观察根尖分生组织细胞的有丝分裂(实验课)
第2讲 观察根尖分生组织细胞的有丝分裂(实验课)
1．实验原理
2
．
实验步骤
1．辨析关于细胞有丝分裂的三个易错点
(1)不清楚“解离”的作用原理，误认为可以观察细胞有丝分裂的动态变化过程。 (2)不清楚细胞具有的相应结构，误认为赤道板也能观察到。
(3)对取材原理不清楚，误认为根尖任何部位的细胞都可作为观察对象，实际上只有分生区细胞才可以作为观察对象。
2．观察根尖分生组织细胞有丝分裂的关键及注意事项
3．必记高中生物常见实验中常见试剂的作用和应用
命题点(一)考查实验材料的选择和试剂的作用
1．(2014·)
A．蚕豆叶肉细胞
B．洋葱鳞片叶表皮细胞
C．蚕豆根尖分生区细胞
D．洋葱根尖伸长区细胞
解析：选C在四个选项中只有C项的细胞具有分裂能力，其他细胞都不能进行细胞分裂。
2．(2017·济宁一模)下列关于观察根尖分生组织细胞有丝分裂实验的叙述，正确的是()
A．使用50%的酒精能够使组织中的细胞相互分离开来
B．使用甲基绿能够对染色体着色，便于观察染色体的行为和数目变化
C．使用清水进行漂洗，可把多余的染液洗掉
D．使用高倍镜也观察不到后期时着丝点的断裂
解析：选D在观察植物细胞有丝分裂实验过程中用15%的盐酸和95%的酒精等比例混合，使组织中的细胞相互分离开来，A错误；甲基绿用于DNA的染色，而染色体应该用龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液染色，B错误；漂洗应该在染色之前进行，目的是洗去多余的解离液，C错误；在观察细胞有丝分裂实验的解离过程中，细胞已经被固定杀死了，所以不可能观察到着丝点分裂的过程，D正确。
3.()
①解离的目的是用药液使组织细胞彼此分离开来
②制片之前要通过漂洗洗去碱性染料，便于显微镜下观察
③压片是为了将根尖细胞压成薄层，避免相互重叠影响观察
④一个细胞中染色体的动态连续变化是观察的主要内容
A．①③B．②③
C．①②③D．①③④
解析：选A解离后需要漂洗洗去解离液，便于染色；解离后细胞已经死亡，不能观察到细胞中染色体的动态变化。
4.(2017·安徽模拟)有一位同学做根尖有丝分裂实验，在显微镜中观察到的图像如图所示，
造成这种情况的原因可能是()
①取材位置不合适②取材时间不合适③制片时压片力量不合适④
解离时间不合适⑤视野选择不合适
A．②③B．②⑤
C．①③④D．①②⑤
解析：选D根尖分生区细胞呈正方形，而图中有些细胞呈长方形，可能是取材位置不合适，①正确；图中细胞多处于未分裂状态，可能是取材时间不合适，②正确；图示细胞均分散开，说明制片时压片力量合适，③错误；解离的目的是使细胞分散开，而图示细胞已经分散开，说明解离时间合适，④错误；图示细胞有些呈长方形，可能是伸长区细胞，因此可能是视野选择不合适，⑤正确。
一、选择题
1．(2017·日照调研)某小组进行观察洋葱根尖分生组织细胞有丝分裂的实验，下列叙述正确的是()
A．盐酸和酒精混合液主要起固定作用
B．用碱性染料吡罗红对染色体染色
C．观察到细胞分裂后期细胞板逐渐形成新的细胞壁
D．细胞内染色体的存在状态可作为判断分裂时期的依据
解析：选D盐酸和酒精混合液主要起解离作用；使用碱性染料龙胆紫溶液或醋酸洋红液对染色体进行染色；在解离时细胞已经死亡，因此，不能观察到细胞板逐渐形成新的细胞壁，此外，细胞板是在末期形成的；在分裂期的前期、中期、后期和末期，染色体的存在状态不同，因此，细胞内染色体的存在状态可作为判断分裂时期的依据。
2．(2017·沈阳一模)人蛔虫是观察细胞有丝分裂的适宜材料，受精后的蛔虫其子宫中游离着许多处于有丝分裂不同时期的受精卵。某同学进行“观察人蛔虫受精卵有丝分裂”的实验，下列相关叙述错误的是()
A．与观察根尖细胞有丝分裂相比，不需要用龙胆紫等进行染色
B．与观察根尖细胞有丝分裂相比，不需要解离、漂洗实验操作
C．与观察根尖细胞有丝分裂不同，实验过程中可能用到生理盐水
D．与观察根尖细胞有丝分裂相比，观察过程仍需要先使用低倍镜
解析：选A观察有丝分裂需要对染色体进行染色，需要用龙胆紫或醋酸洋红液进行染色；由题干信息可知，人蛔虫子宫中处于不同时期的受精卵处于游离状态，因此不需要解离和漂洗；观察动物细胞有丝分裂，滴加生理盐水可以维持细胞的正常形态；用显微镜观察需先用低倍镜后用高倍镜。
3．下列关于“观察洋葱根尖分生组织细胞的有丝分裂”实验的叙述，正确的是() A．制片流程为：解离→染色→漂洗→制片
B．观察中期细胞可清晰地看到染色体且随后染色体着丝点分裂
C．显微镜下绝大多数细胞中能观察到染色体
D．低倍镜下寻找分生区的依据是细胞呈正方形、排列紧密
解析：选D制片流程为：解离→漂洗→染色→制片；观察中期细胞可清晰地看到染色体，但是看到的细胞均是死细胞，所以看不到动态变化；细胞分裂间期时间长，大多数细胞处于间期，所以显微镜下只有少数细胞中能观察到染色体；分生区细胞分裂能力强，所以细胞呈正方形、排列紧密。
4．(2017·正定中学段考)取生长健壮的小麦根尖，经过解离、漂洗、染色、制片过程，制成临时装片，放在显微镜下观察。欲观察到细胞有丝分裂的前、中、后、末几个时期() A．应该选一个处于间期的细胞，持续观察它从间期到末期的全过程
B．若在一个视野中不能看全各个时期，可移动装片从周围细胞中寻找
C．如果在低倍镜下看不到细胞，可改用高倍物镜继续观察
D．如果视野过暗，可以转动细准焦螺旋增加视野的亮度
解析：选B将根尖放入盐酸和酒精中解离时，细胞已经死亡，所以不可能继续分裂，A错误；如果在一个视野中不能看全细胞分裂的各个时期，可移动装片从周围细胞中寻找，B正确；如果用低倍镜看不到细胞，可能是光线太暗、物镜与装片间的距离不合适等原因造成的，这时不能换用高倍镜继续观察，C错误；如果视野太暗，可换用大的光圈或用凹面反光镜，增加视野的亮度，D错误。
5．(2017·漳州八校联考)在“观察植物细胞有丝分裂”实验中，三位实验人员制作洋葱根尖装片的操作步骤(“＋”表示操作，“－”表示未操作)如下表所示：
则甲、乙、丙观察到的实验现象分别是()
A．细胞重叠、染色体着色很浅不清楚、细胞分散染色体清楚
B．细胞分散但看不到染色体、染色体着色清楚、细胞分散染色体清楚
C．细胞重叠、染色体着色很浅不清楚、细胞着色清楚但看不到染色体
D．染色体着色很浅不清楚、细胞分散染色体清楚、细胞分散染色体清楚
解析：选C解离的目的是使细胞分散开，甲未解离，细胞相互重叠；漂洗的目的是洗去解离液，便于染色，乙未漂洗，影响染色效果，染色体着色很浅不清楚；根尖5～7 mm 处为伸长区，伸长区细胞已失去分裂能力，染色体呈染色质状态，观察不到染色体。
6．(2017·江西重点中学联考)如图是关于观察洋葱有丝分裂实验的部分操作，下列叙述合理的是()
A．剪取洋葱根尖2～3 mm，因为该区域属于根毛区，细胞有丝分裂旺盛
B．该实验步骤中唯一的错误是在②和③之间缺少用清水漂洗这一环节
C．在观察的图像中，b属于分生区的细胞，细胞已死亡
D．若用图中b区域的细胞观察质壁分离和复原，实验现象明显
解析：选C根尖2～3 mm的区域属于分生区。在②和③之间应增加清水漂洗这一环节，而③和⑤之间的清水漂洗环节应删除。分生区的细胞呈正方形，细胞经解离已死亡。b 区域的细胞属于分生区细胞，其液泡较小，渗透作用不明显。
7．(2017·海南模拟)洋葱是实验室中常用的材料，下列叙述错误的是()
A．用苏丹Ⅲ染液染洋葱根尖细胞，在光学显微镜下可观察到橘黄色颗粒
B．用洋葱根尖观察植物细胞有丝分裂，可以观察到一个细胞的连续分裂过程
C．选用紫色洋葱鳞片叶表皮细胞观察质壁分离现象时，观察不到染色体
D．在叶绿体中色素的提取与分离实验中，可以选用洋葱管状叶作实验材料
解析：选B在观察根尖的有丝分裂实验中，解离过程细胞已死亡，因此不能看到连续的分裂过程，B错误。
8.下列对植物细胞有丝分裂步骤解释错误的是()
A．解离过程使用15%盐酸，目的是使细胞易于分散
B．可以选用醋酸洋红液对染色体进行染色
C．压片时需要进行研转使细胞分散成均匀一层
D．若镜检时看到细胞如图所示，则可能取材时取错位置
解析：选C解离过程使用解离液(15%盐酸和95%的酒精按体积1∶1的比例)，目的是使组织中的细胞互相分离开易于分散，A正确；可以选用醋酸洋红液对染色体进行染色，易于观察，B正确；在被弄碎的根尖上盖上盖玻片，复加一块载玻片用拇指轻压，使细胞分散开成单层细胞，不可研转，C错误；若镜检时看到细胞图示成熟区细胞，细胞已经分化，看不到染色体行为，则可能取材时取错位置，D正确。
