小鼠肝硬化模型制备研究进展
小鼠肝硬化模型制备研究进展
【摘要】目的以小鼠为例，介绍近年来肝硬化模型制作的研究进展。方法选取国内外近十几年来关于肝硬化模型的相关文献，对其进行整理、归纳和分析。结果就目前而言，主要有两大类建模方案：单因素诱导建模与复合因素诱导建模。结论虽然制作肝硬化模型的方法很多，但是符合人们预期的有效方法却较少，因此，要想制作出令人们满意的肝硬化模型，还有很长的路要走。
【关键词】小鼠肝硬化；模型制备；研究进展
【中图分类号】R657.3+1【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）09-005-01
肝硬化（hepatic cirrhosis，HC）是临床常见的慢性进行性肝病，主要由一种或多种疾病因长期或反复作用而形成的弥漫性肝损害。早期可能因为肝脏代偿功能较强从而无明显症状，后期则主要以肝功能损害和门脉高压为主要特征，并有多系统同时损坏，晚期则经常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症，并且肝硬化具有极高的死亡率[1]。然而，针对肝硬化者以疾病，目前医学界尚未完全明确其发病机制。为此，建立肝硬化模型，通过模型研究肝硬化的发病机制，进而探索肝硬化的预防与治疗手段已经成为我们亟待解决的问题。
引起肝硬化因素有很多，包括病毒性肝炎、酒精中毒、营养障碍、工业毒物或药物、循环障碍和代谢障碍等等，综上所述，其中最主要的人们可能会因为自身平时的各种不良生活习惯以及恶劣的生活环境，从而引发人们的肝硬化疾病的发生。近年来，针对肝硬化的发病机制的相关研究已经陆续展开，主要是建立在以动物为模型的基础上。但是由于动物与人类之间仍存在巨大差异，我们完全可以想象到，若要完全模拟肝硬化的病理特点制备实验动物模型难度相当大。因此，为深入了解肝硬化的发病机制和特点，本文将以动物中的小鼠为例，综合近十几年来的已有相关研究，对肝硬化模型的制备方法进行整理、归纳和分析，以期为临床研究提供参考和依据。根据近十几年的文献综述，我们总结出了两种主要的肝硬化制作模型，分别是单因素诱导性肝硬化模型和多因素诱导性肝硬化模型，下面我们分别举例说明两种模型。
1 单因素诱导性肝硬化模型
1.1 四氯化碳（CCl4）诱导性肝硬化模型
以小鼠为例，四氯化碳（CCl4）诱导性肝硬化模型是最传统的制作方法，通常多采用30%-60%CCl4油剂皮下注射的方法，一般小鼠为1-3mL·kg（体重），每周两次[2]。此模型制作周期短（仅需9周），模型成功率高，死亡率低，具有简便、快捷、高效等优点，特别适于大批量制作。
1.2 化学致癌物诱导性肝硬化模型
长期使用低剂量致癌物也可能引起肝硬化。化学致癌药物诱发的效果比较稳定，但是由于这些化学致癌物本身的毒性很大、且易挥发，所以制作模型时需格外注意自身安全，必要时尽量隔离。
1.3 酒精性肝硬化模型
不良的生活习惯如长期酗酒是引起肝硬化的主要原因之一。针对这一原因，早期相关研究选择使用胃瘘管灌注酒精性液体饲料的方法建立了酒精性肝损伤动物模型，但因为动物的酒精摄取量难以控制，酒精法较少使用。目前的相关研究中大多采用液体食物，通过改变食物成
胰岛细胞特异性敲除基因appl1小鼠模型的制备
尊敬的《上海医学》编辑老师： 您好！首先非常感谢您及评审专家对我们文章的审修，目前已按照修改意见进行了修改，以下是对修改意见的具体答复，希望回答专家的问题，谢谢。 1.“胰岛细胞特异性敲除APPL1基因”和“β细胞APPL1特异性敲除APPL1基因”这两种表达方法应该统一； 在文章中已做修改。 2.从图3可以看出，β细胞APPL1敲除小鼠脂肪组织APPL1的表达显著高于野生型，原因何在? 正如文章所提及，我们收集APPL1flox/flox和β-APPL1KO两组小鼠多例样本，western结果并未发现APPL1蛋白水平表达的脂肪组织中有统计学差异，为了消除之前结果容易给人的误解，我们另外选择两组实验数据来作为结果图。 3.该研究目的是建立β细胞APPL1基因敲除小鼠模型，因此在表型分析方面应多关注β细胞功能，至少要提供血胰岛素水平方面的数据，而不是仅仅提供血糖数据。 这个意见提得很好，事实上我们研究组已经研究了APPL1flox/flox和β-APPL1KO小鼠的空腹血胰岛素水平差异，这部分内容我在文章的方法和结果中也已作了修改和补充。 4.如可以请引用《上海医学》杂志和《中国实用内科杂志》的参考文献各一条 在文章中我已做补充。 此致 敬礼 李晓雯 2015.1．30
胰岛细胞特异性敲除基因APPL1小鼠模型的制备 李晓雯1 李羚1林紫薇1 孙赟1 陈辰2王琛1* 贾伟平1 【摘要】目的制备转接蛋白APPL1胰岛细胞特异性敲除小鼠模型。方法采用基因剔除打靶技术，囊胚显微注射法制备嵌合小鼠，利用Cre-loxp系统繁育APPL1胰岛特异性敲除小鼠。Western blot检测APPL1蛋白表达水平。结果成功制备胰岛细胞特异性敲除基因APPL1小鼠模型，与APPL1flox/flox小鼠相比，胰岛细胞特异性敲除基因APPL1并不影响小鼠体重，空腹血糖以及空腹胰岛素水平，western blot从蛋白水平印证敲除小鼠胰岛中的APPL1蛋白无表达。结论胰岛细胞特异性敲除基因APPL1小鼠模型制备成功，为探讨APPL1在胰岛中的功能提供研究工具。 