常用吸入制剂的介绍-完整版

常用吸入制剂品种介绍

吸入装置的临床应用及比较 1、什么才是理想的吸入装置 ①在各种吸入流速下，剂量输出至肺部的稳定性高；②粒子直径小(2-5微米)；③容易使用；④装置体积小，便于携带；⑤可用于不同剂量药物；⑦经济；⑧可计数。常见的吸入装置有：雾化吸入、定量吸入、干粉吸入。 2、雾化治疗定义：雾化治疗是通过特制的气溶液发生装置，将水分和药物形成气溶胶的液体微滴或固体微粒，被吸入并沉积于呼吸道和肺泡靶器官，达到治疗疾病，改善症状的目的；同时雾化吸入也具有一定的湿化稀释气道分泌物的作用。雾化治疗的优点：①相对于全身给药，雾化治疗具有药物用量小、起效快的优势。②根据药物的不同具有稀化痰液、消除炎症、解除支气管痉挛、减轻喉头水肿、抗感染等作用，成为改善气道畅通的有效手段。雾化治疗的适应症：①痰液粘稠；②气道炎症性疾病；③气道阻塞性疾病；④喉部疾病；⑤其他需要经气道吸收给药的。雾化器(Nebulizer)的优点和不足优点不足使用方便，不需要病人的配合治疗费用较贵不含刺激物有动力要求而携带不方便吸入肺部的药量较高疗效受病人和装置的影响较大药物沉积时间长 2、定量吸入器（metered dose inhaler, MDI）定义：定量吸入器是目前应用最广泛的吸入技术，MDI筒内含有加压混合物，包括抛射剂（主要是氟利昂CFC，HFA134a）、表面活性剂（减少颗粒聚集）和药物（仅占总量的1％）等。筒内压力为300～500kPa，阀门开放时混合物定量的射出，初始速度超过30m/s，直径>30μm。20ms内成雾，理想的微粒化药物颗粒直径在1～5μm。距喷口10cm处雾粒直径为1.4-4.3um，每次约有80％的药物撞击并沉积于口腔部，仅10－20％到达肺内的作用部位。常见的有舒喘灵、万托林喷雾剂，它们在COPD中的作用：迅速扩张气道，解除气道痉挛，3至5分钟起效，维持3至4小时，每次2至4喷，每天4至6次或按需使用，常见不良反应：头痛、震颤、神经紧张、

常用免疫组化标记物精编版

常用免疫组化标记物公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]

常用免疫组化指标的意义 Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA(增埴细胞核抗原)。多数腺癌表达CEA Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。 P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短 Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。 E-Ca，E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。 PS2（雌激素调节蛋白），其表达和ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。 CK18，低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。 CK19，分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应 Hep par 1,肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。 CK20，用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。 CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。 Villin 绒毛蛋白，正常组织中，villin通常只表达于有刷状缘的细胞上，如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中（特别是近曲小管）。Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率，具有明显腺样结构的肿瘤上没有villin表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低。乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显的villin免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极

吸入制剂与合理使用执业药师继续教育考试答案

吸入制剂与合理使用执业药师继续教育考试答案单选题（共10 题，每题10 分） 1 . 吸入治疗的优势包括（） ? A.肺部吸收面积大 ? B.见效快 ? C.药物从肺泡移到血液的距离短 ? D.以上都对我的答案：D 参考答案：D 答案解析：暂无 2 . 气溶胶的具有（），有利于药物与气道表面黏膜上皮细胞接触而发挥药效 ? A.巨大的颗粒 ? B.巨大的接触面 ? C.巨大的气味 ? D.以上都对我的答案：B 参考答案：B 答案解析：暂无 3 . 吸入疗法是目前（）中首选的给药方法。 ? A.哮喘治疗 ? B.流脑治疗 ? C.消化道感染治疗 ? D.以上都不对我的答案：A 参考答案：A 答案解析：暂无 4 . 雾化吸入疗法是在在动力源的驱使下，液体药物被雾化成（），自然呼吸直接达到患病部位? A.超大的雾状颗粒 ? B.细微的雾状颗粒 ? C.干粉颗粒 ? D.以上都对我的答案：B 参考答案：B 答案解析：暂无 5 . 气雾剂处方组成包含药物，还可以有（）等辅料。