9．(2016·泰安二模)下图为洋葱根尖结构示意图。相关叙述不正确的是()
A．在观察植物细胞有丝分裂的实验中，需用盐酸和酒精处理使细胞分散开
B．观察细胞质壁分离现象的最佳区域是①
C．经低温处理后，③处可出现染色体数目改变的细胞
D．增加根尖细胞数目的主要区域是②
解析：选D图中①②③④分别是根毛区、伸长区、分生区、根冠，分生区进行细胞分裂，故增加细胞数目的主要区域是③，低温处理分生区的细胞，会抑制细胞中纺锤体的形成，导致细胞中染色体数目加倍。
10．(2016·海门中学段考，多选)实验材料的选择是科学探究中的一个关键环节，材料选对了就等于实验成功了一半。下面有关洋葱实验材料的叙述中，错误的是() A．表皮细胞大，容易观察，可用于低温诱导染色体数目变化的实验
B．根尖细胞分裂旺盛，可用于观察细胞的减数分裂实验
C．表皮细胞呈紫色，可用于叶绿体色素的提取实验
D．表皮细胞具有大液泡，可用于观察植物细胞的吸水和失水实验
解析：选ABC低温诱导染色体加倍必须是不断分裂的细胞，洋葱表皮细胞是高度分化的细胞，不分裂，A错误；根尖细胞只进行有丝分裂，不进行减数分裂，B错误；表皮细胞的紫色是液泡中色素分子的颜色，而不是叶绿体中色素分子的颜色，C错误；洋葱表皮细胞具有大液泡，可用于观察植物细胞的吸水和失水实验，D正确。
二、非选择题
11．(2016·徐州侯集中学检测)下表是某同学在做几个实验时所列举的实验材料和实验条件等相关内容，请据表回答下列问题：
(1)A～E组实验中需要使用显微镜的是________(填字母)。
(2)A组实验所用的试剂甲是______________，观察到的颜色是________，B组实验观察的细胞结构乙是________。在D组实验中，实验因变量丙是__________________。
(3)在C组实验中若使用0.3g/mL KNO3溶液，则实验现象是________________。
(4)E组为观察植物细胞的有丝分裂实验，实验中装片制作的流程为________________________，如果将常温下培养洋葱的装置移到冰箱的低温室(4 ℃)内再培养一段时间，然后用根尖制成装片并观察细胞中染色体数目的变化，该实验的目的是探究________________________________________________________________________。
解析：(1)需要使用显微镜的实验有B、C、E三组。(2)A组，稀蛋清含有蛋白质，双缩脲试剂与蛋白质反应呈现紫色；B组，健那绿是线粒体的活体染色剂，所以观察的细胞结构应是线粒体；D组，探究pH对过氧化氢酶活性的影响，因变量是单位时间内H2O2产生的气泡数或H2O2被完全分解所需的时间等。(3)C组实验是观察细胞的质壁分离，若使用0.3g/mL KNO3溶液，由于细胞能通过主动运输的方式吸收K＋和NO＋3，所以细胞发生质壁分离后会自动复原。(4)E组为观察植物细胞的有丝分裂实验，实验中装片制作的流程为：解离→漂洗→染色→制片；如果将常温下培养洋葱的装置移到冰箱的低温室(4 ℃)内再培养一段时间，然后用根尖制成装片并观察细胞中染色体数目的变化，实验的自变量是温度变化，该实验的目的是探究温度对植物细胞有丝分裂过程中染色体数目(与形态)变化的影响。
答案：(1)B、C、E(2)双缩脲试剂紫色线粒体单位时间内H2O2产生的气泡数(3)先发生质壁分离，然后又自动复原(4)解离→漂洗→染色→制片低温对植物细胞有丝分裂过程中染色体数目(与形态)变化的影响
12．(2015·江苏高考)中国水仙(Narcissustazetta var. chinensis)是传统观赏花卉，由于其高度不育，只能进行无性繁殖，因而品种稀少。为了探究中国水仙只开花不结实的原因，有研究者开展了染色体核型分析实验，先制作了临时装片进行镜检、拍照，再对照片中的染色体进行计数、归类、排列，主要步骤如下：
剪取新生的根尖→
卡诺固定
液固定
→
1 mol·L－1
HCl解离
→
清水
漂洗
→
卡宝品
红染色
→
制片
压片
→
镜检
拍照
→
核型
分析
请回答下列问题：
(1)选取新生根尖作为实验材料的主要原因是____________________________________。
(2)实验过程中用1 mol·L－1 HCl解离的目的是________________________________。
(3)该实验采用卡宝品红作为染色剂，与卡宝品红具有相似作用的试剂有________(填序号)。
①双缩脲试剂②醋酸洋红液③龙胆紫溶液④秋水仙素溶液
(4)镜检时，应不断移动装片，以寻找处于________期且染色体________的细胞进行拍照。
(5)由下图核型分析结果，得出推论：中国水仙只开花不结实的原因是________________________________________________________________________。
(6)为了进一步验证上述推论，可以优先选用________(填序号)作为实验材料进行显微观察。
①花萼②花瓣③雌蕊④花药⑤花芽
解析：(1)本实验研究的是水仙细胞的染色体核型，最好选择处于分裂中期的细胞进行染色体观察，实验材料选取水仙新生根尖，因为新生根尖分生区细胞分裂旺盛。(2)实验过程中需要制作水仙新生根尖的临时装片，用1 mol·L－1HCl 解离的目的是使组织细胞相互分离。(3)制作临时装片过程中，染色的目的是使染色体(或染色质)着色，常用染色液除卡宝品红外，还有龙胆紫溶液和醋酸洋红液。(4)光学显微镜下观察细胞中的染色体形态和数目的最佳时期是有丝分裂中期。视野中观察到的细胞数量有限，而且处于有丝分裂中期的细胞较少，因此，镜检时要不断移动装片，根据有丝分裂中期细胞的特点，从中挑选染色体分散良好的中期细胞进行拍照。(5)从图中水仙染色体核型可以看出，水仙的体细胞中含有三个染色体组，应属于三倍体(3N＝30)植物。水仙在开花期间进行减数分裂的过程中出现同源染色体联会紊乱现象，极难产生含有完整染色体组的可育配子，所以中国水仙只开花不结实。(6)通过直接显微观察能进行减数分裂的生物材料，可以进一步验证上述推论。在提供的生物材料中，花萼、花瓣、花芽都不能进行减数分裂，雌蕊子房里的胚珠内与雄蕊的花药内都有减数分裂发生。观察减数分裂使用的材料最好是雄性生殖器官(雄蕊)，因为其雄配子多，容易观察。植物雌蕊进行减数分裂的细胞数目很少，用它们作实验材料，不容易找到正在进行减数分裂的细胞。
答案：(1)新生根尖分生区细胞分裂旺盛(2)使组织细胞相互分离(3)②③(4)中分散良好(5)中国水仙是三倍体，减数分裂时同源染色体联会紊乱，不能产生正常生殖细胞(6)④
13．(2015·福建高考)为了研究从植物中提取的可可碱是否可以作为除草剂，某科研小组开展了可可碱对鬼针草根尖细胞有丝分裂和种子萌发影响的实验探究，结果如下表。请回答：
(1)本实验需要制作根尖细胞有丝分裂装片，制片过程中根尖解离需要用到的试剂是________。如图为显微镜下观察到的部分细胞图像，箭号所指的细胞处于分裂期的________期。
(2)实验结果显示，与对照组相比，当可可碱浓度达到1.0 mmol·L－1时，在分裂期的细胞中，后期和末期的细胞数目相对________。产生这种结果的原因可能是________________________，导致染色体无法移向细胞两极。
(3)实验结果表明，随着可可碱浓度的升高，种子发芽率__________。为探究可可碱影响种子发芽率的可能原因，某同学提出假设：可可碱会降低种子中赤霉素的水平。现欲通过实验检验上述假设，请写出实验设计的基本思路：
________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。
解析：(1)在制作植物根尖细胞有丝分裂装片的过程中，解离液是体积分数为95%的酒精和质量分数为15%的盐酸的混合液(1∶1)。图中箭号所指细胞的染色体都集中在赤道板上，可知该细胞处于有丝分裂中期。(2)由表中数据可知，与对照组相比，可可碱浓度为1.0 mmol·L－1时，在分裂期的细胞中，后期和末期的细胞所占百分比小，原因可能是可可碱抑制了纺锤体的形成，从而导致染色体无法移向细胞两极。(3)由表中数据可知，随着可可碱浓度的升高，种子发芽率逐渐降低。赤霉素可解除种子的休眠，与种子的发芽有关。要探