【关键词】APPL1；胰岛；条件性敲除 Establishment of APPL1 conditional knock out model in mice islet LI Xiaowen1, LI Ling1, LIN Zeiwei1, SUN Yun1, CHEN Chen2 , WANG Chen1*, JIA Weiping1. 1Shanghai Jiao Tong University Affiliated Sixth People’s Hospital, Shanghai Diabetes Institute, Shanghai Key Laboratory of Diabetes Mellitus, Shanghai 200233, China 2 Shanghai Research Center for Model Organisms, Shanghai 201210, China Corresponding author: WANG Chen, wangchen@https://www.360docs.net/doc/498508527.html, 【Abstract】Objective To discuss the method of APPL1 knock out mouse model in islet. Methods Mouse embryonic stem (ES) cells were targeted knockout of APPL1 by the homologous recombination vector, and screened .The APPL1-knockout embryonic stem cells were microinjected into blastula of C57BL/6J mice.F1 hybrid mice were bred to obtain mouse aggregation chimeras. The conditional KO mice were generated by cross-breeding APPL1 floxed mice with mice expressing Cre in islets. Western blot was conducted to measure protein expression. Results Mice with conditional APPL1 knockout (KO) in islets were generated. Compared with APPL1flox/flox mice, APPL1 conditional knockout in islets does not affect the mice weight, fasting plasma glucose and fasting insulin levels, no APPL1 protein expression was found in APPL1 KO mice islets with western blot. Conclusions The conditional APPL1-knockout mouse model is successfully established, it lays a foundation for study APPL1 function in mouse islets. 【Key words】APPL1; islet; conditional knockout
肝硬化大鼠肝脏组织病理学及血流动力学变化档
肝硬化大鼠肝脏组织病理学及血流动力学变化 作者：乔伟1,2，鲁建国1，王青1，李鹏超1 作者单位：(1. 第四军医大学唐都医院普外科，陕西西安710038;2. 西安市铁路中心医院普外科，陕西西安710054) 【摘要】目的通过建立大鼠肝硬化模型，了解肝硬化形成过程中门静脉血流动力学的变化。 方法雄性健康SD大鼠100只随机等分为5组：4个实验组(80只，每组20只)采用腹腔及皮下注射四氯化碳(CCl4)，同时饮用酒精溶液进行诱导;对照组(20只)给予普通饮水和饲料。 分别于2、4、7、10周后观察肝脏的组织病理学改变及门静脉血流动力学变化。结果肝硬化过程中肝细胞经历变性、坏死、纤维组织增生及假小叶的形成;血流动力学检测指标发生 相应变化，平均动脉压(MAP)表现为逐渐下降，门静脉压力(PVP)、下腔静脉压(IVCP)及门静脉阻力(PVR)表现为逐渐升高，门静脉血流量(PVF)表现为先升高后下降，内脏血管阻力 (SVR)表现为先下降后升高。结论本方法可建立稳定的肝硬化门脉高压症模型，且适于大批量制作;在大鼠肝硬化门脉高压形成过程中门静脉血流动力学及肝组织病理学均发生了变 化，可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。 