? A.抛射剂 ? B.表面活性剂 ? C.助溶剂 ? D.以上都对我的答案：D 参考答案：D 答案解析：暂无 6 . 压力定量气雾吸入器(pMDI)的不足包括 ? A.口咽部药物沉积量较高 ? B.吸入技巧不易掌握 ? C.可造成支气管痉挛 ? D.以上都对我的答案：D 参考答案：D 答案解析：暂无 7 . 关于pMDI+Spacer（加储物罐）的优点的正确描述是 ? A.吸入技巧不易掌握 ? B.吸入肺内的药量可达单用pMDI的一倍以上 ? C.装置明显大于pMDI ? D.抛射剂对环境有影响我的答案：B 参考答案：B 答案解析：暂无 8 . 雾化治疗与患者相关的影响因素包括（） ? A.肺的解剖结构 ? B.疾病的状况 ? C.配合协同能力 ? D.以上都对我的答案：D 参考答案：D 答案解析：暂无 9 . 雾化治疗专家共识推荐意见，肺内沉积的气溶胶大小最佳范围为? A.1～5μm ? B.1～5mg ? C.1～5ml ? D.以上都不对

细胞免疫组化常用试剂配制

免疫细胞化学常用试剂一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂：A液：多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液：Na2HPO4·2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液：NaOH 3.86g 蒸馏水200m

配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH 或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3．Bouin’s液及改良Bouin’s液试剂：饱和苦味酸 40%甲醛250ml 冰醋酸50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3～3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的长期保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。 4．Zamb oni’s(Stefanini’s)液试剂：多聚甲醛20g 饱和苦味酸 150ml Karasson-Schwlt’s PB至1000ml 配制方法：称取多聚甲醛20g，加入饱和苦味酸150ml，加热至60℃左右，持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后，加Karasson-Schwlt’s PB至1000ml充分混合（Karasson –Schwlt’s磷酸缓冲液的配制配制方法见后）。该固定液适于电镜免疫细胞化学，对超微结构的保存较纯甲醛为优，也适于光镜免疫细胞化学研究，为实验室常用固定剂之一。我们在应用中，常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸，以增加其对组织的穿透力和固定效果，保存更多的组织抗原。固定时间为6～18h。 5．PLP液PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液（Periodate-Lysine-paraform-alde－hyde fixative）

常用的雾化吸入药物

常用的雾化吸入药物临床上，常用的雾化吸入药物有3类： (1)湿化祛痰剂：粘液脓栓或粘稠分泌物是气道阻塞的常见原因，并常使肺功能损害加重，诱发感染，这类药物主要作用是化痰，以利于痰液排出。生理盐水5ml，用于湿化气道；α-糜蛋白酶 2.5～5mg加生理盐水10ml稀释后应用；2%～4 %碳酸氢钠2～5ml；蒸馏水5ml；必嗽平2ml加生理盐水5ml稀释后应用，同时加入支气管扩张剂。 (2)支气管扩张剂：常用于咳喘患儿。如异丙肾上腺素 0.25～ 0.5mg加生理盐水5～10ml稀释； 0.5%舒喘灵 0.01～ 0.03ml/kg·次，加生理盐水10ml稀释；地塞米松2mg加生理盐水5～10ml 稀释。 (3)抗生素：雾化吸入在止咳化痰的同时一般都加入抗生素控制炎症，因为许多患儿的咳嗽，咳痰都与感染有关。常用药物：青霉素5～10ml次，加入生理盐水5～10ml皮试后应用；庆大霉素2万μ～4万μ/次加生理盐水10ml；红霉素 0.15～

