分子生物学实验3篇

分子生物学实验

第一篇：PCR技术在分子生物学中的应用

PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项广泛应用的

技术，被用于DNA的扩增和检测。PCR技术已经成为了分子生

物学和生物医学研究的基础技术之一。PCR技术被广泛的应用

于遗传学、人类学、医学研究、植物学和动物学研究等各领域。

PCR技术的基本原理是：通过提取DNA，将DNA特异性引

物与模板DNA相结合，利用热稳定DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸为反应体系提供能量，使其在一定条件下循环扩增目标DNA

片段。通过PCR扩增后的DNA片段可以进行进一步的分析和检测。

PCR技术的扩增具有明显的优势，可同时扩增不同长度的DNA片段，扩增时间短，扩增的精度和重复性高，且所需的样

本量小。PCR技术在分子诊断、基因组学和分子系统学等领域

的应用不断扩展和深化。

随着PCR技术的不断发展，PCR在分子生物学研究中的应用越来越广泛，成为分子生物学研究的重要工具。

第二篇：RNA干扰技术在分子生物学中的应用

RNA干扰（RNAi）是分子生物学中一种重要的现象，其中小分子RNA片段通过RNAi途径参与靶基因的沉默和调节。RNAi技术是人类基因功能研究中最具前途的一种技术之一。

RNA干扰技术的基本原理是通过利用RNAi分子的特异性

配对功能，引导RNAi分子与靶基因mRNA相结合，导致mRNA

的降解和翻译的抑制，实现对基因表达的调控。

RNA干扰技术在分子生物学研究中有广泛的应用，如：功能基因的筛选、基因表达调节、基因功能验证等。RNA干扰技术具有多种优点，如高效性、特异性强、节约时间、资源和成本等方面的优势，逐步成为生命科学研究中的重要工具。

在研究过程中，RNA干扰技术常用于寻找分子病理学中新的治疗靶点，鉴定靶点基因和靶点蛋白，为新药物的开发和临床治疗提供了重要的理论和实验基础。

第三篇：基因克隆技术在分子生物学中的应用

基因克隆技术始于20世纪70年代，是指将DNA分子导入到载体中，使其在细胞中进行表达的过程。该技术已经成为了基础分子生物学的核心技术之一，并为生物医学和生产生物技术提供了重要的支持。

基因克隆技术主要包括：DNA分子切割、分离与纯化、DNA片段连接、转化和筛选等步骤。基因克隆技术的主要应用在于基因和蛋白的结构功能和生物学特性的研究，以及疾病诊断和治疗，还可以制备重要蛋白和药物。

基因克隆技术在分子生物学研究中已经得到了广泛的应用，并且不断开发和优化。该技术已经成为了基础分子生物学和现代生物技术中的重要工具，为生命科学和医学的研究提供了强有力的支持。

综合来看，PCR、RNA干扰、基因克隆等分子生物学技术，在基础研究和应用研究中有着重要的作用。这些技术的不断创新和发展，为生命科学界的发展带来新的机遇和挑战。

分子生物学实验报告

分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。实验一：DNA复制 DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。材料： - DNA模板 - DNA聚合酶 - 引物 - dNTPs - 缓冲液方法： 1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。 2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。 3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。

讨论： DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。实验二：RNA转录 RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。材料： - DNA模板 - RNA聚合酶 - 引物 - NTPs - 缓冲液方法： 1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。 2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。 3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。讨论： RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。这种选择性转

分子生物学实验

分子生物学实验（1）琼脂糖凝胶电泳进行DNA分离原理琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。DNA分子在琼脂糖凝胶中时有电荷效应和分子筛效应。 DNA分子在高于等电点的溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子泳动速度不一样。最前沿的是SCDNA,其后依次是L DNA和OC DNA EB（溴化乙锭）的作用是染色剂，可以插入到DNA的双链中，在紫外线的作用下，会发出白光电泳缓冲液的PH在6~9之间，离子强度0.02~0.05最合适，琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，。（2）SDS法提取植物基因组DNA的原理利用含高浓度SDS的抽提缓冲液在较高温度（55~65度）条件下裂解植物细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后提高盐浓度（KAc）和降低温度（冰上保温）的办法沉淀除去蛋白质和多糖（在低温下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。（3）DNA回收试剂盒回收DNA原理从琼脂糖凝胶中回收DNA片段．可得到大小一致的DNA片段。先使凝胶被溶胶液溶解，然后DNA与HiBindTM DNA柱子结合，再从HiBindTM DNA柱子中洗脱出DNA片段。HiBindTM DNA柱子可以在某种适宜的情况下高效而可逆地结合DNA/RNA，除去蛋白质及其他杂质，而被结合的核酸能很容易地被去离子水或低盐缓冲液洗脱出来。（4）利用PCR扩增目的基因原理利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的扩人工复制，在很短时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA 经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

