超高分辨率共聚焦显微镜
北京大学生命科学院
“超高分辨率共聚焦显微镜”招标采购项目
招标文件
编号：2013[017]
北京大学实验室与设备管理部
二〇一三年七月四日
目录
第一部分投标邀请 (2)
第二部分招标说明 (4)
第三部分货物需求一览表及技术规格 (7)
第四部分设备明细表 (12)
第五部分技术规格偏离表 (13)
第六部分原厂授权书 (14)
开标一览表 (15)
第一部分投标邀请
公告日期：2013年7月4日
项目名称：北京大学生命科学院“超高分辨率共聚焦显微镜”招标采购项目
招标编号: 2013[017]
招标机构名称: 北京大学实验室与设备管理部
地址：北京市海淀区颐和园路5号北京大学红5楼邮编：100871
电话： 62758587 62751412；传真：62751411
联系人：张宇波石铄
北京大学实验室与设备管理部（以下简称“招标机构”）具体承办北京大学生命科学院“超高分辨率共聚焦显微镜”招标采购项目的招标采购事宜，邀请合格投标人就下列货物和有关服务提交密封投标。合格投标人均可在招标机构得到进一步的信息和查阅招标文件。
1.招标内容
1.1招标货物名称：超高分辨率共聚焦显微镜
1.2数量及技术规格要求：数量壹套，技术规格要求详见标书
1.3交货地点：北京首都机场
2.合格投标人必须符合《中华人民共和国政府采购法》第二十二条之规定。
3.招标文件购买时间和办法：2013年7月4日—2013年7月24日(工作日)9:00至16:30时在招标机构（北京大学西门内红1楼、红2楼之间横楼二层5216室）购买招标文件。标书售价200元人民币，售后不退。
4.投标人可从北京大学招标公告栏或实验室与设备管理部网站下载本次招标的电子版标书（https://www.360docs.net/doc/5417894093.html,/more2.asp），以供参考。
5.接受投标时间、投标截止时间及开标时间
5.1接受投标及投标截止时间：所有投标书应于2013年7月25日8:30前递交到上述购买标书地址，
逾期恕不接受。
5.2开标时间：兹定于2013年7月25日8:30整在北京大学实验室与设备管理部后院会议室进行开标、
评标工作。
6.投标细则
6.1 投标内容
6.1.1最终用户：北京大学生命科学院
6.1.2设备名称：“超高分辨率共聚焦显微镜”
6.1.3投标语言：投标文件第四部分- Summary Sheet of Goods Description（设备明细表）及第五部分-Specification and Deviation Form（技术规格偏离表）以中英文对照应标，其余相关投标文件以中文应标。
6.1.4投标货币：美元/欧元
6.1.5交货时间：合同签订后的四个月内
6.2 付款条件：招标机构接受以下付款方式：100%不可撤消即期信用证，其中90%货款凭装运单据支付，
10%尾款凭用户签字确认且加盖单位公章的验收报告支付。
6.3 标书文件要求
6.3.1投标设备及价格明细表(Summary Sheet of Goods Description)
6.3.2技术规格应答及偏离表（Specification and Deviation Form）（请对技术标书内容逐项应答并
填充具体指标）
6.3.3技术资料及样本原件
6.3.4原厂商委托书原件（适用于投标人为贸易公司者）
6.3.5 资格证明文件
包括：营业执照（复印件）；法人资格证明或法人代表授权书；税务登记证明（复印件）；银行资信证明；近三年的销售业绩及投标人认为有必要提供的相关证明文件。
6.4 文件数量：一式六份（一份正本五份副本），开标一览表（SUMMARY SHEET FOR BID OPENING）正本
壹份（请单独放在信封内供开标用）
7.投标地点和开标地点：北京大学实验室与设备管理部B08会议室
8.中标结果将在公示期满后以书面形式通知中标商。
9.中标服务费按差额定律累进法计算收取，具体为：
9.1 100万元人民币以下部分按1％收取；
9.2 100－500万元人民币部分按0.8％收取；
9.3 500万元以上人民币部分按0.6％收取。
10.条款解释：本招标文件内容的解释权属于北京大学实验室与设备管理部。
第二部分招标说明
一．招标要求
1.北京大学实验室与设备管理部（以下简称“招标机构”）具体承办北京大学生命科学院“超高分辨
率共聚焦显微镜”招标采购项目的招标采购事宜(Bid No.2013[017])。
2.投标人应仔细阅读招标文件（包括技术规格）的全部条文。
3.投标人所提供货物的技术规格应符合或超过标书中技术规格的要求。如果投标人不提供技术规格偏
离表说明偏离情况，则将认为提供的货物完全符合招标文件的要求。
4.投标产品是用新技术制造的，应相当或超过招标文件规定的技术规格，投标产品应具有相当或更好
的性能、可靠性和耐用性。
5.投标时提交的产品样本必须是“原件”，而不是“复制件”。
6.交货地点为北京首都机场海关。
7.交货时间在标书的技术规格部分中已注明。在投标文件中，投标人必须说明在授标以后完成交货的
时间，经双方同意的交货期从合同生效之日算起。
8.除了在技术规格中提出的要求外，在合同生效后60天之内，为使用户做好准备工作，卖方应给最
终用户邮寄一套所供产品的全套技术资料，其中包括操作手册（或应用指南）、维修手册等，另一套完整技术资料应随货物包装发运，这些费用应包括在该品目的基本报价中。
9.在合同生效后30天内应将设备安装前对实验室的具体要求邮寄给最终用户。
10.设备应包括一套标准附件和专用工具，投标人按常规提供的标准附件和工具的数量，应在投标中说
明，并报单价。这些费用应包括在该品目的基本价格之内。
11.对招标品目，除了标准附件外投标人还可提供保证设备正常运行的附件，专用工具，它们是该品目
的补充部分，需分别报单价和总价，在评标时其总价应计入该品目的基本价格之内。
12.在技术规格中提出了询问的附件、备件、专用工具和消耗品，需分别报单价和总价，一旦接受，其
费用将记入合同。
13.除了技术规格中买方提出的要求之外，投标人可以推荐某些附件、备件和消耗品，它们是供选购的，
应分别报单价和总价，一旦接受，其费用将计入合同。
14.维修及技术服务要求详见标书技术需求部分。
15.投标文件一式六份(一正五副)，包括以下文件：
17.1投标设备及价格明细表(Summary Sheet of Goods Description)
17.2技术规格应答及偏离表(Specification and Deviation Form)（请对技术标书内容逐项应答并填充具体
指标）
17.3技术资料包括样本原件
17.4原厂商委托书原件(适用于投标人为贸易公司者)
17.5资格证明文件
17.6开标一览表（请单独放在信封内供开标用）
16.投标文件有效期为自开标之日起的60天。投标货币为美元/欧元。接收投标文件截止时间为2013
年7月25日8:30时。投标商务必在此时间前把密封投标文件送达，逾期恕不接受。
邮编：100871；电话：012-62758587 62751412；传真：012-62751411
联系人：张宇波、石铄
二．评标原则
1. 初步审查及确定是否基本响应：
1.1审查投标人所投的标是否完整无误，如单价和总价间有出入，则以单价为准，修正总价；如文字与
数字间有出入，则以文字金额为准；
