胎盘组织及血液中含有丰富的造血干_祖细胞
胎盘组织及血液中含有丰富的造血干/祖细胞
周胜利,宋剑秋,旭 日
(山东脐带血干细胞中心,济南250002)
摘要 大量的临床移植表明人脐血(UCB)可以在造血干细胞移植的儿童中得到造血重建,可是在成人中脐血移植(UCB T)效果并不理想,这主要是脐血中所含的细胞数及造血干/祖细胞数有限,而不适宜体重较大的成人。本研究在收集脐血的同时,也分别收集胎盘血(U PB)及胎盘组织(U PT)中的细胞,检测有核细胞数,CD34(造血干/祖细胞的表明标记)阳性细胞,粒单细胞集落(CFU2GM)。结果发现:来自于胎盘血和胎盘组织中的有核细胞数是脐血细胞的3-4倍;脐血、胎盘血及胎盘组织细胞的有核细胞数分别为(8.3±1.04)×108,(16.33±5.54)×108和(8.01±2.64)×108;CD34+细胞分别为(0.77±0.01)×106,(1.25±0.55)×106和(4.21±1.90)×106;在细胞的长期培养中,U PB细胞和U PT细胞能生存更长时间,而且这些细胞更易贴壁形成纤维样的细胞;冰冻前后U PT细胞活性及回收率无明显差异,表明胎盘细胞和脐血细胞一样适合于长期储存;而且,在U PB和U PT中含有更高比例的T淋巴细胞抑制细胞群,可能意味着U PB和U PT具有更强的免疫抑制功能。结论指出,有必要建立含有胎盘和脐血细胞的血库,以便为大剂量放疗及化疗后的儿童及成年病人进行造血干细胞移植,为重建造血创造条件。
关键词 脐血;脐血库;胎盘组织;胎盘血;造血干/祖细胞
中图分类号 R714156;Q462
Rich H ematopoietic Stem/Progenitor Cells in the H uman Placenta Tissue and Placenta Blood
ZHOU Sheng2Li,SON G Jian2Qiu,XU Ri
(S handong U mbilical S tem Cell Center,Ji nan250002)
Abstract Clinical transplantation evidence has indication that umbilical cord blood(UCB)can be useful in the hematopoietic reconstitution in the children,but not well in the adult patients because of the low cell count.The purpose of our study was to evaluate a new method for collection of blood cells from human placenta and umbilical cord.We have simultaneously harvested blood cells from umbilical cord(UCB),placenta blood(U PB)and placenta tissue(U PT)for their content of nucleated cells,CD34(hematopoietic stem progenitor maker)positive cells.Result showed that the nuclear cell(NC)from U PB and U PT has three to four times than that from umbilical cord blood only,(8.3±1.04)×108(UCB),(16.33±5.54)×108(U PB),and(8.01±2.64)×108(U PT).CD34+cells are(0.77±0.01)×106, (1.25±0.55)×106and(4.21±1.90)×106respectively.The cells from U PB and U PT have more survival ability than the cells from UCB in the long2term cell culture condition.It is clear that the blood stored in the liquid nitrogen did not show large loss of total nucleated cell count and CD34+cells.It was observed that U PT and U PB contained more suppressor lymphocytes,which may be important in prevention of graft2versus2host disease.In conclusion,our data may have implications for the development of placental blood collection together with umbilical cord blood banking for the stem cell transplantation.
K ey w ords umbilical cord blood;umbilical cord blood bank;umbilical placenta tissue;umbilical placenta blood; hematopoietic stem/progenitor cell
在人类的胚胎发育中,造血干/祖细胞首先发生在胎儿卵黄囊中,4个月后转移到胎儿肝脏中生长分化,新生儿出生后就定位在骨髓中,由骨髓不断地生长出各种不同发育阶段的白细胞,红细胞和血小板。人们曾经采用过富含造血干/祖细胞的胎肝用于造血干细胞移植,但由于来源困难以及细胞量的不足,而不能大规模用于临床。近十余年来,人们已发现在脐血中含有丰富的造血干/祖细胞[1]。脐血来源广泛,HLA配型对移植要求不严格,从而在世界各地纷纷建立起脐血库,开展脐血移植[2-4]。到目前,全世界已开展近2000例脐血移植。临床资料证明,脐血移植对于体重大于40公斤的病人的效果并不理想,即使在成功的儿童脐血移植中,血小板回
通讯作者:周胜利 电话:(0531)2999222-2502.传真:(0531) 2999533.E2mail:shengliz@https://www.360docs.net/doc/5c17105399.html,
?
2
4
1
?中国实验血液学杂志 Journal of Ex perimental Hem atology2002;10(2):142-147
升时间也较骨髓移植为长[5]。
我们采用一种简单有效的方法分离胎盘中的细胞,发现在胎盘中有二类细胞,一类是切割胎盘后的胎盘血细胞(U PB),另一类是胎盘碾磨后的组织细胞(U PT),这二类细胞均含丰富的CD34阳性的造血干/祖细胞。二类细胞的总数约为脐血细胞的3 -4倍。这样,建立一座含有胎盘和脐血细胞的血库,就能有足够的细胞应用于儿童和成人间的造血干/祖细胞移植。
材料与方法
孕产妇病史调查
同脐血采集前的孕产妇调查[7]。
胎盘和脐血采集、组织配型、造血祖细胞集落培养及流式细胞术CD34+细胞计数
方法同文献[7]。
深低温保存
按K ogler等[10]脐血的深低温保存方法进行。
贮存细胞的冻融
方法与脐血细胞的冻融相同[7]。
胎盘血和胎盘组织细胞的收集
在收集完脐血后,尽可能保持胎盘的无菌状态和完整性,以无菌布包好后送到脐血库的无菌车间。用无菌生理盐水冲洗净胎盘外的血迹,然后用双止血钳夹住脐带根部,用无菌剪刀在止血钳之间剪断脐带,以及去除附着于胎盘表面的包膜,再用无菌生理盐水清洗2次。将完整胎盘置于1000ml无菌烧杯内,以无菌剪刀剪碎胎盘,收集从粉碎胎盘中流出的血液,称为胎盘血(U PB)。将碎胎盘置于无菌不锈钢网上,用研钵棒一边研碎胎盘,一边用无菌生理盐水冲洗,收集从研磨后冲洗下的细胞,用滤网和注射器反复过滤数次,去除任何残留组织,离心用生理盐水洗2次,所收集的细胞称为胎盘组织细胞(U PT)。
细胞的长期培养
在IMDM中加入20%的脐带混合血浆,10% 56℃灭活胎牛血清和1%(v ol/v ol)抗生素,制备成细胞培养液。用该培养液调整UC B,UPB及UPT的细胞浓度为2×106/ml,以10ml分别加入25ml的培养瓶中,置于37℃,5%CO2孵育箱中培养。每周半量换液2次,并每周做细胞计数和细胞活性检测。
贴壁细胞的传代培养
以长期培养的相同方法把细胞置于25ml培养瓶中,每周换液2次。待细胞贴壁并长满培养瓶底后,先用不含血浆的IMDM冲洗培养瓶2次,加入0.5%胰蛋白酶(trypsin)消化约5分钟,倒出胰蛋白酶溶液,加入细胞培养液,反复冲洗粘于培养瓶壁上的细胞,离心清洗1次,调整细胞的浓度为2×106/ ml,加入到另1个25ml培养瓶中,置于37℃,5% CO2孵箱中继续培养。
统计学分析
应用计算机软件:Stat View(Abacus Concepts, Berkeley,CA,USA)计算分析。每个数值均计算出平均值和标准差,采用t检验的方法。
结 果
细胞活性的比较
检测不同时间和不同温度对这些细胞的影响。表1比较在同样的抗凝剂(CPDA21),同样的细胞浓度(2×106/ml)分别在4℃和25℃(室温)下细胞的活性和计数,表明U PB和UCB在同样的条件下具有同样的细胞活性,而U PT在开始时间活性较UCB为低,但这个细胞活性和计数并不随着温度和时间而有所改变。说明活性低是由于研磨时的细胞损伤,而活性好的细胞并不会随时间和温度改变而死亡。
T able1 I nfluence of time and temperature on survival of nucleated cells in UCB,UPB and UPT
Cell type
Time
(hours)
Temperature
Viability
(%)
Nucleated cells
(×10-6)
UCB 03 4℃ 100 2
25℃100 1.8
84℃1002
25℃100 1.7
U PB04℃1002
25℃100 1.8
84℃100 1.8
25℃1002
U PT04℃752
25℃802
84℃75 1.9
25℃752
3:immediate test after cell harvest.UCB:umbilical cord blood.
