化药6类申报资料项目及具体要求

口服固体制剂溶出度方法的选择和验证（HPLC法）

1 溶出介质选择

1.1 普通制剂

(1) 酸性药物制剂：0.1mol/L盐酸溶液、醋酸盐缓冲液（pH5.5）、磷

酸盐缓冲液（pH6.8）和水。

(2) 中性或碱性药物/包衣制剂：0.1mol/L盐酸溶液、醋酸盐缓冲液（pH

4.5）、磷酸盐缓冲液（pH6.8）和水。

(3) 难溶性药物制剂：0.1mol/L盐酸溶液、醋酸盐缓冲液（pH4.5）、磷

酸盐缓冲液（pH6.8）和水。

(4) 肠溶制剂：0.1mol/L盐酸溶液、磷酸盐缓冲液（pH6.0）、磷酸盐

缓冲液（pH6.8）和水。

1.2 调释制剂

0.1mol/L盐酸溶液、醋酸盐缓冲液（pH4.0～5.0）、磷酸盐缓冲液（pH6.8）和水。

1.3 溶出介质配制方法

0.1mol/L盐酸溶液：用吸量管取盐酸9ml，加水稀释至1000ml。

醋酸盐缓冲液（pH4.5）：取醋酸钠（三水合物）2.99g加水溶解，加入2mol/L醋酸溶液14.0ml，加水稀释至1000ml。（中国药典2010年版二部附录中没有配制方法，以上是日本药典和美国药典中的配制方法）醋酸盐缓冲液（pH5.5）：取醋酸钠（三水合物）5.98g加水溶解，加入2mol/L醋酸溶液3.0ml，加水稀释至1000ml。（中国药典2010年版二部附录中没有配制方法，以上是日本药典和美国药典中的配制方法）磷酸盐缓冲液（pH6.0）：取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液28ml，用水稀释至1000ml。（中国药典2010年版二部附录中没有配制方法，以上是日本药典和美国药典中的配制方法）磷酸盐缓冲液（pH6.8）：取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml。（中国药典2010年版二部附录XV D）

水：纯化水（质量标准见中国药典2010年版二部）

1.4 注释

溶出曲线一般要考察至少3种介质，对于仿制药，在标准介质中的溶出曲线必做，如果标准介质与上述常用介质不一致，与标准介质最接近的介质不再做。

溶出介质第一次配制时，要测定pH值，与标准值的差值应不超过0.1。溶出介质使用前要加热或超声脱气。

测定溶出曲线时取样点不宜过多，通常为5～6个点，例如：5、10、15、30、45、60分钟；小规格的制剂因采用100～250 ml溶出介质，所以溶出曲线一般可选3～4个时间点。

2 不同类型药物溶出曲线

1类： 高溶解性–高渗透性药物

2类： 低溶解性–高渗透性药物

3类： 高溶解性–低渗透性药物

4类： 低溶解性–低渗透性药物

上述分类原则可作为制定体外溶出度质量标准的依据，也可用于预测能否建立良好的体内-体外相关性（IVIVC）。药物的溶解性是通过将最高剂量单位的药物溶解于250ml pH介于1.0和8.0之间的溶出介质中测定而得。当药物的剂量除以介质中的药物浓度小于或等于250ml时，即为高溶解性药物。一般情况下，在胃肠道内稳定且吸收程度高于85%或有证据表明其良好渗透性的药物，可认为是高渗透性药物。

在禁食状态下，胃内滞留（排空）T50%时间为15 20分钟。对于高溶解性-高渗透性（1类）及某些情况下的高溶解性-低渗透性（3类）药物制剂，以0.1mol/L盐酸溶液为介质，在适当的溶出度试验条件下，15 分钟的溶出度大于85%时，可认为药物的生物利用度不受溶出行为的限制，即制剂的行为与溶液相似。在这种情况下，胃排空速度是药物吸收的限速步骤。如果药物溶出比胃排空时间慢，建议在多种介质中测定溶出曲线。