1.2确定标书是否对招标文件做出了基本响应，即是否符合招标文件的所有条款，有没有重大偏离。重
大偏离系指实质上影响投标人提供货物数量、质量或交付期，或者指实质性地与招标文件不一致，限制了招标方的权利或投标人的义务；
1.3对标的响应性的确定是依据投标文件本身的内容，而不受外因的影响；
1.4确定为未做出基本响应的标将予排除，投标人不能在开标之后，通过改正不符之处而使其投标变为
能响应。对于投标文件中并不构成重大偏离的任何细小的不正规、不一致或参差不齐，可以忽略。
2.评标方法：
本次招标采用综合评分法，是指在最大限度地满足招标文件实质性要求前提下，按照招标文件中规定的各项因素进行综合评审后，以评标总得分最高的投标人作为中标候选供应商或者中标供应商的评标方法。
3.评分因素所占权重：
3.1投标报价：30％；
3.2综合商务：10％，考虑投标商资质状况；考虑投标人供货方案；考虑投标人近3年来做过的与
本项目相同或相似的项目业绩等；
3.3技术性能：50％，考虑投标商的设计方案、投标产品的配置、性能等；
3.4售后服务：10％；售后服务，培训等；
4.标的澄清：
为有助于对评标文件进行审查、评价和比较，我们可以请投标人澄清其投标内容。提出澄清的要求
与答复均应是书面的，并不得改变投标价格或实质内容。
5.资格后审：
5.1这次评标中，我们将对综合得分最高投标人和紧接其后的具有评估价的另一投标人进行重点资格后
审；
5.2确定所选择的投标人是否有资格满意地履行合同，同时对紧接其后的具有评估价的另一投标人也要
求做出类似的确定；
5.3做出确定时将考虑投标人的财务、技术、服务和生产能力。审查是以投标人提交的投标人资格证明
文件及我们认为必要的其它资料为基础进行的；
5.4如果确定综合得分最高的投标人不符合履行合同资格，其标将被排除，随即考虑第二家。
6.授予合同的准则：
招标机构不承诺最低价中标，将把合同授予成功的投标人，即所投的标被认定是能最大限度的响应、综合得分最高且是经资格后审后认为能满意地履行合同的投标人。
7.废标：遇到下列情况之一时，可以废标：
7.1全部投标厂商均不具备投标资格；
7.2全部投标实质上都有不符合招标文件要求；
7.3缺乏有效的竞争；
7.4投标价格超过预算，招标人无力支付。
三．评标程序
1.从开标到批准授予合同为止，这一段工作称为评标。
2.开标后，业务组整理投标文件及有关商务资料，登记分发给评标人进行评标。
3.评标人检查投标文件的完整性。投标文件应包括以下文件：
3.1投标设备及价格明细表(Summary Sheet of Goods Description)
3.2技术规格应答及偏离表(Specification and Deviation Form)
3.3技术资料（样本原件）
3.4原厂商委托书原件(适用于投标人为代理商或贸易公司)
3.5资格证明文件
3.6开标一览表（请单独放在信封内供开标用）
第三部分货物需求一览表及技术规格
1.设备名称：超高分辨率共聚焦显微镜
2.数量： 1套
3.设备用途说明：
本系统能够清楚观察活细胞的纳米级结构和功能，可以从分子簇乃至单分子水平上对亚细胞结构直接观察如DNA和蛋白质分子的结构和运动，为蛋白的功能和基因的调控提供最直接的图像支持。
广泛应用于各种细胞成像，进行形态，动态，功能分析。
4.工作条件：
适于在电源220V（ 10％）/50Hz、气温摄氏+15℃～＋25℃和相对湿度小于60％的环境条件下运行。能够连续正常工作。配置符合中国有关标准要求的插头，如果没有这样的插头，则需提供适当的转换插座。
5.规格、技术要求及参数：
*5.1.1全电动倒置显微镜，兼具TIRF和下列至少一种超分辨成像模式
（STORM/GSD/PALM/SIM/STED）。高速电动组件可实现对图像的快速、协调、无缝拍摄。
5.1.2光学系统：无限远独立色差校正光学系统
*5.1.3观察方式：具有明场,宽场荧光、TIRF、下列至少一种超分辨成像模式（STORM/GSD/PALM及SIM/STED），并可实现TIRF-SIM/STED,2DSIM/STED,3D SIM/STED，2D
STORM/GSD/PALM,3D STORM/GSD/PALM,3色STORM/GSD/PALM观察模式。
5.1.4分光出口：左, 右各一侧出口, 100%可见光出左出口, 100%可见光出右出口。100%出目镜。5.1.5数据储存：所有显微镜参数都量化, 并能被存储和复制
5.1.6遥控器：一键式功能转换(例如, 从明场到荧光只要按一键, 即可实现自动切换)
5.1.7 高分辨率液晶显示屏, 实现参数显示
*5.1.8物镜转换器：电动DIC物镜转换器，集成实时Z轴焦点漂移校正，在使用高倍率、高数值孔径的物镜和TIRF之类技术时能清晰聚焦成像。
5.1.9光学变倍：1.5-2x
*5.10 分辨率：
STORM/GSD/PALM模式：XY方向：～20nm；Z方向：～50nm
SIM/STED模式：XY方向：～85nm；Z方向：～300nm，时间分辨率可达0.6秒/帧
5.1.11放大倍数：100x-1000x
5.1.12观察镜筒：双目镜筒，包括遮光板光闸和勃氏透镜。
5.1.13透射光照明：100W 柯勒照明系统, 12V-100W 卤素灯，备用1只，立杆可后倾20°；含4个45mm
滤光片插板(Green; NCB11, ND2, ND8, 隔热)；外部稳压电源，聚光器支座，带聚焦止动器
5.1.14载物台：带线性编码器电动载物台。可用于96孔板。0.1um步进。
5.1.15调焦方式：借助于电动物镜转换器的升降运动，电动下降及重新对焦机构。
*5.2 物镜：平场复消色差物镜，色差矫正横跨435-850nm
10X NA≥0.45, 工作距离≥4.0 mm，支持明场、荧光、及Z轴焦点漂移校正
平场复消色差60x水镜, N.A. ≥1.27, 工作距离≥0.17mm
复消色差TIRF物镜, 100X N.A. ≥1.49, 工作距离≥0.12mm，
温度调节范围：23℃-37℃，支持明场、荧光、微分干涉观察方式以及虚焦补偿
平场复消色差100XVC油镜, N.A. ≥1.40, W.D. ≥0.13mm
5.3 目镜：10X目镜，视野数为≥22mm
5.4 聚光镜：长工作距离系统聚光镜
5.5 Epi荧光，双层荧光光路
5.5.1荧光光强电动调节,带电动光闸。
5.5.2内置消杂光机构（高信噪比荧光系统）
5.5.3荧光光源
5.5.3.1 灯泡：130W金属灯，备用1只。
5.5.3.2 寿命≥2000小时
*5.5.4荧光激发滤块：
DAPI带通型滤色块激发340-380nm; 阻挡400nm; 发射: 435nm-485nm
FITC带通型滤色块激发465-495nm; 阻挡505nm; 发射: 515nm-555nm
TRITC带通型滤色块激发540/25nm; 阻挡565nm; 发射:605/55nm
CY3 HYQ滤色块：激发545/30;阻挡570nm; 发射:610/75nm
CY5 HYQ滤色块：激发620/60nm;阻挡660nm;发射700/75nm
STORM专用荧光滤色块
*5.5.5双层全电动荧光滤块转盘，SIM/STED专用电动荧光转盘。
5.5.6六位荧光滤块转换器
5.5.7荧光滤块更换无需工具
5.5.8荧光滤块转换< 150ms.