【关键词】肝硬化;门脉高压;组织病理学;血流动力学;大鼠 Histopathological and hemodynamic changes of rats with liver cirrhosisQIAO Wei1,2, LU Jian guo1, WANG Qing1, LI Peng chao1 (1. Department of General Surgery, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi an 710038; 2. Department of General Surgery, Xi an Railway Center Hospital, Xi an 710054, China)ABSTRACT: Objective To investigate the hemodynamic changes during the progression of portal hypertension (PHT) by establishing a model of liver cirrhosis in rats. Methods Totally 100 healthy male SD rats were assigned to 5 groups randomly (1 control group and 4 experimental groups with 20 rats in each group). Animal model of cirrhosis was established by subcutaneous injection of carbon tetrachloride (CCl4) and drinking alcohol. Rats in control group were given water and forage. The changes in the portal hemodynamics during the pathological process of liver tissues were observed after 2, 4, 7 and 10 weeks. Results During the formation of experimental cirrhosis, the hepatocytes of rats underwent 4 processes: degeneration, necrosis, fibrosis and pseudolobular proliferation. The hemodynamic changes were observed: the mean arterial pressure declined gradually after injection, but the portal venous pressure, the inferior vena cava pressure and the portal vascular resistance increased slowly. The portal venous flow reduced after ascending whereas the splanchnic vascular resistance increased after descending. Conclusion This method can establish a
大鼠二型糖尿病造模方法
大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
2型糖尿病大鼠模型研究概况
2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的
四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型_叶春华
·论著·四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型 叶春华 刘浔阳 (中南大学湘雅三医院普外科,湖南 长沙 410013) [摘要]【目的】探讨建立一种理想的大鼠肝硬化模型的复制方法并加以评价,为下一步探索肝硬化门脉 高压症治疗方法提供可靠、稳定的模型动物。【方法】90只雄性SD大鼠随机分为两组:实验组(70只)采用四 氯化碳(CCl4)+苯巴比妥钠+食用白酒进行诱导,诱导期间CCl4浓度在一定范围内逐步增加,并用食用白酒 替代医用乙醇溶液;对照组(20只)给与普通饮水和饲料,频度及剂量同实验组。同时采用一系列的检查方 法加以评估。【结果】实验组70只大鼠造模结束时,死亡9只,死亡率12.86%。实验结束时,按照成模标准, 造模成功大鼠共61只,均可观察到肝硬化结节及镜下假小叶形成,成模率87.14%。实验组门静脉压力比对 照组明显增高(P<0.05);血清总胆红素、谷丙转氨酶及谷草转氨酶较正常对照组明显升高(P<0.05),而 血清白蛋白较之正常对照组明显降低(P<0.05)。对照组20只全部存活。【结论】该方法可形成稳定的肝 硬化门脉高压症模型,可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。此模型制作周期短(仅需9周),成模率高, 死亡率低,具有简便、快捷、高效的优点,适于大批量制作。 [关键词] 肝硬化,实验性; 疾病模型,动物; 大鼠; 四氯化碳 Study on Method of Inducing Hepatic Cirrhosis Model in Rats by Carbon Tetrachloride Y E Chun-hua, LIU X un-yang(Department o f General Surgery,the T hird X iangy a Hosp ital,Central South University,Changsha,410013,China) [Abstract]【Objective】T o dev elo p and evalua te an ideal means to induce cir rhotic model in rats for nex t study o n live r cir rhosis with po r tal hypertension trea tment.