U PB:umbilical placental blood.U PT:umbilical placenta tissue CD34+及有核细胞数目
共收集5个胎盘及相应的脐血,从收集到处理
?
3
4
1
?
胎盘组织及血液中含有丰富的造血干/祖细胞
细胞的平均时间为6小时,最长的为18小时。表2比较UCB ,U PB 和U PT 的有核细胞数、CD34+细胞数及淋巴细胞辅助性/抑制性(H/S )细胞的比值。尽管每次收集UCB ,U PB 及U PT 差异很大,但显然U PB 及U PT 细胞的合计数约为脐血有核细胞的2-3倍。图1为UCB ,U PB 和U PT 在流式细胞仪
中的计数图像,所含有CD34+细胞的浓度分别为01046%,01077%和01343%。表2中也看出U PT 所含CD34+细胞最多,U PB 其次,UCB 最少,而且CD34+细胞的浓度也是U PT 为最高,UCB 和U PB 类似。在CFU 2GM 集落培养中,U PB 和U PT 产生的集落细胞远比UCB 的为大,细胞数也多,从集落
T able 2 Nucleated cellularity and hem atopoietic progenitor cells in unfractionated hum an UCB,UPB,and UPT (n =5)
Cell type
UCB
U PB
U PT U PB +U PT/UCB
Total leukocyte (×10-8) 8.30±1.04
16.33±5.54
8.01±2.64 2.91±0.53
Neutrophil (×10-8) 4.22
±0.88 5.21±2.34 1.9±0.71Monocyte (×10-8) 4.10±0.6711.33±5.13 6.1±1.66CD34+cell (×10-6)0.77±0.01 1.25±0.55 4.21±1.90 6.35±1.25CD34+cell (%)0.13±0.020.08±0.030.43±0.11T lymphocytes H/S
3.45±1.38
1.28±0.48
0.7±0.10
Values are x ±s .H/S :helper/suppressor
Figure 1 Flow cytometry test among UCB,UPB and UPT.C ells w ere incub ated with anti 2CD34monoclonal antibody ,labeled with PE.A fter incub ation without w ash ,cells w ere directly put into flow cytometer for test of CD34+cells.CD34+cell concentration :A :UCB 0.046%.B :UPB 0.077%.C :UPT 0.343%
?
441?中国实验血液学杂志 J Ex p Hem atol 2002;10(2)
Figure2 T lymphocytes test from UCB,UPB and UPT in flow cytometry.Three Anti2CD3,CD4and CD8monoclonal antibodies, labeled with PerCp,FITC and PE w ere incub ated with cells and determined in flow cytometry.T helper/suppressor ratio:A:UPT 0.59.B:UPB0.75.C:UCB1.63
细胞取细胞再集落可达3-4次,而UCB只有1-2次。
T淋巴细胞数
图2为在这三类细胞中T淋巴细胞的检测, UCB,U PB和U PT的T淋巴细胞H/S的比值分别为1.63,0.75和0.59,说明在UCB中含有更多的辅助性T细胞,而U PT中含有更多的抑制性T细胞。
长期培养的影响
采用未加任何细胞因子含血清的培养液长期培养UCB,U PB和U PT细胞。图3中可看出在长达12周的培养中,U PT及UCB细胞数在第5周则开始下降,而U PB在第11周时,细胞总数还在上升,比起始细胞数增加约2倍。根据我们多次UCB长期培养的经验,在CD34+细胞未纯化的原代培养中,一般在未加细胞因子的培养液中只能存活6-8周,6周后细胞活性及有核细胞数明显下降,
很快出Figure3 Long term cell culture from unseparated blood among UPT,UPBand UCB.C ells w ere cultured in a volume of 10ml at1×10-6cells per milliliter in the pool umbilical cord plasm a DMEM without cytokines with w eekly estim ation of total cell count and cells w ere recultured at1×10-6/ml with fresh medium
?
5
4
1
?
胎盘组织及血液中含有丰富的造血干/祖细胞
现成片的细胞死亡。而在U PB 及U PT 的培养中,不但细胞存活时间长,而且出现大量的基质细胞,呈成纤维样和较大的卵圆形的细胞。
基质细胞
按照细胞培养的方法,长期培养UCB ,U PB 和U PT 细胞,第4周后换液时不再保留悬浮细胞。在U PB 及U PT 培养中,约第2周即可看到贴壁细胞,而UCB 在第4周时可看到贴壁细胞,组织培养到第7或第8周时,U PB 和U PT 细胞可长满整个培养瓶。图4显示出UCB 及U PB 和U PT 细胞的基质细胞,这些细胞呈成纤维样细胞,胞体大,胞浆丰富,形态不规则,而在U PB 和U PT 中可发现较多双核细胞,细胞生长呈中心聚集状态。当采用胰蛋白酶消化传代,一般UCB 在传到第3代后,基质细胞就不易贴壁,而U PB 细胞和U PT 细胞易于传代,在第7代后还能迅速在培养瓶中生长。采用DMSO 冰冻保存这些贴壁细胞,再次冻融培养后,细胞仍能在培养中贴壁生长
。
Figure 4 Strom a cell layer from placenta blood.The unseparated cells from placenta blood w ere cultured in DMEM containing 20%umbilical plasm a for 5w eeks.C ells began to stick on the plate and have spreaded and flatted to form a patch of giant f ibroblast 2like cells ,covering whole plate
母亲血细胞或细菌的污染
脐血细胞中常有极少量母亲血细胞的污染[11],但这并不影响脐血干细胞的移植[12]。一般也只在采用DNA 扩增的方法时才能发现有母亲血细胞混入脐血。我们采用HLA PCR 2SSP 的方法检测U PB 和U PT 中的细胞,以确认采用我们这种分离U PB
和U PT 细胞的方法是否会加重母亲血细胞的污染。未发现相应的U PB 和U PT 细胞有增加细菌污染的可能。
细胞的冰冻保存和复苏
分别采用5ml 冰冻管或50ml 冰冻袋贮存细胞,其内的细胞浓度为2×107/ml 以及终浓度为10%DMSO ,程控降温仪冷冻细胞到-80℃后,转移到液氮罐内深低温保存。在保存1-2个月后,细胞在37℃水浴中迅速融化,检测细胞回收率和细胞活性及CD34+细胞,如表3所示,深低温保存并未对细胞活性及细胞的回收率发生影响。
T able 3 Leukocytes and hem atopoietic progenitors in placenta tissue before freezing and after tha wing(n =3)
Cell type
Mean cell count/unit ×10-6fresh thawed P
Total leukocyte (×10-8)8.5±2.4
8.4±2.7
>0.5
Viable leukocyte (%) 80±5.1
75±3.7
0.5
Neutrophili (×10-8) 2.5±0.6 2.3±1.0>0.5Lymphocyte (×10-8) 6.0±1.97.1±1.8>0.5
CD34+cell (×10-6)
3.8±1.5
2.8±1.3
0.1
讨 论
本文采用较为简单易操作的方法分离U PB 及U PT 内的造血干/祖细胞。采用这种方法所得的细胞,其母亲血及细菌的污染率并不比脐血为高,但可增加细胞数以及CD34+细胞2-3倍。从胎盘血收集到的细胞数为(16.33±5.55)×108,CD34+细胞数为(1.25±0.55)×106;胎盘组织中收集到的细胞数为(8±2.64)×106,CD34+细胞数为(4.20±1.90)×106。这样把胎盘血和胎盘组织细胞合在一起,其细胞数约为脐血的(2.91±0.53)倍,CD34+细胞数为(6.35±1.25)倍。如果说,一个脐血移植能使40公斤以下的病人得到造血干细胞重建,那么胎盘-脐血所含的细胞数和CD34+细胞就能用于100公斤左右体重的病人。在脐血中H/S T 细胞的比值为3.45±1.38,而在U PB 及U PT 中的比值分别为1.28±0.41及0.70±0.10,这就表明在胎盘组织中含有更多的抑制性T 细胞,这也可能是母体不能排斥胎儿的重要原因之一。如果在脐血移植中输入U PT 细胞是否能更好的抑制GV HD ,显然对此问题还需更多的临床实验。
和UCB 一样,U PB 和U PT 采用DNA 扩增方
?