*5.6 全内反射荧光系统：电动TIRF照明器，双入光端口，宽场荧光及激光可同时进入光路，并可电动调节及储存激光入射角。
*5.7SIM/STED照明系统：高频条纹照明
*5.8激光及激光控制：4激光底座和5激光底座，有独立的AOTF控制激光波长及功率
*5.8.1具有8条激光源：
波长405nm(输出功率≥100mW)，
波长405nm(输出功率≥100mW)，
488nm (输出功率≥200mW)，
561nm(输出功率≥150mW)，
561nm(输出功率≥150mW)，
多线氩离子（输出功率≥65mW)，
640(输出功率≥100mW );
647(输出功率≥200mW )
5.8.2激光单模光纤耦合，8通道AOTF，可调节激光强度。
5.9压电陶瓷载物台：
与电动平移台匹配，具有z轴高精度扫描功能：Z轴分辨率0.2nm，移动范围100um
5.10 EMCCD：
5.11.1 EMCCD规格：512×512像素，16um×16um
5.11.2深度制冷：传感器电子冷却致-85℃
5.11.3峰值量子效率：＞90%
5.11.4动态范围：16bit
5.11.5读出噪声：45e-rms@10MHz
5.11.6灵活的读出区域选择和binning，1X1,2X2,4X4,6X6
5.11.8工作频率：多种工作频率(10、5、1 MHz)
5.11.9全幅（512x512）读出速度：≥50帧/秒, 单分子超快成像读出速度：≥500帧/秒@128x128 5.11 计算机：工作站级别计算机，4核，Windows7 Professional 64bit /30 TFT显示屏
5.12软件：
*5.12.1一般要求：控制和采集图像，并进行存储和数据库管理，显微镜的控制。自动拍摄
STORM,SIM,TIRF图像。
5.12.2图像处理功能，可实现TIRF-SIM/STED,2DSIM/STED,3D SIM/STED，2D
STORM/GSD/PALM,3D STORM/GSD/PALM处理
*5.12.3分析功能：STORM/GSD/PALM专业分析软件，SIM/STED专业分析软件。实时显示定位点；
自动校正xy漂移，重建超分辨率图像；去除串色（crosstalk）；图像可以放大到200倍；进行批量分析；对3D-STORM/GSD/PALM图像进行3D显示；实现3色STORM/GSD/PALM的观察。
5.12.4测量功能：自动探测荧光点数
5.12.5彩色通道管理
5.12.6内置的报告生成器，通过模板导出图像、数据、字符等
5.13 防震台：
气垫式防震台，四支撑，M6螺孔
6.附件及零配件：
备用12V100W卤素灯，专用工具一套，UPS电源一套。
7.选件：无
8.技术服务条款：
8.1 设备安装、调试和验收
8.1.1卖方应在合同生效后的2个月内到用户实验室现场测试震动及水电情况，并向买方提出详细的
安装要求和提供技术咨询。
8.1.2仪器到达用户所在地后，在接到用户通知后2周内进行安装调试，直至通过验收。仪器的安装
调试需在30个工作日内完成。
8.2 技术培训：在用户所在地对用户进行至少2至3人的培训。培训内容包括仪器的技术原理、仪器
操作、数据处理、仪器基本维护等。仪器正常运行后，将对用户进行二次应用培训。
8.3 保修期：卖方提供1年的免费保修,保修期自仪器验收签字之日起计算。
8.4 维修响应时间：卖方应在24小时内对用户的服务要求作出响应；需要在现场解决问题的，应在
2个工作日内到达仪器现场。故障不能及时排除的，延误的时间需相应的延长保修期。
8.5设备保修期满前1个月，卖方免费负责一次全面的检查、维护，并写出正式报告，如发现潜在问
题，应负责排除。
8.6 软、硬件升级：卖方应免费向用户提供自验收合格后仪器硬件允许范围内的终生软件升级，与之
相关的硬件升级仅收取成本费。
9.包装要求及运输方式：
包装要求：应使用崭新坚固之木箱（标准出口包装），适合于空运、海运或陆运等长途运输方式；
适合气候变化；抗震、防潮、防雨、防锈、防冻。投标商应对任何由于不当包装或防护措施不利而导致的商品损坏、损失、锈蚀、费用增长等后果负责。
运输方式：空运（或海运）
10.交货期：合同签订后四个月内交货。
11.交货地点：北京首都机场。
备注：（“*”为必须满足内容）
第四部分设备明细表
Summary Sheet of Goods Description
Signature of Bidder: ___________________________
投标商签字：
第五部分技术规格偏离表
Specification and Deviation Form
Signature of Bidder: _______________________
投标商签字：
第六部分原厂授权书
参与投标的代理商或贸易公司须持有制造商针对本次投标的授权，或在有效期内的长期授权。
进口品牌原厂授权书可参照如下格式：
LETTER OF AUTHORITY FROM MANUFACTURER
___________________(Name of Manufacturer)
To Whom it May Concern:
We ________________ (Name of Manufacturer), a manufacturer duly organized under the laws of _____________ (Name of Country) and having its principal place of business at ______________________________ (Address of Manufacturer), hereby make, constitute and appoint , a company duly organized under the laws of and having its principal place of business at , to be our true and lawful attorney in fact to do the following:
(1) To represent and bind us in the P. R. China for the Buyer's Invitation for
Bid No. 2013[017] for supply of the Goods proposed in the bid which we manufacture or produce.
(2) That, as a manufacturer, we bind ourselves as co-maker of the bid and are jointly and severally responsible
for the compliance of the said bid.
(3) That we hereby give and grant to the said full power and
authority to do and perform all and every act and thing whatsoever, requisite, necessary and proper to be done in the premises, as fully to all intents and purposes as we might or could do, with full power of substitution and revocation, hereby ratifying and confirming all that or its duly authorized representative shall lawfully do, or cause to be done by virtue hereof.
IN TESTIMONY WHEREOF WE HA VE HERETO SIGNED THIS DOCUMENT ON
_____________2013______________ .Accepted on _________2013__________ .
NAME OF TRADING COMPANY NAME OF ISSUING MANUFACTURER
(Name of duly authorized (Name of duly authorized
representative to sign, representative to sign,
rank or position and department) rank or position and department)
招标编号：2013[017] 北京大学实验室与设备管理部
开标一览表
SUMMARY SHEET FOR BID OPENING
Signature of Bidder: _____________________________________
投标商签字
激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件研究.