【M ethods】N inety male SD rats we re randomly di- vided into two gr oups,T he e xperiment g roup(n=70)wa s treated with CCl4,PBS and ea table alcoho l and the co ncentra tion of CCl4and eatable alcohol were increased stage by stag e in a ce rtain range during the ex peri- ment.T he co nt rol g roup(n=20)wa s trea ted w ith common drinking w ater and animal feeds,the f requency and do se w ere the same a s the experime nt g ro up,meanwhile evalua ted by a se ries of check methods.【Results】 Af te r being induced w ith above means,the ra t mor tality of the ex periment gr oup w as12.86%,and the fo rma- tion rate of liver cir rhosis false lobe was87.14%.T he po rtal v eno us pressure of the e xperiment g roup w as higher than the co ntrol g ro up(<0.05),ST B,G PT,G O T we re higher than the co ntro l g roup,but SA B de- crea sed(P<0.05).T he contro l g r oup w as all surv iv al.【Co nclusio n】T he pro cedure is fair ly stable and relia- ble,the model is useful for resea rch in liv er cir rhosis w ith po rtal hy pe rtension.T he cy cle time of inducing cir- rhosis model is shor t the mor ta lity is low. [Key words] liver cir rho sis,ex pe rimental; disesase models,animal; rats; carbon tetr achloride [中图分类号] R575.2 [文献标识码] A [文章编号] 1671-7171(2005)05-0619-04 由于病毒性肝炎、酒精性肝病等原因造成的慢性肝病和肝硬化患者有增多的趋势,近十年来有关门脉高压症的研究成为消化学界的热点。本实验通 [作者简介] 叶春华(1967-),男,湖南安乡人,博士,主治医师,主要从事肝胆外科临床工作。 [收稿日期] 2005-04-01过腹腔内注射四氯化碳(CCl4)加饮用苯巴比妥钠和食用酒精,探讨建立一种理想的肝硬化模型的方法。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物 90只Sprag ue-Daw ley鼠(简称SD大鼠),全部雄性,体重180～220g,普通大鼠饲
小鼠肝硬化模型制备研究进展
小鼠肝硬化模型制备研究进展 【摘要】目的以小鼠为例，介绍近年来肝硬化模型制作的研究进展。方法选取国内外近十几年来关于肝硬化模型的相关文献，对其进行整理、归纳和分析。结果就目前而言，主要有两大类建模方案：单因素诱导建模与复合因素诱导建模。结论虽然制作肝硬化模型的方法很多，但是符合人们预期的有效方法却较少，因此，要想制作出令人们满意的肝硬化模型，还有很长的路要走。 【关键词】小鼠肝硬化；模型制备；研究进展 【中图分类号】R657.3+1【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）09-005-01 肝硬化（hepatic cirrhosis，HC）是临床常见的慢性进行性肝病，主要由一种或多种疾病因长期或反复作用而形成的弥漫性肝损害。早期可能因为肝脏代偿功能较强从而无明显症状，后期则主要以肝功能损害和门脉高压为主要特征，并有多系统同时损坏，晚期则经常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症，并且肝硬化具有极高的死亡率[1]。然而，针对肝硬化者以疾病，目前医学界尚未完全明确其发病机制。为此，建立肝硬化模型，通过模型研究肝硬化的发病机制，进而探索肝硬化的预防与治疗手段已经成为我们亟待解决的问题。 