641?中国实验血液学杂志 J Ex p Hem atol 2002;10(2)
法常可检测到母亲细胞的存在,但临床上证明UCB 移植比骨髓移植产生的GV HD轻,甚至混合脐血移植也未见GV HD加重。脐血库是用液氮深低温保存大量的完成HLA配型的脐血,那么U PB和U PT 是否也能像脐血一样深低温保存呢?U PT和UCB 一样是血液细胞,无疑和UCB一样可长期保存,本实验重点检测U PT冰冻前后的活性和回收率。实验表明胎盘血中细胞可以按脐血细胞一样储存和冻融,其有核细胞的回收率在90%左右,活性也和冰冻前细胞无明显差异,这为建立胎盘脐血库提供了实验依据。
当把未分离的UCB,U PB及U PT细胞在无细胞因子的培养液中长期培养时,观察到U PB和U PT细胞比UCB能维持更长时间。UCB细胞一般只能存活6-8周,而U PB和U PT细胞可维持14周以上,而且出现大量的基质细胞,U PB细胞在培养12周后,还较起始细胞增加约2倍。更为重要的是来自于U PB和U PT的基质细胞可以连续传代10次以上,深低温保存冻融后还能贴壁生长,流式细胞术检测CD34及成熟白细胞(CD45)标记全为阴性,这些细胞是否具有分化成其它细胞的潜能还有待更多的研究[14-16]。
参考文献
1Broxmeyer HE,Douglas GW,Hangoc G,et al.Human umbilical cord blood as a potential source of transplantable hematopoietic stem/ progenitor cells.Proc Natl Acad Sci USA,1989;86:3828-3832 2G luckman E,Broxmeyer HA,Auerbach AD,et al.Hematopoietic reconstitution in a patients with Fanconi′s anemia by means of umbilical cord blood from an HLA2identical sibling.N Engl J Med, 1989;321:1174-1178
3G luckman E.Umbilical cord blood bank for transplantation of hematopoietic stem cells in man.Nouv Rev Fr Hematol,1993;35: 293-294
4Rocha V,Wagner J E,Sobocinski KA,et al.Graft2versus2host disease in children who have received a cord2blood or bone marrow transplant from an HLA2identical sibling.Eurocord and International Bone Marrow Transplant Registry Working Committee on
Alternative Donor and Stem Cell Sources.N Engl J Med,2000;
342:1846-1854
5Laughlin MJ.Umbilical cord blood for allogeneic transplantation in children and adults.Bone Marrow Transplantat,2001;27:1-6
6Bertolini F,Lazzari L,Corsini C,et al.Placental blood collection and banking for transplantation.Bone Marrow Transplant,1995;
15(Suppl.2):Abstr.56
7周胜利,沈柏钧,阎文瑛等.山东脐血库3000份脐带血处理保存的操作程序.中国实验血液学杂志,2001;9:153-159
8Rubinstein P,Dobrila L,Rosenfield RE,et al.Processing and cryopreservation of placental/umbilical cord blood for unrelated bone marrow reconstitution.Proc Natl Acad Sci USA,1995;92:10119 -10122
9Almici C,Carlo2Stella,Wagner J E,et al.Clonogenic capacity and ex vivo expansion potential of umbilical cord blood progenitor cells are not impaired by cryopreservation.Bone Marrow Transplant, 1997;19:1079-1084
10K ogler G,Sarnowski A,Wernet P.Volume reduction of cord blood by Hetastarch for long2term stem cell banking.Bone Marrow transplant,1998;22(Suppl):1S14-15
11Scaradavou A,Carrier C,Mollen N,et al.Detection of maternal DNA in placental/umbilical cord blood by locus2specific amplification of the non2inherited maternal HLA gene.Blood,1996;88:1494-1500
12Petit T,Dommergues M,Socie G,et al:Detection of maternal cells in human fetal blood during the third trimester of pregnancy using allele specific PCR amplification.Br J Haematol,1997;98:767-771
13Rocha V,Chastang C,Laporte J P,et al.Unrelated umbilical cord blood transplants in adults with hematological malignancies.Blood, 1998;92(Supp1):144a
14Devine SM,Bartholomew AM,Mahmud N,et al.Mesenchymal stem cells are capable of homing to the bone marrow of non2human primates following systemic infusion.Exp Hematol,2001;29:244 -255
15K oc ON,Lazarus HM.Mesenchymal stem cells:heading into the clinic.Bone Marrow Transplant,2001;27:235-239
16Petersen BE,Bowen WC,Patrene KD,et al.Bone marrow as a potential source of hepatic oval cells.Science,1999;284(5417): 1168-1170
(2001-02-23收稿;2001-11-30接受)
?
7
4
1
?
胎盘组织及血液中含有丰富的造血干/祖细胞
造血干细胞捐献倡议书
造血干细胞捐献倡议书 捐献造血干细胞，让血脉相融，让真情永在。下面小编为大家精心整理了造血干细胞捐献倡议书，希望能给你带来帮助。 造血干细胞捐献倡议书篇一：尊敬的社会各界朋友、爱心人士：我国每年有400 多万病患者等待着造血干细胞移植，仅白血病患者，全国每年新增4万人，主要发病年龄在35岁以下，其中50%以上是儿童。这些患者大部分需要造血干细胞移植的救治。目前，中国红十字会正在扩充中华骨髓库，随着资料库的扩充，将使成千上万的白血病患者和其他可以用此种方法治疗的患者获救。造血干细胞是人体骨髓中有一种能起着造血功能的细胞。人失血或捐献造血干细胞后，可刺激骨髓加速造血，1-2周内，就恢复原来水平。因此，捐献造血干细胞不会影响健康。 伊宁县红十字会20xx年以来开展捐献造血干细胞采血样工作。县直范围内采集了36人(份)的造血干细胞血样，至今我县已捐献移植成功2名。 按照伊犁州红十字会的安排，在世界红十字博爱周活动期间，集中开展造血干细胞采集血样工作。 我们向社会各界的爱心人士发出倡议，如果您年龄合适、身体健康，志愿捐献造血干细胞，请奉献您的爱心，积极报名参加，献出您博大的爱心，用您崇高的精神照亮每一个患者的心，给千百万患者一份生命的希望!