究可可碱是否降低了种子中赤霉素的含量，从而影响了发芽率，可用等量的鬼针草种子设置不同实验组，这些实验组分别用不同浓度的可可碱(自变量)溶液处理，一段时间后测定各组种子中赤霉素的含量，从而分析可可碱浓度与赤霉素含量的关系。为了使实验更严谨，还应设置空白对照组。
答案：(1)盐酸(或盐酸和酒精)中(2)减少可可碱能够抑制纺锤体的形成(3)降低以不同浓度的可可碱处理鬼针草种子，一段时间后测定各组种子中赤霉素的含量，分析可可碱浓度与赤霉素含量的关系
PI染色检测细胞周期
1、离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次。 2、加入预冷70%乙醇，于4℃固定过夜，或-20℃长期固定（4℃过夜一般隔天就进行检测，如果想推迟几天测，那就保存在-20℃，有资料说-20℃可以保存一个月，个人建议尽量在最短时间内检测，有些实验是在不同时间点上收细胞，这时我就等最后一次固定完了一块测，基本上也多在一周内检测完毕，没有特地去比较保存时间对检测结果的影响）。 3、细胞染色 离心收集细胞，以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭（PI），100ug/mL RNase A，0.2% Triton X-100，4℃避光孵育30分钟（PI我是直接用PBS配成工作浓度，然后加入细胞沉淀混匀，RNA酶现加，但有时不加发现对实验结果也没太大的影响）。 4、流式分析 以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2-3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。 分析时，使用FL2-w和FL2-A显示，去除联体细胞，具体如下图。 细胞周期流式后一般分为G0/G1,S,G2/M期三部份，如果有凋亡，在G0/G1期前面有个凋亡峰(也称sub-G0期),而如果分析时细胞窗口没设置好，可能在最前面还有细胞碎片峰。 结果解读 G0/G1期细胞占总的61.2%，峰位于横座标的45.76 G2/M期占13.07，峰位于横座标的91.43 S期占25.73 G2/G1为2.0（即G2期为4倍体细胞，而G1期为2倍体细胞，比值为2） 峰的变异系数为4.54%（好） 细胞碎片为0.48%，细胞聚集体有0.06%。 总的细胞数（仪器检测到的）为17525个， 在细胞周期中分析的细胞数为17431个（即排除了碎片及聚集体后）
实验报告观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
观察根尖分生组织细胞的有丝分裂 班级：高二三班第三小组姓名：久违丶漠. 【实验目的】 1..制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片。 2.识别有丝分裂的不同时期，比较细胞周期在不同时期的时间长短。 3.绘制植物细胞有丝分裂简图 【实验原理】 1.高等植物体内，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞。 2.细胞分裂具有独立性：同一时刻，同一组织的不同细胞，可处于细胞周期的不同分裂时期。在高倍显微镜下，根据染色体的形态和数目，识别有丝分裂的不同时期。 3.碱性染料（龙胆紫溶液或醋酸洋红液）能将染色体染成深色。 【实验用具】 洋葱（可用葱、蒜代替）。显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，剪刀，镊子，滴管 质量分数为15%的盐酸，体积分数为 95% 的酒精，质量浓度为ml或ml的龙胆紫溶液（将龙胆紫溶解在质量分数为2%的醋酸溶液中配制而成）或醋酸洋红液，洋葱根尖细胞有丝分裂固定装片。 【实验步骤】 1.洋葱根尖的培养 在实验课前3～4天，取洋葱一个，放在广口瓶上，瓶内装满清水，让洋葱的底部接触到瓶内的水面。把这个装置放在温暖的地方培养。待根长约5 cm时，取生长健壮的根尖制成临时装片观察。 2.装片的制作 制作流程为：解离→漂洗→染色→制片 3.洋葱根尖细胞有丝分裂的观察
（1）把制成的装片先放在低倍显微镜下观察，扫视整个装片，找到分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密。再换成高倍显微镜仔细观察，首先找出分列中期的细胞（原因：因为中期细胞中染色体的形态更为清晰和固定），然后再找前期、后期、末期的细胞，注意观察各时期细胞内染色体形态和分布的特点，最后观察分裂期间的细胞。 （2）如果自制装片效果不太理想，可以观察洋葱根尖固定装片。 4.绘图 绘出植物细胞有丝分裂中期简图。 【讨论】 1.在观察结果中，处于那一个时期的细胞最多？为什么？ 处于间期的细胞最多，因为间期持续的时间最长（见右图），其大约占细胞周期的90%~95%。分裂间期为分裂期进行活跃的物质准备，完成DNA分子的复制和有关蛋白质的合成，同时细胞有适度的生长。 【结论】 前期：核仁和核膜逐渐消失。核内染色质逐渐缩短变粗成为染色体，每一染色体含有两染色单体，它们具有一个共同的着丝点；两级发出纺锤丝形成纺锤体。染色体散乱地分布在纺锤体的中央。 中期：染色体形态比较稳定、数目比较清晰，便于观察。各染色体的着丝点排列在赤道板上，纺锤丝与染色体的着丝点相连。 后期：各染色体着丝点分裂为二，其每条染色单体也相应地分开，并各自随着纺锤丝的收缩而平均移向两极，每极有一组染色体，数目和原来的相同。 末期：核膜、核仁重新出现，分开在两极的染色体各自组成新的细胞核，在细胞中央出现细胞板形成新的细胞壁，使细胞分裂为二，形成二个子细胞。这时细胞又进入分裂间期。 细胞有丝分裂的重要意义，是将亲代细胞的染色体经过复制（实质为DNA的复制）之后，精确地平均分配到两个子细胞中。细胞的有丝分裂对于生物的遗传有重要意义
PI染色检测细胞周期实验步骤
protocol : PI染色检测细胞周期 1、收集细胞：胰酶（含EDTA）消化收集对数生长期细胞（加热处 理后损失多的组宜多收集细胞保证细胞有 0.5-2 X 10*6个），吸取旧培养基到一个新离心管里；少量常温PBS （根据培养皿大小决定量，PBS洗可以保证消化效率）洗2次，清洗的PBS也要收集到上述离心管内【检测凋亡才需收集旧培养基及清洗的 PBS J ;然后胰酶消化 （注意一定要消化完全，显微镜下观察细胞呈单个，而不是成片脱落）后利用旧培养基中和胰酶；离心（1000r/300g 5mi n）收集细胞沉淀。 2、用预冷的PBS清洗细胞两次。 3、固定细胞：用0.5ml预冷的PBS重悬细胞沉淀，使细胞充分悬浮成单细胞，再将重悬细胞加入1.2ml预冷的99.7%无水乙醇（乙醇终浓度70%），吹打混匀以免细胞团聚，4C固定2H至过夜。 4、细胞染色：离心（1000r/300g 5min ）收集固定的细胞，以1.8 mL的PBS洗细胞一次，离心（第一次实验时用7000rpm才把细胞离心下来，但最后流式结果显示细胞没有碎）再次获取细胞沉淀后加入1 00卩IRNaseA 于37 C水浴30min，最后加入400卩lPI避光染色30 min （常温或4C 均可） 【有的试剂盒说明是：每个样本加入500uL染色剂（据样本数，用P BS 临时配好总量，其中 PI 50ug/ml、RNase A 100ug/mL、Trit on X-100 0.2% ） 4 C避光染色30分钟】 5、流式分析以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2-3万个细胞，结
果用细胞周期拟和软件ModFit分析。分析时，使用FL2-W和FL2-A显示，去除联体细胞。
PI染色检测细胞周期实验步骤
