中药制剂分析复习资料

中药制剂分析复习资料

中药制剂分析的特点：一、以中医药理论为指导，评价中药制剂质量。二、中药制剂化学成分的多样性和复杂性。三、中药制剂原料药材质量差别。1.原料药材的品种、规格、产地、采收季节、加工方法的影响 2.炮制方法的影响四、中药制剂工艺及辅料的影响。五、中药制剂杂质来源的多途径性。六、中药制剂有效成分的非单一性。

中药制剂分析工作的基本程序：取样:基本原则：应具有代表性、真实性、科学性。一式三份（供检验、复检、备查），贵重药可酌情少取。制备供试品、目的：（1）将样品中被测成分转化为待测状态（2）消除影响、干扰成分（3）浓缩、富集待测成分

提取方法:（1）溶剂提取法遵循“相似相容”原则. 选择溶剂要求：①对待测成分溶解度大、干扰成分溶解度小②与中药中待测成分不反应③易得、具有安全性。溶剂提取法中常用的提取方式①冷浸法②连续回流法③超声波提取法（2）水蒸气蒸馏法如挥发油、小分子生物碱（3）超临界流体萃取法原理：超临界流体兼有气、液两重性的特点，其密度接近液体而粘度和扩散系数又与气体相似。因而它不仅具有与液体溶剂相当的萃取能力，而且具有优良的传质效果（4）升华法挥发油、游离羟基蒽醌（如大黄）

鉴别、1）定性鉴别除单方制剂外，复方一般选择其中主药、辅药做为主要对象，其次应鉴别毒剧及贵重药材。方法有显微鉴别（对含原药粉的制剂）；理化鉴别（应以专属性强灵敏度高的方法、简便结果准确为原则且要空白对照）；薄层色谱法应用最多

净化方法：液液萃取法、色谱法（最常用）、沉淀法、盐析法、固相微萃取

中药制剂的检查项目可分为制剂通则检查、一般杂质检查、特殊杂质检查及微生物限度检查。检查、含量测定、书写检查报告

第二章

中药制剂的定性方法主要有性状定性鉴别、显微定性鉴别和理化定性鉴别.理化鉴别常用的方法有化学反应法、显微化学法、光谱法、色谱法.指纹图谱、特征图谱鉴别

显微鉴别是指利用显微镜来观察药材的组织构造、细胞形状以及内含物等微观特征，以此鉴别药材品种和质量的方法。中药制剂的显微鉴别适用于仍保留了原药味显微特征的成药，可利用成药中原药粉末的组织、细胞或内含物等特征来鉴别处方组成的真实性。

薄层色谱法是中药制剂鉴别最常用的方法。对照品对照，阴阳对照法，采用对照药材和对照品同时对照

阳性对照溶液的制备：取制剂处方中欲鉴定的某单味原药材，按制剂的制法处理后，再以与制备样品供试液相同的比例、方法、条件制成溶液。

阴性对照溶液的制备：将制剂处方中减去欲鉴定药味后的其它所有各味药材，按制剂方法处理后，再以制备样品供试液相同的比例、方法、条件制成溶液。

影响薄层色谱分析的主要因素：1.样品的预处理2.展开剂的优选3.吸附剂的活性与相对湿度的影响4.温度的影响

气相色谱法是供试品呈现的与对照品保留时间相同的色谱峰，从而对样品作出鉴别。

高效液相色谱法在相同的色谱条件下比较样品和对照品色谱峰的保留时间是否一致，从而对被检成分的存在情况作出判断。

指纹图谱:指中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段得到的能够标识该中药特性的共有峰的图谱。

中药指纹图谱的建立:研究的基本程序:包括样品收集、方法建立、数据分析、样品评价和方法检验等。样品采集要求一定数量以保证供试品的代表性和均一性；方法建立指选择的方法及在建立指纹图谱时要进行方法学考察；数据分析是对研究过程中获得的数据进行处理，找出共同和不同点确定评价指标；样品评价是指按确定的指标对样品进行的品质评价；方法检

验指在方法确定后的一段时间内对更多未知样品进行检验进一步考察方法的可行性与实用性。

中药指纹图谱分类:中药材、中药饮片、配伍颗粒、中成药制剂及半成品指纹图谱。中药化学指纹图谱。中药生物学指纹图谱。

中药指纹图谱建立原则:系统性，特征性，稳定性。

第三章

1．中药制剂中杂质的来源：一是由中药材原料中引入，而是在生产制备过程中引入，三是贮存过程中受外界条件的影响而使中药制剂的理化性质改变而产生。

2.中药制剂的杂质分为一般杂质和特殊杂质，一般杂质有酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐等。.药物中所含杂质的最大允许量即为杂质限量，用百分比或百万分之几（ppm）表示。