倡议人：XXX 时间：XXXX年XX月XX日 造血干细胞捐献倡议书篇二：XXX： 朋友，当我们每天享受惬意生活、感受美好生命的时候，你可曾想到，我们身边还有许多忍受病痛、挣扎在死亡边缘等待捐献造血干细胞的人，等待着万分之一配型成功的生命曙光，更是等待着我们的爱心。 我国现有约400万名血液病患者，仅白血病患者每年新增4万人。他们等待着造血干细胞移植。捐献造血干细胞很简单，不是“钻骨抽髓”的概念，和献血的过程一样，都是在肘静脉处采集，几乎没有痛苦，不会影响人体健康，所需要的只是你的一点勇气和一份爱心。 在美国造血干细胞捐献者资料库的库容量是460万，欧洲是370万，台湾是24万。而在有着13亿人口的我国大陆，目前还不到100万，远不能满足占世界1/4人口华人的需要。透过一双双充满期待的眼睛，我们看到的是患者在生死线上挣扎，是他们对生命的渴望和期待。挽救生命比什么都重要，只要我们献出一点爱，生命就会因你而精彩。过去我们可能曾得到过别人的帮助，现在只要拿出一点勇气，就有可能延续一个人的生命，挽救一个几乎破碎的家庭。造血干细胞移植不仅可以使身患绝症的病人获得第二次生命，还可以实现奉献者帮助他人的心愿，是社会文明与道德风尚程度的具体表现，是社会主义精神文明所大力倡导的一项社会公益事业。积极参与造血干细胞捐献活动，为推动社会文明与进步做出积极贡献。
胎盘造血干细胞库建立计划书
胎盘造血干细胞库建立项目计划书 一、胎盘造血干细胞库建立项目目的 本计划要建立一座大型的世界一流水平的胎盘造血干细胞提取、保存，造血干细胞治疗和相应的研究开发和应用公司，为所有的客人提供配型完全相符、质量可靠、数量充足的胎盘造血干细胞用于治疗各种血液性疾病。 项目的主要业务是储存胎盘造血干细胞，以期当需要时可随时提供病人所缺乏的造血干细胞，这就是当前较为前沿的细胞治疗。目前，国外已开始有个案的临床报告，相信很快就会进入临床应用，而一旦胎盘造血干细胞移植开始实现，不但能为成千上万的病人造福，也有巨大的商业价值。 二、背景概述 20世纪末，世界生命科学领域最重要的进展有二：一是人类基因组完成DNA 序列测定，二是干细胞生物学研究取得突破，这两大科学进展将使生命科学在21世纪发生革命性的变化。人类基因组工程发现了人类各种致病基因及生理性基因，这个学科能使人们了解自身生命的奥秘和疾病发生发展的机制，早期诊断疾病及时采用有效预防保健和治疗措施。干细胞生物工程的研究课题使人体的自我修复变成了可能，干细胞可以修复、改善或取代人体内损伤、缺失、病变、衰老的组织或器官，可以治疗目前不能治愈的大多数疾病。 干细胞是具有自我复制和向各种细胞分化潜能的原始细胞，是形成生命机体各组织器官的起源细胞。人类个体的发育过程实质上就是干细胞的自我更新和增殖分化的过程。人体内所有血细胞、红细胞、白细胞、血小板等，都是由造血干细胞分化而来。而各个器官的细胞也是分别来源于各个器官的干细胞，像肝脏、神经、脑组织、胰腺、皮肤等。 美国脐血干细胞中心的建设始于20世纪90年代初，现有46个脐血中心，其中公共中心18个，自体中心28个。纽约血站在美国卫生总署(NIH)的帮助下，首先建成世界上第一个脐带血干细胞中心并在临床应用。到现在，美国已建立起可容纳55000份脐带血的大型冷冻中心，目前已冻存17000多份脐带血向临床提
胎盘干细胞保存方法
胎盘干细胞保存方法 现在很多疾病医学是不能够治疗的，比如白血病就需要通过符合匹配的骨髓才能够治疗患者的疾病。其实通过胎盘干细胞就能够发育分化成这些我们所需要的物质，而且胎盘的干细胞生殖能力比较大，所以对于患者来说是比较有效的。那么胎盘干细胞的保存就成为了棘手的问题了。 目前科学发现的胎盘干细胞中含有：胎盘间充质干细胞、胎盘亚全能干细胞、胎盘造血干细胞。 胎盘干细胞为通过胎盘组织采集获得的干细胞。新生儿降生之时，一般可通过三种渠道获得干细胞。 第一种为脐带内血液源采集造血干细胞。 第二种为脐带自身内采集脐带源间充质干细胞。 第三种为胎盘源采集胎盘干细胞。 胎盘源干细胞在临床应用前景中，存在举足轻重的作用。在
自体器官修复、克隆移植，美容，遗传类疾病治疗，及心脏病、肝病、糖尿病等多个等领域拥有无限前景。 胎盘亚全能干细胞是取自胎盘组织的一类亚全能干细胞，胎盘亚全能干细胞具有以下特性： 1. 具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下具有分化为间充质干细胞，上皮干细胞、神经干细胞、肝干细胞，肌细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力。可以用来修复受损或病变的组织器官，治疗心、脑血管疾病、神经系统疾病、肝脏疾病、骨组织病、角膜损伤、烧伤烫伤、肌病等多种疾病。 2.具有免疫调节作用，通过负性免疫调节功能，抑制机体亢进的免疫反应，使机体免疫功能恢复平衡，从而可以用来治疗造血干细胞移植之后的免疫排斥反应以及克隆氏病、红斑狼疮，硬皮病等自身免疫系统疾病。 3.胎盘亚全能干细胞定向培养的间充质干细胞是人体微环 境的重要组成部分，移植间充质干细胞可以改变造血微环境，重建免疫系统，促进造血功能恢复，与造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等的治疗效果。
第十二章 造血干细胞及免疫细胞的组成
第十二章造血干细胞及免疫细胞的组成 （参考答案） 一、单选题： 1、出生后，人造血干细胞的主要来源是 A.淋巴结 B.脾脏骨髓 D.胸腺 E.肝脏 2、人多能造血干细胞表面具有鉴别意义的标志是 3、对于多能造血干细胞错误的叙述是 A.是各种血细胞的共同祖先 B.具有自我更新和分化两种功能 C.出生后，多能造血干细胞主要来源于骨髓 是多能造血干细胞的重要表面标志 E.可增生分化为多种功能不同的血细胞 4、人B细胞分化成熟的部位是 骨髓 B.肝脏 C.扁桃体 D.脾生发中心 E.肠集合淋巴结 5、与造血干细胞分化无直接关系的是 A. multi-CSF B.骨髓细胞外基质 D.SCF E.骨髓基质细胞 二、填空题 1、人造血干细胞的主要表面标记为 CD34 和 CD117 。 2、多能造血干细胞具有自我更新和分化两种重要的潜能。 3、骨髓、胸腺造微环境是造血干细胞发育分化的重要条件。 4、多能造血干细胞最初分化为定向干细胞，包括淋巴样干细胞和髓样干细胞。 三、名词解释： 1、多能造血干细胞——是具有自我更新和分化两种重要能力的细胞，使机体在整个生命过程中保持造血能力。 2、定向干细胞——由干细胞最初分化形成的细胞被称为定向干细胞，如造血干细胞分化成为淋巴样干细胞和髓样干细胞。
3、阳性选择——CD4+CD8+双阳性前T细胞(胸腺细胞)与胸腺皮质上皮细胞表面MHC-Ⅱ类或I类分子发生有效结合时,就可被选择而继续发育分化为具有TCR的CD4+或CD8+”单阳性”细胞。反之,则会发生细胞调亡，此即为阳性选择过程。经过这一选择，CD4＋或CD8＋T细胞获得识别抗原肽-MHC-Ⅱ类或I类分于复合物的能力，即决定T细胞应答的MHC限制性。 四、问答题： 1、多能造血干细胞的主要特征及其表面标志。 ⑴、具有自我更新（self-renewing）和分化(differentiation)能力。 ⑵、CD34、CD117、不表达谱系特异性标志Lin-（CD2、CD3、CD14、CD16、CD19、CD24、CD56、CD66b、血型糖蛋白） 2、抗原识别受体多样性产生的机制。 ⑴、组合原因：基因库中有几百个V区基因、众多的D、J基因，?可以随机组合； ⑵、连接原因：进行V—D—J、V—J重组时，连接处的碱基移位切除、整合，使互补决定簇多样性成10倍以上增长； ⑶、体细胞突变：抗原刺激后的体细胞基因突变，只发生在已经重排过的V区基因上，增加了抗体的多样性。