分子生物学实验

一、动物总RNA的提取： 1、防止RNA酶降解的措施? ①所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6h或更长时间。 ②塑料器皿(EP管、Tris等)用0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯 )12h以上，高压灭菌后备用。 ③操作人员戴一次性手套，实验过程中手套要勤换。 ④独立的操作空间 2、实验过程：抽提的试剂？答：①用Trizol液分离提取；②用氯仿纯化蛋白；③异丙醇或乙醇沉淀核酸；④DEPC（焦磷酸二乙酯）是核酸酶抑制剂；⑤离心分层，RNA在上层水相，中间是蛋白和DNA，下层是有机相； 3、实验结果图：理论上从负极到正极应该呈现3个条带，分别是28s、18s、 5s， 28s亮度是18s亮度的二倍。若点样孔处有条带，则表明有DNA、蛋白质污染。若RNA被RNA酶降解则只有一条条带。二、逆转录PCR（RT-PCR） 1、 RT-PCR实验原理和所用试剂及作用？实验原理：RT-PCR较常用。在这个反应体系中，被检物为RNA，如mRNA，需借助逆转录酶的逆转录作用，转变为相应的互补链DNA（cDNA）才能进行PCR。为此，逆转录和PCR分两步进行，先作逆转录获得cDNA，再以此为模板作PCR。2、所用试剂有RNA酶抑制剂、逆转录酶缓冲液、逆转录酶、4种dNTP、TaqDNA聚合酶、引物三、PCR扩增 1、PCR扩增实验步骤和所用试剂及其作用步骤：①模板变性（92℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA ②低温退火（37℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。 ③延伸（72℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP 为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。 2、所用试剂及作用：①模板DNA②TaqDNA聚合酶，③扩增缓冲液，④dNTP， ⑤引物。四、外周血DNA的提取： 1、外周血DNA的提取原理：用外周血淋巴细胞提取，本实验中DNA提取采用的是苯酚/氯仿抽提的方法。基本原理就是苯酚、氯仿对蛋白质有极强的变性作用，

分子生物学实验3篇

分子生物学实验第一篇：PCR技术在分子生物学中的应用 PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项广泛应用的技术，被用于DNA的扩增和检测。PCR技术已经成为了分子生物学和生物医学研究的基础技术之一。PCR技术被广泛的应用于遗传学、人类学、医学研究、植物学和动物学研究等各领域。 PCR技术的基本原理是：通过提取DNA，将DNA特异性引物与模板DNA相结合，利用热稳定DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸为反应体系提供能量，使其在一定条件下循环扩增目标DNA 片段。通过PCR扩增后的DNA片段可以进行进一步的分析和检测。 PCR技术的扩增具有明显的优势，可同时扩增不同长度的DNA片段，扩增时间短，扩增的精度和重复性高，且所需的样本量小。PCR技术在分子诊断、基因组学和分子系统学等领域的应用不断扩展和深化。随着PCR技术的不断发展，PCR在分子生物学研究中的应用越来越广泛，成为分子生物学研究的重要工具。第二篇：RNA干扰技术在分子生物学中的应用 RNA干扰（RNAi）是分子生物学中一种重要的现象，其中小分子RNA片段通过RNAi途径参与靶基因的沉默和调节。RNAi技术是人类基因功能研究中最具前途的一种技术之一。 RNA干扰技术的基本原理是通过利用RNAi分子的特异性配对功能，引导RNAi分子与靶基因mRNA相结合，导致mRNA 的降解和翻译的抑制，实现对基因表达的调控。

RNA干扰技术在分子生物学研究中有广泛的应用，如：功能基因的筛选、基因表达调节、基因功能验证等。RNA干扰技术具有多种优点，如高效性、特异性强、节约时间、资源和成本等方面的优势，逐步成为生命科学研究中的重要工具。在研究过程中，RNA干扰技术常用于寻找分子病理学中新的治疗靶点，鉴定靶点基因和靶点蛋白，为新药物的开发和临床治疗提供了重要的理论和实验基础。第三篇：基因克隆技术在分子生物学中的应用基因克隆技术始于20世纪70年代，是指将DNA分子导入到载体中，使其在细胞中进行表达的过程。该技术已经成为了基础分子生物学的核心技术之一，并为生物医学和生产生物技术提供了重要的支持。基因克隆技术主要包括：DNA分子切割、分离与纯化、DNA片段连接、转化和筛选等步骤。基因克隆技术的主要应用在于基因和蛋白的结构功能和生物学特性的研究，以及疾病诊断和治疗，还可以制备重要蛋白和药物。基因克隆技术在分子生物学研究中已经得到了广泛的应用，并且不断开发和优化。该技术已经成为了基础分子生物学和现代生物技术中的重要工具，为生命科学和医学的研究提供了强有力的支持。综合来看，PCR、RNA干扰、基因克隆等分子生物学技术，在基础研究和应用研究中有着重要的作用。这些技术的不断创新和发展，为生命科学界的发展带来新的机遇和挑战。