protocol：PI染色检测细胞周期 1、收集细胞：胰酶（含EDTA）消化收集对数生长期细胞（加热处理后损失多的组宜多收集细胞保证细胞有0.5-2×10*6个），吸取旧培养基到一个新离心管里；少量常温PBS（根据培养皿大小决定量，PBS洗可以保证消化效率）洗2次，清洗的PBS也要收集到上述离心管内【检测凋亡才需收集旧培养基及清洗的PBS】；然后胰酶消化（注意一定要消化完全，显微镜下观察细胞呈单个，而不是成片脱落）后利用旧培养基中和胰酶；离心(1000r/300g5min)收集细胞沉淀。 2、用预冷的PBS清洗细胞两次。 3、固定细胞：用0.5ml预冷的PBS重悬细胞沉淀，使细胞充分悬浮成单细胞，再将重悬细胞加入1.2ml预冷的99.7%无水乙醇(乙醇终浓度70%)，吹打混匀以免细胞团聚，4℃固定2H至过夜。 4、细胞染色：离心（1000r/300g5min）收集固定的细胞，以1.8 mL的PBS洗细胞一次，离心(第一次实验时用7000rpm才把细胞离心下来，但最后流式结果显示细胞没有碎)再次获取细胞沉淀后加入1 00μlRNaseA于37℃水浴30min，最后加入400μlPI避光染色30 min（常温或4℃均可） 【有的试剂盒说明是：每个样本加入500uL染色剂（据样本数，用P BS临时配好总量，其中PI 50ug/ml、RNase A 100ug/mL、Triton X-100 0.2%）4℃避光染色30分钟】 5、流式分析
以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2-3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。分析时，使用FL2-w和FL2-A显示，去除联体细胞。
高中第章第节 二 观察根尖分生组织细胞的有丝分裂学案教案
二、观察根尖分生组织细胞的有丝分裂 【随堂巩固练习】 1、下列可以用来观察植物细胞有丝分裂的是（） （A）番茄果实（B）洋葱鳞片叶（C）洋葱根尖（D）叶表皮细胞 2、下图表示洋葱根尖分生组织细胞有丝分裂装片的制作与观察，据图回答： （1）A过程叫______，作用是__________ 。 （2）C过程叫__________，主要目的是__________ 。 （3）D过程中需要对载玻片上的根尖进行按压，以促使细胞_______ 。 （4）E过程中需要先在低倍镜下找到根尖的_____ 区，才能进行下一步的观察。 （5）观察时，在一个视野里往往找不全有丝分裂过程中各个时期的细胞，此时可以慢慢地移动，从邻近的区细胞中寻找。该区细胞的特点 是。 3、下列叙述中，正确的一组是（） ①实验中使用的盐酸的质量分数为15%②使用的酒精的体积分数为65%③使用的龙胆紫染 液的质量浓度为0.01g/mL④解离液的两种液体的配制比例为1:1⑤解离的时间为10～15min ⑥漂洗的时间约为10min⑦染色的时间为3～5min （A）①③④⑥⑦（B）①②③④⑤（C）①④⑤⑥⑦（D）②③④⑥⑦ 4、在观察根尖分生组织细胞的有丝分裂实验中，制作装片的正确顺序是（） （A）染色→解离→漂洗→制片（B）解离→漂洗→染色→制片 （C）漂洗→解离→染色→制片（D）解离→染色→漂洗→制片 5、经过漂洗的洋葱根尖放入盛有质量浓度为0.01g/mL的龙胆紫溶液的玻璃皿中染色，被染色的是 （） （A）整个细胞（B）整个细胞核（C）核仁（D）染色质和染色体 6、观察根尖分生组织细胞有丝分裂实验时，看到解离后的根尖变酥软，原因是（） （A）龙胆紫使细胞变软（B）酒精使细胞变软 （C）盐酸使组织细胞分散（D）根脱水变软 7、用光学显微镜的低倍镜观察洋葱根尖细胞有丝分裂装片时，在同一个视野里数目最多的是处在 的细胞。因为。 8、在低倍镜下，观察到的洋葱根尖分生区细胞形态是（） 9、下表为某同学在显微镜下观察细胞有丝分裂装片所看到的一些状况，分析回答： （1）该细胞是根尖部位的细胞。 （2）这个细胞处于有丝分裂的期。 （3）若要把这个细胞进一步放大观察，请从下列各项中选择正确的操作步骤，并按顺序排列。 A．朝右下方移动装片，使需放大的细胞移至视野中央 B．朝左下方移动装片，使需放大的细胞移至视野中央 C．调节粗准焦螺旋使镜筒上升 D．缓缓调节细准焦螺旋至物像清晰 E．开大光圈，将平面镜换成凹面镜 F．转动转换器，移走低倍物镜换上高倍物镜
流式检测细胞周期要点
1.收集细胞； ～5000rpm离心5min，收集沉淀，重悬于200ul的PBS中，再次离心收集沉淀； ％冰冻乙醇（-20度保存）4度固定过夜or-20度固定1h； 4.离心收集沉淀，PBS洗一次（视沉淀量可忽略）； 5.沉淀重悬于200～500ul的PBS，加入Rnase A 37度水浴1h； 目纱布过滤至流式管，加入PI染色，4度避光30min-1h，上机器。 1、Q：要做胃粘膜组织的DNA含量及倍体检查，但取材后要等几个星期才会做流式细胞术检查，请问：胃组织要怎样保存好呢？用低温保存，还是用乙醇固定？或者固定后再低温下保存？ A：我做过乳腺细胞的DNA含量测定，取得组织以后，先处理成单细胞悬液，然后再加70%冰乙醇固定，要保证冰乙醇的最终浓度为50%，这样固定的细胞悬液可以至少保存12小时，最多可保存一个月，上机检测前再加PI综合染液。我就是这样做的，保存了将近三个星期，结果还可以，变异系数为5%. 2、实验中想用PI分析细胞周期及凋亡率，请教几个问题： Q：（1）所用的RNAs酶用什么配制呢？用PBS配吗？ A：RNaseA用PBS配制没有问题，但是注意要沸水浴去除DNase的活性。 Q：（2）测细胞周期和凋亡率时都要用RNAs酶，可以一起检测吗？ A：用流式细胞仪测定时细胞周期和凋亡率是同时测定的，不用担心。 Q：（3）Triton－x－100是固定剂吧，用了70％的冷乙醇（是4℃吗？），是不是就不用Triton－x－100固定了？ A：Triton X-100是起透化作用的，不是固定剂，可以用75％的乙醇于-20度固定。 Q：（4）还要设什么内参标准（5％鸡红细胞）吗？
观察洋葱根尖有丝分裂实验
实验十一：观察根尖分生组织细胞的有丝分裂 一、实验目的： 1、制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片。 2、观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期，比较细胞周期不同时期的时间长短。 3、绘制植物细胞有丝分裂简图。 二、实验原理： 1、高等植物的分生组织有丝分裂较旺盛。 2、有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同，可用高倍显微镜根据各个时期内染色体的变化情况，识别该细胞处于那个时期。 3、细胞核内的染色体易被碱性染料（如龙胆紫）染成深色。 三、程序设计思路 1、洋葱根尖的培养在上实验课之前的3-4天，取洋葱一个，放在广口瓶上。瓶内装满清水，让洋葱的底部接触到瓶内的水面。把这个装置放在温暖的地方培养。待根长约5cm，取生长健壮的根尖制成临时装片观察。 2、装片的制作 制作流程为：解离—漂洗—染色—制片 解离上午10时至下午2时，剪去洋葱根尖2-3mm，立即放入盛入有盐酸和酒精混合液（1：1）的玻璃皿中，在温室下解离。 3-5min 用药液使组织中的细胞相互分离开来 漂洗待根尖酥软后，用镊子取出，放入盛入清水的玻璃皿中漂洗。约10min 洗去药液，防止解离过度 染色把根尖放进盛有质量浓度为ml或ml的龙胆紫溶液（或醋酸洋红液）的玻璃皿中染色。3-5min 染料能使染色体着色。 制片用镊子将这段根尖取出来，放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子尖把根尖能碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。然后，用拇指轻轻的按压载玻片。使细胞分散开来，有利于观察 3、观察 a低倍镜观察：找到分生区细胞，其特点是细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂b高倍镜观察：在低倍镜观察的基础上换高倍镜，直到看清细胞的物象为止 c仔细观察：先到中期，再找其余各期，注意染色体的特点 d移动观察：慢慢移动装片，完整地观察各个时期（如果自制装片效果不太理想，可以观察洋葱根尖固定装片） 4、绘图 5、记录 四、分析 1、取材分析 （1）取材及用具：a，取材：洋葱（可用葱.蒜代替），质量分数为15%的盐酸，体积分数为95%的酒精，质量浓度为ml或ml的龙胆紫溶液（将龙胆紫溶解在质量分数2%的醋酸溶液中配制而成）或醋酸洋红液，洋葱根尖细胞有丝分裂固定装片。 b、实验用具：显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，剪子，镊子，滴管。 c、取材分析：取材应为洋葱根尖分生区细胞根尖2-3mm，而且洋葱的根必须有活性。 (2)药品用法用量分析：解离液应为质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精按照1:1比例混合，而且解离时间要控制在3min-5min （3）过程分析：实验核心内容必须严格按照解离——漂洗——染色——制片四步进行