对于低溶解性-高渗透性药物（2类），溶出可能是药物吸收的限速步

骤，有可能建立较好的体内外相关性。对于此类制剂，建议在多种介质中的测定溶出曲线。

对于高溶解性-低渗透性药物（3类），渗透是药物吸收的限速步骤，可能不具有好的体内外相关性，吸收程度取决于溶出速率与肠转运速率之比。

对于低溶解性-低渗透性药物（4类），制备口服制剂比较困难。

3 溶出方法（转篮法与桨法）及其转速的选择

一般情况下，片剂多选择桨法，转篮法多用于胶囊剂，转速大部分在50～100转/分。转篮法以100转/分为主；桨法以50转/分为主。一般认为桨法50转/分相当于转篮法100转/分。

4 溶出度测定方法的验证（以胶囊为例）

4.1专属性

专属性试验的目的是考察辅料和胶囊壳对溶出度测定有没有干扰。

对照品溶液：取对照品，按标准方法配制。

供试品溶液：取胶囊1粒，置量瓶中，加质量标准中规定的溶剂适量，超声使主成分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，滤过，取续滤液进样。

空白溶液：取空白胶囊，置量瓶中，加质量标准中规定的溶剂适量，超声使充分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，滤过，取续滤液进样。

对照品溶液：取对照品适量，按标准方法配制。

判断标准：空白溶液在主成分的位置不出峰；供试品溶液色谱峰的理论板数、拖尾因子要符合要求；对照品溶液和供试品溶液的峰面积相差不超过10% 。

4.2系统精密度

取专属性项下的对照品溶液，连续进样6次。结果见下表。

进样次数 1 2 3 4 5 6 RSD(%)峰面积

保留时间

要求：峰面积RSD不超过2.0%；保留时间RSD不超过1.0% 。 4.3 线性与范围

取对照品适量，按标准方法配制一系列浓度的溶液，通常不少于6份，例如：10%、25%、50%、75%、100%（标准浓度）、150% 。

最低浓度样品的色谱图中，信噪比要不低于10:1；以峰面积对浓度浓度进行线性回归，线性相关系数r（保留4位有效数字）不小于0.999或R2不小于0.998；y轴截距的绝对值应不超过100%浓度样品峰面积的2% 。

4.4 滤膜吸附（此项试验要在准确度和精密度之前做）

供试品溶液：取胶囊1粒，置量瓶中，加质量标准中规定的溶剂适量，超声使主成分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，分为2份；1份滤过，弃去不同的体积，分别取续滤液进样，另1份离心，取上清液进样。比较峰面积的变化，结果见下表。

样品峰面积吸附量（%）

离心0

弃3ml

弃5ml

弃7ml

判断标准：吸附量应不大于标示量的2% 。

4.5 准确度（要保证主成分能够完全溶解）

取对照品适量，依法配制成相当于标示量50%、80%（一般为标准限度）和100%的供试品溶液，均加入处方量的辅料（包括胶囊壳），每

个浓度平行配制三份，依法测定含量。结果见下表。

表3.2.P.5-45溶出度回收率试验结果

样品

加入量

（mg）

测得量

（mg）

回收率

（%）

平均值（%）1

2

50%

3

1

2

80%

3

1

2

100%

3

判断标准：3个浓度的平均回收率均为98.0%～102.0%；RSD≤2.0%（n=9）。

4.6 溶液稳定性（可以同时做四种介质）

取胶囊1粒，置量瓶中，加质量标准中规定的溶剂适量，超声使充

分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，滤过，取续滤液室温放置，

分别于0、2、4、6、8、12小时进样。

要求：峰面积RSD不超过2.0% 。

4.7 重复性

取胶囊1粒，按标准方法试验，到规定时间后，取样6份，依法测定含量。含量RSD应不超过2.0% 。

4.8 中间精密度

（1）与重复性不同的时间，不同的试验人员，不同的溶出仪和液相。

取胶囊1粒，按标准方法试验，到规定时间后，取样6份，依法测定含量。含量RSD应不超过2.0% 。

（2）与重复性同时取样，由不同的试验人员，用不同的液相试验。测定结果与重复性的结果合并计算，RSD应不超过2.0% 。

注：方法（1）的测定结果与重复性的结果没有可比性。

方法（2）对试验操作要求较高。

4.9 耐用性

溶出度的色谱条件一般会与含量测定相同，但是样品浓度、溶剂通常与含量测定不同，因此仍旧要考察耐用性。暂定考察柱温、检测波长、流速和色谱柱这四项，试验设计同含量测定项。

