检验医学SOP文件4--免疫室作业指导书
免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01~52
第A版
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生效日期：2015年4月8日ABCD人民医院检验科
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血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。
2.标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹
2.2 标本种类：血清或血浆
2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：96Test/Kit
6.4试剂盒组成：
HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称：自动酶标仪
7.2仪器厂家：Rayto
7.3仪器型号：RT-2100
8.操作步骤
8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl于相应孔中。
8.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50μl，轻拍混匀。
8.6温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8显色：每孔加入底物A、B各50μl，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9终止：每孔加终止液50μl，混匀。
8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析
9.1临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBsAg阳性
样品OD值S/C.O<1者为HBsAg阴性
10.质量控制
每次试验用含2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：阴性
12.临床意义：在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。
13.操作性能：灵敏度为ng/ml，特异性高。
14.方法局限性
14.1. 对于病毒复制较强的病人，病毒量较大，出现HOOK现象，造成假阴性，须将病人血清进行稀释后再重新试验。
14.2.如出现跳孔现象可能造成假阳性。
14.3. 样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
15.注意事项
15.1. 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2. 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3. 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4. 所有样品都应按传染源处理。
15.5. 封口膜使用说明
15.5.1. 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2. 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6. 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）410-412页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。
2.标本采集
2.1采集前病人准备：受检者应空腹
2.2标本种类：血清或血浆
2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒
6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit
6.4 试剂盒组成：
HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备
7.1 仪器名称：自动酶标仪
7.2 仪器厂家：Rayto
7.3 仪器型号：RT-2100
8.操作步骤
8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl于相应孔中。
8.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50μl，轻拍混匀。
8.6温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8 显色：每孔加入底物A、B各50μl，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9 终止：每孔加终止液50μl，混匀。
8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析
9.1临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBsAb阳性
样品OD值S/C.O<1者为HbsAb阴性
10.质量控制
每次试验用含30mIu/mlHBsAb的质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围
阴性或阳性
12. 临床意义
HBsAb阳性表明存在HBV的保护性抗体。
13. 操作性能：灵敏度高，特异性好。
14. 方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。
15. 注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；
可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）412页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒e抗原检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）及TMB
等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗原（HBeAg）。
2.标本采集
2.1采集前病人准备：受检者应空腹
2.2标本种类：血清或血浆
2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血
清备用。
3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免
反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称：乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：96Test/Kit
6.4试剂盒组成：
HBeAg微孔板，HBeAg酶标记抗原，HBeAg阳性对照血清，HBeAg阴性对照血清，浓
缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称：自动酶标仪
7.2仪器厂家：Rayto
7.3仪器型号：RT-2100C
8.操作步骤
8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自
封袋封存。
8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或
去离子水按1：19稀释后使用。
8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl于相应孔中。
8.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50μl，轻拍混匀。
8.6温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8显色：每孔加入底物A、B各50μl，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9终止：每孔加终止液50μl，混匀。
8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记
录结果）。
9.结果判断与分析
9.1临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBeAg阳性
样品OD值S/C.O<1者为HBeAg阴性
10.质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAg质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：阴性或阳性
12.临床意义：HBeAg阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志；持续阳性则揭示转为慢性。
13.操作性能：灵敏度高，特异性好。
14.方法局限性：样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
15.注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存
以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无
误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒e抗体检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）、中和抗原（HBeAg）及TMB等其它试剂，采用竞争法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗体（HBeAb）。
2.标本采集
2.1采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2标本种类：血清或血浆。
2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：2-8℃保存不应超过24小时，-20℃不应超过3个月，
-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称：乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：96Test/Kit
6.4试剂盒组成：
HBeAb微孔板，HBeAb酶标记抗原，中和抗原，HBeAb阳性对照血清，HBeAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称：自动酶标仪
7.2仪器厂家：Rayto
7.3仪器型号：RT-2100C
8.操作步骤
8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl于相应孔中。
8.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50μl，轻拍混匀。
8.6中和：分别在每孔中加入中和抗原（HBeAg）50μl，轻拍混匀。
8.7温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.8洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.9显色：每孔加入底物A、B各50μl，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.10终止：每孔加终止液50μl，混匀。
8.11测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析
9.1临界值（C.O.）的计算：
待测样品为原倍血清时，临界值＝阴性对照孔OD值N×0.2，待测样品为非原倍血清时，临界值＝阴性对照孔OD值N×0.5，（非原倍血清是指稀释血清、质控血清等）。
9.2结果判定：样品OD值S/C.O<=1者为HBeAb阳性
样品OD值S/C.O>1者为HBeAb阴性
10.质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：阴性
12.临床意义：HBeAb阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志。阳性表示机体已产生免疫力，病毒活力降低，传染性减弱，预后好。
13.操作性能：灵敏度高，特异性好。
14.方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。
15.注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒核心抗体检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝核心抗原（HBcAg），配以酶标记抗体（HbcAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用竞争抑制法原理检测人血清（或血浆）中乙肝核心抗体（HBcAb）。2.标本采集
2.1采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2标本种类：血清或血浆。
2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血
清备用。
3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免
反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称：乙型肝炎病毒核心抗体诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：96Test/Kit
6.4试剂盒组成：
HBcAb微孔板，HBcAb酶标记抗原，HBcAb阳性对照血清，HBcAb阴性对照血清，浓
缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称：自动酶标仪
7.2仪器厂家：Rayto
7.3仪器型号：RT-2100C
8.操作步骤
8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自
封袋封存。
8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或
去离子水按1：19稀释后使用。
8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：每测定孔加入50μl样品。对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl。作为临床
诊断依据，必须将原倍血清样品按1：30稀释后再检验，稀释液应采用生理盐水或10mMPBS；
作为流行病学调查依据，使用原倍血清检验。
8.5加酶：每孔加入酶标记抗体50μl，轻拍混匀。
8.6温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8显色：每孔加入底物A、B各50μl，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9终止：每孔加终止液50μl，混匀。
8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析
9.1临界值（C.O.）的计算：
临界值＝阴性对照孔OD值N×0.2
9.2结果判定：样品OD值S/C.O<=1者为HBcAb阳性
样品OD值S/C.O>1者为HBcAb阴性
10.质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBcAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：阴性
12.临床意义：高效价阳性表示现实感染，低效价阳性表示既往感染。
13.操作性能：灵敏度高，特异性好。
14.方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。
15.注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无
误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）413页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。