引起肝硬化因素有很多，包括病毒性肝炎、酒精中毒、营养障碍、工业毒物或药物、循环障碍和代谢障碍等等，综上所述，其中最主要的人们可能会因为自身平时的各种不良生活习惯以及恶劣的生活环境，从而引发人们的肝硬化疾病的发生。近年来，针对肝硬化的发病机制的相关研究已经陆续展开，主要是建立在以动物为模型的基础上。但是由于动物与人类之间仍存在巨大差异，我们完全可以想象到，若要完全模拟肝硬化的病理特点制备实验动物模型难度相当大。因此，为深入了解肝硬化的发病机制和特点，本文将以动物中的小鼠为例，综合近十几年来的已有相关研究，对肝硬化模型的制备方法进行整理、归纳和分析，以期为临床研究提供参考和依据。根据近十几年的文献综述，我们总结出了两种主要的肝硬化制作模型，分别是单因素诱导性肝硬化模型和多因素诱导性肝硬化模型，下面我们分别举例说明两种模型。 1 单因素诱导性肝硬化模型 1.1 四氯化碳（CCl4）诱导性肝硬化模型 以小鼠为例，四氯化碳（CCl4）诱导性肝硬化模型是最传统的制作方法，通常多采用30%-60%CCl4油剂皮下注射的方法，一般小鼠为1-3mL·kg（体重），每周两次[2]。此模型制作周期短（仅需9周），模型成功率高，死亡率低，具有简便、快捷、高效等优点，特别适于大批量制作。 1.2 化学致癌物诱导性肝硬化模型 长期使用低剂量致癌物也可能引起肝硬化。化学致癌药物诱发的效果比较稳定，但是由于这些化学致癌物本身的毒性很大、且易挥发，所以制作模型时需格外注意自身安全，必要时尽量隔离。 1.3 酒精性肝硬化模型 不良的生活习惯如长期酗酒是引起肝硬化的主要原因之一。针对这一原因，早期相关研究选择使用胃瘘管灌注酒精性液体饲料的方法建立了酒精性肝损伤动物模型，但因为动物的酒精摄取量难以控制，酒精法较少使用。目前的相关研究中大多采用液体食物，通过改变食物成
糖尿病动物模型简介
糖尿病动物模型 转载请注明来自丁香园 发布日期: 2006-07-10 19:22 文章来源: 丁香园 关键词: 糖尿病糖尿病动物模型 2.7 db/db小鼠 db/db小鼠糖尿病发病系瘦素受体突变所致，呈常染色体隐性遗传。该鼠在10～14日龄时就出现多食、高胰岛素血症，但4周龄时血糖仍维持正常，随后该鼠体重逐渐增加，出现高血糖。2～3月龄时尽管胰岛素水平为正常时的6～10倍，但血糖水平可达22～33mmol/L；约3～6月龄时胰岛素水平逐渐下降至低于正常水平，该期小鼠体重明显下降，并出现酮症，组织学显示显著的β细胞坏死，如缺乏胰岛素治疗，该小鼠存活不超过10月。db/db小鼠另一个特点为：其血清胰高糖素的水平较正常对照升高2倍以上[22.23]。db/db小鼠是适用于研究2型糖尿病发病机制的动物模型。 2.8 ob/ob小鼠 ob/ob小鼠为2型糖尿病动物模型,属常染色体隐性遗传。ob/ob小鼠糖尿病发病是由于ob基因突变，造成其编码的蛋白leptin缺乏,引起肝脂肪生成和肝糖原异生显著增加，高血糖又刺激胰岛素分泌，引起胰岛素抵抗，刺激脂肪的形成，ob/ob小鼠体重可达90克之多。ob/ob小鼠症状的轻重取决于遗传背景，纯合体动物表现为肥胖，明显的高血糖及高胰岛素血症，而ob/ob/6J小鼠胰岛素水平可达正常小鼠的10～50倍，但其血糖常只有轻度的升高。组织学显示ob/ob小鼠胰岛β细胞显著增生、肥大，而胰岛A细胞、D细胞及PP细胞数量明显减少[24.25]。 2.9 KK鼠 KK小鼠是日本学者培育的一种轻度肥胖型2型糖尿病动物，后与C57BL/6J小鼠杂交，并进行近亲繁殖，得到Toronto－KK（T－KK）小鼠。将黄色肥胖基因(即Ay)转至KK小鼠，得KKAy鼠，与KK小鼠相比，KKAy鼠有明显的肥胖和糖尿病症状。KK小鼠有明显的多食，从5周龄起,血糖、血胰岛素水平逐步升高，至5月龄时体重可达50克，非空腹血糖常低于17mmol/L，非空腹血胰岛素可达1200ug/mL，1岁龄时，多食、高血糖、高胰岛素血症、肥胖及肝脏对胰岛素的敏感性可自发恢复正常，但糖尿病KK小鼠生命常明显缩短。此外，KK小鼠空腹胰高糖素水平升高，且不受葡萄糖抑制。组织学显示B细胞有脱颗粒和糖原浸润,随后出现胰岛肥大和肝脂肪化和脂肪组织增多[26.27]。 【其他DM动物模型】 1.激素性DM动物模型：注射垂体前叶提取物、生长素、肾上腺皮质激素、甲状腺素或胰高血糖素均可直接或间接产生DM。 2.病毒性DM动物模型：利用脑-心肌炎病毒（EMC－M病毒）和柯萨基病毒等使某些种属的小鼠胰岛β细胞脱颗粒、坏死，导致胰岛β细胞破坏，产生类似的1型DM。 3.免疫性DM动物模型：静脉注射抗胰岛素抗体或用同种或异种胰岛素的弗氏佐剂复合物及抗血清免疫;或用同种或异种胰腺+弗氏佐剂免疫动物均可在数小时后产生一过性高血糖。其机制是内源性胰岛素与输入的抗体结合导致内源性胰岛素降低而致DM。 4.下丘脑性DM动物模型：用电凝法或注射硫代葡萄糖金损伤丘脑下部腹内侧核（VMH）饱中枢，可使成熟动物产生过度摄食、肥胖，直至产生DM。
糖尿病小鼠模型的制备