分子生物学实验室常见实验

分子生物学实验室常见实验 1.基因克隆实验：基因克隆实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是将感兴趣的DNA序列克隆到重组DNA分子中。这个实验通常包括DNA的摘取、PCR扩增、限制性内切酶的消化、连接载体、转化大肠杆菌等步骤。 2. 蛋白质表达实验：蛋白质表达实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是将感兴趣的蛋白质表达到大肠杆菌等宿主细胞中。这个实验通常包括将感兴趣的基因克隆到表达载体中，表达载体转化至宿主细胞，利用诱导剂等物质诱导表达蛋白质等步骤。 3. PCR实验：PCR实验是一种基于酶催化反应的分子生物学实验。该实验通过模板DNA、引物、酶及核苷酸等原料，经一系列温度变化，扩增目标DNA片段。该实验通常用于基因克隆、DNA测序、点突变检测等领域。 4. DNA测序实验：DNA测序实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是确定DNA序列。这个实验通常包括PCR扩增、DNA纯化、测序反应、数据分析等步骤。 5. RNA干扰实验：RNA干扰实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是利用RNA干扰技术抑制特定基因的表达。这个实验通常包括制备siRNA、合成siRNA、转染细胞等步骤。 6. 蛋白质纯化实验：蛋白质纯化实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是将感兴趣的蛋白质从混合物中提纯出来。这个实验通常包括细胞裂解、纯化、检测等步骤。

7. 荧光检测实验：荧光检测实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是利用荧光分子标记分子或细胞等，观察其分布、表达及功能等。这个实验通常包括荧光染色、荧光显微镜观察等步骤。 8. 基因编辑实验：基因编辑实验是一种新兴的分子生物学实验，其目的是通过基因编辑技术，直接改变DNA序列，从而实现对基因的修饰。这个实验通常包括CRISPR/Cas9等基因编辑技术的设计、实现、检测等步骤。

分子生物学基础实验

分子生物学基础实验实验一质粒DNA的小量制备一、实验原理载体:要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA 链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb 之间，具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，它也不复制。每个细胞内只含有1个或几个质粒分子。后者的质粒在整个细胞周期中随时复制，在细胞里，它有许多拷贝，一般在20个以上。通常大的质粒如F因子等，拷贝数较少，复制受到严格控制。小的质粒，如ColE Ⅰ质粒（含有产生大肠杆菌素E1基因），拷贝数较多，复制不受严格控制。在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素时，染色体DNA复制受阻，而松弛型ColEⅠ质粒继续复制12－16h，由原来20多个拷贝可扩增至1000－3000个拷贝，此时质粒DNA占总DNA的含量由原来的2％增加到40％－50％。质粒pBR322、pUC19就是由ColE Ⅰ衍生的质粒。

分子生物学实验

实验五：植物糖基转移酶的RNA提取及扩增一、实验思路：铁筷子(Helleborus Thibetanus Franch.) 是毛茛科(Ranunculaceae) 铁筷子属(Helleborus)多年生草本植物。其根茎呈结常状圆柱形，稍扁，长2.5~4.5 cm，直径3.5~7.0 mm，较粗的通常有分枝，分枝顶端有茎痕和浅褐色干燥的小芽苞，表面黑褐色或灰黑色，常有数个类圆形窝状茎痕，环纹在结节的膨大处较密，质略硬，折断面不平坦灰白色，常有裂隙，维管束点呈环状排列，髓约占横切面直径的1/2。根茎上生有多数圆柱形细根，粗细较均匀，直径0.6-2.0 mm，表面黑褐色，有细纵皱纹和少数侧根及侧根痕，质脆，易折断，断面灰白色，显粉性。早春2月开花，花大，单生或2朵捧成单歧聚伞花序；萼片5，花瓣状，白色至粉红色；花瓣小，呈管状，不明显；雄蕊多数，心皮2~3分离。4月结果，蓇葖果。5月种子成熟，呈黑色。主要生长在秦岭山区南北坡海拔1100~3100 m的山地疏林或灌丛中。铁筷子全属约有20余种，主要分布在欧洲东南部和亚洲西部。其中的HelleborusThibetanus Franch.为我国特产种，又名黑毛七、小桃儿七、小山桃儿七、九百棒、嚏根草等，是陕西民间一种疗效确切的草药。其性凉味苦，有小毒，具清热解毒、活血散瘀、消肿止痛之功效，主治膀胱炎、尿道炎、疮疖肿毒及跌打损伤等症。此外，铁筷子花色美丽，亦可作为早春观赏花卉。二、实验材料

三、主要实验步骤：（一）样品采集 1．植物材料为五年大苗的铁筷子，实验取样时选择植物根茎，约1 g，立即使用液氮冷冻，-80 °C冰箱保存、备用。 2．实验材料准备： 1)配制0.1%的DEPC水（通风橱中配置）：用量筒量取去离子水1 L，在通风橱中加入1mL DEPC到1 L去离子水中，终浓度为0.1%的DEPC。迅速盖上盖子，混匀，然后放在37 °C摇床中中速摇荡至少4 h。 2)使用0.1%的DEPC水处理PCR管（0.2 mL）、EP管（1.5 mL）、研钵、镊子。浸泡过夜，次日倾倒DEPC水。将PCR管、EP管灭菌，研钵、药勺、镊子用锡箔纸包裹180 °C烘箱，2小时。（二）RNA提取 1．准备工作（试剂配置和器材准备）实验所用的研臼、杵、小药勺、试剂瓶、量筒、剪刀等与实验材料有接触的器皿都要在0.1%的DEPC水中浸泡24h，用锡纸包裹于180 °C（烘箱）高温灭菌2h

分子生物学实验报告全解(有图有真相)