观察根尖分生组织细胞有丝分裂教学设计
《观察根尖分生组织细胞有丝分裂》教学设计 一、设计思路： 本节实验课设计的指导思想是注重思考和活动的过程。因为经历过程能增强记忆，感受过程能领会方法，体会过程能有效学习。学生学习生物不仅仅是为了模仿、继承和积累现成的生物知识，其最终目的是培养生物思维和掌握学习方法，学会对未知领域的探索和创新。过程式教学，注重了学生的学习过程，想学生所想，有利于学习方式的转变，能把“还学生以主体地位”真正落实在生物教学中。 本实验课的理论依据是：⑴植物体的根尖、茎尖等分生区的细胞具有连续分裂增殖的特点；⑵质量分数为15%的盐酸溶液与体积分数为95%的酒精各半的混合液浸泡植物根尖，根尖细胞被杀死，细胞间质被溶解，细胞容易分离；（3）使用显微镜的低倍镜可以找到分生区的部位，再换高倍镜，同时借助于移动装片可在视野中找到有丝分裂的各个分裂时期；（4）龙胆紫或醋酸洋红是碱性染料，容易使细胞核内的染色体着色。 本节实验课的教学特色是教师讲解实验方法步骤后，然后组织学生讨论，引导学生动手实验操作、观察，最后用数码显微镜将实验效果好的装片展示在白板上，同学之间可以非常直观地相互交流实验成果。 二、实验教学分析： 本节教材是人教版高中生物·必修1《分子与细胞》·第六章《细胞的生命历程》·第1节《细胞的增殖》中的一节实验内容。细胞的有丝分裂是高中生物课程的核心内容之一，有丝分裂是细胞分裂的主要方式，也是后面学习减数分裂和遗传基本规律的基础。《观察根尖分生组织细胞的有丝分裂》是一个经典的高中生物实验。教材突出的是实验步骤和显微镜操作技巧，要求学生学会制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片，观察并验证植物细胞有丝分裂几个时期的细胞结构特点，加深理解细胞有丝分裂的过程。 对于高二年级的学生来说，他们分析问题能力的提高、智力的发展在很大程度上都必须通过思想交流才能实现。而通过讨论课能让学生有机会同他的同伴进行深入的讨论，将推动他们对自己的思路作进一步的分析，并重新考虑自己的立场和观点。同时也让学生能有机会同老师进行讨论，能鼓励学生提出疑问和创见。 本节实验课用到的材料用具有：培养好的洋葱；质量分数为15%的盐酸溶液,体积分数为95%的酒精；质量浓度为0.01 g/mL或0.02 g/mL的龙胆紫溶液或醋酸洋红液；光学显微镜、数码电子显微镜、 三、教学的重、难点： 重点：实验设计，力图通过这一教学过程的实施、帮助学生培养推理分析能力，解决问题能力，理解科学实验的本质。 难点：实验材料的选择和装片制作。
细胞周期同步化
细胞周期同步化 在细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中，其中有少数细胞在进行有丝分裂活动，其余细胞分别处于G1、S和G2各期。不同时相的细胞对药物干预存在不同反应，会影响实验的重复性，因此，需要获得周期一致性的细胞。利用细胞同步化技术可使细胞大量的处于同一细胞时期，并可获得该时期大量的物质，如细胞中期时的染色体。细胞周期同步化(synchronization)是指为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡，借助某种自然或人为的实验手段,使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同一时相( 除了G0期的细胞)的现象。细胞同步化本质上包括用一定的方法获得一定数量的同步化细胞群和使细胞进入同步化生长的两层含义。 DNA 合成抑制法是通过抑制DNA合成将细胞同步于同一时期的方法。高浓度TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法是目前常用的抑制DNA 合成的同步化方法。它可逆地抑制DNA 合成，而不影响其他时期细胞的转运，最终可将细胞群阻断在S 期或G1 /S 交界处。其原理是: Td Ｒ是细胞DNA 合成不可缺少的前体，但向培养基中加入过量TdＲ，可形成过量的三磷酸腺苷，后者能反馈抑制其他核苷酸的磷酸化，从而抑制DNA 合成。它将细胞同步于G1 /S期交界处，同步化程度高，适用于任何培养体系，可将几乎所有的细胞同步化，但是容易产生非均衡生长，个别细胞体积增大。TdＲ双阻断法因为简单易行且可逆，在肿瘤药理方面对细胞周期同步化的实验中得到了广泛的应用。羟基脲、5-氟脱氧尿嘧啶、阿糖胞苷、氨甲蝶呤和高浓度ADR、GDR也属于DNA合成抑制剂，它们与TdR作用相似，均可通过抑制DNA合成达到同步化的目的。 中期阻断法是利用破坏微管的药物将细胞阻断在M期从而得到同一时期细胞的方法，常用的药物有秋水仙素等。秋水仙素通过抑制微管的聚合，进而抑制有丝分裂装置的形成，将细胞阻断于有丝分裂中期然后再释放使细胞达到同步化。中期阻断法非平衡生长问题不明显，但可逆性比较差，当阻断时间过长时，许多细胞产生异常分裂。过去研究中也发现，同步后的细胞的生长能力明显不如撤去阻断剂后得到的S期细胞旺盛。秋水仙胺、Nocodazole也是目前常用的中期阻断剂。 经过同步化之后的细胞可以通过流式细胞术对其周期进行分析。将细胞用PI（碘化丙啶）染液进行染色，使用流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。由于细胞的DNA含量在不同时期有显著的差异，因此可以将细胞分成
第十三讲观察根尖分生组织的有丝分裂(实验课)
第十三讲观察根尖分生组织的有丝分裂(实验课) 1．实验原理 2． 1．实验成功的关键及注意事项
2．关注洋葱在实验中的“一材多用” 命题点(一)考查实验材料的选择和试剂的作用 1．(2017·北京高考)洋葱根尖和小鼠骨髓细胞都能用于观察细胞有丝分裂，比较实验操作和结果，叙述正确的是() A．都需要用盐酸溶液使细胞相互分离 B．都需要用低倍镜找到分裂细胞再换高倍镜观察 C．在有丝分裂中期都能观察到染色体数目加倍 D．在有丝分裂末期都能观察到细胞板 2．(2014·全国卷Ⅰ)回答下列问题： (1)在观察大蒜根尖细胞有丝分裂的实验中，常用盐酸酒精混合液处理根尖，用龙胆紫溶液染色。实验中，盐酸酒精混合液的作用是__________________________；龙胆紫溶液属于________性染料，能够使细胞中的________着色。 (2)用光学显微镜观察细胞，可以看到细胞核。细胞核的功能可概括为：____________________________________________________________________________。 [归纳拓展]归纳盐酸和酒精的“同材异用”