大鼠的骨髓间充质干细胞提取
大鼠的骨髓间充质干细胞提取 第一步，SD大鼠麻醉处死，75%乙醇皮肤消毒，无菌条件下迅速剪开两侧后肢皮肤及肌肉，取股骨及胫骨，浸泡在PBS中。 心得体会：①鼠龄4周，重量在160-200g之间的雄性SD大鼠。老鼠太老了，骨髓都分化的太厉害，没有年幼老鼠的骨髓这么有活力。雌的也行，但是雌的比较厉害，咬人。Wistar 大鼠行不行，也行，但是就品种而言，SD的生存力更强大。 ②我个人认为引颈处死不人道。麻醉药品为氯胺酮、安定、阿托品各一支混到一起，腹腔麻醉，保证30秒老鼠躺倒，安乐死。如果你水平够高，可以直接用注射器抽取心脏内的血液，可以减少手术中老鼠出血较多而影响术野不清的问题。 ③老鼠的两支前肢取下来也行，但老鼠太小，前肢更小，如果你的确需要大量的细胞取下来也无妨。浸泡的15ml的一次性离心管中（也可以用培养皿），管中提前加好含有青链霉素的PBS 10ml就行了，青链霉素的浓度为500U／ml，这样是区别于生长液中青链霉素浓度，组织抑菌是200-500U／ml，生长液抑菌是20-100U／ml。就当初步的消毒吧！ ④整个手术过程要快，一般控制在20分钟之内，时间长了，骨髓会凝，不利于后期的冲洗。老鼠浑身都是宝，可以叫上研究脂肪的，嗅鞘的，心肌的其他人员一起来，把剩下不要的老鼠尸体给别人，做实验要巧花钱。一般老鼠一条腿的一根股骨就够种在一个60mm的皿里了，具体根据个人经验而言。 第二步，⑴将装有骨头的离心管置于紫外线下消毒30分钟后移至超净台，倒掉PBS后，再用含青链霉素的PBS清洗骨头三遍。 ⑵去掉骨头两侧的骨骺端，暴露出骨髓腔，用5ml的一次性注射器吸取5.2ml的细胞生长液，用针头插到骨头的一端冲洗，然后换另一端接着冲。将骨髓冲出的细胞生长液至60mm培养皿中（皿最好倾斜45度），冲洗数次直至将绝大部分骨髓冲出。 ⑶换1ml注射器的针头，反复在培养皿中吹吸细胞悬液2-3次后再全部吸到无菌容器中，大约此时的细胞悬液为5ml。 心得体会： ①离心管中得骨头要用无菌的镊子夹取，放到一次性培养皿的皿盖上，皿是用来承装细胞悬液的，这样可以节省一个皿。 ②5.2ml的细胞生长液经过冲骨髓后或多或少都会有一些残留在骨髓中，所以到最后可能就剩下5ml细胞悬液了，甚至更少，如果不够5ml，可以加至5ml，这样是方便你计数用的。冲洗的过程中以骨腔颜色变白为标准，基本3-4次就差不多。培养皿倾斜45度是为了在冲洗和吹打过程让较大的杂质停留，方便去除的，相对保持细胞悬液的清晰度。 ③换用1ml的针头是为了能更好的打散细胞，当然这个过程要轻柔，避免用力破坏细胞。无菌容器最好是光滑的，因为在转移细胞悬液的时候会存在细胞的丢失，临床上经常使用的抗生素瓶子就非常好用，但是要经过严格的清洗和消毒。 ④以上的细胞生长液5ml具体配制为 DMEM(90%)+胎牛血清(10%)+L-VC(忽略不计)+青链霉素(忽略不计) 低糖DMEM液（含有glutamine的，Gibco公司的，500ml一瓶，大约60元）浓度90%，5ml 细胞生长液中大约需要4.5ml
造血干细胞移植技术临床应用质量控制指标2017版
附件2 造血干细胞移植技术临床应用 质量控制指标 （2017年版） 一、造血干细胞移植适应证符合率 定义：造血干细胞移植术适应证选择正确的例数占同期造血干细胞移植术总例数的比例。 计算公式： 造血干细胞移植适应证符合率 =造血干细胞移植术适应证选择正确的例数同期造血干细胞移植术总例数×100% 意义：体现医疗机构开展造血干细胞移植技术时，严格掌握适应证的程度，是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量的重要过程性指标之一。 二、异基因造血干细胞移植植入率 定义：异基因造血干细胞移植术后100天内，实现造血重建（患者外周血中性粒细胞＞0.5×109/L 与血小板＞20×109/L ）的患者例次数占同期异基因造血干细胞移植患者总例次数的比例。 计算公式： 异基因造血干细胞移植植入率 =异基因造血干细胞移植术后100天内实现造血重建的患者例次数同期异基因造血干细胞移植患者总例次数×100% 意义：反映医疗机构造血干细胞移植技术水平的重要指标之一。 三、重度（Ⅲ-Ⅳ度）急性移植物抗宿主病发生率 定义：急性移植物抗宿主病（aGVHD ），是指造血干细胞移植术后100天内，由于移植物抗宿主反应而引起的免疫性疾病，主要表现为皮疹、腹泻和黄疸，是异基因造血干细胞移植的主要并发症和主要死亡原因。重度（Ⅲ-Ⅳ度）急性移植物抗宿主病发生率，是指异基因造血干细胞移植术后发生重度（Ⅲ-Ⅳ度）急性移植物抗宿主病患者例次数占同期异基因造血干细胞移植患者总例次数的比例。
计算公式： 重度（Ⅲ?Ⅳ度）急性移植物 抗宿主病发生率=重度 Ⅲ?Ⅳ度 异基因造血干细胞移植术后 发生急性移植物抗宿主病患者例次数同期异基因造血干细胞移植患者总例次数×100% 意义：体现医疗机构对不同移植方式造血干细胞移植术后aGVHD 预防水平，是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量的重要过程性指标之一。 四、慢性移植物抗宿主病发生率 定义：慢性移植物抗宿主病（cGVHD ），是指造血干细胞移植术100天后，由于移植物抗宿主反应而引起的慢性免疫性疾病。慢性移植物抗宿主病发生率，是指异基因造血干细胞移植术后发生慢性移植物抗宿主病患者例次数占同期异基因造血干细胞移植患者总例次数的比例。 计算公式： 慢性移植物 抗宿主病发生率=异基因造血干细胞移植术后发生慢性移植物抗宿主病患者例次数同期异基因造血干细胞移植患者总例次数×100% 意义：体现医疗机构对造血干细胞移植术后cGVHD 预防水平，是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量的重要过程性指标之一。 五、异基因造血干细胞移植相关死亡率 定义：异基因造血干细胞移植术后100天内非复发死亡患者数占同期异基因造血干细胞移植患者总数的比例。 计算公式： 异基因造血干细胞移植相关死亡率 =异基因造血干细胞移植术后100天内非复发死亡患者数同期异基因造血干细胞移植患者总数×100% 意义：体现医疗机构对造血干细胞移植术后患者的综合管理水平，是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量的重要结果指标之一。 六、异基因造血干细胞移植总体生存率 定义：异基因造血干细胞移植后1年和3年随访（失访者按未存活患者统计）尚存活的患者数占同期异基因造血干细胞移植患者总数的比例。 计算公式：
胎盘干细胞与脐带血干细胞的区别