激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件研究 [ 05-12-18 15:01:00 ] 作者：Yu Nanshen 编辑：studa9ngns 【摘要】目的本文对应用激光扫描共聚焦显微镜进行荧光强度的测定条件做了详细的分析。方法选择和设置激光扫描共聚焦显微镜的各参数，对用间接免疫荧光法检测改性后的材料表面对人牙龈成纤维细胞分泌细胞外基质纤粘连蛋白FN和I型胶原的影响进行荧光强度的定量。结果细胞在材料表面接种后FN的荧光染色强度在四组材料之间差异无显著性，说明材料表面化学成分的改变对FN的形成没有明显影响。但四组材料对I型胶原分泌的影响有差异。结论选择和设置适合的激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件，可以真实有效的反映实验的结果。 关键词激光扫描共聚焦显微镜荧光强度 The research on determine condition of fluorescence intensity in confocal laser scanning microscopy 【Abstract】 Objective To explore the conditions under which fluorescence intensity is determined in confocal laser scanning microscopy.Methods The parameters of confocal laser scanning microscopy were set and the effects of these modifications on the response of the fibro-conglutination albumen and type I collage n of human gingival fibrobˉlasts on indirect immunityfluorescence were observed，and the fluorescence intensity of the effects was measured.Reˉsults After the cells grafted on the material surface，the fluorescence dye intensity of the fibro-conglutination albuˉmen had no notable differ ence in materials of the four groups，the alter of the chemistry component of the material surˉface had no notable influence on the formation of the fibro-conglutination albumen.But the effects of the type I collaˉgen were different in materials of the four groups.Conclusion Setting appropriate conditions for the determination of fluorescence intensity in confocal laser scanning microscopy is important in the analysis of the true results of experiˉment.Key words confocal laser scanning microscopy fluorescence intensity
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册 目录: 1 系统得组成 系统组成及光路示意图 实物照片说明 2 系统得使用 2、1 开机顺序 2、2 软件得快速使用说明 2、3 显微镜得触摸屏控制 2、4 关机顺序 3 系统得维护 1 系统得组成 激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。 系统组成及光路示意图: 电脑工作站 激光器 电动荧光显微镜扫描检测单元 实物照片说明: 电动荧光显微镜 扫描检测单元 CO2 培养系统控制器 激光器 电脑工作站 2 系统得使用 2、1 开机顺序 (1)打开稳压电源(绿色按钮) 等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关 (2)主开关[ MAIN SWITCH ]“ON” 电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON” 扫描硬件系统[ PONENTS ]“ON” (3)打开[ 电动显微镜开关] 打开[ 荧光灯开关] (注:具有5 档光强调节旋钮) (4)Ar 离子激光器主开关“ON” 顺时针旋转钥匙至“—” 预热等待约15分钟, 将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至 “Laser run”状态,即可正常使用 (5)打开[ 电脑开关],进入操作系统
注:键盘上也具有[ 电脑开关] 2、2 软件得快速使用说明 (1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标 (2)进入ZEN 界面,弹出对话框: “Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、 分析等。 “Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已 存图像数据得处理、分析。 (3)软件界面: 1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用) 2 动作按钮; 3 工具组(多维扫描控制); 4 工具详细界面; 5 状态栏; 6 视窗切换按钮; 7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块 动作按钮: Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。 Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程(1组图片,如XYZ、XYT 等)。 Stop ——暂停/结束扫描。 New ——建立一个新图像扫描窗口/文档。 激光连接状况检查 眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换(ZEN软件界面右上角): Ocular ——通过观察筒用眼睛观察。(激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。) Camera ——光路切换至相机。 LSM ——共聚焦扫描成像光路。 显微镜设置: “Ocular”——> “Light Path”——> 点击物镜图标,选择物镜——> 样品聚焦。 透射光控制(Transmitted Light Control) 反射光光闸控制(Reflected Light Shutter) 荧光激发块选择(Reflector) 共聚焦LSM 扫描设置 点击“LSM”(ZEN软件界面右上角),系统切换至共聚焦扫描光路: 光路设置: Smart Setup ——自动预设光路 选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法, 应用“Apply”。 (注:Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫 描。Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺 序扫描。Best promise 为兼顾速度与信号得折
激光共聚焦扫描显微镜简介
