度。 检查方法分割的小块肉，应检查其皮肤、脂肪、肌肉的色泽、组织结构状态、黏度、弹性和气味。 （二）pH值测定 1 样品处理将样品除净脂肪、筋腱和骨后，剪碎搅匀，称取10g，置于锥型瓶中，加入100ml水，间歇摇动，浸渍30min过滤，滤液放入冰箱后备用。 2 将以上处理好的样品液用pH试纸测定其pH值。 （三）硫化氢反应 1 将待检肉剪碎至绿豆大小，装入100ml锥型瓶中，使之达到瓶容积的1/3。 2 取一滤纸条，用碱性醋酸铅溶液湿润，稍干后将其小心插入锥型瓶，勿使纸条触及肉样。
动物源性食品安全控制对策和措施正式样本
文件编号：TP-AR-L3031 In Terms Of Organization Management, It Is Necessary To Form A Certain Guiding And Planning Executable Plan, So As To Help Decision-Makers To Carry Out Better Production And Management From Multiple Perspectives. （示范文本） 编制：_______________ 审核：_______________ 单位：_______________ 动物源性食品安全控制 对策和措施正式样本
动物源性食品安全控制对策和措施 正式样本 使用注意：该解决方案资料可用在组织/机构/单位管理上，形成一定的具有指导性，规划性的可执行计划，从而实现多角度地帮助决策人员进行更好的生产与管理。材料内容可根据实际情况作相应修改，请在使用时认真阅读。 一、广泛宣传，提高对畜产品安全重要性的认识 各级应加强宣传教育，全面提高全社会对畜产品 安全的重要性认识，增强广大畜牧兽医工作者、兽药 饲料生产者、养殖者和畜禽屠宰加工销售者的责任感 和使命感。只有全民的认识提高了，才能自觉执行国 家的法律法规，依法生产经营和使用，只有广大群众 的共同参与，才能筑牢畜产品质量安全屏障。 二、健全法制，完善畜产品安全法律法规体系 解决畜产品安全的根本措施是健全和完善立法， 严格执法。要针对当前畜产品安全方面法律法规少
的实际，加快立法步伐。参考欧盟、美国等发达国家和地区的标准，尽快形成具有中国特色的畜产品安全法律体系，覆盖生产、加工、流通和消费各个领域，规范动物食品质量安全管理行为。 三、完善机制，加强畜产品安全体系标准化建设积极吸收国际先进的畜产品安全管理经验，结合我国实际，在饲料生产、经营企业大力推广建设以HACCP为核心的IS09001安全管理体系。兽药生产企业大力推行GMP标准，兽药经营实行GSP连锁经营模式。同时应加强无公害畜产品基地建设及认证工作，积极推行畜禽标准化养殖，保障生产无公害动物源性食品。 四、严格管理，加强对动物源性食品安全 加强对动物源性食品安全的监督检测加强对畜产品生产过程及畜产品市场的监督管理，建立动物源性
食品理化检验 名词解释
食品理化检验名词解释 1.感官检查：以人的感觉为依据，以文字描述为表达方式，着重描述食品的外 部特征，以及这些特征作用于人的感觉器官的反应。 2.相对密度：20℃时，某物质质量与同体积20℃纯水质量比值，以d表示。 3.比旋光度：20℃时，以纳光D线作为光源，在一根100nm长的样品，浓度为 1g/ml旋光活性物质中所产生的旋光度，表示。=100α/lc “+” 右旋“-”左旋 4.重量分析(重量法)：通过称重计算含量的分析方法。 5.容量分析(滴定法)：通过读取体积计算含量的分析方法。 6.食品样品前处理：在食品样品测定前，将样品中的待测成分转变成适于测定 的形式，同时去除共存的干扰成分，必要时浓缩待测成分，使样品能满足分析方法要求的操作过程。 7.