0.3g/次加生理盐水10ml稀释；制霉菌素2～3万μ/次加生理盐水10ml稀释。通常，上述三类药物同时应用效果较好。临床常用： α-xx 2.5～5mg，地塞米松2～5mg，庆大霉素4万μ～8万μ，加入生理盐水10～20ml以达到祛痰、平喘、消炎的功效。雾化药物基本组方：庆大霉素4~8万u，地塞米松5~10 mg，α-糜蛋白酶5mg，对于喉水肿严重并出现呼吸困难者加入肾上腺素 0.5~1mg，并加大地塞米松用量。将上述药物用40℃温开水配成15 ml加入雾化杯中，机器水槽内加50℃的温开水进行超声雾化吸入。急性喉炎每日吸2次;每次10~20min，5天为1个疗程，应用1~2个疗程;慢性喉炎每日1次，每次20min，7天为1个疗程，应用2~4个疗程。每个疗程间可有2~3天休息。具体需要到医院检查后再制定治疗方案。选用超声雾化吸入药物时应注意哪些问题？超声雾化吸入应用的各种药物，必须是水溶性的，稳定性好、粘稠度低及适宜人体组织的胶体渗透压；药液浓度太高不易起雾；药液对粘膜不宜有刺激性；酸碱度要接近中性；注意不要引起过敏反应。雾化的药液应新鲜配制，定期消毒，避免污染。用作雾化治疗的液体可选用蒸馏水、０．４５％盐水或生理盐水。蒸馏水稀释粘液的作用较生理盐水强，但刺激性也较强，因此，当分泌物较粘稠干涸时，可选用蒸馏水或０．４５％盐水，长期湿化则可用生理盐水。心脏功能不全者，长期使用生理盐水湿化时应注意对心脏负荷增加的影响。超声药物雾化吸入疗法超声雾化吸入疗法系气雾吸入疗法的一种。是利用超声的空化作用，使液体在气相中分散，将药液变成雾状颗粒（气溶胶），通过吸入直接作用于呼吸

免疫组化试剂

免疫组化免疫组化是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。免疫组化试剂盒： Vector Laboratories公司VECTASTAIN@ ABC免疫组化试剂盒： Vector公司于1977年率先开发出了生物素-亲和素系统，该产品系列是检测方法上的重要革命。其后，公司发展出ABC技术（Avidin : Biotinylated Enzyme Complex Technology，亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术），并建立了著名的VECTASTAIN?ABC系统，目前，该系统被视为最灵敏、最可靠与最有效的染色系统，并被广泛应用于免疫组织化学、免疫电镜、原位杂交与凝集素化学中。ABC技术利用生物素和卵白素具有极高亲和性的生物学特征，将卵白素和生物素化辣根酶按照一定的比例混合，形成ABC复合物。该法亦被称作三步法，第一步为biotin化二抗和一抗结合，第二步为avidin（亲和素，A液）和二抗上的biotin结合，第三步为HRP偶联的biotin（B液）和avidin结合，而HRP再催化底物显色完成染色。试剂盒组份： 2ml试剂A（Avidin DH溶液） 2ml试剂B（生物素化的酶） 1ml生物素化的二抗（1.5mg anti-IgG/0.5mg anti-IgM抗体/2.1mg通用抗体） 3ml阻断血清其中standard试剂盒只含有试剂A和试剂B VECTASTAIN?ABC系列产品 VECTASTAIN?ABC-HRP Kits（辣根过氧化物酶）最通用的系统，使用范围广VECTASTAIN?ABC-AP Kits（碱性磷酸酶）灵敏度较高，染色密度较低，适于形态学染色非常重要的组织 VECTASTAIN?ABC-GO Kits（葡萄糖氧化酶）灵敏度较低，适用于组织内源性HRP或AP 含量比较高的组织，常与HRP或AP系统配合进行双染。 VECTASTAIN?ABC Kits（辣根过氧化物酶）灵敏度高，特别适用于神经组织