激光共聚焦扫描显微镜简介 一、激光共聚焦显微镜的基本组成 激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope LSCM)是20世纪80年代发展起来的一项具有划时代意义的高科技新产品，是当今世界最先进的细胞生物学分析仪器。激光共聚焦显微镜利用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦的原理和装置，以及通过针孔的选择和PMT的收集，并带有一套对其所观察到的对象进行数字图像分析处理的系统软件。与传统光学显微镜相比，它具有更高的分辨率，实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点。所以它问世以来在生物学的研究领域中得到了广泛应用。 激光共聚焦显微镜主要有四部分组成：1、显微镜光学系统。2、扫描装置。3、激光光源。4、检测系统。整套仪器由计算机控制，各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地进行。 1.1 显微镜光学系统 显微镜是LSCM的主要组件，它关系到系统的成象质量。显微镜光路以无限远光学系统可方便地在其中插人光学选件而不影响成象质量和测量精度。物镜应选取大数值孔径平场复消色差物镜，有利于荧光的采集和成象的清晰。物镜组的转换，滤色片组的选取，载物台的移动调节，焦平面的记忆锁定都应由计算机自动控制。 1.2 扫描装置 LSCM使用的扫描装置在生物领域一般为镜扫描。由于转镜只需偏转很小角度就能涉及很大的扫描范围，图象采集速度大大提高，512×512画面每秒可达5帧以上，有利于那些寿命短的离子作荧光测定。扫描系统的工作程序由计算机自动控制。 1.3 激光光源 LSCM使用的激光光源有单激光和多激光系统。多激光器系统在可见光范围使用多谱线氩离子激光器，发射波长为457nm、488nm和514nm的蓝绿光，氦氖绿激光器提供发射波长为543nm的绿光，氦氖红激光器发射波长为633nm的红光。 1.4 检测系统 LSCM为多通道荧光采集系统，一般有三个荧光通道和一个透射光通道，能升级到四个荧光通道，可对物体进行多谱线激光激发，样品发射荧光的探测器为感光灵敏度高的光电倍增管PMT，配有高速12位A/D转换器，可以做光子计数。PMT前设置针孔，由计算机软件调节针孔大小，光路中设有能自动切换的滤色片组，满足不同测量的需要,也有通过光栅或棱镜分光后进行光谱扫描功能的设置。 二、激光共聚焦显微镜的特点以及在生物领域的应用 与传统光学显微镜相比，激光共聚焦显微镜具有更高的分辨率，实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点，在对生物样品的观察中，激光共聚焦显微镜有如下优越性： 1、对活细胞和组织或细胞切片进行连续扫描，可获得精细的细胞骨架、染色体、细胞器和细胞膜系统的三维图像。 2、可以得到比普通荧光显微镜更高对比度、高解析度图象、同时具有高灵敏度、杰出样品保护。 3、多维图象的获得，如7 维图象(XYZaλIt): xyt 、xzt 和xt 扫描,时间序列扫描旋转扫描、区域扫描、光谱扫描、同时方便进行图像处理。
激光共聚焦显微镜的原理与应用范围
激光共聚焦显微镜的原理与应用范围 激光扫描共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。把光学成像的分辨率提高了30%~40%，使用紫外或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，在亚细胞水平上观察生理信号及细胞形态的变化，成为形态学，分子生物学，神经科学，药理学，遗传学等领域中新一代的研究工具。 1激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）的原理 从基本原理上讲,共聚焦显微镜是一种现代化的光学显微镜,它对普通光镜从技术上作了以下几点改进: 1．1用激光做光源因为激光的单色性非常好,光源波束的波长相同,从根本上消除了色差。1．2采用共聚焦技术在物镜的焦平面上放置了一个当中带有小孔的挡板,将焦平面以外的杂散光挡住,消除了球差;并进一步消除了色差 1．3采用点扫描技术将样品分解成二维或三维空间上的无数点,用十分细小的激光束(点光源)逐点逐行扫描成像,再通过微机组合成一个整体平面的或立体的像。而传统的光镜是在场光源下一次成像的,标本上每一点的图像都会受到相邻点的衍射光和散射光的干扰。这两种图像的清晰度和精密度是无法相比的。 1．4用计算机采集和处理光信号,并利用光电倍增管放大信号图 在共聚焦显微镜中,计算机代替了人眼或照相机进行观察、摄像,得到的图像是数字化的,可以在电脑中进行处理,再一次提高图像的清晰度。而且利用了光电倍增管,可以将很微弱的信号放大,灵敏度大大提高。由于综合利用了以上技术。可以说ＬＳＣＭ是显微镜制作技术、光电技术、计算机技术的完美结合,是现代技术发展的必然产物。 2ＬＳＣＭ在生物医学研究中的应用 目前,一台配置完备的ＬＳＣＭ在功能上已经完全能够取代以往的任何一种光学显微镜,它相当于多种制作精良的常用光学显微镜的有机组合,如倒置光学显微镜、紫外线显微镜、荧光显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜(ＰＨ)、微分干涉差显微镜(ＤＩＣ)等,因此被称为万能显微镜,通过它所得到的精细图像可使其他的显微镜图像无比逊色。
LeicaSP8激光扫描共聚焦显微镜快速操作手册2013-5-13
Leica激光扫描共聚焦显微镜 快速操作手册 制作：徕卡显微系统（上海）贸易有限公司 2013年3月
目录： 1 系统的组成 系统组成 (3) 光路示意图 (4) 2 系统的使用 2.1 开机顺序 (5) 2.2 软件界面简介 (7) 2.3 在显微镜下观察样品 (8) 2.4 采集共聚焦图像 (9) 2.5 XYZ三维扫描（Z-Stack） (11) 2.6 时间序列扫描（Timeseries or xyt Scan） (15) 2.7 波长扫描（xyλScan） (16) 2.8 HyD检测器 (17) 2.9 图像的保存及输出 (18) 2.10 关机 (20) 3 系统的维护 (21)
Leica SP8 系统组成图
1可见波长激光或白激光15UVIS, HIVIS或VISIR的光路镀膜 2声光调制器（AOTF）16扫描视场旋转镜（Abbe-Konig 旋转）* 3红外激光（IR）* 17在NND位置上的反射光检测器（RLD）* 4电光调制器18物镜（可提供各种选择）* 5紫外激光* 19在NND位置上的透射光检测器（TLD）* 6 AOTF或直接调制器（DMOD）20正方型针孔 7STED 激光* 21Fluorifier盘* 8Setlight监控二极管22X1出口接口* 9AOBS, 及其他选配件23外置检测器* 10用于FRAP的光束增强镜* 24色散棱镜 11红外激光耦合25分开的荧光光谱 12与CS2紫外光路耦合的紫外激光26最多5个光电倍增管或4个HyD检测器 13STED激光耦合*选配组件 14全视野扫描镜及串行高速扫描镜选件
激光扫描共聚焦显微镜的原理和应用
激光扫描共聚焦显微镜的原理和应用 一、激光扫描共聚焦显微镜的原理 传统的光学显微镜使用的是场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰；激光扫描共焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope，LSCM)采用点光源照射样本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜搜集，并沿原照射光路回送到由双色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明针孔和探测针孔。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔，焦平面以外的点被挡在探测针孔之外不能成像，这样得到的共聚焦图像是标本的光学切面，避免了非焦平面上杂散光线的干扰，克服了普通显微镜图像模糊的缺点，因此能得到整个焦平面上清晰的共聚焦图像。 原理图 二、激光扫描共聚焦显微镜组成特点 LSCM由显微镜光学系统，激光光源，扫描装置和检测系统构成，整套仪器由计算机控制，各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地
进行。显微镜是LSCM的主要组件，它关系到系统的成像质量。通常有倒置和正置两种形式，前者在切片、活细胞检测等生物医学应用中使用更广泛。 三、激光扫描共聚焦显微镜的应用 （一）细胞的三维重建 普通荧光显微镜分辨率低，显示的图像结构为多层面的图像叠加，结构不够清晰。LSCM能以0.1μm的步距沿轴向对细胞进行分层扫描，得到一组光学切片，经A/D转换后作为二维数组贮存。这些数组通过计算机进行不同的三维重建算法，可作单色或双色图像处理，组合成细胞真实的三维结构。旋转不同角度可观察各侧面的表面形态，也可从不同的断面观察细胞内部结构，测量细胞的长宽高、体积和断层面积等形态学参数。通过模拟荧光处理算法，可以产生在不同照明角度形成的阴影效果，突出立体感。通过角度旋转和细胞位置变化可产生三维动画效果。LSCM的三维重建广泛用于各类细胞骨架和形态学分析、染色体分析、细胞程序化死亡的观察、细胞内细胞质和细胞器的结构变化的分析和探测等方面。（二）静态结构检测 1.细胞原位检测核酸 用于细胞核定位及其形态学观察、检测细胞内DNA的复制及断裂情况以及染色体定位观察。 2.原位检测蛋白质、抗体及其他分子 原位检测蛋白质、抗体及其他分子 免疫荧光标记技术 检测荧光蛋白 3.检测细胞凋亡 检测细胞凋亡不同时期细胞形态、细胞凋亡相关蛋白
激光共聚焦显微镜技术1讲解