分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院

目录实验一细菌的培养 (2) 实验二质粒DNA的提取 (4) 实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7) 实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9) 实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11) 实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14) 实验七RNA分离与纯化 (17) 实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA (19) 实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21) 实验十感受态细胞的制备及转化 (23) 实验十一克隆的筛选和快速鉴定 (25) 实验十二地高辛标记的Southern杂交 (27) 实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达 (31) 思考题 (32) 分子实验心得总结 (33)

实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。特别是常用的大肠杆菌。大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。实验室中最常用的是LB培养基。三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂 1. 胰蛋白胨 2. 酵母提取物 3. 氯化钠 4. 1mol/L NaOH 5. 琼脂粉 6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器 1. 培养皿 2. 带帽试管 3. 涂布器 4. 灭菌锅 5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等） 6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g 细菌培养用酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。加入去离子水至总体积为lL，在15 lbf／in2 (1.034×105Pa)高压下蒸气灭菌20分钟。这样得到是LB液体培养基。LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。（二）细菌的培养（１）在液体培养基中培养 1.过夜培养 ⑴取5ml液体培养基加入一只无菌的试管中。 ⑵用接种环或灭菌牙签挑一个单菌落，接种于培养液中。

常见分子生物学实验方法 ppt课件3篇

常见分子生物学实验方法 ppt课件 1. 基因克隆实验方法基因克隆是指将一个或多个基因从一个生物体中分离出来，置于另外一个生物体中，并且使其在新宿主中表达，从而获得大量的目标基因产物。（1）限制酶切割法：将质粒和目标基因使用限制酶切割，得到可互相配对的切口。将它们接合形成重组质粒，转化至大肠杆菌中进行筛选。（2）聚合酶链式反应（PCR）：利用DNA聚合酶在一定温度下对DNA模板进行扩增、重复，PCR可使目标DNA扩增数千倍，成为细胞操作或其他实验的良好基础。（3）DNA定向克隆：利用DNA复制的属性和DNA酶的活性，通过向目标DNA的特定区域加入赋予重组性的核酸片段向目的基因主导特定区域，达到目标的DNA定向克隆效果。 2. mRNA分析实验方法 mRNA分析是分析mRNA信使分子的性质、结构、功能等方面的实验方法。（1）Northern印迹：通过RNA电泳的方式分离RNA，将RNA转移至硝酸纤维素膜，并与适当的标记DNA进行杂交，利用核酸杂交进行检测和鉴定。（2）RT-PCR（即逆转录PCR）：将mRNA逆转录，合成cDNA，然后通过PCR技术进行扩增，是检测mRNA表达量的常用手段。（3）荧光原位杂交（FISH）：将荧光探针与特定控制序

列杂交，可以在组织或细胞水平发现目标mRNA的位置和表达情况，可得到细胞表达局部和过程的信息。 3. 蛋白质表达实验方法蛋白质表达是分析分离和检测目标蛋白质的方法。（1）重组蛋白质表达：在大肠杆菌或哺乳动物细胞中表达重组蛋白质，为研究蛋白质的结构和功能提供重要材料。（2）GST标签蛋白质表达：将GST蛋白质与目的蛋白质融合，通过分离纯化GST标签蛋白质，可同时分离纯化目的蛋白质，比其他表达和纯化蛋白质的方法更高效。（3）蛋白质印迹（western blot）：将分离出来的蛋白质转移到聚丙烯酰胺凝胶并与特定抗体结合，从而检测蛋白质的表达水平和效率等信息。以上是分子生物学实验方法的三个方面，从基因水平到蛋白质水平进行了简单的介绍。各种实验方法各有优缺点，选择合适的方法对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。

现代分子生物学3篇

现代分子生物学第一篇：现代分子生物学的发展历程及意义现代分子生物学是指研究生命现象及其分子机制的一门学科，具有重要的科研、医学及工业应用价值。下面将介绍现代分子生物学的发展历程及其意义。 1. 发展历程 20世纪40年代至50年代，分子生物学在双螺旋DNA模型的发现以及重要的DNA复制研究中迅速发展。 60年代至70年代，分子生物学继续扩展，逐渐涉及了基因组、病毒学、RNA及基因表达等领域。 80年代至90年代，随着PCR技术及基因编辑技术的发明，使分子生物学突飞猛进，应用范围迅速扩大，其中包括基因治疗、药物研发、疾病诊断与治疗等。 21世纪以来，随着现代高通量技术（NGS），人们对分子生物学的研究更加深入细致，尤其是在基因表达、组学、代谢组等方面，为现代分子生物学的发展提供了新的动力。 2. 意义现代分子生物学的意义主要体现在以下几个方面： 1) 更深入的理解生命基础现代分子生物学研究细胞分子结构、生物大分子功能及其分子机制等方面，能够更全面、更深入地理解生命基础。如利用PCR技术及基因编辑技术可以深入了解DNA序列和基因功能，而高通量技术有助于研究多个生物大分子，更全面地了解生物体内代谢和基因表达等机制。