各种吸入剂的正确使用方法

各种吸入剂的正确使用方法使用气雾剂吸入治疗是治疗哮喘的有效方法之一，吸入治疗的效果与吸入装置及正确的使用方法有关，现将常用吸入装置及正确使用方法作一介绍 1.压力定量气雾吸入器压力定量气雾吸入器压力定量气雾吸入器是由药物、推进剂、表面活性物质或润滑剂三种成分组成。使用此种吸入装置的气雾剂有万托林气雾剂、喘康速气雾剂、爱全乐气雾剂、必可酮气雾剂、辅舒酮气雾剂、普米克气雾剂等。使用方法为：①移去套口的盖，使用前轻摇贮药罐使之混匀。②头略后仰并缓慢地呼气，尽可能呼出肺内空气。③将吸入器吸口紧紧含在口中，并屏住呼吸，以食指和拇指紧按吸入器，使药物释出，并同时做与喷药同步的缓慢深吸气，最好大于5秒钟（有的装置带笛声，没有听到笛声则表示未将药物吸入）。4尽量屏住呼吸5～10秒钟，使药物充分分布到下气道，以达到良好的治疗效果。⑤将盖子套回喷口上。⑥用清水漱口，去除上咽部残留的药物。 2.干粉吸入器干粉吸入器是通过使用者主动吸入空气的动能分散药物微粒，干粉雾颗粒的流速与使用者的吸气流速相吻合。国内常用的干粉吸入器有两种：储存剂量型涡流式干粉吸入器，俗称都保，如普米克都保、奥克斯都保。另一种为为准纳器，如舒利迭。都保的使用方法：①旋转并移去瓶盖。检查剂量指示窗，看是否还有足够剂量的药物。②③一手拿都保，另一手握住底盖，先向右转到底再向左转到底，听到“咔”一声，即完成一次剂量的充填。④⑤吸入之前，先轻轻地呼出一口气（勿对吸嘴吹气），将吸嘴含于口中，并深深地吸口气，即完成一次吸入动作。深吸气的目的：是要让药粉可以深入肺部达到良好的治疗效果。吸药后，从嘴唇移走吸入瓶，约屏气5～10秒，然后缓缓呼气。⑥用完后将瓶盖盖紧。注意事项：①10分钟后，用温水漱口以保持口腔清洁。②清理吸嘴：用手握住吸嘴往外压，即可把吸嘴拿下，用干布把吸嘴下方内侧之药粉擦干净，绝对不可以用水清洗。准纳器的使用方法：①一手握住准纳器外壳，另一手拇指向外推动准纳器的滑动杆直至发出咔哒声，表明准纳器已做好吸药的准备。②握住准纳器并使远离嘴，在保证平稳呼吸的前提下，尽量呼气。③将吸嘴放入口中，深深地平稳地吸气，将药物吸入口中，屏气约10秒钟。④拿出准纳器，缓慢恢复呼气，关闭

吸入制剂质量控制研究技术指导原则汇总

附件一吸入制剂质量控制研究技术指导原则

吸入制剂质量控制研究技术指导原则一、概述吸入制剂系指通过特定的装臵将药物以雾状形式传输至呼吸道和/或肺部以发挥局部或全身作用的制剂。与普通口服制剂相比，吸入制剂的药物可直接达到吸收或作用部位，吸收或作用快，可避免肝脏首过效应、减少用药剂量；而与注射制剂相比，可提高患者依从性，同时可减轻或避免部分药物不良反应。因而近年来越来越为药物研发者所关注。吸入制剂在制剂处方、给药装臵、制剂工艺、质量研究、稳定性研究等方面均有其特殊关注点，可对吸入制剂的质量可控性、安全性与有效性产生至关重要的影响，因此质量控制研究部分是吸入制剂的临床前乃至临床研究重点之一。本指导原则是在参考国内外相关指导原则和文献的基础上，结合我国吸入制剂研发的现状，通过分析质量控制研究与安全有效性和质量可控性之间的内在关系而制定的。旨在为药物研发者在吸入制剂质量控制研究过程提供基本的技术指导，也力求使药物研发者和评价者对药物评价过程中需要关注的问题达成共识。本指导原则所讨论内容仅限于经口腔吸入制剂在质量控制研究工作方面的特殊研究内容，经鼻吸入制剂暂不纳入本指导原则。其他一般性要求参见国家食品药品监督管理局颁布的相关指导原则。由于新制剂技术的不断涌现以及临床上的特殊需求，在吸入制剂研发过程中会遇到很多难以预料的问题，因此本指导原则只是一个一般性原则，药物研发者应从药物研发的客观规律出发，具体问题具体分析，必要时根据实际情况采用其他有效的方法和手段进行研究。