激光共聚焦显微镜技术 The techniques and applications of Confocal Laser Scanning Microscopy 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史 1957年，Marvin Minsky提出了共聚焦显微镜技术的某些基本原理，获得了美国的专利。1978年，阿姆斯特丹大学的G.J.Brakenhoff首次展示了改善了分辨率的共焦显微镜。 1985年，Wijnaendtsvan Resandt推出了第一台对荧光标记的材料进行光切的共焦显微镜 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史 ?80年代末，各家公司都推出了商品化的共焦显微镜,英国的Bio-Rad公司的MRC系列，德国Leica公司的TCS系列，Zeiss公司的LSM系列等。 ?近二十年来，从滤片型到光谱型，人们对共焦高分辨率，采集图像快速，技术的改进及应用开发不断进行，出现了很多新的技术。如双光子，FCS,FLIM ,STED等。 共焦显微镜的优点 人眼分辨率：0.2mm 光学显微镜分辨率：0.25μm 电子显微镜分辨率：0.2nm 共焦显微镜分辨率：μm 共焦显微镜的优点 ?电子显微镜的缺陷： 1.只能观察固定样品 2.样品制备过程（固定、包埋、切片）造成的假象 ?荧光显微镜的缺陷: 1.可以观察活细胞或组织，但细胞或组织内结构高度重叠。 2.荧光具有强散射性，造成图像实际清晰度的大大下降。 3.荧光漂白很快，使荧光图像的拍照有困难。 4.如果荧光滤片选配不当，多荧光标记样品图像的采集很困难，且很难抑制光谱交叉。 共焦显微镜的优点 ?共焦显微镜与传统显微镜的区别 1.抑制图像的模糊，获得清晰的图像 激光扫描共焦显微镜技术 ?共焦显微镜与传统显微镜的区别
荧光显微镜技术参数
荧光显微镜技术参数 1．工作条件及用途 适于在气温为摄氏-40℃～＋50℃的环境条件下运输和贮存，在电源220V （ 10%）/50Hz、气温摄氏-5℃～40℃和相对湿度85%的环境条件下运行。 可作切片的明场（BF）、荧光（FL）、偏光（PO）观察。 2．主要技术指标 2.1 研究级正置显微镜 2.1.1 研究级正置显微镜，可作明场、偏光和荧光的观察 2.1.2 光学系统：无限远校正光学系统，齐焦距离必须为国际标准45mm 2.1.3 调焦：载物台垂直运动方式距离不小于25mm，带聚焦粗调限位器，粗调旋钮扭矩可调，最小微调刻度单位≤1微米 2.1.4 观察镜筒：宽场三目观察筒，倾角为30° *2.1.5 照明装置：内置透射光柯勒照明器，12V100W卤素灯，光强预调开关，内置式滤色镜（日光平衡滤色片、ND25、ND6），左右手均可操作。 *2.1.6 物镜：万能平场半复消色差物镜 4X（N.A≥ 0.13，W.D≥17） 10X（N.A≥0.3，W.D≥10） 20X（N.A≥0.5，W.D≥2.1 spring） 40X（N.A≥0.75，W.D≥0.51 spring） 100X（N.A≥1.30，W.D≥0.2 spring,oil） 2.1.7 载物台：右手油式载物台，带有旋转装置和扭矩调节装置，高抗磨损性陶瓷覆盖层载物台。 2.1.8 目镜：10X宽视野目镜，带屈光度校准 2.1.9 物镜转换器：六孔物镜转换器 2.1.10 聚光镜：摇摆式聚光镜，N.A.≥0.9 2.1.11 具备ECO环保节能感应开关，操作人员离开30分钟后自动关闭透射光源。 2.2 荧光照明系统 2.2.1 荧光照明器：八孔荧光照明器，配置ND25、ND6、ND1.5中灰滤色片，
激光扫描共聚焦显微镜的原理和应用-17954讲解
激光扫描共聚焦显微镜的原理和应用 Tina(2007-10-23 09:40:17 一、激光扫描共聚焦显微镜的原理 传统的光学显微镜使用的是场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰；激光扫描共焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope，LSCM采用点光源照射样本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜搜集，并沿原照射光路回送到由双色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明针孔和探测针孔。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔，焦平面以外的点被挡在探测针孔之外不能成像，这样得到的共聚焦图像是标本的光学切面，避免了非焦平面上杂散光线的干扰，克服了普通显微镜图像模糊的缺点，因此能得到整个焦平面上清晰的共聚焦图像。 原理图
二、激光扫描共聚焦显微镜组成特点 LSCM由显微镜光学系统，激光光源，扫描装置和检测系统构成，整套仪器由计算机控制，各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地进行。显微镜是LSCM的主要组件，它关系到系统的成像质量。通常有倒置和正置两种形式，前者在切片、活细胞检测等生物医学应用中使用更广泛。 三、激光扫描共聚焦显微镜的应用 一）细胞的三维重建
普通荧光显微镜分辨率低，显示的图像结构为多层面的图像叠加，结构不够清晰。LSCM 能以0.1μm的步距沿轴向对细胞进行分层扫描，得到一组光学切片，经A/D转换后作为二维数组贮存。这些数组通过计算机进行不同的三维重建算法，可作单色或双色图像处理，组合成细胞真实的三维结构。旋转不同角度可观察各侧面的表面形态，也可从不同的断面观察细胞内部结构，测量细胞的长宽高、体积和断层面积等形态学参数。通过模拟荧光处理算法，可以产生在不同照明角度形成的阴影效果，突出立体感。通过角度旋转和细胞位置变化可产生三维动画效果。LSCM 的三维重建广泛用于各类细胞骨架和形态学分析、染色体分析、细胞程序化死亡的观察、细胞内细胞质和细胞器的结构变化的分析和探测等方面。 二）静态结构检测：原位鉴定细胞或组织内生物大分子、观察细胞及亚细胞形态结构 1.细胞原位检测核酸 用于细胞核定位及其形态学观察、检测细胞内DNA的复制及断裂情况以及染色体定位观察。 2.原位检测蛋白质、抗体及其他分子 原位检测蛋白质、抗体及其他分子 免疫荧光标记技术 检测荧光蛋白 3.检测细胞凋亡
激光扫描共聚焦显微镜
激光扫描共聚焦显微镜 ZEISS 780操作规程 本设备属于精密设备，操作人员必须提前熟悉其适用范围、结构、性能及其具体操作方法，未经操作培训者不能进行上机操作。通过操作培训的人员必须严格按照仪器管理老师的培训要求及设备使用说明书指定的操作进行工作。 1.开机 提前进行镜检，确保样本无误；查看空调温度、抽湿机湿度和不间断电源工作情况。 1.1开三相稳压电源。注意：先开稳压电源后面的黑色扳手开关①，再按下稳压电源前面的绿色按钮②，如果出现报警声，请马上关闭稳压电源，并报告管理人员。 1.2两分钟以后依次打开电源控制板上的三个开关。先打开主开关MAIN SWITCH ③，再依次打开SYSTEMS/PC④和COMPONENTS⑤开关。注意：各个开关不要同时按下，开机时仪器会进行自检，每按下一个开关，请等待相应的部件自检完毕后再开下一个开关。 1.3打开电脑开关⑨，点击“LSM User”图标，进入桌面；当看到桌面右下角显示“注意安全”图标时，方可点击桌面中央的ZE N软件图标；然后点击“Start System”按钮开启软件。 注意：当桌面右下角始终不显示“注意安全”图标时，不可启动软件。这时把电脑主机左边那台仪器的盖子掀开，按一下“Reset”按钮，等待电脑桌面右下角出现“注意安全”图标。 1.4打开氩离子激光器（若不使用458nm或488nm或514nm激光线则不需要打开）。先打开氩离子激光器正面的开关ON⑥，再顺时针旋转钥匙⑦至“—”的方向，等待绿色指示灯亮起方可开启光路(大约5-10min)。 注意：Ar+激光器在启动后，需要1h左右的预热时间才能进入稳定状态。若闲置时间1h以上，可将激光器扳钮由“laser run”位置扳至“idle power”处⑧，保护激光器，延长使用寿命。
激光共聚焦显微镜原理
激光共聚焦显微镜原理 激光共聚焦扫描显微技术（Confocal laser scanning microscopy）是一种高分辨率的显微成像技术。普通的荧光光学显微镜在对较厚的标本（例如细胞）进行观察时，来自观察点邻近区域的荧光会对结构的分辨率形成较大的干扰。共聚焦显微技术的关键点在于，每次只对空间上的一个点（焦点）进行成像，再通过计算机控制的一点一点的扫描形成标本的二维或者三维图象。在此过程中，来自焦点以外的光信号不会对图像形成干扰，从而大大提高了显微图象的清晰度和细节分辨能力。 图1. 共聚焦显微镜简化原理图 图1是一般共聚焦显微镜的工作原理示意图。用于激发荧光的激光束(Laser)透过入射小孔(light source pinhole)被二向色镜(Dichroic mirror)反射，通过显微物镜(Objective lens)汇聚后入射于待观察的标本(specimen)内部焦点(focal point)处。激光照射所产生的荧光(fluorescence light)和少量反射激光一起，被物镜重新收集后送往二向色镜。其中携带图像信息的荧光由于波长比较长，直接通过二向色镜并透过出射小孔(Detection pinhole)到达光电探测器(Detector)（通常是光电倍增管（PMT）或是雪崩光电二极管（APD）），变成电信号后送入计算机。而由于二向色镜的分光作用，残余的激光则被二向色镜反射，不会被探测到。