2) 生物医学领域的应用现代分子生物学的应用在医学领域得到广泛关注，如基因治疗、药物研发、疾病的诊断及治疗等。利用分子生物学技术，人们可以研究和治疗许多疾病，例如癌症、家族性疾病、自身免疫疾病等。 3) 植物农业领域的应用现代分子生物学为提高农业产量、改善作物品质等方面提供了全新思路。如转基因技术能够将有益的基因从一个物种转移到另一个不同物种，以提高农作物的产量和耐病性。 4) 工业生产的应用分子生物学技术在工业生产中的应用包括提高酵母菌发酵工艺的效率、生产合成维生素等。综上所述，现代分子生物学是目前发展最快、最具前景的学科之一，并且具有重要的科研、医学及工业应用价值。第二篇：现代分子生物学技术及应用现代分子生物学中的技术以及它们的应用，是使得这门学科能够得到迅猛发展的重要因素。以下将对现代分子生物学中常用的一些技术及其应用进行介绍。 1. 聚合酶链反应（PCR）聚合酶链反应是一种以DNA为模板、在体外通过体外扩增产生大量DNA片段的技术。应用于DNA或RNA检测时，可快速和精准地检测出微小数量的DNA或RNA，例如肯定/否定结论、定量分析等。 2. 基因编辑技术基因编辑技术引入异位DNA或通过改变基因顺序来调控生物体机制的方法。其中最代表性的就是CRISPR/Cas基因编辑技术。这种技术有许多潜在应用，例如改变基因序列、创造

分子生物学技术3篇

分子生物学技术第一篇：PCR技术的原理和应用 PCR（聚合酶链反应）是一种基于DNA复制的分子生物学技术，由于其具有快速、精确、灵敏等特点，被广泛应用于基因检测、感染病原体检测、遗传病诊断等领域。 PCR技术的核心原理是在一个闭合的反应体系中，将DNA 的两条链分离后进行轮替式的扩增，最终可以快速产生目标DNA片段。PCR反应通常包括三个步骤：变性、退火和延伸。首先，将双链DNA变性为两个单链模板，然后引入合适的引物后，在退火步骤中让引物与目标DNA序列互相结合，最后让DNA聚合酶沿着单链模板进行延伸，形成新的DNA链。一个PCR循环大约需要几十秒，一般反应次数在30至40次之间。 PCR技术具有诸多优点，如高度特异性、高度灵敏度、高度精确性等。其在医学、生态、环保等领域均有广泛的应用。例如，在病原体检测方面，PCR技术常被用于快速检测人体液体中的病原体，如HIV、乙肝病毒等。在生态检测方面，PCR 技术也被广泛应用于快速鉴别环境样品中的微生物群落，从而评估环境质量。在应用PCR技术时，需要注意：1、反应体系必须严格控制，以免DNA污染和误差;2、引物的设计必须严谨，以免引物与非目标序列混合扩增，导致结果不准确;3、扩增产物必须进行准确的分析和检测，以确定扩增产物的大小、种类等。总之，PCR技术在分子生物学和医学领域发挥着重要作用，未来也必然会不断完善和发展。

第二篇：SDS-PAGE技术的原理和应用 SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的分离蛋白质的技术。相比于传统的凝胶电泳技术，SDS-PAGE具有更高的分辨率和准确性。因此，SDS-PAGE也广泛应用于生物学和医学领域，如分离和鉴别重要的分子标志物、酶和激素等。 SDS-PAGE的原理是利用离子型表面活性剂SDS（十二烷基硫酸钠）破坏蛋白质的二级或三级结构，将蛋白质分解成单独的多肽链，并使这些多肽链带有同样的负电荷。然后，将这些已经被SDS单体包裹的“均质”蛋白质纳入聚丙烯酰胺凝胶中，通过电场将含有不同分子量的蛋白质分开，并形成多个带状物。通过银染或印迹法等技术分析出分离出的各个蛋白质带的分子量和相对丰度。 SDS-PAGE技术具有高度的分辨率，能够快速分离出具有不同分子量的蛋白质，是生物学科学家探索细胞结构的有力工具。例如，在疾病诊断和治疗方面，SDS-PAGE技术被广泛应用于鉴别蛋白质等生物标志物的相对含量和分子量等特征，从而确定疾病的相应治疗策略。当应用SDS-PAGE技术时，需要注意样品的前处理和准确地注入样品到凝胶中，以保证凝胶电泳结果的准确性。此外，还需要使用标准蛋白质作为分子量标准以及对分析结果进行定量分析。总之，SDS-PAGE技术作为分离蛋白质领域的重要技术，对于人类基因组学和基因表达等方面的研究发挥着关键作用，必将继续得到广泛应用和不断改进。第三篇：基因克隆技术的原理和应用基因克隆技术是一种将DNA序列从原有基因组中提取出来并重复制的技术。它允许将特定的基因序列克隆到一个或多