重金属在弱酸性条件下能与硫代乙酰胺作用而显色，在碱性条件下能与硫化钠作用显色。注意：硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳ph值是3.5，最佳显色时间为2分钟。

1.硫代乙酰胺法：适用于供试品可不经有机破坏，溶于水，稀酸和乙醇的药物重金属检查。原理：在弱酸性溶液中，硫代乙酰胺发生水解，产生硫化氢，可与重金属离子作用，生成有色硫化物的均匀沉淀。若供试液带有颜色，可在甲管与丙管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之均与乙管一致。供试品中含微量高铁盐，在弱酸溶液中会氧化硫化氢而析出流加入抗坏血酸和盐酸羟胺还原为二价铁

2.样品炽灼后的硫代乙酰胺法，适用于含芳环，杂环以及难溶于水，稀酸和乙醇的有机药物重金属检查。原理：重金属可能与芳环或杂环形成较牢固的价健，供试品先炽灼破坏，再加盐酸转化为易溶于水的氯化物。炽灼温度应该控制在500~600度，超过700度，重金属会有损失。

3.硫化钠法：适用于供试品能溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物重金属检查。原理:在碱性条件下，硫化钠与重金属离子作用生成不溶性硫化物。

砷盐检查法：.古蔡氏法的原理：金属锌和酸作用，产生新生态的氢，与供试品中微量砷盐反应，生成挥发性砷化氢，砷化氢与溴化汞试纸作用生成黄色至棕色砷斑。五价砷在酸性溶液中能被金属锌还原为砷化氢，但生成速度较三价砷慢，在反应中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价砷还原为三价砷。供试品和锌粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生的硫化氢气体会干扰检查，用醋酸铅棉花可吸收除去。二乙基二硫代甲酸银法（Ag-DDC法）原理利用金属锌与酸作用产生新生态氢与药品中微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢，用二乙基二硫代氨基甲酸银溶液吸收，还原生成红色胶态银，与同条件下一定量标准砷溶液所产生的红色胶态银在510nm测吸光度，进行比较判定含砷限量。

铁盐检查法：硫氰酸盐法。原理：三价铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红色可溶性的硫氰酸性铁配离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色，判断供试品中铁盐是否符合限量规定。

干燥失重主要检查药物中的水分，结晶水，其他挥发性的物质。（1）常压恒温干燥法：适用于制剂中组分受热较稳定的情况（2）干燥剂干燥法：适用于受热易分解或挥发的供试品。常用干燥剂有：无水氯化钙、硅胶或五氧化二磷、硫酸。（3）减压干燥法：适用于熔点低，受热不稳定及较难驱除水分的供试品，因为在减压条件下，可降低干燥温度及缩短干燥时间。水分测定法用于测定中药固体制剂或中药材中的水分含量。检查方法：烘干法，甲苯法，减压干燥法，气相色谱法。

炽灼残渣检查法：有机药物经炽灼炭化，再加硫酸湿润，加热使硫酸蒸汽除尽后，于高温（700~800）炽灼至完全灰化，使有机质破坏分解变成挥发性物质逸出，残留的非挥发性无机杂质成为硫酸盐。其目的是用于控制有机药物或挥发性无机药物中非挥发性无机杂质。中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，则其细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得

的灰分为“生理灰分”。总灰分除生理灰分外还包括外来参杂物（泥土，沙石）。温度为500~600中药经高温炽灼得到的总灰分加盐酸处理，得到不容于酸的灰分，称酸不溶性灰分。

农残：电子捕获检测器，氢焰离子化检测器，氮磷检测器或质谱检测器

黄曲霉毒素的检查：黄曲霉毒素是一类结构相似的化合物，其基本结构都有二呋喃和香豆素。高效液相色谱：黄曲霉毒素都具有紫外吸收，在紫外照射下能产生荧光，但荧光较弱，常通过衍生使荧光增强