图2. 探测针孔的作用示意图 图2解释了出射小孔所起到的作用：只有焦平面上的点所发出的光才能透过出射小孔；焦平面以外的点所发出的光线在出射小孔平面是离焦的，绝大部分无法通过中心的小孔。因此，焦平面上的观察目标点呈现亮色，而非观察点则作为背景呈现黑色，反差增加，图像清晰。在成像过程中，出射小孔的位置始终与显微物镜的焦点(focal point)是一一对应的关系（共轭conjugate）,因而被称为共聚焦（con-focal）显微技术。共聚焦显微技术是由美国科学家马文?闵斯基(Marvin Minsky)发明的；他于1957年就为该技术申请了专利。但是直到八十年代后期，由于激光研究的长足进步，才使得激光共聚焦扫描显微技术（CLSM）成为了一种成熟的技术。 图3. 激光共聚焦显微镜原理框图 当今的激光共聚焦显微镜已经发展为一种结合了激光技术，显微光学，自动控制和图像处理等多种尖端科研成果的高技术工具。是现代微观研究领域不可缺少的利器之一。Nikon秉承“信赖与创造”的一贯企业理念，正在为业界提供世界领先水平的共聚焦显微镜系统产品。
激光扫描共聚焦显微镜及其应用讲解
激光扫描共聚焦显微镜及其应用 激光扫描共聚焦显微镜（Laserscanningconfocalmicroscope,LSCM)是近代最先进的细胞生物医学分析仪器之一。它是在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激光荧光探针，利用计算机进行图像处理，不仅可观察固定的细胞、组织切片，还可对活细胞的结构、分子、离子进行实时动态地观察和检测。目前，激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像 激光扫描共聚焦显微镜（Laser scanning confocal microscope, LSCM)是近代最先进的细胞生物医学分析仪器之一。它是在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激光荧光探针，利用计算机进行图像处理，不仅可观察固定的细胞、组织切片，还可对活细胞的结构、分子、离子进行实时动态地观察和检测。目前，激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领域得到广泛应用。 激光共聚焦显微镜的原理 激光扫描共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。 主要系统包括激光光源、自动显微镜、扫描模块（包括共聚焦光路通道和针孔、扫描镜、检测器）、数字信号处理器、计算机以及图象输出设备（显示器、彩色打印机）等。 通过激光扫描共聚焦显微镜，可以对观察样品进行断层扫描和成像。因此，可以无损伤的观察和分析细胞的三维空间结构。同时，通过激光扫描共聚焦显微镜也是活细胞的动态观察、多重免疫荧光标记和离子荧光标记观察的有力工具。 主要功能 1、图像处理功能 2、细胞生物学功能应用范围：（1）定量荧光测定；（2）定量共焦图像分析；（3）光学切片及三维重组；（4）动态观察；（5）荧光漂白恢复研究；（6）质膜流动性研究；（7）蛋白质相互作用研究；（8）激光显微外科及“光陷阱”研究；（9）光活化技术研究。 （编辑：文静）
共聚焦以及普通荧光显微镜的操作
准备工作：至少提前半小时 1，先开空调 2，打开激光器：上面的小的是530激光器【0.53μm半导体端泵绿光】；下面大的是488激光器【488nm蓝光半导体激光器】。先打开二者的总的开关，然后再打开响应的钥匙。若不知道需要什么激光，全都打开。PS：关的时候，先关闭钥匙，在关闭总的开关。 3，依次打开 olympus LG-PS2冷光源【电压12V,功率100W,低燥音,发热低,小巧美观.使用进口特种灯泡使用寿命可达4-5年.质量稳定,可靠性高,带有多种滤色片，可输出黄色光、白色光、红色光、蓝色光等多种在不同场合需要的纯正光色。亮度高、能耗低。】 U-RFL-T【外接汞灯电源】 FV5-PSU【扫描控制装置, 负责控制各部分电源分配和整个扫描系统的整合】4，然后再依次打开共聚焦电脑（白色）和普适电脑（黑色） 左边的白色电脑密码为fluoview 打开user，密码为user 右边黑色为普适电脑，密码为2618710 打开DPcontrol 操作过程： 1档：空档，用于共聚焦 2档：蓝激绿激发波长Ex=460-490nm；发射波长Em>510nm 3档：绿激红Ex=510-550nm；Em>570nm 4档: 紫激蓝Ex=330-385nm; Em>420 5档：紫激蓝Ex=426-450nm；Em=467-499nm 6档：DIC=空档+立体化 显微镜的操作：
软件的操作： 1，microscope control 2，laser intensity 3，三个长方形的通道 4，Objective 步骤： 1，打开汞灯 2，将 打开 3，将objective调节到相应的与物镜一致的型号，如物镜为60X W，则objective 应调节为60X W；其中，只有60X W中有W，代表water，是水镜，在观察前滴一滴水。 4，PMT：光电信号增强 Gain：信号放大 Offset：扣除背景 5， 调节其中的三个参数。
激光扫描共聚焦显微镜在生命科学中的应用
激光扫描共聚焦显微镜在生命科学中的应用 实验目的与要求 1. 掌握激光扫描共聚焦显微镜的成像基本原理及其在生命科学中的应用。 一、激光扫描共聚焦显微镜的成像基本原理 1.普通荧光显微镜的不足 使用荧光物质标记细胞中的特定成分或结构，不仅图像与对比度增强，而且由于许多荧光显微镜的光源使用短波长的紫外光，大大提高了分辩率（δ=0.61 λ/ NA ）。但当所观察的荧光标本稍厚时，普通荧光显微镜不仅接收焦平面上的光量，而且来自焦平面上方或下方的散射荧光也被物镜接收，这些来自焦平面以外的荧光使观察到的图像反差和分辨率大大降低（即焦平面以外的荧光结构模糊、发虚，原因是大多数生物学标本是层次区别的重叠结构）。 Laser Scanning Confocal Microscope 2. 共聚焦扫描显微镜的成像原理 采用点光源照射标本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜收集，并沿原照射光路回送到由双向色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明针孔和探测针孔。两者的几何尺寸一致，约100-200nm；相对于焦平面上的光点，两者是共轭的，即光点通过一系列的透镜，最终可同时聚焦于照明针孔和探测针孔。这样，来自焦平面的光，可以会聚在探测孔范围之内，而来自焦平面上方或下方的散射光都被挡在探测孔之外而不能成像。以激光逐点扫描样品，探测针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光点的共聚焦图像，转为数字信号传输至计算机，最终在屏幕上聚合成清晰的整个焦平面的共聚焦图像。 Confocal Principle
每一幅焦平面图像实际上是标本的光学横切面，这个光学横短面总是有一定厚度的，又称为光学薄片。由于焦点处的光强远大于非焦点处的光强，而且非焦平面光被针孔滤去，因此共聚焦系统的景深近似为零，沿Z轴方向的扫描可以实现光学断层扫描，形成待观察样品聚焦光斑处二维的光学切片。把X-Y平面（焦平面）扫描与Z轴（光轴）扫描相结合，通过累加连续层次的二维图像，经过专门的计算机软件处理，可以获得样品的三维图像。 LSCM的基本特点 观察方式：以荧光为主 光源：激光（紫外、可见光、近红外） 照明方式：点照明、逐点扫描 成像方式：共聚焦、逐点成像 输出：实时观测,数字化图像，可以进行图像处理和定量分析多重染色样品的观察 3. 共聚焦扫描显微镜在生命科学研究中的应用 细胞结构、蛋白质（如受体、抗原、抗体、酶、细胞 骨架蛋白等基因表达产物）、DNA、RNA等 细胞膜流动性（荧光光漂白恢复技术） 细胞内氧自由基活性 细胞内钙离子浓度变化 膜电位
德国Zeiss LSM710激光扫描共聚焦显微镜操作说明
德国Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 快速操作手册 制作制作：：Zeiss 光学仪器光学仪器（（上海上海））国际贸易有限公司 孙 凯 2009年6月
目录目录：： 系统组成及光路示意图 实物照片实物照片说明说明 2.1 开机顺序 2.2 软件的软件的快速快速快速使用使用使用说明说明 2.3 显微镜显微镜的的触摸屏控制 2.4 关机顺序
激光扫描共聚焦显微镜系统主要由激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：：电动荧光显微镜电动荧光显微镜、、扫描检测单元扫描检测单元、、激光器激光器、、电脑工作站及各相关附件组成电脑工作站及各相关附件组成。。 系统系统组成及光路组成及光路组成及光路示意图示意图示意图：： 电脑工作站 激光器 扫描检测单元 电动荧光显微镜