本指导原则适用于吸入制剂研发的整个过程。二、吸入制剂的分类根据处方、制剂工艺的不同，吸入制剂表现出多种制剂形式，目前国内外有多种剂型名称并存，相互之间既有交叉也有覆盖，不利于药物研发和评价。为此，本指导原则从分类的科学性出发，同时参考国内外指导原则和相关文献，将吸入制剂分为气雾剂、喷雾剂和粉雾剂，以便有针对性地提出各自的质量控制要求。需要说明的是，多数疾病均需定量给药，因此本指导原则所涉及内容均以定量吸入制剂为对象。气雾剂系指将含药溶液、乳状液或混悬液与适宜的抛射剂共同分装于具有特制阀门系统的耐压容器中，使用时借助抛射剂的压力将内容物成雾状喷出，吸入后发挥局部或全身治疗作用。气雾剂一般由药物、辅料、耐压容器、定量阀门系统和喷射装臵组成。喷雾剂系指含药溶液、乳状液或混悬液臵于特制的装臵，使用时借助适当的雾化系统将内容物呈雾状释出，用于患者吸入的制剂。喷雾剂一般由药物、辅料、容器、雾化装臵等组成。粉雾剂系指将微粉化的药物或/和载体以单剂量或多剂量储库形式，采用特制的干粉吸入装臵，由患者主动吸入雾化药物至呼吸道或肺部的制剂。三、质量控制研究（一）吸入制剂质量控制的主要指标和参数根据吸入制剂的制剂特点以及临床应用特点，气雾剂、喷雾剂和粉雾剂的质量控制指标/参数主要有药物/雾滴的粒度和粒度分布、喷射模式、每揿主药含量/每喷主药含量/每吸主药含量、每瓶总揿次/每瓶总喷次/每瓶总吸次，在吸入制剂的处方工艺研究、质

免疫组化技术(原理、分类、步骤及主要试剂、设备准备)

免疫组化技术原理抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。分类（常用） 1、免疫荧光方法最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。 2、免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，目前在病理诊断中广为使用的当属PAP法（过氧化物酶-抗过氧化物酶）、ABC法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物）、SP 法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）、即用型二步法（聚合物链接）等。 3、免疫胶体金技术免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。 4、免疫铁蛋白法 5、放射免疫自显影法标本 1、组织标本：石蜡切片（病理切片和组织芯片）、冰冻切片 2、细胞标本：组织印片、细胞爬片、细胞涂片

免疫组化技术(原理、分类、步骤及主要试剂、设备准备)

免疫组化技术免疫组化技术
业精于勤而荒于嬉行成于思而毁于随
免疫组化技术
原理
抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂 DAB 显示为棕黄色颗粒）。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
分类（常用）
1、免疫荧光方法
最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。
2、免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后， 60 年代发展起来的技术。于基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，目前在病理诊断中广为使用的当属 PAP 法（过氧化物酶-抗过氧化物酶）、ABC 法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物） SP 、SP 、即用型二步法（聚合物链接）等。法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）
3、免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌 A 蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。
4、免疫铁蛋白法 5、放射免疫自显影法
标本
1、组织标本：石蜡切片石蜡切片（病理切片和组织芯片）、冰冻切片石蜡切片 2、细胞标本：组织印片、细胞爬片、细胞涂片
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免疫组化操作方法原理步骤以及常见问题处理大总结

免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较

免疫组化染色机种类介绍

自动化免疫组化染色机种类介绍免疫组化的传统技术正在受到新的快速高敏的新技术的挑战，一方面是新试剂的推出，如SP、EPOS、Envision和CSA，另一方面是自动免疫组化染色机的问世。免疫组化技术正进入一个新的发展阶段。从先进国家免疫组化规范化或标准化的进程来看，自动免疫组化染色机的应用几乎贯穿始终，早在20世纪末已得到极大的普及，然而国内的自动免疫组化染色机应用则在近几年才得以发展。浙江省肿瘤医院作为省内较早应用的少数单位之一，在自动化免疫组化染色的使用和质量控制方面获得些许经验，在此做简单的介绍交流。自动化免疫组化染色技术是由电脑控制整个染色程序的免疫组化染色机，具有自动加抗体、自动冲洗、显色、复染及预处理等功能，有全自动和半自动、封闭型和半开放型之分。根据不同仪器大小，每次染色20～240张切片不等，整个染色程序约需60～90min左右，它不仅可以应用于免疫组化染色，某些仪器还可应用于组织化学染色、特殊染色及原位分子杂交染色。目前较为理想的仪器为Roche公司、Lecia公司及Thermo公司的产品等。下面对不同机型的自动免疫组化染色机的特点分述如下。 Thermo公司的LabVision Autostainer 该机型属开放式半自动系统类型，用户可任意编辑所需试剂及模板，内建试剂兼容性检测。切片特殊染色模板可任意调整试剂量、孵育时间。体系开放保证可适就性强，即可同时运行不同检测试剂盒和不同的染色程序及不同厂商生的的一抗。使用单一探头，探头材料为特氟伦包被不锈钢，检测探头交叉污染残留物 <10-6 ，且分样精度>99%(总体积)。联合使用配套的抗原修复仪，可实现脱蜡与抗原修复一步完成。DAKO公司的 Autostainer系LabVision Autostainer贴牌产品，配合使用DAKO的Flex检测系统可获得极为敏感的免疫组化结果。早期的Biogenex i6000TM全自动染色仪亦属该类型产品，不同的是其加样头采用标准的Tip头加样，完全避免交叉污染的风险。 Lecia公司的Bond-Max