、糖尿病的概念及分类 糖尿病已成为全人类继恶性肿瘤和心脑血管病之后的严重威胁人类健康的第三大非传染 性疾病。目前我国己成为世界第一糖尿病大国。 糖尿病是一类由遗传、环境、免疫等因素引起的、具有明显异质性的慢性高血糖症及其并 发症所组成的综合征，并非单一病因所引起的单一疾病（多原因引起的综合症）。糖尿病分 为：i型糖尿病、n型糖尿病和其它特异性糖尿病。I型糖尿病即胰岛B细胞大量破坏，常导 致胰岛素绝对性缺乏，以往称为胰岛素依赖型糖尿病、青年发病型糖尿病，“三多一少”症状明显。本型病因及发病是由于胰岛B细胞受到细胞介导性自身免疫性破坏。n型糖尿病由于胰 岛素抵抗并胰岛素分泌不足所致，以高血糖高血脂为显著特点。以往称为非胰岛素依赖型糖尿病、成年发病型糖尿病，常伴有明显的遗传因素，但遗传机制尚未阐明。其它特异性糖尿病 包括，B细胞功能的基因缺陷、胰岛素作用的基因缺陷、胰腺外分泌疾病、内分泌疾病、药物或化敏学制剂所致的糖尿病、感染、非常见型免疫介导性糖尿病以及有时并发糖尿病的其它遗传综合症。 （糖尿病是无法根治的，现在随着人们生活水平的提高，饮食习惯，生活方式的改变糖尿病的发病率节节攀升，成为威胁人类健康的一大难题。人们曾经一度把糖尿病称为富贵病这也是有一定道理的。为了提高人们的生活质量，近几年对糖尿病的研究日益加深） 二、糖尿病模型的建立 近年来，随着国内外对糖尿病治疗药物研究的深入开展，建立比较理想的糖尿病动物模型 显得尤为重要。目前常用的动物模型有实验性动物模型和自发性动物模型。自发性模型应用价 值较高，但因价格昂贵，饲养、繁殖条件要求严格，而不能得到广泛应用。实验性模型则应用比较广泛，实验性糖尿病动物模型的建立，是用各种方法损伤动物胰脏或胰岛B细胞导致胰岛 素的缺乏，或用化学药物对抗胰岛素作用，导致动物出现高血糖形成糖尿病。实验性糖尿病动 物模型的建立主要有6种方法：胰腺切除法致糖尿病、免疫性糖尿病、激素性糖尿病、下丘脑损伤性糖尿病、化学性糖尿病、病毒性糖尿病。由于化学性糖尿病动物模型诱发简便、来源广，应用较广泛。目前多采用注射化学诱导剂（链脲佐菌素或四氧嘧啶）的方法，引起短时间 内胰岛B细胞大量损害而诱发糖尿病动物模型的建立。 1糖尿病模型小鼠
MSCS不同途径移植对肝硬化模型大鼠的治疗影响
MSCS不同途径移植对肝硬化模型大鼠的治疗影响 摘要】目的探讨骨髓间充质干细胞不同途径移植对肝硬化模型大鼠的效果差别，为临床干细胞移植提供依据。方法用四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射和酒精 喂养的方法建立肝硬化大鼠模型,将肝硬化模型随机分为肝硬化未移植组、门静脉 移植组、肝动脉移植组、尾静脉移植组，构建对比实验，观察并评估。结果三种 不同的途径移植MSCS肝硬化模型到小鼠体内，四周后移植组较未移植组肝功能 明显改善，转氨酶明显降低，纤维化程度均明显改变，三种移植方式无明显统计 学差异。结论骨髓间充质干细胞MSCS移植肝细胞大鼠后，门静脉，肝动脉组， 尾静脉组移植MSCS数量均无统计学差异，对肝硬化的质量均有效，而且三种治 疗效果类似。 【关键词】大鼠骨髓间充质干细胞移植途径肝硬化 随着社会城镇化、老龄化的出现、器官组织病变以及细胞组织因素的增多患病的风险几 率增高，人体机能器官细胞内不断适应甚至损伤。肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由 一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显 症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道 出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。通过此类病情的发展将选 择有利的因素进行对肝硬化进行治疗，所以通过骨髓间充质干细胞(MESENCHYMAL Stem Cells，MSCS)不同途径移植对肝硬化模型大鼠的效果差别进行研究。成体干细胞具有多潜能分化的 作用,在肝硬化的微环境中可以转分化为肝细胞,或者与残存肝细胞融合,或者通过旁分泌的作用,改善肝功能。大量实验及临床已经证明,骨髓间充质干细胞移植治疗,可以减轻肝硬化程度, 改善肝脏功能。 实验材料与方法 1、1 实验材料 1、1、1 实验对象选取48只5日龄的健康大鼠，雌雄不限，重量200-220g之间，用于 分离成熟的肝细胞，由长沙医学院机能实验室提供。 1、1、2 实验仪器与试剂Ⅳ型胶原(collagen Ⅳ)，四氯化碳分析纯，橄榄油分析纯，胰蛋 白酶，染色剂，一次性无菌注射剂，35 mm培养皿，培养液，培养箱，同型对照抗体，手术 显微镜一套等。 1.2 实验方法 1.2.1大鼠模型的构建取48只健康大鼠，分为两组正常组8只为对照组，肝硬化模型组 40只，用四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射和酒精喂养的方法建立肝硬化小鼠模型,4周之后，对大鼠肝脏进行病理学检查，将肝硬化模型随机分为肝硬化未移植组(n=8)、门静脉移植 组(n=8)、肝动脉移植组(n=8)、尾静脉移植组(n=8)。8周之后，将处死所有大鼠并取出肝脏。 1.2.2 MSCS的获取制备无菌条件下分别将四组门静脉、肝动脉、尾静脉等移植到肝细胞 悬液中，通过不同方法构建三种对比试验，提取健康SD小鼠骨髓,利用全骨髓贴壁的方法原 代培养骨髓MSCS,利用CM-DIL(活细胞染色剂)标记间充质干细胞，无菌条件获取股骨，去除 骨上肌肉组织，培养液反复冲洗收集细胞悬液，培养传代3次。,然后通过3种途径分别进行 移植，均需常规麻醉，备皮，消毒，铺巾，打开腹腔，用一次性注射器注射MSCS悬液。 1.2.3 病理学检查 HE染色切片观察，正常的大鼠肝脏，肝小叶清晰可见，形态正常。实 验组肝细胞有些脂肪病变，部分坏死并有炎症，肝小叶不清晰，肝细胞索杂乱，形成许多假 小叶，符合肝硬化诊断标准。实验组较正常组对比，转氨酶显著升高，血清蛋白明显降低， 肝纤维化严重，有明显伤害。MSCS移植后，肝细胞有所恢复，结构有所改善，肝细胞损伤 降低，三种途径对大鼠肝硬化有明显效果，但三种方式效果相似无明显区别 讨论 肝硬化（Cirrhosis Of Liver）是临床常见的慢性进行性肝病，是我国常见的主要死亡原因 之一。在我国大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织