基因的分子生物学3篇

基因的分子生物学第一篇：基因的发现与结构基因是生物体内的遗传物质，掌握基因分子生物学对于理解遗传学和细胞分子生物学有着至关重要的意义。而要了解基因，首先需要了解基因的发现和结构。本篇将从发现基因的历史出发，介绍基因的结构、功能和分类。一、基因的发现基因的发现历史可以追溯到康德尔和洛希提出的“遗传病理学”学说。他们认为父母对后代的遗传是通过“血”的传递实现的。此后，许多科学家先后展开了一系列的基因研究，如摩尔根和他的学生门德尔等人的基因定位实验，和沃特森和克里克提出的基因结构模型等。这些研究奠定了遗传学和分子生物学的基础。二、基因的结构大体上，基因是由DNA (deoxyribonucleic acid, 脱氧核糖核酸) 组成的，并且这些基因携带着遗传信息。DNA分为四种碱基：腺嘌呤(Adenine, A)、胸腺嘧啶(Thymine, T)、鸟嘌呤(Guanine, G)和胞嘧啶(Cytosine, C)。这些碱基以复合物的形式排列成了DNA链。每条DNA链由磷酸基团和脱氧核糖醛基团组成，两条链通过碱基之间形成的氢键粘在一起。基因的长度不固定，从几百个碱基到数百万个碱基不等。而基因的信息则是通过DNA链中的不同碱基序列存储的。这种存储方式使用了DNA所具有的“四字母”编码系统，每三个碱基编码一个氨基酸。

三、基因的功能基因所携带的遗传信息分为两类：表型信息和表达控制信息。表型信息指的是基因所编码的蛋白质，而表达控制信息则是指调节基因表达的元件，如启动子、转录因子等。基因的表达是指基因信息转化为蛋白质的过程，而基因表达的过程同样分为两个环节：转录和翻译。其中转录是指由RNA依据DNA 模板合成RNA的过程；翻译是指RNA信息转变为蛋白质序列的过程。这一过程的完美执行需要多种辅助因子的调节。四、基因的分类随着基因研究的不断进步，基因的分类也不断被完善。目前，基因主要分为三类：编码基因（coding genes）、调控基因（regulatory genes）和结构基因（structural genes）。其中编码基因仅占所有基因的一小部分，它们的功能是编码蛋白质；调控基因则控制编码基因的表达，包括控制转录和翻译过程；结构基因则编码非蛋白质产物，如tRNA和rRNA等。综上，基因是生命体遗传信息的基本单位，是生命进化和多样性的重要来源。基因的结构、功能和分类是基因分子生物学研究的基本内容，掌握这些内容，对于深入了解生命体的运作机制和生物技术的应用都具有重要的意义。第二篇：基因表达的调控基因的表达是决定生命体多样性和功能的基础。在细胞分子生物学领域，对于基因表达的调控机制的研究十分重要。本篇将从基因调控的原理、基本模式和调控元件入手介绍基因表达的调控机制。一、基因表达调控的原理基因表达调控的原理在于，转录后的mRNA需要再进一步被调控才能转化为蛋白质。因此，有效的调控措施可以降低不

分子生物学试验教学教案

分子生物学试验教学教案分子生物学实验教学教案(3000字) XX科技大学实验教学教案课程名称分子生物学指导教师李市场 XX科技大学实验教学教案首页实验一大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验目的通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术。实验原理将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DN。转化(Trnsformtion)是将外源DN分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DN分子进入体内并稳定地遗传给后代。为了提高转化效率, 实验中要考虑以下几个重要因素： 1. 细胞生长状态和密度: 细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的OD600 来操纵。DH5α菌株的OD600 为0.5时,细胞密度在5×107 个/ml左右(不同的菌株情况有所不同),这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。

2. 质粒的质量和浓度: 1ng的cccDN即可使50μl 的感受态细胞达到饱和。一般情况下,DN溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5％。 3. 试剂的质量: 所用的试剂,如CCl2 等均需是最高纯度的(GR.或R.),并用超纯水配制,最好分装保存于干燥的冷暗处。 4. 防止杂菌和杂DN的污染。本实验以E.coli DH5菌株为受体细胞,并用CCl2处理,使其处于感受态,然后与pUC19质粒共保温,实现转化。由于pUC19质粒带有氨苄XX霉素抗性基因(mpr )，可通过mp抗性来筛选转化子。如受体细胞没有转入pUC19，则在含mp 的培养基上不能生长。能在mp培养基上生长的受体细胞（转化子）肯定已导入了pUC19。转化子扩增后，可将转化的质粒提取出，进行电泳、酶切等进一步鉴定。一. 仪器控温摇床(37℃) 高速冷冻离心机水浴锅冰箱（-20℃,‐70℃）超净工作XX培养箱(37℃) 752分光光度计灭菌锅二. 试剂CCl2 无菌水,冰胰蛋白胨酵母粉 mp NCl 三. 其他用品移液器，枪头

分子生物学分析3篇

分子生物学分析第一篇：PCR技术 PCR，全称为聚合酶链反应（polymerase chain reaction），是分子生物学领域最为常用的一种技术。PCR技术主要包括三个步骤：变性、退火、延伸。它能够在较短的时间内扩增DNA片段，是分子生物学重要的基础技术之一。 PCR的原理是在DNA双链的末端加上引物（primer），用DNA聚合酶（polymerase）在引物的指导下进行扩增。具体来说，PCR的步骤如下：首先将DNA样本加入PCR反应体系中，然后加入两种适当浓度的引物、dNTPs、聚合酶和缓冲液。接着进行多次循环加热（变性）、退火（引物结合）和延伸（聚合）。 PCR技术在基因组测序、基因工程、分子诊断等领域得到广泛应用。例如，在基因诊断中，可以通过PCR扩增DNA片段，将DNA序列中的突变基因分析出来，从而达到对致病基因的检测和诊断。需要注意的是，PCR技术能够扩增任何目标DNA片段，包括病原体、动植物、人类等。因此，在使用和处理PCR反应体系时需要特别小心，避免交叉污染。第二篇：Gel电泳分析 Gel电泳是一种分离生物大分子的技术，主要应用于DNA、RNA、蛋白质等分子的分离和检测。其基本原理是利用凝胶的孔隙大小和电荷作用，将带电分子作用下垂直电场向电极运动，以实现分子的分离和检测。