免疫组化试剂的正确使用

免疫组化试剂的选择一抗的正确选择与使用 1. 首选单克隆抗体：单克隆抗体具有高特异性、高亲和力、交叉反应少等特点，避免与细胞或组织蛋白的非特异性结合，减少染色背景。 2. 多克隆抗体：最好是经样本来源种属正常血清吸附过，尽可能的减少非特异性着色背景。加一抗前，用封闭液（可以是BSA或二抗来源的正常动物血清）充分封闭，以阻断非特异性结合位点。 3. 跨膜分子的抗体选择：要注意免疫原是整个蛋白分子或是胞外区、胞内区。对于胞内区抗体，染色时需要使用穿孔剂，而胞外区抗体不必使用。 4. 正确使用：一般供应商都会提供稀释范围和使用方法。但由于供应商质捡所用组织不同，实验条件和操作人为误差，常常需要客户自己再重新选择比例。一般从供应商提供稀释比例的1/10稀释度始，作倍比稀释。 5. 保存：一抗体一般为液体二抗的正确选择与使用 1. 种属来源要匹配：根据所用一抗选定二抗。一般来说，如果一抗是小鼠原性，二抗应选择兔/山羊或其它种属抗小鼠的抗体。目前，美国Vector公司和Zymed公司都有开发的用小鼠抗体检测小鼠组织的试剂盒，即一抗来源于小鼠，该试剂盒采用了通用非特异性封闭液和专利封闭内源性小鼠Ig的封闭液，可以得到清晰的染色背景。 2. 注意抗体同种型和亚型：确定一抗同种型和亚型后，可以选择抗一抗来源种属广谱Ig或针对一抗亚型的二抗。如一抗是小鼠IgG1, 可以选用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗。 3. 正确使用：也需要重新选择稀释比例。一般从供应商提供稀释比例的1/10稀释度始，作5倍比稀释。检测系统的正确选择

检测系统一般有酶法、荧光法和亲和放大系统：亲和素－生物素放大系统很常用，但由于内源性亲和素和生物素广泛存在，经典的SP、SRABC和LSAB法等常出现背景着色，尤其是内源性生物素丰富的肝、肾染色时很难避免。Zymed公司研发的非生物素放大试剂盒NAB和 Picture Plus试剂盒，采用多聚氨基酸支架偶联多个抗体和酶、荧光素等信号检测分子起到良好的放大效果，具有高敏、背景清晰等优点。对于啮齿动物组织的免疫化学检测：由于啮齿动物非特异性结合强，最好选用美国Vector公司和Zymed公司都有开发的用小鼠抗体检测小鼠组织的试剂盒。设立阳性对照和阴性对照实验设立对照是证明实验系统正确性的标尺，为查找实验原因提供重要线索。 1. 阳性对照的选择：阳性对照是证明整个实验体系正确的重要依据，主要涉及所用缓冲液、稀释液、二抗和检测系统等因素。尤其在结果出现无信号时，为查找原因的提供重要线索。具体选择方法请参阅抗原修复有关章节。 2. 阴性对照的选择：有两种：一种是自身对照，指测试组织本身非抗原表达部位。一种是外部对照，指已证实不表达检测抗原的组织。设置阴性对照表明检测抗原特异性和非抗原表达部位的非特异性结合。一般自身对照比较常用，在同一张测试片上作，减少了操作误差，对照更可靠。试剂保存抗体试剂保存：抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。抗体浓度越高（浓度大于10mg/ml），越稳定，易保存；浓度低时，应加0.1%-1.5%的牛血清白蛋白作保护剂；必要时需要加0.01-0.15％NaN3防腐剂以延长保存时间。酶标记抗体在应用防腐剂时要注意不能用NaN3，否则会抑制酶的活性。-抗体浓缩液应在-20℃保存，可以长达两年；用时取出，室温融解，如一次或短时间用不完，应进行小量分装，－20℃保存，避免反复冻融；融解后抗体于2－8℃可以保存一个月。（请参阅免疫组化基础知识有关章节。）试剂盒保存：完整试剂盒未打开前于2－8℃可以保存一年，打开后，应根据说明书要求对具体试剂进行适当存放。一般标准品应放置－20℃，用不完的抗体试剂应小量分装－20℃保存。

