不同品种西兰花种子中莱菔硫烷的HPLC分析
不同品种西兰花种子中莱菔硫烷的
HPLC分析
(作者：__________ 单位：__________ 邮编： __________ )
作者：张婵娟，郭晓玲，孟青，冯毅凡
【摘要】目的建立西兰花种子中莱菔硫烷的HPLC含量测定方法。
方法色谱柱：Waters 公司XBridgeTM C18 (150 mn K 4.6 mm,5 卩m); 流动相：甲醇拟水(体积比30 : 70);流速：1.0 mL/min; PDA检测器；检测波长：240 nm 柱温:30 C。结果莱菔硫烷在14.6?292.5卩g/mL范围内线性关系良好尸0.9994 ，平均回收率为97.32%
(RSD=1.2%。结论本法简便、准确，重复性好，可用作西兰花种子的
质量控制，为不同产地不同品种的西兰花种子的收购及栽培等提供有效
监控依据。
【关键词】西兰花种子；莱菔硫烷；HPLC含量测定
Abstract:Objective To establish a method for content an alysis of sulforapha ne in broccoli seeds.Methods Samples were analyzed on a Waters XbridgeTM C18 (150 mm x 4.6 mm,5 卩m) column by using methanol 拟water (30 : 70) as the mobile
phase.The flow rate was 1.0 ml/ min .The detection wavelength
was 240 nm.The column temperature was 30 °C . Results The calibrati on curve was lin ear over the concen trati on of 14.6 ?292.5 卩g/ml for sulforaphane (r=0.9994).The average recovery of sulforapha ne was 97.32% and RSD 1.2%.C on clusi on The method is simple,accurate,reproducible andean be used for the quality con trol of broccoli seeds.
Keywords:broccoli seeds ; sulforaphane ; HPLC
西兰花又名绿花菜、青花菜等，为十字花科芸苔属甘蓝种中以绿色花球为产品的一个变种，一、二年生草本植物。20世纪50年代，西兰花就已经成为国际上最受欢迎的抗癌抗衰老的十字花科蔬菜，并被誉为“防癌新秀” [1]。
西兰花中所含的来服硫烷、烯丙基异硫氰酸盐、苯乙基异硫氰酸盐等异硫氰酸盐类化合物可以有效地预防肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、直肠癌、胃癌等癌症［2, 3］。而其中的莱服硫烷是目前发现的抗氧化、防癌、抗癌活性最显著的异硫氰酸盐类化合物，是一种有效的保护酶诱导物，能够防护致癌化合物引起的伤害，也因此有开发成抗癌药或保健品的价值，具有较为广阔的市场前景［4］。有关十字花科植物中莱服硫烷的含量测定已有文献报道［5, 6］，本研究对不同产地不同品种的西兰花种子中莱服硫烷的含量进行了比较，方法
简便准确，重复性好，可用作西兰花种子的质量控制，为不同产地不同品种的西兰花种子的收购及栽培等提供有效监控依据。
1仪器与试药
1.1仪器
Waters 2695/2996高效液相色谱仪；Empower色谱工作站；十万分之一电子天平（Sartorius）；KQ；【250B型超声波清洗器（昆山市超声波仪器厂）；FW180密封式高速超细粉碎机（上海市国创建筑机械厂）。
1.2试剂与试药
甲醇（色谱纯，英国TEDIA公司）;三蒸水（自制）；莱菔硫烷对照品（sigma公司，含量〉98%）;实验所用样品见表1,经本院生药教研室鉴定均为西兰花种子。
表1不同品种西兰花种子样品（略）
Tab.1 Sample of differe nt kinds of broccoli seed
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Warers 公司产XbridgeTM C18 （150 mm< 4.6 mm,5 卩m）;流动相：甲醇拟水（体积比30：70）；流速：1.0