胎盘干细胞与脐带血干细胞的区别 干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的原始的未分化的细胞，它可以向多种类型细胞分化，并具有相应的功能，可以用来修复和替代受到损伤，病变的组织和器官。目前主要的成体干细胞来源有胎盘来源、脐带来源、脐带血来源和骨髓来源的干细胞，本文主要介绍一下胎盘来源的干细胞和脐带血来源的干细胞的区别： 1、分离部位不同：胎盘干细胞是从胎盘组织中分离提取的干细胞，脐带血干细胞是从脐带里面血液中分离提取的干细胞。 2、种类不同：胎盘中的干细胞主要指的是间充质干细胞，而脐带血干细胞主要指的是造血干细胞。 3、分化能力不同：1）胎盘干细胞分化能力强，在特定的诱导条件下可以分化成血管干细胞、神经干细胞、肝干细胞等多种类型的干细胞，从而修复受损和病变的组织和器官2）脐带血干细胞可以在体内向红细胞、血小板等各种血液细胞分化。 4、数量不同：1）胎盘体积大，从中提取的干细胞数量丰富，并可以在体外培养扩增，扩增培养的子细胞数量达十亿个，可以供成人多次使用2）脐带血干细胞的数量要根据抽取的脐带血多少而定，不可以在体外培养扩增，一份脐带血干细胞可以供40kg以下患者一次使用。 5、治疗使用：1）胎盘干细胞目前在治疗脑瘫、糖尿病、肝硬化、心血管疾病等诸多疾病都显示了良好的效果2）脐带血干细胞可以治疗白血病，再生障碍性贫血等血液系统疾病。不过对于儿童白血病多以先天性为主，所以对于这种情况，自己的脐带血干细胞是不能使用的，需要配型使用捐献的脐血干细胞。 6、配型方面：二者自体使用都不需要配型，如果异体使用，胎盘干细胞由于免疫源性低的特点，所以配型成功率非常高，有血缘关系的亲属都可以使用；脐带血干细胞与父母配型有1/2的几率，与兄弟姐妹有1/4的几率。
动物骨髓干细胞细胞分离液试验方法
动物骨髓干细胞细胞分离液试验方法 货号：P8600 规格：200mL 保存：常温保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启 封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。 产品内容： 名称规格 动物骨髓干细胞分离液200mL 匀浆冲洗液200mL 样本稀释液200mL 清洗液200mL 洗涤液200mL 无菌硅化离心管5支 实验前准备： 1、适用仪器 最大离心力可达1200g的水平转子离心机 骨髓单细胞悬液的制备： 1.以适当方式处死动物，剥离出股骨或胫骨，用剪刀剪断骨头两端，露出内腔。 2.用注射器吸取适量（根据动物大小）的匀浆冲洗液冲洗出内腔中的骨髓。 3.收集悬液到合适离心管中，反复吹打成单细胞悬液，以70μm细胞筛网（随试剂盒附赠5个）过滤。 4.450g，离心10min，弃上清。 5.用样本稀释液重悬细胞浓度为2×108-1×109/ml的单细胞悬液备用（以小鼠为例，一般使用1ml样本稀释液重悬骨髓细胞）。 检验方法： 全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。 1.取一支离心管，加入与骨髓单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于3ml）。
2.用吸管小心吸取骨髓单细胞悬液加于分离液液面上，400-550g，离心20-30min。（注：根据骨髓单细胞悬液量确定离心条件，骨髓单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。 3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色目的细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。 4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色目的细胞层到另一15ml离心管中，向离心管中加入5-10ml洗涤液，混匀细胞。 5.400g，离心10min。 6.弃上清。 7.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。 8.250g，离心10min。 9.重复7、8、9，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。 差异贴壁法纯化细胞： （1）用干细胞无血清培养基或干细胞完全培养基以1.5-3×106个/ml的密度重悬细胞，将细胞铺于一次性细胞板或细胞瓶中，放于37℃二氧化碳培养箱中进行贴壁培养。 （2）2-4小时内贴壁的为巨噬细胞前体（俗称为单核细胞）。 （3）10-24小时内贴壁的单个核细胞为内皮、内皮祖细胞、干细胞。 （4）不贴壁的为淋巴细胞。
造血干细胞
造血干细胞 一定义 造血干细胞是骨髓中的干细胞，具有自我更新能力并能分化为各种血细胞前体细 胞，最终生成各种血细胞成分，包括红细胞、白细胞和血小板。也是存在于造血组 织中的一群原始多能干细胞。可分化成各种血细胞，也可转分化成神经元、少突胶 质细胞、星形细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞和肝细胞等。 干细胞可以救助很多患有血液病的人们，最常见的就是白血病。虽其配型成功率相 对较低，且费用高昂，但其治疗效果好且捐献造血干细胞对捐献者的身体并无很大 伤害。 二特征 人体内所有的血细胞都来自造血干细胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＨＳＣ）的定向分化。ＨＳＣ又称多能干细胞，是存在于造血组织中的一群原始造血细胞，有两个重要特性： （１）高度的自我更新或自我复制能力； （２）可定向分化、增殖为不同的血细胞系，并进一步生成血细胞。造血干细胞采用不对称的分裂方式：由一个细胞分裂为两个细胞。其中一个细胞仍然保持干细胞的一切生物特性，从而保持身体内干细胞数量相对稳定，这就是干细胞自我更新。而另一个则进一步增殖分化为各类血细胞、前体细胞和成熟血细胞，释放到外周血中，执行各自任务，直至衰老死亡，这一过程是不停地进行着的。 三造血干细胞的造血原理 1 造血干细胞具有多潜能性，即具有自身复制和分化两种功能。在胚胎和迅速再生的骨髓中，ＨＳＣ多处于增殖周期之中；而在正常骨髓中，则多数处于静止期，当机体需要时，其中一部分分化为成熟血细胞，另一部分进行分裂增殖，以维持ＨＳＣ的数量相对稳定。人类ＨＳＣ首先出现于胚龄第２～３周的卵黄囊，在胚胎早期（第２～３个月）迁至肝、脾，第５个月又从肝、脾迁至骨髓。从胚胎末期一直到出生后，骨髓成为ＨＳＣ的主要来源。造血干细胞进一步分化发育成不同血细胞系的定向干细胞。定向干细胞多数处于增殖周期之中，并进一步分化为各系统的血细胞系，如红细胞系、粒细胞系、单核-吞噬细胞系、巨核细胞系以及淋巴细胞系。2由造血干细胞分化出来的淋巴细胞有两个发育途径，一个受胸腺的作用，在胸腺素的催化下分化成熟为胸腺依赖性淋巴细胞，即T细胞；另一个不受胸腺，而受腔上囊（鸟类）或类囊器官（哺乳动物）的影响，分化成熟为囊依赖性淋巴细胞或骨髓依赖性淋巴细胞，即B细胞。并分别由T、B细胞引起细胞免疫及体液免疫。如机体内造血干细胞缺陷，则可引起严重的免疫缺陷病。
胎盘间充质干细胞的分离和培养