第四章

薄层扫描吸收法：适用于可见、紫外有吸收的物质，分别以钨灯、氘灯为光源。方法学考察：工作曲线、精密度、准确度、分离度

气相色谱法：（1）理论塔板数，分离度，重复性和拖尾因子（2）GC实验条件的选择：固定相的选择,柱温的选择，载气的选择，汽化室温度，检测室温度，进样量

高效液相色谱的实验条件的选择1.反相键合相色谱：分离分析非极性与中等极性的化合物；非极性固定相：C18（ODS）柱；极性溶剂作为流动相：一般有甲醇、乙腈、水2.正相键合相色谱：分离分析溶于有机溶剂的极性和中等极性的分子型物质。3.流动相的选择 4.洗脱方式

几种常用的HPLC检测器

1.紫外检测器：因其高灵敏度和稳定性，在HPLC中应用最广泛。但它所能检测的物质必须具有吸收紫外光的生色团，而相应的流动相在检测波长下则应当是无紫外吸收的，这一特性大大限制了其能检测的物质范围和一些良好溶剂的使用。

2.荧光检测器：只适用于产生荧光或其衍生物能发荧光的物质

3.蒸发光散射检测器ELSD：糖类、皂苷类、生物碱、萜类内酯、甾类等

4.电化学检测器

5.示差折光检测器

6.化学发光检测器

含量测定方法选择原则：据测定对象进行选择2.据被测成分性质选择3.视被测对象是无机离子还是有机成分而定4.视被测定物质分子量大小而定5.视被测定物质的含量高低而定6.当测定成分较为复杂时，可以采用联用技术，以提高测定分离度和测定效率。验证：1.准确度：是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率表示2.精密度：在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度3.专属性：指在其他成分可能存在下，采用的方法能正确的测定出被测成分的特性4.检测限：指供试品中被测物能被测出的最低量5.定量限：供试品中被测成分被定量测定的最低量6.线性：指在设计的范围内，测定结果与供试品中被测物浓度直接呈正比关系的程度7.范围：指能达到一定精密度，准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间8.耐用性：在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据第五章

生物碱类成分分析:采用沉淀法薄层色谱法气相色谱法及高效液相法。薄层色谱法中一般采用硅胶为吸附剂，硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上成盐，使Rf值很小或拖尾形成复斑，因此在硅胶吸附薄层色谱中常用碱性系统或在碱性环境下展开。展开剂一般以氯仿为基本展开溶剂，根据色谱结果可加入甲醇、丙酮等极性大的溶剂，或加入环己烷等极性小的溶剂

生物碱含量测定1.总生物碱的含量测定①化学分析法：酸碱滴定法②比色法A.酸性染料比色法B.雷士盐比色法（2）单体生物碱的含量测定：博层色谱扫描和高效液相色谱

.黄铜鉴别（显色反应）a盐酸镁粉反应:加入后溶液出现红色-紫红色。b了金属盐类的配合反映:黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或邻二酚羟基可与Al3＋，Zr4＋，Pb2＋，Sr2＋等形成配合物，这些配合物有产生荧光或颜色加深的特点，其中铝盐和锆盐能与大多数黄酮类化合物产生黄绿色荧光（喷洒硝酸铝的原因）。薄层色谱法及高效液相色谱法

总黄酮：紫外分光光度法，三氯化铝-醋酸钾比色法，高效液相色谱法。单体黄酮：薄层色

谱扫描法及高效液相色谱法

三萜皂苷：总皂苷测定：比色法、重量法。皂苷元的测定：可用总皂苷加酸水解或将样品先水解再用有机溶剂提取皂苷元。测定有薄层色谱法、高效液相色谱法、比色法。单体皂苷的测定：有薄层色谱法、高效液相色谱法

醌类成分分析:。1.化学显色反应：在碱性条件下羟基蒽醌以及具有游离酚羟基的蒽醌苷均可发生显色反应，如遇碱性溶液多呈橙色、红色、紫红色（牛黄解毒片中大黄鉴别）或蓝色，遇醋酸镁甲醇溶液呈红色，可用于该类成分鉴别(2)薄层色谱(3)升华法：游离的蒽醌及其他醌类衍生物可用升华法得到升华物，可见光下观察或加碱液显色。游离蒽醌HPLC。结合型蒽醌:HPLC和比色法。总蒽醌：HPLC和比色法

挥发性成分分析:挥发性成分是中药中一类具有芳香气并易挥发的成分，化学成分复杂，包括挥发油类成分和其他分子量较小易挥发的化合物。根据制剂中所含挥发油各组分结构或功能基的化学性质进行鉴别，如含有双键萜类成分可与溴加成反应使溴水褪色，不饱和萜类成分可被高锰酸钾氧化使高锰酸钾褪色，大多数挥发油成分能在浓硫酸存在下与香草醛形成各种颜色化合物。总挥发油的测定常采用挥发油测定器用蒸馏法测定。