mL/min ;检测波长：240 nm;进样量：10卩L;柱温30 C。
2.2对照品溶液的制备
精密称取莱菔硫烷对照品5.85 mg ,置20 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得到质量浓度为292.5卩g/mL的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
取不同品种的西兰花种子，粉碎成粉末，过20目筛,取粉末0.3 g,精密称定，加1 mL蒸馏水，超声30 min后，置35 C水浴水解4 h,加入10 mL甲醇，超声30 min后，滤过，滤渣用约8 mL甲醇分3次洗涤，合并滤液并定容至20 mL。再经0.45卩m滤膜滤过得供试品溶液。
2.4系统适用性试验
分别吸取对照品及西兰花药材溶液各10 L，注入液相色
谱仪。在此条件下，莱菔硫烷色谱峰与其相邻组分峰达到基线分离，理论塔板数以莱菔硫烷计不低于 5 300。见图1。
A.莱菔硫烷对照品；
B.西兰花种子样品
图1 HPLC色谱图（略）
Fig.1 HPLC chromatogram
2.5线性关系考察
精密量取“ 2.3 ”项下储备液分别用甲醇稀释制成质量浓度
为14.6、58.5、117.0、175.5、234.0 和292.5 卩g/mL 的对照品溶液，分别进样20卩L,以峰面积(A )对质量浓度(p )进行回归分析，得回归方程:A=3 743.7 p -2 878.2,r=0.999 4 。结果表明莱菔硫烷的质量浓度在14.6?292.5卩g/mL范围内与峰面积线性关系良好。
2.6重复性试验
精密称取1号种子粉末6份，按“2.4 ”项下制备，依法测定莱菔硫烷的含量。结果平均含量为 1.4014%,RSD为0.49%<
2.7中间精密度试验
精密吸取浓度为292.5卩g/mL的对照品溶液10卩L,重复进样6次，以莱菔硫烷峰面积计算，RSD=0.14%表明中间精密度良好。
2.8稳定性试验
取重复性试验中同一浓度供试品溶液室温下放置，于0、2、4、6、8h后依法测定莱菔硫烷的含量，结果其RSD直为0.84%，表明样品溶液在8 h内测定结果稳定。
2.9加样回收率试验
精密称取9份已知含量的1号种子样品0.15 g,按“ 2.4
项下，同法制成供试品溶液。经0.45卩m微孔滤膜过滤，各取续滤液0.5 mL,分别置于25 mL量瓶中，分别加入不同量的质量浓度为
292.5卩g/mL的莱菔硫烷对照品溶液0.1、0.2、0.3 mL ,甲醇定容
至刻度。按“ 2.1 ”项下色谱条件测定莱菔硫烷的含量，结果平均回收率为97.32%,RSD为 1.20%,见表2。
表2莱菔硫烷加样回收率试验（略）
Tab.2 The results of recovery test
2.10样品的含量测定
取不同品种的西兰花种子按“ 2.4 ”项下，同法制成供试品溶液，依法测定，结果见表3。
3讨论
3.1从表3可以看出，不同品种的西兰花种子中莱菔硫烷的含量有明显差别，台湾和日本进口的西兰花种子莱菔硫烷的含量明显没有我国的高，但是我国产的几种西兰花种子中莱菔硫烷的含量也有较大差别。本方法简便、准确，可作为西兰花种子的质量控制，同时为不同产地的西兰花种子的收购及栽培等提供有效依据。
表3西兰花种子中莱菔硫烷的含量（略）
Tab.3 Con te nts of sulforapha ne in broccoli seeds
3.2制备供试品溶液采用的前处理过程的原理是：异硫氰酸盐以其前体芥子油苷的形式存在于西兰花种子中，完整的芥子油苷没有防癌活性，莱菔硫烷等异硫氰酸盐是由西兰花种子中的芥子油苷经过内
源性黑芥子酶水解才能产生；粉碎种子过程中，随着种子细胞壁的破碎
内源性黑芥子酶得以释放出来］2］。故本试验关键步骤是水解，本试验采用正交试验筛选出了最佳的水解条件；由于甲醇会使黑芥子酶
灭活,故测定加样回收率时采取水解后再加入莱菔硫烷对照品的方法。【参考文献】
:1］季宇彬，池文杰，邹翔，等.西兰花中萝卜硫素提取、分离与抗癌活性研究］J ］?哈尔滨商业大学学报：自然科学
版,2005,21(3):270-273.
:2］单毓娟.十字花科蔬菜的癌症预防作用］J ］.国外医
学卫生学分册,2005,32(5):269-273.
:3]王舒然，夏薇.莱菔硫烷与肿瘤]J].疾病控制杂
志,2004,8 (5) :452-455.