胎盘间充质干细胞得分离,原代与继代培养及鉴定 刘亭 2016、7。21 目录 前言 (2) 1分离制备PMSC组织得选取 (3) 2脐带,胎盘MSC得分离与纯化 (5) 2、1胎盘组织得获取,存储与清洗 (5) 2—2 脐带,胎盘MSC得分离及纯化方法 (6) 3 原代培养与继代培养 (10) 3-1培养基 (10) 3-2培养密度 (11) 3—3培养条件 (11) 3—4换液 (11) 3-5 传代培养 (12) 3-6细胞形态与生长速度 (12) 3-7 MSC得冻存与复苏: (12) 4细胞表面抗原检测 (13) 5生长曲线 (13) 6细胞周期 (13) 7分化潜能 (13) 参考文献 (13) 附件1不同实验室从脐带血,脐带与胎盘等各组织中分离MSC得方法 (15) 脐带血 (15) 脐带 (15) 羊膜 (17) 绒毛膜 (18) 蜕膜层 (18) 胎盘 (19) 整体灌注法 (20) 附件2 背景知识 (20) 附件3 PMSC实验所需试剂 (21)
前言 干细胞(Stem cell,SC)就是一种能够自我更新且未分化并可分化成两个或两个以上其它品系得细胞。在一定得条件下,干细胞能够分化成为多种成熟细胞类型。按照来源与分化潜能不同,干细胞可分为胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)与成体干细胞(Adult stem cell,ASC)两类。胚胎干细胞来源于早期得胚泡与胚胎内层得细胞群,并且具有向3个胚层细胞分化得能力。但就是胚胎干细胞应用时产生得免疫排斥、体内实验中引发肿瘤生成以及所涉及得伦理问题等影响并制约了临床应用。成体干细胞形成于原肠胚形成后得胎儿与成体组织,早期研究认为,成体干细胞主要分化为其来源组织得细胞类型。然而,近几年来得很多研究表明,成体干细胞具有能够分化成为除来源以外得其她胚层组织得能力。 间充质干细胞(Mesenchymal stem cell, MSC)又称为基质干细胞,就是属于成体干细胞得一种,最早从骨髓中分离而来、MSC就是由早期中胚层发育而来得非造血成体干细胞,该细胞在体外可以贴壁生长,并呈现梭状。胞质丰富,细胞核呈圆形,1-3个核仁、在适当得条件下可以大量扩增,并转化为间充质祖细胞,进而分化成包括三个胚层得各种组织细胞,如脂肪、骨、软骨、内皮细胞、成纤维细胞等。 MSC具有低得免疫原性、能向肿瘤迁移、具有免疫调节与造血支持等功能,而且易于外源基因导入表达,就是基因治疗中重要得载体细胞。此外,一些研究学者还发现,MSC具有类似免疫抑制剂作用,可抑制T淋巴细胞在混合淋巴细胞中得免疫反应,并同时抑制T细胞得异基因增殖反应、所以,MSC在治疗组织缺损、器官退行性疾病、肿瘤及免疫疾病具有相当广泛得应用前景。近年来MSC已逐步成为干细胞研究得热点(张慧娟等,2014)、 目前所报道得间充质干细胞主要来源于骨髓,采用密度梯度离心法获得。虽然分离方法简便,但供者取骨髓需要经历一个比较痛苦得手术,并在取材过程中及取材后会有很高得感染机会;由于人体骨髓中间充质干细胞得含量极其稀少,每105-106个单个核细胞中大约只有1个;而且随着年龄得增加,骨髓中间充质干细胞得数量、增殖与分化能力均显著下降,使其在研究与应用尤其就是临床应用中受到限制。其她组织中,如动员得外周血、乳牙、脐带、脐血也存在间充质干细胞,然而,从这些组织中获得得细胞数量较为有限。以上因素,都限制了间充质干细胞
一、什么是造血干细胞它能再生吗
一、什么是造血干细胞？它能再生吗？ 造血干细胞是一类可以产生各种类型血细胞的细胞，它具有自我更新和很强的再生与分化发育能力，它来源于红骨髓，可以经血流迁移到外周血液循环中，适量的造血干细胞就能维持正常的血液成份平衡。 二、什么是造血干细胞移植? 患者因疾病或其它原因导致造血或免疫功能异常时，将他人的正常造血干细胞移植到患者体内，重建患者的正常造血等相关功能，达到治疗某些疾病的目的。 三、造血干细胞移植的分类？ 根据造血干细胞来源可分为骨髓移植、外周血造血干细胞移植、脐带血造血干细胞移植及胎肝造血干细胞移植。 四、造血干细胞移植能治疗哪些疾病? 造血干细胞移植是治疗白血病、再生障碍性贫血、重症免疫缺陷症、地中海贫血、急性放射病、某些恶性实体瘤、淋巴瘤等造血及免疫系统功能障碍性疾病的成熟技术和重要手段，对有些疾病有根治性疗效。 五、健康者在多大年龄适合捐献造血干细胞？ 年龄在18-40岁的健康者均可登记成为捐献造血干细胞的志愿者18-55岁健康者可采集造血干细胞。 六、捐献造血干细胞影响身体健康吗? 人体内的造血干细胞具有很强的再生能力。正常情况下，人体各种细胞每天都在不断新陈代谢，进行着生成、衰老、死亡的循环往复，当指出部分造血干细胞后，造血干细胞会很快增殖，一般健康者在十天左右即可补足所捐的细胞量。因此，捐献造血干细胞不仅不会影响自身的造血功能反而使自身的造血系统得到了锻炼，增强了生命的活力。 七、从外周血采集造血干细胞，对捐献者有危险、痛苦吗? 至今没有因采集外周血造血干细胞引起对指献者伤害的报道，在采集完成后，一些轻微疼痛感和不适将会消失，所用的器材都经严格消毒并一次性使用，所在的采集医院都是由卫生部认定、在中华骨髓库备案的有移植和采集资质的三甲医院，安全是有保障的。 八、捐献造血干细胞需多长时间?捐献者大约需采集多少造血干细胞?捐献期间正常工作怎么办? 约1个星期，注射动员剂4天(皮下注射，2次/日)，第5天采集，大约需采集100ml~200ml 含1%左右浓度造血干细胞的混悬液。一旦确定捐献，我们红会工作人员将会为您请假，并尽量帮您解决捐献期间的生活问题。 九、在采集造血干细胞前，为什么要对捐献者使用动员剂?对人体有副作用吗?有什么样的不适症状? 在正常生理条件下，外用血的造血干细胞量极少，不能满足移植的需要，药物动员之后，加速骨髓造血干细胞的生成并释放到外周血中，可使外用血造血干细胞增加20-30倍，以满足移植需要。据多年的临床观察和目前国际上的报道，动员剂(国际上公认的G-CSF)对人体健康没有副作用。 注射动员剂期间可能会有腰酸背痛、食欲;减退、低热等不适症状，因人而异，停药后这些不适症状就会消失。 十、捐献造血干细胞后会影响生育吗? 不会影响。志愿者指完造血干细胞后可正常怀孕生育。 十一、怎样加入中国造血干细胞捐献者资料库江苏省分库，成为一名捐献造血干细胞志愿者? 如果您适龄、身体健康、有过无偿献血经历、家人支持、在当地有比较固定的工作或住
胎盘造血干细胞