无机化处理：是指将样品在加热条件下，与氧化剂作用，使有机物分子结合 彻底破坏。 8.灰化：将样品先小火炭化后，再以高温灰化或氧化剂加热共熔，使有机质彻 底分解。 9.瓷效应：高温条件下，重金属离子在瓷或石英表面不光滑处与硅酸盐发生牢 固结合的现象。 10.乳化现象：由一种液相分散在另一种液相中形成乳浊液使两相不易分层的现 象。 11.食品标签：在预包装食品标签上向消费者提供食品营养信息和特性的说明。 12.转化糖：蔗糖水解后生成的单糖混合物总称为转化糖。 13.灰分：是食品在550-660℃灼烧恒重后的残渣，是标示食品中无机成分总量 的一项指标。 14.抗氧化剂：可防止或延缓食品成分氧化变质，提高食品稳定性、延长食品储 存期的一类物质。 15.兽药：用于预防、治疗和诊断动物疾病或有目的地调节动物生理功能并规定 作用、用途、用法、用量的物质。 16.兽药残留：食品动物用药后或长期喂养含药物饲料后，动物性食品中含有的 某种兽药的原形或其代谢物及与兽药有关的杂志的残留。 17.食盐：以NaCl为主要成分，指的是海盐、地下矿盐或以天然卤水制得的盐， 不包括其他资源生产的盐，特别是化学工业的副产品除外。 18.油脂酸败：即高温劣变，油脂由于含有杂质或在不适宜条件下久藏而发生一 系列化学变化和感官性状恶化。 19.过氧化值（POV）：油脂中不饱和脂肪酸被氧化形成的过氧化物含量成为过氧 化值，一般以100g油脂能使碘化钾析出碘的克数表示。 20.酸价（AV）：是指中和1g油脂中的游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数。 21.极性分子（PC）：在食品煎炸工艺条件下，食用油脂发生劣变，产生比正常 油脂分子极性更大的一些成分的总称。 22.碘价：100g油脂吸收的卤化碘换算为碘的克数，是油脂中脂肪酸不饱和度。 23.皂化价：指1g油脂在碱性条件下充分水解形成脂肪酸盐所需要的KOH。 24.不皂化物：指油脂皂化后不溶于水而溶于有机溶剂的物质。
动物食品卫生学在线作业答案
动物食品卫生学（第2版）_在线作业_1 交卷时间：2016-08-16 11:40:35 一、单选题 1. (5分) 动物性食用油脂在日光、水分、温度、空气及外界微生物的作用下，会发生（）而使油脂变质，失去食用价值。 ? A. 酸败 ? B. 醛化酸败和酮化酸败 ? C. 水解作用 ? D. 氧化作用 纠错 得分： 5 知识点： 18.1 生脂肪的理化特性 2. (5分) 安全、优质、营养、是（）的特征。 ? A. 绿色食品 ? B. 保健食品 ? C. 无公害食品 ? D. 有机食品
纠错 得分： 5 知识点： 6 安全动物性食品的生产和管理 3. (5分) 在猪的宰后检验点的设置中，头部咬肌检验点主要检验（）。 ? A. 猪弓形虫 ? B. 猪囊虫 ? C. 猪旋毛虫 ? D. 猪蛔虫 纠错 得分： 5 知识点： 11.1 宰后检验的目的和一般要求 4. (5分) （）是指动物在生长发育过程中受到生物性或化学性物质所造成的。 ? A. 外源性污染 ? B. 化学性污染 ? C. 生物性污染 ? D. 内源性污染
得分： 5 知识点： 1.1 动物性食品污染概述 5. (5分) 蜂窝织炎是指在皮下和肌间等（）发生的一种弥漫性化脓性炎症。 ? A. 脂肪组织 ? B. 疏松结缔组织 ? C. 肌肉组织 ? D. 致密结缔组织 纠错 得分： 5 知识点： 14.1 局限性和全身性病变组织检验与处理 6. (5分) 在肉类罐头的实验室检验项目中，（）是肉类罐头的必检项目。 ? A. 细菌学检验 ? B. 兽药残留量的测定 ? C. 重金属含量的测定 ? D. 亚硝酸盐含量的测定 纠错 得分： 5