(1)不同浓度酒精的用途： (2)3．在观察根尖分生组织细胞的有丝分裂实验中，下列处理及其目的恰当的是( ) A ．剪取根尖2～3 cm ，进行制片处理 B ．根尖放入盐酸和酒精混合液中解离，目的是使细胞分散开 C ．染色后，需用清水漂洗去浮色再观察 D ．制片时需在盖玻片上再放上一片载玻片，防止压碎盖玻片 4.(2018·泉州质检)在“观察洋葱根尖分生区细胞的有丝分裂”实验中，某同学观察到的一个视野图像如右。已知洋葱根尖分生区细胞一个细胞周期约12 h 。下列有关叙述最合理的是( ) A ．装片制作时使用甲基绿吡罗红混合染色剂进行染色 B ．向左上方移动装片可使该视野中M 细胞移到视野中央 C ．计算该视野中分裂后期细胞所占的比例，乘以12 h ，得出分裂后期的时长 D ．降低显微镜的放大倍数，有助于更精确比较不同分裂时期的时间长短 命题点(三) 考查细胞周期中各时期的计算 5．回答与观察细胞染色体实验有关的问题：(1)右图表示洋葱根尖细胞的细胞周期。假设洋葱根尖细胞的细胞周期大多开始于夜晚22：00时，若要观察洋葱根尖细胞有丝分裂过程，取材的最佳时间是____________。 (2)某同学检查了洋葱根尖6 000个处于有丝分裂中的细胞，其中有692个处于前期，105个处于中期，35个处于后期，168个处于末期。据此判断下列有关叙述错误的是( ) A ．分裂期中各时期相对持续时间是前期＞末期＞中期＞后期 B ．细胞周期中分裂期持续的时间比分裂间期要短 C ．分裂期中前期持续的时间最短 D ．分裂中期持续的时间约为0.21 h [归纳拓展] 细胞分裂时期与所观察细胞数目的关系及计算 (1)细胞周期中不同时期持续时间长短与处于该时期的细胞数呈正相关。 (2)某时期持续时间(t )＝处于该时期细胞数观察细胞总数 ×细胞周期(T )
生物实验报告《观察植物细胞的有丝分裂》
生物实验报告《观察植物细胞的有丝分裂》 一、实验目的 1.观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期。 2.初步掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技能。 3.初步掌握绘制生物图的方法。 二、实验原理 在植物体中，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞，高等植物细胞有丝分裂的过程，分为分裂间期和分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍显微镜观察植物细胞的 有丝分裂的过程，根据各个时期细胞内染色体（或染色质）的变化情况，识别该细胞处于有 丝分裂的哪个时期，细胞核内的染色体容易被碱性染料着色。 三、材料用具 洋葱根尖、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、培养皿、铅笔、质量分数为15%的盐酸、 体积分数为95%的酒精、质量分数为0.01g/ml的龙胆紫（或紫药水） 四、实验过程（见书Ｐ39） 1．洋葱根尖的培养（提前3—4天） 2．解离：5min 3．漂洗: 10min 4．染色: 5min 5．制片 6．镜检 五、注意 1．解离充分是实验成功的必备条件。解离充分，组织才能分散，细胞也不会重叠。 2 ．漂洗时间一定要足够，否则细胞染不上色。 第1 页共13 页
3 ．染色时，染液的浓度和染色时间必须掌握好。特别是染色不能过深，否则镜下一片紫色，无法观察。 六、讨论 1．制作好洋葱根尖有丝分裂装片的关键是什么？谈谈你自己的体会。 2．在观察清楚有丝分裂各个时期的细胞以后，绘出洋葱根尖细胞有丝分裂的简图，并标明时期。
生物技术实习报告4篇 生物学是一门实践性很强的学科，我们在经过了将近一年对动物学和植物学的理论学习后，野外实习也至关重要，它可以使我们更加有效地掌握和巩固课堂教学的基本理论知识和基本实验技能，而且还可以学到许多在课堂上学不到的知识，开阔视野，认识人与自然的关系，增强环境保护意识和社会责任感。 实习目的;(1)复习、巩固和验证所学的生物学基本理论和基本知识，同时进一步丰富所学的生物学知识;(2)用辩证唯物主义观点观察丰富多彩的生物世界，了解植物和动物的形态、习性、种类、用途的多样性以及它们与环境的关系，激发学习的积极性;(3)理论联系实际，通过自主学习和研究性学习培养独立工作能力和创新意识;(4)培养不怕困难，吃苦耐劳的好作风热爱祖国的山山水水，珍惜大自然一草一木的良好素质与情感;(5)增强集体主义观念弘扬团队精神，促进同学，师生之间的了解与沟通。 实习意义;(1)通过野外实习，我们不仅巩固了书本上学到的知识，而且还学到许多在书本上学不到得知识;(2)通过野外综合学习，我们更加热爱自然，热爱专业，团结合作，吃苦耐劳，同时也提高了独立观察、思考、分析、解决问题的能力和探索创新的新能力;(3)通过野外实习，增强了我们对植物界生物的认识，认识了人与自然的关系，增强环境保护意识和社会责任感。 主要内容：5月29日，早晨五点集合，出发赶往青岛，下午一点左右到达参观青岛市中山公园的动、植物园，下午2点10分集合，晚上进入北九水风景区。 5月30日，上午在山里采集标本，下山后按小组制作标本，下午去樱桃园采摘樱桃。 5月31日，挑战崂顶，6点40出发，中午12点左右到达崂顶，围山顶走了一圈后开始下山，下山时由于方向性错误我们在深山里迷路了，还遇上了大雨，幸亏遇上了几名野外登山队员，才得以走出这座鬼斧神工的大山，到达营地时已经晚上7点多了。 6月1日，早上8点多，在青岛栈桥看风景，9点到下午2点在海底世界参观标本及各种海洋生物(标本馆、海底世界、海兽馆、梦幻水母宫)下午两点多向日照出发，来到李家湾赶海园，住在海边，心情无比激动。 6月2日，上午来到灯塔风景区和万平口风景区看大海，下午回到营地赶海，采集和制作标本。 6月3日，上午来到国家森林公园观赏各类植物，下午回到营地采集和制作标本。 6月4日，上午自由活动，下午1点去刘家湾赶海园赶海，采集和制作标本，这里的海滩好大呀。 6月5日，上午7点出发赶往济南大明湖公园参观游览，下午出发返回，晚8点抵达沧州，野外实习顺利结束。 总结体会：首先，我觉得这次去山东，可以说是不负此行吧，我们不仅开阔了眼界，领略
细胞增殖细胞周期的测定方法
苑中2011 届高三生物二轮专题复习学案 1 “细胞增殖”相关知识的建构（2 课时）一、减数分裂与基因的分离、自由 组合定律请画出能体现基因自由组合现象的细胞分裂图像 例1、（08 江苏）某种昆虫长翅（A）对残翅（a）为显性，直翅（B）对弯翅（b）为显性，有刺刚毛（D）对无刺刚毛（d）为显性，控制这3 对性状的基因均位于常染色体上。现有这种昆虫一个体基因型如下图所示，请回答下列问题。（1）长翅与残翅、直翅与弯翅两对相对性状的遗传是否遵 循基因自由组合定律，并说明理由。。（2）该昆虫一个初级精母细胞产生的精细胞的基因型为____________。（3）该昆虫细胞有丝分裂后期，移向细胞同一极的基因有。（4）该昆虫细胞分裂中复制形成的两个D 基因发生分离的时期 有______ 。（5）为验证基因自由组合定律，可用来与该昆虫进行交配的异性个体的基因型分别是 _______________________________________________ ____________________________ 。二、细胞分裂与可遗传变异请画出可遗传变异种类的概念图苑中2011 届高三生物二轮专题复习学案 2 1、基因重组（非同源染色体的自由组合、交叉互换）例2、（07 广东）在减数分裂中每对同源染色体配对形成四分体，四分体中的非姐妹染色单体 之间经常发生交换。实验表明，交换也可以发生在某些生物体的有丝分裂中，这种现
象称为有丝分裂交换。图39—1 是某高等动物一个表皮细胞发生有丝分裂交换的示意图，其中D 和d，E 和e，F 和 f 表示某对同源染色体上的三对等位基因。图39—1 交换 过程示意图（左：交换前的染色体；右：交换后的染色体）（1）请问该细胞在发生有丝分裂交换后，产生几种基因型 的子代表皮细胞？并分别写出基因型 _______________________________________________ __________________。（2）如果不考虑该生物产生配子时发生的交换，那么该生物产生的配子有几种基因型？并 写出基因型 _______________________________________________ _____________。（3）如果图39—1 是该生物的精原细胞在产生精细胞时发生减数分裂交换后的结果，请问由它产 生的配子类型有几种？并写出基因型 ______________________________。（4）如果细胞在减数分裂和有丝分裂中都发生交换，你认为哪一种分裂方式对于遗传多样性的贡献更大？为什么？ _______________________________________________。 2、染色体变异（染色体结构变异、染色体数目变异）例 3、（10 苏州高二期末）右下图表示某生物体的细胞进行减数 分裂过程中，其中联会的两对染色体之间出现异常的