第六章

相对密度定义:在相对温度20℃、压力条件下，某物质的密度与水的密度之比。

总固体含量:指在一定温度下将水或溶液烘干至恒重后残留在器皿中的物质。

.融变时限：栓剂中释放的情况，油脂性基质通过两相萃取进入体液来发挥作用

崩解时限：药物在规定条件下从片剂胶囊剂或里释放的情况

溶出度：反映药物溶解于体液的情况

生物利用度:指制剂中药物被吸收进入血液的速率和程度。

缀合物：中药制剂中的待测成分或其代谢物与机体的内源性物质结合生成的产物，结合疏松，结合物结合紧密

特异性系指在生物样品中所含内源性和外源性物质及相应代谢物质同时存在时，所用方法能准确测定待测物质的能力，通常表示所检测的相应信号应属于待测成分所特有。专属性：只与一种信号有关，选择性：将俩种或多种物质区分开来

定量限：是指测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度，通常以标曲上的最低浓度点表示。检测限：试样中被测物能被检出的最低浓度或量

相对回收率：方法回收率。绝对回收率又称提取回收率，主要考察生物样品在制备过程中造成的待测成分的损失

重量差异：药物制剂的重要质量指标。装量差异：药物制剂的均匀性检测指标之一，常见于胶囊，粉针等剂型。单剂量或多剂量包装。最低装量：适用于固体，半固体和液体制剂

2.半固体中药制剂质量检查项目

流浸膏即至少含20%乙醇

糖浆剂含蔗糖量一般不低于45%，煎膏剂中加炼蜜或糖（或转化糖）的量一般不超过清膏量的3倍

糖浆剂的pH值有时与制剂本身的稳定性及防腐剂的抑菌能力关系密切

单剂量灌装的糖浆剂必须作装量差异检查，多剂量灌装的应作最低装量差异

5、蜜丸和浓缩蜜丸中含水分不得超过15%，水蜜丸和浓缩水蜜丸不得超过12%，水丸、糊丸和浓缩水丸不得超过9.0%，蜡丸不检查水分

6、蜡丸检查崩解时限

9、颗粒剂粒度不能通过1号筛与能通过5号筛的颗粒与粉末总和不得超过15%

10、颗粒剂的含水量除规定外，不得超过6.0%

11、散剂的含水量不得超过9.0%

12、散剂的粒度除规定外，通过6号筛的粉末重量，不得少于95%

13、栓剂比其他的多检查了融变时限

14、中药注射剂一般要求检查：性状、装量差异或装量检查、渗透压摩尔溶度检查、可见异物检查、不溶微粒检查、无菌检查、pH值检查、色泽检查、水分检查、重金属检查、砷盐检查。有关物质检查：蛋白质检查、鞣质检查、树脂检查、草酸盐检查、钾离子检查。

安全性检查：热原或细菌内毒素检查、异常毒性检查、过敏反应检查、溶血与凝血检查、刺激性物质检查。

1..药物的代谢反应可分为一相和二相代谢转化，两相反映均受相应的药物代谢酶催化。一相代谢是指药物在以细胞色素p450为核心的混合功能氧化酶等催化下发生氧化还原水解等反应，使药物分子结构增加了极性基团水溶性增强，药物的活性发生改变。二相代谢是指药物或经一相反应后的代谢物在尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶的催化下，与葡萄糖醛酸，硫酸盐等结合，使药物分子的极性进一步增大，有利于从尿中排泄，结合过程通常使药物灭活。（氧化还原水解反应称为药物代谢的第一相反应，结合反应称为药物代谢的第二相反应。）去除蛋白质:a加入与水相混溶的有机溶剂，如乙腈甲醇乙醇丙醇丙酮及四氢呋喃，b加入中性盐，中性盐能将与蛋白质结合的水置换出来从而使蛋白质脱水沉淀，常用的中性盐有饱和硫酸盐、镁盐、磷酸盐及枸橼酸，c加入强酸，当ph低于蛋白质的等电点时蛋白质以阳离