动物源性食品安全知识
动物源性食品安全知识 食用私屠滥宰肉有什么危害？ 私宰肉未经过检验检疫，很可能带有细菌、病毒等病原体，若是毒死、死因不明畜禽被私宰，食用后可能造成感染人需共患病、引起中毒等危害。 如何鉴别生鲜猪肉、牛肉好坏？ 新鲜猪肉宰杀口外翻，切面粗糙，周围有血液浸润，表面有一层微干或微湿润的外膜，触摸时不粘手，肌肉呈现均匀的红色、有光泽，切断面稍湿。脂肪洁白，肌肉富有弹性，指压后凹陷能立即恢复，无异味。 生鲜牛肉有光泽，红色均匀，脂肪洁白或呈淡黄色；外表微干或风干的膜，不粘手，手指按压后的凹陷能立即恢复。 如何鉴别变质肉？ 变质肉的脂肪失去光泽，色泽黄甚至变绿，肌肉暗红，表面沾手，切面潮湿，指压后凹陷不能恢复。 如何鉴别注水肉？ 注水肉肉色淡红，有光泽，手摸瘦肉不粘手。新切面湿，指压有水渗出，切割刀口内可见渗水。 如何识别老母猪肉？ 老母猪肉分层明显，手触有粗糙感。肉色暗红，肌纤维粗，纹路乱，水分少，按压无弹性、无沾性。脂肪松弛，呈灰白色，手摸时手指沾的油脂少。 如何辨别病死猪肉？ 病死猪肉具备以下一种或多种特种：皮肤大片或全身紫红、有红色斑块或多处红点；脂肪黄染，肉中有异物，或外观显著异常；病死猪肉的宰杀口切线平整，切面光滑，无血液浸润；刀口不外翻，平整，周围组织稍有血液浸润。 如何选购安全的畜产品？ 到正规的超市或冷鲜肉店购买；（2）购买有明确生产单位或生产日期的畜产品；（3）购买有《动物检疫合格证明（产品A/B）》和胴体背部有检验检疫印章的畜产品。 8、食用畜禽产品时有哪些注意事项？ （1）清洗：制作前要清洗，以保证产品的卫生；（2）休整：修去淋巴、淤血、异常色斑等；（3）煮熟：食用时要熟透，不食用未熟透的畜产品；（4）分开：生熟要分开，避免交叉感染；（5）保存：未食用完的畜产品应立即冷藏保存；（6）加热：再次食用时应完全加热；（7）放置：放置半年以上的冷冻畜产品应慎用；（8）肉制品：应加热后食用，不宜冷用。 社会事务局
营养与食品卫生学试题
《营养与食品卫生学》习题 一、单项选择题 1．以下哪种氨基酸对于婴幼儿来说是必需氨基酸（） A．精氨酸B．组氨酸 C．丝氨酸D．胱氨酸 2．浮肿型蛋白质—热能营养不良主要是由于缺乏哪种营养素（）A．蛋白质B．热能 C．维生素D．矿物质 3．下列哪种营养素缺乏会引起巨幼红细胞贫血（） A．锌B．铁 C．叶酸D．尼克酸 4．超氧化物歧化酶（SOD）的主要组成成分是（） A．铜B．铁 C．锌D．硒 5．牛奶中含量最低的矿物质是以下哪一种（） A．钙B．铁 C．钾D．钠 6．膳食中可促进铁吸收的因素是（） A．抗坏血酸B．脂肪酸 C．草酸D．植酸 7．具有抗氧化作用的维生素是（） A．维生素A B．维生素D C．维生素E D．叶酸 8．食物中长期缺乏维生素B1易引起（） A．蛋白质热能营养不良B．癞皮病 C．脚气病D．败血病 9．人体所需的一部分尼克酸可由体内哪种氨基酸转化（） A．苏氨酸B．赖氨酸 C．色氨酸D．蛋氨酸 10．下面那种食物中蛋白质含量最高（） A．肉类B．奶类 C．水果D．大豆 11．RDA指的是（） A．推荐营养素供给量B．适宜摄入量 C．可耐受的高限摄入水平D．估计平均需要量 12．粮谷类食物蛋白质的第一限制性氨基酸为（） A．苯丙氨酸B．蛋氨酸 C．苏氨酸D．赖氨酸 13．消瘦型蛋白质—热能营养不良主要是由于缺乏哪种营养素：（）A．蛋白质B．热能 C．维生素D．矿物质 14．下列哪项是糖尿病患者的典型症状之一（）