Gel电泳技术有不同类型，如聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）、蛋白质电泳等。其中，琼脂糖凝胶电泳在DNA、RNA分析中应用广泛。在DNA分析中，Gel电泳是确定PCR扩增产物的常用技术。其过程是将PCR产物样品加入琼脂糖凝胶孔中，加上电场使DNA分子沿电场方向运行，电泳后形成DNA条带。这些条带是根据DNA分子的长度确定的，通常与DNA的分子量成正比。与PCR扩增产物相比，琼脂糖凝胶电泳也可用于检测来源于各种天然DNA样本。通过运行DNA分子，可以了解DNA分子大小和特定区域的序列。虽然Gel电泳技术已应用多年，但它仍然是分子生物学中不可或缺的方法。它的应用范围涉及从医学到农业等多个领域。因此，为了提高实验效果和结果准确性，需要进行深入的了解和熟练的操作。第三篇：Western blotting技术 Western blotting技术，也称为免疫印迹技术，是一种可用于检测蛋白质的分子生物学技术。它将蛋白质分离出来，化学修饰，然后通过抗体-抗原相互作用使其可视化和检测。 Western blotting技术的具体流程为：首先将分离的蛋白质样品用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进行分离，然后用特定的抗体与待检测的蛋白质结合，再用同类抗体标记的物质作为化学发光试剂进行可视化检测。在分子生物学研究中，Western blotting技术被广泛应用于检测蛋白质含量及其修饰状态。例如，它可以用于检测抗体对遗传工程蛋白和天然蛋白的反应，发现蛋白质修饰（如糖基化、磷酸化、酰化等），甚至用于定量分析蛋白质的含量。

分子生物学实验指导

实验1 植物总DNA的提取 Isolation of total DNA from plants 生物总DNA的提取是分子生物学实验的一个重要内容。由于不同的生物材料细胞壁的结构和组成不同，而细胞壁结构的破坏是提取总DNA的关键步骤。同时细胞内的物质也根据生物种类的不同而有差异，因此不同生物采用的提取方法也不同，一般要根据具体的情况来设计实验方法。本实验介绍采用CTAB法提取植物总DNA的技术。 [实验目的] 学习和掌握学习CTAB法提取植物总DNA的基本原理和实验技术。学习和掌握紫外光吸收法鉴定DNA的纯度和浓度。 [实验原理] 植物叶片经液氮研磨，可使细胞壁破裂，加入去污剂（如CTAB），可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化。本实验采用CTAB法，其主要作用是破膜。CTAB 是一种非离子去污剂，能溶解膜蛋白与脂肪，也可解聚核蛋白。植物材料在CTAB的处理下，结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA 被释放出来。CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7mM）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1-0.5mM NaCl）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经过氯仿/ 异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA，最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA沉淀分离出来。由于核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收。核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。纯的DNA样品A260/280≈1.8，纯的RNA样品A260/280≈2.0，并且1μg/ml DNA溶液A260=0.020。 [实验器材] 1、高压灭菌锅 2、冰箱 3、恒温水浴锅 4、高速冷冻离心机 5、紫外分光光度计 6、剪刀 7、陶瓷研钵和杵子 8、磨口锥形瓶（50ml） 9、滴管 10、细玻棒 11、小烧杯（50ml） 12、离心管（50ml） 13、植物材料 [实验试剂] 1、3×CTAB buffer（pH8.0） 100mM Tris 25mM EDTA 1.5M NaCl

分子生物学实验

实验一CTAB法制备植物DNA 一、实验目的通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法。二、实验原理利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。细胞提取液含有的CTAB溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用氯仿或苯酚抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经异丙醇沉淀。三、仪器、材料与试剂（一）仪器 1.台式离心机 2.水浴锅 3.摇床（二）材料与试剂 1.2× CTAB缓冲液： 50 mmol/L Tris-HCl(pH8.0) 0.7 mol/L NaCl 10 mmol/L EDTA(pH8.0) 1％CTAB 20mmol/L 2-巯基乙醇(用前加入) 2.异丙醇 3.乙醇 4.氯仿：异戊醇（24：1） 5.5ml离心管和吸头 6.研钵四、实验步骤： 1.把已加入巯基乙醇的CTAB提取液放入65o C水浴中预热。 2.取10g-50g新鲜叶片，最好是嫩叶。 3.将叶片在无菌水下洗涤，吸干，放入液氮中冻结。用研钵和研杵研成粉状，迅速加到1.5ml 的试管中，大概试管的1/3-2/3。 4.在装有磨碎叶片的试管中加入0.5ml预热的CTAB，轻轻混匀，然后在65o C水浴中温育 40分钟左右，不时混匀。 5.用等体的24：1的三氯甲烷/异戊醇抽提匀浆液（在水浴过的试管中加入等体积的24：1），在摇床上摇荡20分钟。 6.10000转/min下离心15分钟，取上清液。 7.再加等体积的24：1，再摇荡10分钟，10000转/min下离心15分钟，取上清液。 8.加等体积的异丙醇（冷）沉淀DNA，加入时注意速度稍快一点。 9.将絮状DNA挑出用70%乙醇洗涤2次，再用无水乙醇洗1次。 10.如果DNA量少，可8000转/min下离心5分钟。 11.将DNA风干，加无菌水溶解。置于4o C或-20o C冰箱中储存备用。实验二植物DNA的SSR扩增一、实验目的通过本实验学习、掌握植物DNA的SSR扩增的基本原理和方法。