观察有丝分裂实验学案
【总第28】实验《观察根尖分生组织细胞的 有丝分裂》学案 课题：实验《观察根尖分生组织细胞的有丝分裂》 1、实验原理：（1）细胞核中的染色体易被碱性染料着色，便于在显微镜下观察。 （2）高等植物的根尖、芽尖的分生区细胞在适宜的条件下有丝分裂旺盛。 （3）同一组织细胞，其分裂并不同步进行，可观察到处于不同时 期的细胞。 2、方法与步骤： 过程：解离---漂洗----染色-----观察 步骤： 一：取材：取生长健壮白色的洋葱根尖剪取洋葱根尖部分2mm—3mm。（提示：上午10点至下午2点时细胞分裂活跃，处于分裂期的细胞较多，此时取材最合适） 二. 解离：将剪取的根尖放入盛有盐酸和酒精(1:1)的培养皿中，在温室下解离3min—5min， 解离的目的，用药液使组织中的细胞相互分离开来。 (提示：注意解离时间。时间过短，则细胞不易被压散，时间过长，则细胞容易被压碎，影响染色) 三漂洗：待根尖酥软后（用镊子试），用镊子取出根尖，放入盛有清水的玻璃杯中漂洗10min。 漂洗的目的：洗去药液，防止解离过度而影响染色 四染色：把根尖放入盛有0,01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液中，染色3-5min，使染色体着色 五制片：用镊子取染色的根尖放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子把根尖弄碎，盖上盖玻片，再加一片载玻片，然后，用拇指轻轻按压载玻片，使细胞分散开有利于观察 六观察：先用低倍镜找到分生区，再换高倍镜观察。 （提示：1.分生区细胞呈正方形，排列紧密。2.注意根据染色体的特征，分辨又是分裂的不同时期。3.同一视野中所有分裂期细胞不能全部看到，慢慢移动装片，找到各个时期的细胞） 跟踪训练 1、下列可以用来观察植物细胞有丝分裂的是（） （A）番茄果实（B）洋葱鳞片叶（C）洋葱根尖（D）叶表皮细胞2下列叙述正确的一组是（） ①实验中使用的盐酸的质量分数为15% ②使用的酒精的体积分数为65% ③使用的龙胆紫染液的质量浓度为0.01g/mL ④解离液的两种液体的配制比例为1:1 ⑤解离的时间为10～15min ⑥漂洗的时间约为10min ⑦染色的时间为3～5min （A）①③④⑥⑦ （B）①②③④⑤ （C）①④⑤⑥⑦ （D）②③④⑥⑦3、在观察根尖分生组织细胞的有丝分裂实验中，制作装片的正确顺序是 （） （A）染色→解离→漂洗→制片（B）解离→漂洗→染色→制片 （C）漂洗→解离→染色→制片（D）解离→染色→漂洗→制片 4、经过漂洗的洋葱根尖放入盛有质量浓度为0.01g/mL的龙胆紫溶液的玻璃皿 中染色，被染色的是 （A）整个细胞（B）整个细胞核（C）核仁（D）染色质和染色体 5、观察根尖分生组织细胞有丝分裂实验时，需要解离根尖的原因是（）（A）龙胆紫使细胞染色（B）酒精使细胞变软 （C）使组织细胞分散（D）根脱水变软 6、用光学显微镜的低倍镜观察洋葱根尖细胞有丝分裂装片时，在同一个视野里数目最多的是处在 的细胞。因为。 7、在低倍镜下，观察到的洋葱根尖分生区细胞形态是（） 8、一同学观察洋葱根尖细胞有丝分裂装片时发现被观察的材料边缘为浅蓝色，中间为白色。下列有关对这一现象的分析，正确的是（） A染色时间过长 B染色时间过短 C解离不充分 D漂洗不彻底 9、（2012山东）某小组进行观察洋葱根尖分生组织细胞有丝分裂的实验，下列关于该实验的叙述正确的是 A.盐酸和酒精混合液主要起固定作用 B.碱性染料吡罗红（派洛宁）可用于染色体染色
有丝分裂实验过程
实验原理 在植物体中，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞。高等植物细胞有丝分裂的过程，分为分裂问期和有丝分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍镜观察植物细胞有丝分裂的过程，根据各个时期细胞内染色体或染色质）的变化情况，识别该细胞处于有丝分裂的哪个时期。细胞核内的染色体容易被碱性染料（如龙胆紫、醋酸洋红）溶液着色。 目的要求 1．观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期。 2．学会制作洋葱根尖有丝分裂装片的生物技术。 3．学会使用高倍镜和绘生物图的方法。 材料 洋葱（可以用蒜、葱代替）。 用具 显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿3个，、剪刀，镊子，滴管。 药品 质量分数为15％的盐酸，酒精的体积分数为95％的溶液，龙胆紫的质量浓度为0．01 g ／mL的或0．02 g／mL的溶液（或醋酸洋红液）。 方法步骤 一、洋葱根尖的培养 在上实验课之前的3d～4d，取洋葱一个，放在广口瓶上。瓶内装满清水，让洋葱的底部接触到瓶内的水面。把这个装置放在温暖的地方，注意经常换水，使洋葱的底部总是接触到水。待根长5 cm时，可取生长健壮的根尖制片观察。 二、装片的制作 1．解离下午2时是洋葱有丝分裂的高峰期，可在此时剪取洋葱的根尖 2 mm～ 3 mm，立即放入盛有氯化氢的质量分数为匕％的溶液和酒精的体积分数为95％溶液的混合液（1：1）的玻璃皿中，在室温下解离3 min～5 min后取出根尖。 2．漂洗待根尖酥软后，用镊子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10 min. 3．染色把洋葱根尖放进盛有龙胆紫的质量浓度为0．01g／mL 或0．02 g/mL的溶液（或醋酸洋红液）的玻璃皿中，染色3 min～5 min。 4．制片用镊子将这段洋葱根采取出来，放在载玻片上，加一滴清水，并且用镊子尖把洋葱根尖弄碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。然后，用拇指轻轻地压盖玻片，这样可以使细胞分散开来。 三、洋葱根尖细胞有丝分裂的观察 1．低倍镜观察 把制作成的洋葱根尖装片先放在低倍镜下观察，慢慢移动装片，要求找到分生巨细胞，它的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂。 2．高倍镜观察 找到分生区细胞后，把低倍镜移走，换上高倍镜，用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰，直到看清细胞物像为止。 3．仔细观察，可先找出处于细胞分裂期中期的细胞，然后再找出前期、后期、末期的细胞。注意观察各个时期细胞内染色体变化的特点。 4．在一个视野里，往往不容易找全有丝分裂过程中各个时期的细胞。如果是这样，可以慢慢地移动装片，从邻近的分生区细胞中寻找。 5．如果自制装片效果不太理想，可以观察教师演示的洋葱根尖细胞有丝分裂的固定装片。
观察根尖分生组织细胞的有丝分裂(精品实验教案)
高中生物实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂 一、教学目的 1．观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期。 2．初步掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技术。 3．初步掌握绘制生物图的方法。 二、实验程序 装片的制作：洋葱根尖细胞培养：实验课前3-4d培养（温暖、常换水），待根长到5cm 取材：取根尖2-3mm 解离：解离液：质量分数为15%的HCl溶液和95%的酒精溶液按1∶1体积比的比例混合解离时间：3-5min 解离目的：使组织中的细胞互相分离开 解离程度：根尖酥软 漂洗：漂洗液：清水 漂洗时间：10 min 漂洗目的：洗去组织中的解离液，有利于染色 染色：染色液：0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫（醋酸洋红）溶液 染色时间：3-5min 染色目的：使染色体（或染色质）着色 制片：镊子尖把根尖弄碎，盖上盖玻片，复加一块载玻片用拇指轻压（使细胞分散开）观察：先低倍镜：据细胞特点找到分生区（细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂）后高倍镜：先找中期细胞，后找前、后、末期细胞（绝在多数细胞处于间期，少数处于分裂期。 