消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和转化生长因子_的影响_戚忠玺
第11卷 第5期 2009 年 5 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 11No. 5 May，2009 肝硬化是临床常见的慢性进行性肝脏疾病，是由一种或多种病因长期或反复作用造成的弥散性肝脏损害，肝硬化腹水是肝硬化门脉高压征的主要临床表现。消臌软坚丸是我院治疗肝硬化腹水的制剂，临床研究显示对腹水具有良好效果[1]。为了进一步阐明其作用机理，本实验采用复合因素造模法复制肝硬化大鼠模型，然后给予药物治疗，以观察消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和血清和肝组织转化生长因子-α（TGF-α）的影响，以揭示其延缓肝硬化进程，治疗肝硬化腹水的作用机理。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1 实验动物 健康SD大鼠60只，体重（180±20）g，雌雄各半，由河南安阳华兴实验动物养殖场提供，动物合格证号：SCXK（豫）2004-0007。 1.1.2 实验用药 消臌软坚丸由河北中医肝病医院制剂室制备（该院自拟方，由黄芪30g，车前子30g，葶苈子15g，沉香6g，鳖甲30g等组成，课题组监制）。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。1.1.3 复方鳖甲软肝片（阳性药对照组）由内蒙 古福瑞制药有限责任公司提供，国药准字（2005）Z-71号。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。 1.1.4 主要试剂 转化生长因子-α（TGF-α）试剂盒（批号：20051202），购自解放军总医院科技开发中心放免所。 1.1.5 主要仪器722型光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂；1-15K型高速冷冻离心机，美国Sigma公司；HH-W21-600型电热恒温水箱，天津泰斯特仪器有限公司；LEICA RM2125型切片机，德国LEICA公司；TDL-5-A型离心机，上海安亭科学仪器厂。 1.2方法 1.2.1 模型制备60只大鼠均适应性喂养1周，随机分为造模组48只和正常组12只。参照文献[2]，48只造模组大鼠首次予皮下注射40% 四氯化碳（CCl4）花生油溶液0.5mL/100 g体重，以后每周2次皮下注射0.3mL/100g，共9周。造模开始前2 周均以20%猪油，0.5%胆固醇，79.5%玉米面混合饲料（由河北医科大学动物实验中心加工）喂养，第3~9 周 消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和转化生长因子-α的影响 戚忠玺1，耿兰书1，耿束华1，王少贤2，魏 萱2 （1.河北中医肝病医院，河北 正定 050800；2.河北医科大学中医学院，河北 石家庄 050091）摘 要：目的：观察消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和转化生长因子-α（TGF-α）的影响。方法：采用复合因素造模法复制肝硬化大鼠模型，以复方鳖甲软肝片为对照，观察消臌软坚丸对大鼠肝脏病理形态学和TGF-α的影响。结果：与正常组比较，模型组大鼠肝间质广泛纤维组织增生，将正常肝小叶分割成大小不等的肝细胞团（即假小叶形成），血清和肝组织TGF-α含量明显升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较，高、低剂量组和对照组肝小叶结构亦受损，少量纤维组织增生，但未见形成间隔。血清和肝组织TGF-α含量明显下降（P<0.05或P<0.01）。结论：消臌软坚丸能显著改善肝硬化大鼠的肝脏病理组织学损害，同时可降低血清和肝组织TGF-α水平，具有显著的抗肝脏纤维化，阻断肝硬化进程的作用，对腹水的产生与消退也产生积极的影响。 