常用免疫组化试剂(类别)介绍

常用免疫组化试剂（类别）介绍一、用于鉴别诊断(一)上皮源性: １、细胞角蛋白/ ｃytokeraｔin、ＣK: 目前,商品化得细胞角蛋白有２0多种，不同得分子量代表不同类型得上皮标志。通常将CＫ分为两大类型:Ⅰ型(低分子量);Ⅱ型（高分子量）.理论上讲,大多数单层上皮表达低分子量得CK；复层上皮多表达高分子量得CK;移形上皮（膀胱)与假复层上皮（呼吸道得被覆上皮）既表达低分子量得ＣK,也表达高分子量得CＫ。在癌组织中，低分子量得ＣK多在腺癌中表达，高分子量得CK多在鳞癌中表达.目前为止,未发现任何一种上皮只含有一种CK，某些上皮可含２－１０种不同分子量得ＣK。因此，目前试图应用单一得CK免疫表型来确定某种特定得上皮性肿瘤就是不可能得。同样,应用CK来区别腺癌、类癌与间皮瘤也就是困难得。因此,ＣK得免疫组化结果判断就是一个较为复杂得问题,在应用这类标记物作为腺癌与鳞癌得鉴别应特别注意。有必要时，应联合用多种CＫ加以综合判断。CK得阳性表达还包括有间变癌、双向分化得滑膜肉瘤、脊索瘤、胚胎癌、间皮瘤、上皮样肉瘤、胸腺瘤等. CＫ得阴性表达有:副节瘤单向分化得滑膜肉瘤、软骨(肉)瘤、精原细胞瘤、淋巴瘤、脑膜瘤、恶黑、恶纤组、软组织肉瘤(除特殊类型外）.在判断CK免疫组化结果时应注意几点：(1）CK得单克隆抗体优于多克隆抗体;(2)CK常出现斑点状得假阳性反

应,应注意识别; （３）虽然大多数CK多在胞浆表达,但CK17多在胞核表达;(4）绝大多数ＣK抗体需用胰酶消化,可增加阳性表达率与染色强度;(5）部分非上皮性肿瘤(平滑肌肉瘤）可见有CK表达，在诊断时应注意;（6)淋巴结、扁桃体与脾组织中得滤泡外得网织细胞含有CＫ8与１8以及desmiｎ,在判断淋巴结转移癌与肌源性肉瘤转移时应根据组织学综合判断. ２、上皮膜抗原（epｉｔhelialmeｍbraneantigen／ＥMA)：EＭA就是上皮细胞分泌得一种乳脂小球膜糖蛋白,广泛存在于人体各种上皮细胞中(也存在于间皮细胞、浆细胞、组织细胞与T细胞淋巴瘤中），其分布与角蛋白相似,但对内脏腺上皮优于细胞角蛋白，尤其就是分化差得癌EMA有时可呈强阳性表达。EMＡ可作为上皮源性肿瘤得常用标记物。ＥMA阳性表达得肿瘤有鳞癌、胃肠道腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、间皮瘤、滑膜肉瘤、甲状腺乳头状癌、上皮样肉瘤等. 在判断EMA免疫组化结果时应注意几点: (1）EMA虽然就是上皮细胞非常敏感得标记,但一些非上皮性肿瘤(如浆细胞、组织细胞与Ｔ细胞淋巴瘤)也可阳性表达。因此在癌与其她间叶性肿瘤鉴别时不能作为唯一得参考标记; (２)EMA对内脏上皮源性肿瘤得敏感性优于体表上皮源性肿瘤,因此在腺癌中得表达明显高于鳞癌。3、桥粒蛋白:就是上皮细胞特有得结构,就是一种广谱得上皮性标记.鳞癌、腺癌、移形细胞癌、未分化癌与