因为间期时长远大于分裂期。） 【例析】 在观察植物细胞有丝分裂实验中，为利于观察，常采用哪些方法使根尖分生区细胞分散开？（解离、弄碎、压片） 三、分生组织细胞的有丝分裂实验的关注要点分析 观察根尖分生组织细胞的有丝分裂的实验是高中教材中几个关键性实验之一，其重要性不容忽视。本实验有几个需要关注的要点，在此做简要归纳与分析： 关注要点一：根尖分生区细胞 1、根尖分生区细胞的位置：实验中学生经常犯得错误是，拿来植物根，随意剪一段下来就进行实验，结果往往导致实验失败。因为分生区细胞的位置在距根尖2~3毫米的位置上，所以要注意取材的位置。 2、根尖分生区细胞的形态：即使取材位置合适，但此处细胞也不全是根尖分生区细胞，所以在显微镜下观察时，一定要注意观察细胞的形态，只有呈正方形（有的并不是十分规则的正方形),排列紧密的细胞才是分生区细胞。 关注要点二：解离的含义与效果 1、解离的含义：解离是指把取下来的根尖细胞放在15%的盐酸与95%的酒精按照1:1的比例混合的解离液中处理的过程，其目的是使组织中的细胞相互分散开。如果把每个细胞比作一块砖，那么解离就是要把砌墙后粘合在砖头间的水泥处理掉，即处理细胞间的胞间层，这样细胞就容易分散开了。
流式检测细胞周期和凋亡实验步骤
流式细胞技术检测细胞周期分布 1) 已转染miRNA mimics的细胞培养达到85％融合时，用胰酶消化细胞。1000 rpm，离心5min，收集细胞沉淀； 2) 已消毒的PBS重悬细胞，1000 rpm/min，离心5 min，收集细胞。重复此步骤2次，以除去胰酶； 3) 加入预冷的70%乙醇固定细胞过夜； 4) 第二天1000rpm，离心5 min，收集细胞沉淀，PBS重悬两次，以除去乙醇； 5) 离心后加入500ul PBS重悬细胞，加入碘化丙锭(PI)染色液(含50mg/L PI，1g/L Triton X-100，100g/L RNase)混匀，4℃避光孵育30min。 6）流式细胞仪FACStar (美国BD公司) 检测。接收的信号经Cellquest软件处理，对检测细胞的荧光强度进行分析。实验重复3次。 2.11流式细胞技术检测细胞凋亡水平 1) 已转染BART6-3p mimics的细胞培养达到85％融合时，将上清培养液收集至离心管内；常常 2）PBS清洗贴壁细胞3次，用胰酶消化细胞（注意：消化时不可过度），收集于第一步的离心管内； 3) 1000 rpm离心5min，弃上清收集细胞，PBS轻轻重悬后，加入195 ulAnnexin V-FITC结合液，吹打混匀，重悬细胞，加入5ul Annexin V，轻轻混匀。避光室温孵育15min； 4) 加入10 ul PI染色液，轻轻混匀，避光孵育； 空白：Annexin V—FITC结合液200ul 双染：185ul结合液+5 ulAnnexin V—FITC+10ul PI 单染：195ul结合液+5ul Annexin V—FITC 190ul结合液+10PI 5) 进行流式细胞仪检测，Annexin V-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光。
高中生物观察有丝分裂过程实验优质课教案
观察有丝分裂过程实验 一.教材分析 细胞的有丝分裂是高中生物课程的核心内容之一，是在学生学习了细胞的分子组成、结构及代谢的基础，是学习的是学习生物体生长、发育等生命现象的重要基础。细胞的有丝分裂是细胞分裂的主要方式，也是后面学习减数分裂和遗传基本规律的基础。《观察根尖分生组织细胞的有丝分裂》是一个经典的高中生物实验。是在学生已了解了有丝分裂过程、意义的基础上进行的。教材突出的是实验步骤和显微镜操作技巧。要求学生学会制作大蒜根尖细胞有丝分裂装片，观察并验证植物细胞有丝分裂几个时期的细胞结构特点，加深理解细胞有丝分裂的过程。二.教学目标 （一）知识目标 1.观察植物细胞有丝分裂的过程识别有丝分裂的不同时期。 2.制作根尖有丝分裂临时装片。 （二）能力目标 1通过植物细胞根尖的临时装片制作,初步掌握植物根尖压片的基本方法以及使用高倍显微镜和绘生物图的基本技能。 2、通过实验操作并观察有丝分裂的过程帮助学生培养推理分析能力,解决问题能力,理解科学实验的素质。 （三）情感目标 1.通过小组进行根尖培养及实验过程的相互配合，培养学生的协助精神。 2.培养学生实事求是的科学态度和认真严谨的科学精神。 三.教学重点和难点 1.教学重点： 观察有丝分裂各时期的细胞特征，识别有丝分裂的不同时期。 掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技术。 理解各时期中染色体数和DNA数的变化规律和相互关系。 2.教学难点： 制作大蒜根尖细胞有丝分裂装片的过程中,涉及到的试剂以及对标本的处理时
间、操作的先后顺序。 四.教学方法 自制的多媒体课件 五.教学准备 1.教师准备好实验材料、用具。 2.学生预习课本相关内容，了解该实验的实验原理、目的要求及实验操作的步骤，提出与本课内容有关的问题。 六.教学过程 复习导入： 真核细胞的分裂方式主要有哪几 种？我们已经学习了有丝分裂的相 关知识，了解了有丝分裂各时期的 变化特点，这节课我们就自己动手来 完成植物细胞有丝分裂过程装片的制 作以及对各个时期细胞的观察。 我们今天用的材料是植物根尖组织 提问“根尖组织的结构还记得吗?” 那我们今天的目的是为了观察植物细 胞有丝分裂的各个时期，所以我们选 择观察的对象必须是具有完整的细胞 周期这样的细胞。 提问“在根尖的这些组织中，哪些细 胞是能具有细胞周期的？”
观察植物细胞有丝分裂实验报告
观察植物细胞有丝分裂 实验报告 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT
《观察植物细胞有丝分裂》实验报告 组员：肖石连、周小燕、汪小康、邹苗 执笔人：汪小康 一、实验原理 1.观察部位：植物体的根尖、茎尖等分生区的细胞。 2.分裂过程：高等植物细胞有丝分裂分为间期和分裂期的前期、中期、后期和末期，不同时期细胞染色体的行为变化有各自的特点.。 3.观察过程：先用低倍镜找到根尖生长点的细胞（正方形、排列紧密、有的正在分裂），再用高倍镜辨别各时期的染色体(染色质)变化，并判断该细胞处于有丝分裂的哪个时期。 4.染色过程：细胞核内的染色体容易被碱性染料（龙胆紫或醋酸洋红等）着色。 二、实验器材 大蒜、显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、刀片、镊子、烧杯等 15%的盐酸、95%的酒精、龙胆紫溶液等 三、实验步骤 1.前期培养：取大蒜若干放在装满清水的100ML烧杯上，让它的底部接触瓶内水面，把烧杯放在温暖地方培养。 2．解离：实验前一天，取大蒜根尖，使用卡诺氏固定液（乙醇：冰醋酸=3:1）进行24H固定，之后用蒸馏水冲洗，放入70%酒精中，在4℃冰箱中保存。待到实验时即可进行解离处理。取经过和未经过固定液处理的根尖各1-3个，剪根尖2CM，放入盛
有15%盐酸和95%酒精1:1混合液的培养皿中并盖好（以防盐酸挥发），解离3~5min,此时根尖变得酥软透明。 3.漂洗：用镊子夹住伸长区一端，从培养皿中取出根尖，放到盛有清水的培养皿中漂洗2~3min，可用镊子或玻棒轻轻搅动。 4．染色：用镊子夹住伸长区一端，从培养皿中取出根尖，放到干净的载玻片中央，用刀片切去根尖大概0.5mm，紧贴刚刚切的位置切下针尖大小的根尖，此处即为根尖分生区。利用准备好的染液进行染色，时间为3~5min。 5.压片：将被染上色的根尖盖上盖玻片（防止气泡产生），然后在盖玻片上放一层吸水纸，水平放在实验台上，用拇指稍用力对其按压，使根尖细胞呈云雾状散开，此时再把盖玻片周围染液吸拭干净即可。 6.观察：先用低倍镜观察，找到分生区细胞（体积小、排列紧密、整齐、近似正方形，有的细胞正在分裂）。找到视野后用高倍镜观察。 四、实验结果及讨论 从所做实验观察结果看来，处于间期的细胞最多，处于分裂时期的细胞较少。原因是细胞间期在细胞有丝分裂周期中占的比重大。此次实验观察到了有丝分裂各时期形态。比较成功