实物照片说明实物照片说明：： 电动荧光显微镜 扫描检测单元 CO 2培养系统控制器 激光器 电脑工作站
2.1 开机顺序 （1）打开稳压电源打开稳压电源（（绿色按钮绿色按钮）） （2）主开关 [ MAIN SWITCH ]“ON ” 电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“ON ” 扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“ON ” （3）打开 [ 扫描载物台开关 ] 打开 [ 电动显微镜开关 ] 打开 [ 荧光灯开关 ] （注：具有荧光光强调节具有荧光光强调节旋钮旋钮旋钮）） （4）Ar 离子激光器 “ON ” 顺时针旋转钥匙 至 “—” 预热预热等待约等待约15分钟分钟，， 将激光器 [ 扳钮 ] 由“Standby “Laser run ”状态状态，，即可正常使用 （5）打开 [ 电脑开关 ]，进入操作系统 注：键盘上也具有 [ ]
荧光显微镜介绍及使用
荧光显微镜 一.荧光显微镜(Fluorescence microscope) ： 荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。 在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。 荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜的光源所起的作用不是直接照明，而是作为一种激发标本的内荧光物质的能源。我们之所以能观察标本，不是由于光源的照明，而是标本内荧光物质吸收激发的光能后所呈现的荧光现象。 荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别： 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上； 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人眼。 荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。 荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的
光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。 二．工作原理 光源 多采用200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15m i n。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。 超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。 新型超高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一
共聚焦显微镜使用技巧与心得
共聚焦显微镜使用技巧与心得（一）之荧光原理篇 关键词：共聚焦显微镜心得2014-12-24 09:46 来源：丁香园点击次数：1112 工欲善其事必先利其器，想用好共聚焦显微镜光会用操作可不行，那永远不可能成为“共聚焦达人”，要想成为“达人“必先懂得原理，好吧，开始啦。 什么是荧光？ 荧光： 荧光现象是物质在光的照射下所产生的发光现象。 首先荧光是一种光致发光现象，荧光物质必须是在光的照射下才能发光。否则就是其他的发光现象而不是荧光。例如夜光物质，夜光表，虽然也需要先用光照射，但离开光照射后它还能继续发光，就不是荧光。这叫磷光。另外一个例子是作western blot时用化学发光，也是发光，但不是荧光。 其次，荧光物质发出的荧光与照射光的色彩不同。准确地说，是荧光物质发光的波长与照射光的波长是不同的。典型的荧光物质是在紫外线照射下能发出黄绿色的荧光。例如钱上的的荧光防伪标记，用紫外线照射后能发黄绿色的光。 所以在使用荧光显微镜的照片，观察绿色荧光样品时，你会看到物镜下照射到样品的光是蓝色的光。观察红色荧光样品时，照射样品的却是绿色的光。但在目镜里却能分别看到绿色与红色的荧光图像。 在荧光显微镜里，使用蓝色光照射样品后，样品发出的绿色荧光与照射样品的蓝色光混在一起，经过一个滤光片，把蓝色的照射光过滤掉，这样在目镜上就只看到绿色的荧光了。 样品发出的荧光，虽然有一种颜色，但它并不是单色光，而是有一定波长分布范围的混合光。具体测量出每个波长下的相对光强，作一条光强-波长的关系曲线，这就是荧光光谱了。或者称之为发射光谱。它反映了这个物质发射的荧光的色彩成分。一般情况下，荧光物质的荧光光谱的波长范围并不会太大，所以它会形成某种明显的颜色。例如绿色或红色或黄绿色。通常这个波长范围是几十个纳米。 在荧光的光谱分布中，当然会有一个波长对应着最强的荧光强度，这个波长就是我们平时所说的荧光的波长，又叫最大发射光波长，通常荧光染料的参数中的荧光波长就是这个波长。荧光物质所发出的光实际上是这个波长上下几十纳米范围之内的。 照射样品的光叫激发光。激发光的波长必须比荧光波长短。这是能量守恒的因素。短波长的
共聚焦显微镜
共聚焦显微镜 从一个点光源发射的探测光通过透镜聚焦到被观测物体上，如果物体恰在焦点上，那么反射光通过原透镜应当汇聚回到光源，这就是所谓的共聚焦，简称共焦。共焦显微镜[confocallaserscanningmicroscope(clsm或lscm)]在反射光的光路上加上了一块半反半透镜(dichroicmirror)，将已经通过透镜的反射光折向其它方向，在其焦点上有一个带有针孔(pinhole)的挡板，小孔就位于焦点处，挡板后面是一个光电倍增管 (photomultipliertube，pmt)。可以想像，探测光焦点前后的反射光通过这一套共焦系统，必不能聚焦到小孔上，会被挡板挡住。于是光度计测量的就是焦点处的反射光强度。其意义是：通过移动透镜系统可以对一个半透明的物体进行三维扫描。 激光扫描共聚焦显微镜是二十世纪80年代发展起来的一项具有
划时代的高科技产品，它是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，把光学成像的分辨率提高了 30%--40%，使用紫外或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，在亚细胞水平上观察诸如ca2+、ph值，膜电位等生理信号及细胞形态的变化，成为形态学，分子生物学，神经科学，药理学，遗传学等领域中新一代强有力的研究工具。激光共聚焦成像系统能够用于观察各种染色、非染色和荧光标记的组织和细胞等，观察研究组织切片，细胞活体的生长发育特征，研究测定细胞内物质运输和能量转换。能够进行活体细胞中离子和ph值变化研究（ratio），神经递质研究，微分干涉及荧光的断层扫描，多重荧光的断层扫描及重叠，荧光光谱分析荧光各项指标定量分析荧光样品的时间延迟扫描及动态构件组织与细胞的三维动态结构构件，荧光共振能量的转移的分析，荧光原位杂交研究（fish），细胞骨架研究，基因定位研究，原位实时pcr产物分析，荧光漂白恢复研究（frap），胞间通讯研究，蛋白质间研究，膜电位与膜流动性等研究，完成图像分
激光扫描共聚焦显微镜操作手册
激光扫描共聚焦显微镜（A1R-si） 操作指南
目录 第一章：Ti-E 显微镜操作2-7 显微镜光路调节和照明注意事项 6 Ti-E 物镜，DIC 插片，DIC 棱镜对照表7 第二章：共聚焦开关机8-10 第三章：共聚焦图像拍摄1-38 NIS-Elements C 软件开启和操作界面简介1-15 NIS-Elements C 的实时图像获得基本操作16-23 图像拍摄24-27 探测模式（标准探测器）设置28-38 第四章: 图像的保存和查看39-42 第五章：图像分析43-46 附件一、多维拍摄功能和操作方式介绍47-51 附件二：图像格式批量转换操作52-53
第一章Ti-E 显微镜操作指南 （一）认识显微镜各个部件 （1）滤光片：包括D---毛玻璃；NCB---色温（8）滤色块转盘（包括DIC 检偏器）； 平衡片；ND---减光片；“G IF”---绿色滤（9）手动荧光光闸； 光片和用于PFS 的红外滤光片；（10）电动焦距调节旋钮；（2）视场光阑；（11）ND 减光片； （3）聚光器升降旋钮；（12）遥控器； （4）起偏器（DIC 用）；（13）透射光电源； （5）聚光器对中旋钮；（14）汞灯荧光光源； （6）孔径光阑；（15）PFS 控制器 （7）聚光器模块（包括明视场，DIC）；（16）HUB 控制器
遥控器示意图(根据具体配置有些图标可能不显示) 1）物镜切换按钮； 2）滤光块，DIC 检偏器切换按钮； 3）DIC 检偏器快速切换按钮； 4）光路端口切换按钮； 5）PFS 开关控制按钮； 6）聚光器转盘切换按钮； 7）透射光源控制按钮*。 *请注意：CNTL 按钮灯亮，则可以通过遥控器或电脑控制软件来调节透射光源强度，此时显微镜底座左侧光源开关和调节旋钮锁定；CNTL 功能关闭，可以通过显微镜底座开关和旋钮来控制透射光源。