4.10 溶出曲线对比研究（直接引用）

在制剂的开发研究中，通过对比不同处方之间的溶出曲线，可以较准确地反映药物处方、工艺、生产场地及规模等因素变化对药物体外释放行为的影响。近年来，国外针对溶出曲线的相似性评价方法报道很多，其中f2因子方法因为计算简单、判定结果可靠，作为评价体外溶出曲线相似性的方法，已经被美国FDA的CDER和欧盟EMEA收载并推荐使用。

F2因子的计算公式为：

Rt与Tt分别代表参比和受试制剂第t时间点的平均累积释放度，n 为测试点数。其中如果两条溶出曲线完全一致，则：

f2=50×lg(100)=100；如果一批样品释药完全，而另一批尚未开始释药，则有：f2=50×lg(1)= 0。因此，f2的值的范围在0～100，而且f2越大，两条曲线的相似性越高。

事实上即使是相同处方的产品，其批次不同，在溶出曲线上也会有一定的差异。如果受试与参比制剂溶出曲线的差异不大于参比制剂间溶出曲线的差异，那么就可以认为受试与参比制剂溶出曲线具有相

似性。通常认为，同一处方不同批次的样品，在任一取样点释放度的平均差异不超过10%，是可以接受的。将10%代入式中计算：。因此，FDA与EMEA规定：若受试与参比制剂的溶出曲线间的f2值不小于50，则认为两者相似。

在某些情况下，如果对于任一取样点释放度的平均差异的限定不是10%，则可通过计算得出相应的f2值(临界值)。表1提供了一些释放度平均差异与相应的f2临界值。

表1 释放度平均差异与f2临界值表

Table 1 Average difference of drug release percent and f2 Limit

平均偏差（Average difference） 2% 5% 10% 15% 20%

F2临界值（f2 Limit） 83 65 50 41 36

f2因子的应用条件及注意事项：

1.在进行参比与受试制剂的溶出曲线比较的过程中，时间点间隔

无需相等，但两者所取各时间点必须一致，一般除0时外，选择3点以上，即n≥3。

2.f2计算公式只适用于受试与参比制剂的平均累积释放度差值

<100时的溶出曲线比较（如果二者的差值>100，就会得到一个负值），普通口服制剂要保证药物溶出90%以上，缓释制剂、肠溶制剂药物释放需达到80%以上，或达到释放平台。

3.受试与参比制剂释放曲线上各时间点的平均累积释放度差异，

在平台区达到最小（如果外推到释放100％，差值将为0），在该

区域上取样点的增加会直接导致f2值偏大。因此，受试或参比制剂的药物累积释放度在85%以上的取样点应不多于一个，否则，将会给判定结果带来误差。

4.f2因子比较一般选择每个处方的12个剂量单位的测定均值来进行处理。因为不考虑参比和受试制剂批内样本间差异，所以若参比或受试制剂批内样本间差异较大时，用f2因子来评价两者溶出曲线的相似性时需要谨慎，从第2个时间点至最后1个时间点溶出结果的变异系数应小于10%。

5.f2值与平均偏差之间成非线性关系，它只适用于描述参比与受试制剂溶出曲线的相似性，而不能用于评价受试制剂样本间差异。

总之，f2因子法作为定量描述制剂体外溶出曲线相似性的非模型依赖方法，简单易行、结果可靠。当药品处方、生产工艺、生产地点和生产规模等发生变更后，溶出度检查是比较变更前后制剂产品相似性或差异程度的重要工具和研究工作的重要内容，同时该方法也为口服固体制剂的处方筛选，产品质量控制、生物等效性评价等提供了有力的判定依据。在进行f2因子比较试验时要特别注意样本量、样本批间差异、溶出取样点等是否满足条件，以保证数据的可靠性。