A．肥胖B．多尿 C．高血压D．佝偻病 15．维生素B2的良好来源是（） A．白菜B．菠菜 C．大米D．动物肝脏 16．与老年人容易发生的腰背酸痛有较密切关系的营养素是（）A．钠B．钙 C．铜D．维生素A 17．下列哪项不是脂类的营养学意义（） A．促进脂溶性维生素吸收B．提供能量 C．构成机体组织和重要物质D．提供必需氨基酸 18．下列哪项不是维生素的特点（） A．天然食物组成成分B．维持健康所必需 C．每日需要较多D．维持人体生长 19．维生素A的主要来源是（） A．马铃薯B．梨子 C．小麦D．动物肝脏 20．人体所需的一部分尼克酸可由体内哪种氨基酸转化（） A．苏氨酸B．赖氨酸 C．色氨酸D．蛋氨酸 21．下列哪项不是维生素D在人体的缺乏症（） A．在成人发生骨软化症B．在儿童发生癞皮病 C．在婴幼儿发生佝偻病D．在老年人可发生骨质疏松症22．婴幼儿常见的营养问题不包括（） A．缺铁性贫血B．缺锌所致生长发育迟缓 C．缺乏维生素D所致佝偻病D．缺钙所致骨质软化症 23．老年人发生腰背酸痛时在营养学上首先应考虑的疾病是（）A．骨质软化症B．类风湿性关节炎 C．更年期综合征D．骨质疏松症 24．钙的最好来源是（） A．小虾皮B．各种瓜子 C．奶及奶制品D．白菜 25．下列有关脂类的说法中哪一项不正确（） A．促进必需氨基酸吸收B．胆固醇是合成维生素D的原料C．每克可提供9kcal能量D．可提供脂溶性维生素 26．被世界卫生组织列为营养调查中必测项目的三项指标是（）A．坐高、身高、头围B．体重、身高、头围 C．胸围、头围、体重D．体重、身高、皮褶厚度 27．糖尿病患者的理想体重（Kg）计算公式为（） A．身高（cm）－100 B．身高（cm）－105 C．身高（cm）－110 D．身高（cm）－115 28．治疗时应适当增加膳食纤维摄入的疾病是（）
动物性食品理化检验复习
动物性食品理化检验复习 名称解释 恒量: 指在规定的条件下，连续两次干燥或灼烧后称定的质量差异不超过规定的范围。即两次烘干称重的质量差不超过2mg。 空白试验：指不加样品，而采用完全相同的分析步骤、试剂及用量进行的操作，所得结果用于扣除样品中的本底值和计算检测限 吸取:指用移液管或刻度吸管吸取液体物质的操作。其精度要求用数值的有效数位表示。 准确称取:指用分析天平进行的称量操作，其精度为±0.0001g。 采样：从大量分析对象中抽取有一定代表性的部分样品作为分析材料，这项工作称为采样采样法：又称抽样法，它是从事物总体中，采集部分样本来进行理化分析，并以此推断总体，了解总体基本情况。 四分法取样：又称圆锥四分法，将样品充分混合成圆锥体，再把圆锥体压成扁平的圆形，然后在中心划两条垂直交叉的直线，分成对称的四等分；弄去对角的2个四分之 一圆，再充分混匀，反复用四分法缩分，直至得到适量样品。 空白值：在不加试样的情况下，按照试样分析同样的操作手续和条件进行试验，试验所得结果称为空白值。 误差：分析结果与真实值之间的差值。依误差性质来源可分可定误差和不确定度误差。 可定误差：也成系统误差，有确定原因引起的，具有一定函数规律的误差。 准确度：测定值与真实值符合的程度。 精密度：指在相同条件下，多次重复测定的结果彼此符合的程度。 回归直线：在理想情况下，符合一定规律的标准曲线的上方各点至直线的纵向距离之和，具备上述条件的直线只有一条，称为回归直线。 水分活性（AW）: 指在同一温度下，食品中水分所产生的蒸汽压与纯水蒸气压之间的比率。必需脂肪酸：有几种脂肪酸人体自身不能合成，必须有食物供给。 必需氨基酸：是指人体自身不能合成或合成的量不能满足人体的需要，必须由食物蛋白质来供应，这些氨基酸称必需氨基酸。 蛋白质的生物价(BV)：它表示的是利用氮占吸收氮的百分比，即表示食物蛋白质被人体摄入后的利用程度。 灰分：系指食品在某一特定温度（一般为550℃）下灼烧后所得残渣，残渣中主要是氧化物，盐类等矿物质，可视为食品中近似无机物质含量。 PSE 猪肉：是指颜色苍白或粉红、质地松软和肉汁渗出，宰后45分钟肌肉pH在6.0以下为特征的猪肉。 