分子生物学实验

分子生物学实验实验一、菌株复壮与单菌落菌株的获取一、实验目的学习细菌培养的LB培养基及抗生素抗性筛选培养基的配制，掌握高压灭菌和获取细菌单菌落菌株两种基本实验操作技能。二、实验材料、设备及试剂 1、实验材料大肠杆菌（E. coli）DH5α菌株：R-，M-，Amp- 2、实验设备恒温摇床，电热恒温培养箱，无菌工作台，高压灭菌锅 3、试剂酵母浸膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，卡那霉素三、实验步骤液体LB（Luria-Bertain）培养基配方：蛋白胨(typtone) 1.0% （1 g/100 ml）酵母提取物(Yeast extraction)0.5% （0.5g/100 ml）氯化钠 1.0% （1 g/100 ml） PH 7.0 固体LB培养基：每100 ml液体培养基中加入1.5g琼脂粉请按试剂瓶上的编号使用相应编号的药勺取药，防止药品相互污染！ (1)每组按上述液体LB培养基配方，以配制100ml的量称取药品放入烧杯。 (2)用量筒量取约80 ml 蒸馏水注入烧杯中，玻棒搅拌使药品完全溶解后用 100ml量筒定容至100ml。 (3)pH试纸检测pH值，并用1 N NaOH或1 N HCl调节pH值至7.0。 (4)将100ml溶液分装入两个三角瓶，每瓶为50ml。

(5)按固体培养基配方称取适量琼脂粉分别放入两个三角瓶中，以配制成两瓶 50ml固体LB培养基。 (6)两个三角瓶分别用锡纸包扎瓶口。并用记号笔在三角瓶上标注各组标记。 (7)把装有培养基三角瓶放入灭菌锅中，盖上锅盖，以对称方式拧紧锅盖，打开排气阀通电加热，至有连续的白色水蒸气从排气阀排出时，关闭排气阀。当高压锅温度（气压）指示器指示锅内温度升高至121℃（0.1Mpa）时，调节电压（或利用手动开关电源的方式）使高压锅稳定在该温度（压力）下20 min，然后断开电源。待指示器指示压力降为0时，方可打开排气阀，然后再打开锅盖小心取出锅内物品。 (8)取出三角瓶后，在酒精灯火焰旁进行下述操作。 (9)取其中的一瓶直接倒培养皿，每皿倒入的量以刚好能在培养皿底铺展成薄薄的一层即可。每组倒1块培养皿，在皿盖上用记号笔写上“LB”及各组的标记。 (10)另外一瓶培养基待温度降低至60℃左右时（刚能感觉不烫手），向培养基中加入0.1ml 50mg/ml的氨苄青霉素（Amp）溶液，使培养基中Amp的终浓度为50mg/L。快速充分混匀后每组倒1块培养皿，在皿盖上标注“LB+”及各组的标记。 (11)接种环蘸取菌液，密密划线。 (12)倒置于37℃恒温培养箱中进行培养。 (13)一天后观察菌落。四、思考题 (1)在说明本实验所用的菌种时用到这样的符号：“R-，M-，Amp-”，这告诉我们关于该菌种的什么信息？ (2)在步骤7中，为何须待连续的白色水蒸气从排气阀排出时才能

分子生物学综合实验报告

分子生物学综合试验报告

综合实验Ⅰ.Southern杂交（质粒DNA提取、PCR技术体外扩增DNA、质粒载体和外源DNA的连接反应、地高辛标记的Southern杂交）一.实验目的 1.学习Southern杂交的原理及操作方法。 2.学习碱裂解法提取质粒的原理。 3.学习PCR反应的基本原理和实验技术；了解引物设计的一般要求。 4.掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。二.实验原理利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的碱裂解法提取质粒的主要原理是：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。聚合酶链反应（PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术，PCR进行的基本条件：DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）、引物、dNTP（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq DNA聚合酶、反应缓冲体系。 PCR循环由三个步骤组成：变性、退火、延伸。每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。 DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来。最常用的来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶。对于平末端或互补的粘性末端可直接进行连接反应。一个片段是平末端，另一片段为粘性末端或两个片段都是粘性末端但不配对，则需要通过各种方式使其可一匹配或通过平末端进行连接。通常