:4 ] LAURENCES，PENGFEI L，SOLANGEL，et al . Sulforapha ne,a n atural occurri ng isothiocya nate ，in duces cell cycle arrest and apoptosis in HT29humancolon cancer cells
萝卜的营养价值及其中的有机硫化合物
萝卜的营养价值及其中的有机硫化合物 食工095班朱燕芳090107819 摘要：萝卜的品种多，有白、红、青，但以白萝卜最为普遍。萝卜一、二年生草本。根肉质，长圆形、球形或圆锥形，根皮绿色、白色、粉红色或紫色。茎直立，粗壮，圆柱形，中空，自基部分枝。基生叶及茎下部叶有长柄，通常大头羽状分裂，被粗毛，侧裂片1～3对，边缘有锯齿或缺刻；茎中、上部叶长圆形至披针形，向上渐变小，不裂或稍分裂，不抱茎。总状花序，顶生及腋生。花淡粉红色或白色。长角果，不开裂，近圆锥形，直或稍弯，种子间缢缩成串珠状，先端具长喙，喙长2、5～5厘米，果壁海绵质。种子1～6粒，红褐色，圆形，有细网纹。原产我国，各地均有栽培，品种极多，常见有红萝卜（变萝卜）、青萝卜、白萝卜、水萝卜和心里美等。根供食用，为我国主要蔬菜之一，种子含油42％，可用于制肥皂或作润滑油。种子、鲜根、叶均可入药，功能下气消积。生萝卜含淀粉酶，能助消化。 关键字：萝卜有机硫解毒医学价值防癌白萝卜营养保健萝卜汁有机酸营养成分干扰素诱生剂芥子油维生素E 蛋白质保健功能 萝卜为十字花科草本植物，又名莱菔，其种子、鲜根、叶均可入药。萝卜性平微寒，具有清热、解毒、散瘀、健胃消食、化痰止咳、顺气利便、生津止渴、补中、安五脏等功能。 萝卜所含的核黄素及钙、铁、磷等，比梨、橘子、苹果还要高，尤其维生素C含量比，比苹果高10倍，比梨高18倍，因此有“萝卜赛梨”之说。 我国栽培、食用萝卜的历史悠久。我们的祖先对萝卜赞美有佳，明朝李时珍对萝卜有这样的评价：“可生可熟，可菹可酱，可豉可醋，可糖可腊可饭，乃蔬菜中之最有利益者”。此外还有关于关于萝卜的大量俗语广为流传，如：“萝卜上市，医生没事”；“萝卜进城，医生关门”；“冬吃萝卜夏吃姜，不劳医生开药方”；“吃萝卜喝茶,气的医生满地爬”；“鱼生火、肉生痰，白菜、萝卜保平安”等。 现代医学研究发现萝卜还有防癌、抗癌、解毒、补血、治痛风、减肥等功效，其药用价值在于营养成分丰富而均衡。 胡萝卜在西方有很高的声誉，被视为菜中上品。荷兰人把它列为“国菜”之一。胡萝卜所含的营养素很全面。据测定，每百克含碳水化合物7.6克，蛋白质0.6克，脂肪0.3克，钙30毫克，铁0.6毫克，以及维生素Ｂ1、维生素Ｂ2、维生素Ｃ等，特别是胡萝卜素的含量在蔬菜中名列前茅，每百克中约含胡萝卜素3.62毫克，相当于1981国际单位的维生素Ａ，而且于高温下也保持不变，并易于被人体吸收。胡萝卜素有维护上皮细胞的正常功能、防治呼吸道感染、促进人体生长发育及参与视紫红质合成等重要功效。 胡萝卜是一种带根皮的蔬菜。据国外报道，常食带根皮的蔬菜，可以强壮身体，御寒耐冷。日本学者认为，带根皮的蔬菜生长在土壤里，根部和皮壳中含有大量
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PI3K-Akt-GSK-3β通路在莱菔硫烷调控心肌冷缺血再灌注损伤中的作用
目次 目次 引言 (1) 第1章实验研究 (3) 1.1试验材料 (3) 1.1.1实验动物 (3) 1.1.2主要仪器设备 (3) 1.1.3主要药品及试剂 (4) 1.1.4主要试剂配制 (5) 1.2试验方法 (6) 1.2.1实验分组 (6) 1.2.2同种异体异位心脏移植模型的制备 (6) 1.2.3心脏移植后24h供心心跳评分 (7) 1.2.4实验取材 (7) 1.2.5移植后24h供心组织的蜡块制备及切片 (8) 1.2.6供心组织HE染色 (8) 1.2.7免疫组织化学法染色（PV-6001二步法） (9) 1.2.8蛋白免疫印迹法（western blotting）检测 (10) 1.2.9统计学处理 (11) 1.3结果 (12) 1.3.1移植后24h各组供心心肌组织学 (12) 1.3.2免疫组织化学检测各组供心心肌组织中Akt、P-Akt、GSK-3β、 P-GSK-3β、Bcl-2、Bax的蛋白表达 (12) 1.3.3蛋白免疫印迹（Western bolt）法检测各组供心心肌组织中Akt、 P-Akt、GSK-3β、P-GSK-3β、Bax、Bcl-2的蛋白表达 (15) 1.4讨论 (18) 1.5小结 (27) 1.6不足与展望 (27) 参考文献 (27) 第2章综述 (33) -V-
华北理工大学硕士学位论文 PI3K/Akt/GSK-3β信号通路与心肌缺血再灌注损伤的相关性研究 (33) 参考文献 (37) 结论 (40) 附图 (41) 致谢 (55) 导师简介 (56) 作者简介 (57) 学位论文数据集 (58) -VI-