挥发性碱性总氮（TVBN）：是指动物性食品在腐败过程中，由于细菌酶的作用，使蛋白质分解而形成的产物。此类产物系碱性含氮物质，主要包括氨，以及少量伯胺及叔 胺等物质，并均具有挥发性。 肪肪酸败：动物油脂在贮存期间，因受日光、水分、温度、空气以及外界微生物作水解氧化用，发生一系列水解和氧化过程，使油脂变酸、变苦涩，以致不能食用，动物油 脂这种变质过程即为肪肪酸败。 食品添加剂：是指为改善食品品质和色、香、味以及为防腐和加工工艺的需要而加入食品中的化学合成或天然物质。
动物性食品卫生学练习题
动物性食品卫生学练习题 一、填空： 1、屠畜的宰前检验采用____群体检查__和______个体检查_____相结合方法。 2、河豚中毒的机理是毒素阻碍了___神经末梢___和___中枢神经___的传导。 3、肌凝蛋白又叫__肌球蛋白__，其具有____ATP酶活性___活性。 4、肌纤蛋白又叫__肌动蛋白__，是构成___细肌丝__的主要成分。 5、屠畜的宰前管理一般包括_休息管理__，___停饲管理__和 __沐浴管理__三部分。 6、宰后检验猪胴体时，最具有剖检意义的淋巴结是_____________，____________，____________和__________。 7、家禽屠宰的三管切断放血法，这三管是指___________，__________和_________。 8、食品污染中化学性污染包括____________, ___________,____________, ___________。 9、肌纤维的________中含有肌红蛋白，活动越多的肌肉其肌红蛋白含量_________。 10、肌纤蛋白是构成肌原纤维_______的主要成分，它不具有___________活性。 11、蛋黄是由__________, ____________, ___________构成。 12、蛋中含有多种矿物质，其中以______________和______________含量较多。 13、宰后检验中，检查咬肌主要是为了检验___________感染，检查膈肌是为了检验 __________感染，检查颌下淋巴结主要是为了检验_________和__________感染。14、“珍珠病”指的是__________；在心膜上有花椰菜状赘生物是指患有___________；全身 淋巴结呈“石”样病变可能是患有_____________；“虎斑心”是_____________的典型病里变化。 15、过度疲劳和恐惧会大量消耗畜体中的______________贮量，从而影响_______________ 过程的正常进行，降低肉的质量。 16、有机磷中毒的作用方式是它与血液_____________结合，形成不易水解的 _________________，而失去分解_______________的能力。 17、当乳中缺少__________时，脂肪和水便会分离；缺少___________时，蛋白质即可发生 沉淀。 18、砷的毒性与其总价有关，三价砷的毒性________，五价砷的毒性________。
动物性食品安全问题及对策
动物性食品安全问题及对策 摘要：随着生活水平的不断提高，环境污染、药物残留、食品的加工卫生等问题引起社会的广泛关注,食品安全问题越来越受到人们的重视。本文主要简述了当前动物性食品安全的现状，初步分析动物性食品安全性问题产生的原因，并对如何保障我国动物食品安全提出了对策和建议。 关键词：动物性食品；食品安全；对策 动物性食品又称动物源性食品，是指动物肉、蛋和奶等可食性组织及其加工的产品。动物性食品安全是指在人类食用的动物性产品中，不应该有或不存在潜在的威胁人体健康的危险因素，人们在食用了这样的产品之后，不应该有导致疾病或潜在疾病的危险，不应该有危害后代健康的隐患。