子形式存在，加入强酸后可与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉淀，常用强酸有10%三氯醋酸，6%高氯酸，d加入含锌盐及铜盐的沉淀剂，溶液ph值大于蛋白质等电点时蛋白质以阴离子形式存在，金属阳离子可与蛋白质中带负电的羧基形成不溶性盐而沉淀，常用金属沉淀剂有CuSO4-Na2WO4，e超滤法:以多孔性半透膜作为分离介质的一种膜分离技术，f酶水解法，在测定一些酸不稳定及与蛋白结合牢固的成分时可用酶解法，常用酶是枯草菌溶素。2.分析方法的设计依据：1.文献总结2.待测药物的理化性质及在体内存在情况3.生物样品的类型4.待测中药制剂化学成分的预期浓度范围5.分析测定的目的及要求。分析方法的选择：生物样品中待测物的预期浓度范围。分析方法的建立：1.以纯品进行测定，取待测药物或特定活性的代谢产物纯品适量，按照拟定的分析方法进行测定，根据分析结构，确定最是测定浓度，灵敏度，最佳的分析条件2.空白溶剂实验：取待测药物的非生物基质溶液，按拟定的分析方法进行衍生化反应，纯化等样品预处理，并测定空白值的响应信号3.空白生物基质实验：主要用来考查生物基质中内源性物质对待测成分的干扰4.模拟生物样品实验，取空白生物基质，加入待测药物制成模拟生物样品，进行方法学考查5.实际生物样品的测定，考查代谢产物对药物，内标物的干扰。分析方法的评价:a特异性，又称为专属性和专一性，特异性指在生物样品中所含内源性和外源性物质及相应代谢物质同时存在时，所用的方法能准确测定待测物质的能力，通常表示所检测的相应信号应属于待测成分所特有。b标准曲线与线性范围:标准曲线指生物样品中所测定药物的浓度与响应值的相关性，通常用回归分析方法获得标准曲线，提供回归方程和相关系数。标准曲线最高与最低浓度的区间为线性范围。c准确度:指用该方法测得的生物样品中待测药物的浓度与其真实浓度的接近程度。d相对回收率（方法回收率）RR从生物样本基质中回收得到目标物质的影响值除以加入到生物基质中已知量的标准品生产的影响值即为分析物的相对回收率。e精密度:指每一次测定结果与多次测定的平均值的偏离程度，一般用标准偏差SD或相对标准偏差RSD表示。f定量限LOQ:指测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度，通常以标准曲线上最低浓度点表示。检测限LOD指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。g稳定性是储存条件、药物的化学性质、空白生物样品和容器系统的函数。h提取回收率又称绝对回收率主要是考察生物样品在制备过程中造成的待测成分的损失。

3..药品质量标准是对药品的质量规格及检测方法所作的技术规定，是药品生产、供应、使用、检验和管理部门必须共同遵守的法定依据，以确保用药的安全有效。中药制剂的质量标准是根据药品质量标准的要求所制定的符合中药特点控制中药质量的技术规范。

药品质量标准的制定必须坚持质量第一，充分体现科学使用规范的原则。

质量标准的特性：权威性、科学性、进展性

1.影响中药制剂质量稳定性的因素（1）生物因素（2）物理因素（3）化学因素

2. 考察方法新药稳定性试验，至少应对3批以上的样品进行考察1.比较试验法：实验中，固定其他因素，仅改变其中1个因素观察该因素对制剂稳定性的影响；然后逐个改变其他因素进行试验，以确定最佳条件。制剂处方筛选和制剂工艺研究 2.留样观察方法：将进行观察的样品，按上表要求，根据不同剂型的考核项目、考核时间，并按上述稳定性研究的技术要求，在正常室温下或分别置于3~5oC、20~25oC、33~37oC放置观察

3.加速试验法注意：①确定稳定性考察内容②建立能反映制剂稳定性的检测方法③选择有效的稳定性试验指标

含量测定:气相色谱法的系统适用性试验:按药典要求制剂分析时需按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整以达到规定要求，或规定在分析状态下色谱柱的最小理论塔板数，分离度，重复性和拖尾因子。

各项参数:a色谱柱的理论塔板数n在选定条件下注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间和半峰宽，按公式计算理

论塔板数，测得理论塔板数低于各品种项下规定的最小理论塔板数，应改变色谱柱的某些条件使理论塔板数达到要求，n一般不低于10000。b分离度R定量分析时为了便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度，R＞＝1.5。c重复性，取各品种项下对照溶液连续进样5次除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2%。d拖尾因子T为保证测量精度应检查待测成分峰的拖尾因子T是否符合各品种项下规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求，T应在0.95-1.05之间。