常用吸入制剂品种介绍

常用吸入制剂品种介绍分类通用名商品名规格图片特点用法用量其他 β2受体激动剂沙丁胺醇万托林 100μg ×200喷短效，是急性发作的首选药。常用量:1~2喷，必要时 q4～8h. 极量:8喷/日持续时间：4~5h 注意事项：易出现恶心，头痛、头晕、心悸、手指震颤。高血压和甲亢患者慎用，长期用药可形成耐药性，药效降低。特布他林喘康速 0.25mg ×200喷短效，作用与沙丁胺醇相当。常用量:1~2喷，必要时 6喷极量:24喷/日持续时间：4~7h 福莫特罗奥克斯 (都宝) 4.5μ ×60吸长效，作用较沙丁胺醇强且较持久，用于维持治疗和预防发作，适于夜间哮喘发作。但糖尿病患者慎用。常用量:1~2喷，1~2次/ 日2~4喷，1~2次/日极量:8喷/日沙美特罗+ 丙酸氟替卡松舒利迭 50μ g/250μg× 60吸长效β－激动剂/激素，不适用急性哮喘发作的患者。作用缓和且持久。不能口服。沙美特罗+丙酸氟替卡松（舒利迭准纳器）联合用药可相互增加疗效。常用量:1吸，bid 吸入型糖皮质激素丙酸倍氯米松必可酮 250μg ×80喷本药因疗效慢，不宜用于哮喘急性发作。可作为治疗哮喘发作的间歇期及慢性哮喘的首选药。常用量:轻度：1~2喷/ 日;中度：2~4喷/日;重度： 4~8喷/日极量：8喷/日T1/2: 5h 注意事项：为防止呼吸道真菌或病毒感染及产生声音嘶哑，每次用药后，应及时漱口，不使药液残留于咽喉部。特点：以上三种药是局部作用强，吸收作用微弱的肾上腺皮质激素。伯克纳鼻喷剂 50μg ×80喷常用量: 2喷/鼻孔，2次 /日 1喷/鼻孔， 3~4次/日极量: 8喷/日布地奈德普米克 (都宝) 0.1mg ×200喷局部作用是丙酸倍氯米松的 1.6-3倍,几乎无全身作用,对肾上腺素抑制作用更轻。常用量:吸入激素治疗:2~4吸,qd ，1~4吸，bid，慢性阻塞性肺病:4吸，bid, 极量:8吸，bid 宝益苏 0.2mg ×100喷同普米克(都宝) 丙酸氟替卡松辅舒良鼻喷雾剂 50μg ×120喷早晨用药好，丙酸氟替卡松是生物活性更强的吸入剂。常用量:2喷/鼻孔，每早

常用免疫组化

一、泌尿与男性生殖系统肿瘤前列腺癌：CK、P63、34E12、PSA、P504S（9AMAC）、AR 前列腺增生／腺瘤：CK、P63、34BE12、P504S 肾癌：CK、EMA、Inhibin、Melan－A、CK7、Vimentin、PAX2、CD10 肾母细胞瘤：WT－1、CK、P53、Ki－67 膀胱尿路上皮癌：CK7、CK20、P53、Ki－67、P63 精原细胞瘤：CK、PLAP、CD117、LCA、OCT3／4 二、淋巴造血系统肿瘤胸腺肿瘤：CK、CD3、CD5、CD20、TdT、EBV＊霍奇金淋巴瘤：CD30、CD15、ALK－1、EMA、CD3、CD20、EBV＊、PAX －5 非霍奇金淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、TdT、CD43 间变大细胞淋巴瘤：CD30、CD15、ALK－1、EMA、CD3、CD20、EBV＊弥漫性大B细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD43、CD30、Ki－67 小B细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD10、CD20、CD23、CD79α、CyclinD1、TdT T细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD43、CD45RO、CD79α、TdT、TiA－1、Perforin 套细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD20、CD79α、CyclinD1、TdT、Bcl－2、Ki－67 T／NK细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD56、TiA－1、Perforin、粒酶B 淋巴上皮病变／癌：CK、EMA、S－100、Ki－67、P53、EBV＊、P63、CD30、CD20