由于动物性食品安全和人们的身体健康有着非常密切的关系，所以越来越引起人们的关注。 1我国动物食品安全的现状 1.1动物食品产量大安全性差 尽管我国的畜禽产品生产数量和增长速度已连续十几年保持世界第一，且市场潜力、生产成本等方面具备优势，但是食品安全仍然与世界先进水平之间存在明显差距。从生产环节看，分散饲养目前仍然在我国占主导地位，而养殖业发达的国家十年前就已淘汰了这种家庭式的养殖方式；从加工环节看，大多数加工企业的设备、工艺和管理水平十分落后，私屠乱宰的现象没有得到完全的控制，而一些大中型现代化肉联厂的生产能力又处于闲置状态；从营销方式看，我国的动物食品绝大多数是通过农贸市场进行，而发达国家肉类流
动全部采用先进的超市零售方式经营。 1.2动物食品安全事故不断 近年来国际上动物食品安全事故接连发生，如比利时的“二恶英毒鸡”事件，起始于英国并扩散到其他国家的“疯牛病”、“口蹄疫”，使这些国家的食品工业和畜牧业受到沉重的打击，这一系列问题已引起了国际社会的关注。与国外相比，我国动物食品的安全问题更为严重，如浙江“瘦肉精”中毒事件；农兽药、重金属、抗生素和激素对动物食品的安全及环境污染带来了潜在危害；含三聚氰胺婴儿奶粉使更多的婴儿形成尿路结石，严重损害了幼儿的身心健康，对我国的奶牛业造成了难性的影响，引起了党中央、国务院的高度重视。 2影响动物性食品安全的因素 2.1生物性因素 动物性食品在生产、运输、包装过程中受到污染，导致大量微生物、寄生虫孳生，造成食物中毒。人食用了被致病微生物污染的畜禽肉品后，极易被感染、发病，使得动物疫病流行，尤其是人畜共患传染病及寄生虫病的发生。由此可见，动物性食品的生物污染严重影响了动物性食品的质量，危害着消费者的身心健康。 2.2饲料因素 饲料霉烂变质、含有毒性物质、被药物污染，或饲料中某些元素缺乏或过量都会影响肉品的品质；饲料中重金属含量超标，通过动物性食品的富集作用使人中毒。现代化的养殖业由于高度的集约化，需大量使用药物来防治动物疾病，容易在饲料中超量使用兽药，
食品理化检验试题及答案
食品理化检验试题及答案 （每空4分，共100分） 姓名：得分： 一、填空题 1、食品检验由食品检验机构指定的检验人独立进行。 2、GB5009上的准确称取是指用天平进行的称量操作，其准确度为 ±0.0001g。 3、采样应注意样品的生产日期、批号、代表性和均匀性（掺伪和 食物中毒样品除外）。 4、食品理化实验室个人防护设施主要包括护目镜，工作服，口罩， 手套。 二、选择题： 1、食品理化检验包括（ABC） A、快检筛查 B、定性 C、定量 2、法定计量单位包括(AC) A、mol/L B、% C、kg D meq ）： 3、食品安全标准应当包括下列内容（ABCDEFGH A食品、食品相关产品中的致病性微生物、农药残留、兽药残留、 重金属、污染物质以及其他危害人体健康物质的限量规定； B食品添加剂的品种、使用范围、用量； C专供婴幼儿和其他特定人群的主辅食品的营养成分要求； D对与食品安全、营养有关的标签、标识、说明书的要求；
E食品生产经营过程的卫生要求； F与食品安全有关的质量要求； G食品检验方法与规程； H其他需要制定为食品安全标准的内容。 4、掺伪或中毒样品采样应注意（B） A 代表性 B典型性 C普遍性 5、一般样品在检验后应保存（A）个月 A 一、 B 三、 C 六、D九 6、罐头或其它小包装食品同一批号，包装小于250克时，采样应 不少于（D）个 A 3、 B 6、 C 9 、D10 7、下列单位哪些是错误的写法(AC) A mg/Kg、 B g/100g、 C PH 、 D mol/L 8、被测物质含量在