关键词：消臌软坚丸；肝硬化；病理形态学；转化生长因子 中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-842X (2009)05- 0193- 02 Effect of Xiaoguruanjian Pill on Hepatic Pathological Histology and Blood Transforming Growth Factor of Hepatic Cirrhosis Rat QI Zhong-xi1，GENG Lan-shu1，GENG Shu-hua1，WANG Shao-xian2,WEI Xuan2 （1.HeBei Hepatopathy Hospital of TCM，Zhengding 050800，Hebei，China; 2.College of TCM,Hebei Medical University, Shijiazhuang 050091,Hebei，China） Abstract：Objective: To observe the effect of Xiaoguruanjian pill on liver Cirrhosis rats blood and liver transforming growth factor-α(TGF-α). Methods: reproduced the rats models of cirrhosis by adopting complex factors, compared with Fufangbiejiaruanganpian, the effect of Xiaoguruanjian Pill on hepatic pathology and TGF-αwere observed. Results: Compared with normal group, extensive fibrous tissue hyperplasia can be seen in hepatic mesenchyme of the model group, the liver pseudolobule formed,the contents of TGF-αin serum and liver were increased（P<0.01 or P<0.05）.Compared with model group, there were a few fibrous tissue hyperplasia in high-dosage group, low-dosage group and control group, no fibrotic septa formed. the contents of TGF-αin serum and liver were decreased（P<0.01 or P<0.05）. Conclusion: Xiaoguruanjian pill could obviously improve the cirrhosis rat pathology, decrease the contents of TGF-αin serum and liver, decrease or restrain the happening or development of ascites. Key words：Xiaoguruanjian pill;hepatic cirrhosis; pathology; transforming growth factor-α 收稿日期：2008-12-21 基金项目：河北省中医药管理局科学研究计划课题（2007150） 作者简介：戚忠玺（1972-），男，山东威海人，副主任医师，硕士，从事各种急慢性肝病的中西医研究。 193
糖尿病小鼠模型的制备
一、糖尿病的概念及分类 糖尿病已成为全人类继恶性肿瘤和心脑血管病之后的严重威胁人类健康的第三大非传染性疾病。目前我国己成为世界第一糖尿病大国。 糖尿病是一类由遗传、环境、免疫等因素引起的、具有明显异质性的慢性高血糖症及其并发症所组成的综合征，并非单一病因所引起的单一疾病(多原因引起的综合症）。糖尿病分为：Ⅰ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病和其它特异性糖尿病。Ⅰ型糖尿病即胰岛β细胞大量破坏，常导致胰岛素绝对性缺乏，以往称为胰岛素依赖型糖尿病、青年发病型糖尿病，“三多一少”症状明显。本型病因及发病是由于胰岛β细胞受到细胞介导性自身免疫性破坏。Ⅱ型糖尿病由于胰岛素抵抗并胰岛素分泌不足所致，以高血糖高血脂为显著特点。以往称为非胰岛素依赖型糖尿病、成年发病型糖尿病，常伴有明显的遗传因素，但遗传机制尚未阐明。其它特异性糖尿病包括，β细胞功能的基因缺陷、胰岛素作用的基因缺陷、胰腺外分泌疾病、内分泌疾病、药物或化敏学制剂所致的糖尿病、感染、非常见型免疫介导性糖尿病以及有时并发糖尿病的其它遗传综合症。 （糖尿病是无法根治的，现在随着人们生活水平的提高，饮食习惯，生活方式的改变糖尿病的发病率节节攀升，成为威胁人类健康的一大难题。人们曾经一度把糖尿病称为富贵病这也是有一定道理的。为了提高人们的生活质量，近几年对糖尿病的研究日益加深） 二、糖尿病模型的建立 近年来，随着国内外对糖尿病治疗药物研究的深入开展，建立比较理想的糖尿病动物模型显得尤为重要。目前常用的动物模型有实验性动物模型和自发性动物模型。自发性模型应用价值较高，但因价格昂贵，饲养、繁殖条件要求严格，而不能得到广泛应用。实验性模型则应用比较广泛，实验性糖尿病动物模型的建立，是用各种方法损伤动物胰脏或胰岛β细胞导致胰岛素的缺乏，或用化学药物对抗胰岛素作用，导致动物出现高血糖形成糖尿病。实验性糖尿病动物模型的建立主要有6种方法：胰腺切除法致糖尿病、免疫性糖尿病、激素性糖尿病、下丘脑损伤性糖尿病、化学性糖尿病、病毒性糖尿病。由于化学性糖尿病动物模型诱发简便、来源