胎盘造血干细胞 胎盘造血干细胞的基本介绍： 胎盘是胎儿和母亲血液交换的场所，含有非常丰富的血液微循环。人在母亲子宫内发育的阶段，胎盘是首先形成的器官之一。胎盘中含有大量的早期干细胞，包括数量丰富的造血干细胞。这些干细胞在胎盘中行使着造血的功能。小孩出生后剥离的胎盘内所含的造血干细胞，可以分化形成各种血细胞（红细胞、白细胞、血小板等）的祖宗，注射到体内可以发挥造血功能。 胎盘造血干细胞的用途： 胎盘组织中造血干细胞的含量是脐带血中造血干细胞含量的8-10倍，可供小孩自用几次，甚至可提供给多个成人患者的治疗。胎盘造血干细胞移植能有效解决了骨髓或动员后外周血来源不足，脐带血中造血干细胞数量不够成人使用等技术难题，将有望取代骨髓、动员后外周血和脐带血用于异基因或同基因（小孩本人的）造血干细胞移植。 胎盘造血干细胞移植可以用来治疗多种血液系统疾病和免疫系统疾病，包括血液系统恶性肿瘤（如白血病、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合症、淋巴瘤等）、血红蛋白病、骨髓造血功能衰竭（如再生障碍性贫血）、先天性代谢性疾病、先天性免疫缺陷疾患、自身免疫性疾患等多种疾病。 造血原理： 由造血干细胞定向分化、增殖为不同的血细胞系，并进一步生成血细胞。人类造血干细胞首先出现于胚龄第2～3周的卵黄囊，第4周胎盘开始发挥造血功能。在胚胎早期（第2～3月）造血功能延伸至肝、脾，第5个月又从肝、脾迁至骨髓。在胚胎发育期，胎盘是一个重要的造血组织，胚胎末期一直到出生后，骨髓成为造血干细胞的主要来源。造血干细胞具有具有自身复制和分化两种功能。在胚胎和迅速再生的造血组织中，造血干细胞多处于增殖周期之中；而在正常骨髓中，则多数处于静止期（G0期），当机体需要时，其中一部分分化成熟，另一部分进行分化增殖，以维持造血干细胞的数量相对稳定。造血干细胞进一步
佛教慈济骨髓干细胞中心
壹、計畫說明 長期以來造血幹細胞捐贈的傳統觀念中，認為骨髓捐贈是「抽龍骨水」，以至於願意捐贈造血幹細胞的民眾並不多，然而，骨髓捐贈並非抽龍骨水，而現在更有一種新的捐贈方式－週邊血幹細胞捐贈，是多數民眾所不知。台灣每年仍有約300位血癌患者需要尋找非親屬捐贈者，在血液病患日漸增加的情況下，我們更需要持續不斷推廣捐贈造血幹細胞的正確認知，讓民眾在正確的認知下，重新思考捐贈造血幹細胞的意義。 為推動造血幹細胞捐贈，希望透過宣導進而達到提升捐贈率的效果，並藉此將辦理「因為有愛-微電影創意影片」之徵選活動，向民眾徵求創意，吸引更多人加入捐贈行列。 貳、報名資格 一、一般民眾、不限年齡。(歡迎學校及社團踴躍參加) 二、個人或組隊報名均可，一組最多五人。 三、為符合公平原則，已獲得國內外獎項之作品，均不得參賽，違者取消參賽 資格。 四、不拘任何表現方式，發揮創意用5分鐘以內影片投稿參賽。 五、參賽作品不得使用非法取得下載之音樂、影像或影片片段。參賽者若有抵 觸任何著作權之法律，一切法律責任由參賽者承擔。 六、參賽者之作品如涉及智慧財產權者，主辦機關取得全部權利。 七、本活動之參賽作品，無論入選與否，一經送件即視為同意本活動評審所有 規則，並同意授權主辦單位得自行運用相關業務範圍內，對所有參賽作品 之公開發表、公開展示、公開播放、影像及圖文宣導、攝影、重製、改作、 編輯、印製、散布、出版、網頁製作、下載傳輸等相關非商業行為之用途， 日後不得有異議。且不另支付稿費及版稅，參賽者無異議亦不另行索取費 用。
參、徵件期間： 一、報名收件日期：即日起至6月30日止。以郵戳為憑，逾期恕不受理。 二、初審結果公佈：102年7月15日(一) 三、網路投票期間：102年8月1日～8月31日 請上「骨髓幹細胞中心Facebook粉絲團」投票 四、決審：102年9月 五、公布優勝結果：102年9月 六、頒獎典禮：102年本中心週年慶活動(預計9月) 七、成績公佈：公布於活動網站及慈濟骨髓幹細胞中心網站 肆、創作主題 須與造血幹細胞捐贈方式緊密連結，且畫面上需呈現自行設計的標語。 伍、作品規格： 一、類型：不限(劇情片、紀錄片、動畫短片皆可) 二、相關規格： 1.片長：嚴格規範5分鐘以內(包含片頭與片尾) 2.拍攝工具：不限 3.影片格式：像素至少720(W)x480(H)的avi/mov/mpg格式。 4.輸出格式：mpeg格式 5.參賽影片畫面大小至少720x480，最大不得超過1,920x1,080。 6.請將原始影片格式及輸出之mpeg格式，以數位檔案存於隨身碟中或以 CD/DVD-R片燒錄轉檔成之作品繳交。 7.提交作品不予退還，未符合作品競賽規格者不另行通知與退件。
什么是造血干细胞
什么是造血干细胞 近三十年来，血细胞生成的研究发展很快，现已证明人类骨髓中存在造血多能干细胞，它们具有高度自我更新的能力，并且能分化为各血细胞系统的祖细胞（如淋巴系干细胞、粒系干细胞），再大量分化、增殖为各种原始和成熟血细胞，最后这些成熟的血细胞通过骨髓进入血液中，发挥各自的生理作用。人体造血干细胞的一半存在于干细胞池，是人体造血细胞的储备库，以适应和满足各种状态下造血的需要；另一半存在于增殖池，这些造血干细胞不断增殖、自我复制，以弥补因细胞衰老或丢失所致的血细胞不足，维持人体血细胞的平衡。 人体的造血组织有很强的代偿功能，当抽取部分造血干细胞后，会很快增殖，一般健康者在1-2周左右即可补足所捐的造血干细胞量。因此，捐献者不仅不会影响自身的造血功能，反而使自身的造血系统得到了锻炼，更具备了生命的活力。 什么是骨髓 骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨骺和扁平骨（如髂骨）的骨髓腔中，是一种海绵状的组织。能产生血细胞的骨髓呈红色，称为红骨髓。人出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪填充了所有的长骨的骨髓腔（呈
淡黄色，称黄骨髓），最后几乎只有扁平骨和长骨骨骺中才有红骨髓。此种变化可能是由于成人不需要全部骨髓腔造血，部分骨髓腔造血已足够补充所需血细胞。当机体严重缺血时，部分黄骨髓可转化为红骨髓，骨髓的造血能力可显著提高。骨髓的造血功能极强，骨髓最高的造血能力可达到正常造血情况的9倍，如果只保留骨髓的1/10，就能完成正常的造血功能，所以少量骨髓捐献对身体没有什么影响。 造血干细胞移植的过程是怎样的 常规的移植前，只需HLA—A、B、DR三个座位六个基因相同即可。由于HLA—A、B的多样性最明显，所以上海分库原先是对志愿者先做HLA—A、B分型，待检索后供、受者HLA —A、B相配后，再对供者作HLA—DR分型检测，看是否相配？现在已采用基因检测法，不分一、二类了。如果供、受者HLA 完全相配，同时供者健康检查合格，就可以着手准备移植手术。先用化学药物和放射治疗摧毁患者身上癌细胞，这时患者的正常造血干细胞也会被杀死，人体的免疫力下降，易发生感染，必须在无菌病房（层流室）中接受移植。移植方法如同输血，植入的造血干细胞在患者体内繁殖，重建造血和免疫系统，患者逐渐恢复健康。造血干细胞移植对白血病的有效治愈率可达到70%左右。 造血干细胞采集的方式是什么
胎盘造血干细胞捐献--志愿表
胎盘组织造血干细胞捐献办理须知 国内外研究表明，胎盘组织中蕴含大量的造血干细胞，数量可达同一供者来源脐带血的5-10倍。为了扩大造血干细胞资源，帮助需要造血干细胞移植的患者，建设胎盘组织造血干细胞（以下简称胎盘造血干细胞）公共库是广东省干细胞产业化基地的社会职责之一。捐献胎盘是产妇富有爱心的体现，捐献合格的胎盘造血干细胞的用途有以下两方面：（1）面向全社会，提供给有救助需要的非亲缘患者进行造血干细胞配型移植治疗使用；（2）满足相关合法机构的医疗和科研。广东省干细胞产业化基地向社会各界承诺，捐献合格的胎盘造血干细胞不会用于商业目的。 为了确保非亲缘造血干细胞移植的安全，广东省干细胞产业化基地依据国家卫计委（原卫生部）相关的技术规范，制定了捐献胎盘的严谨筛选标准，分为采集前捐献资格的筛选和采集后检测合格标准，并接受卫计委和省卫生厅的监督检查。 捐献胎盘具体标准公示如下： 【胎盘捐献筛选标准】（采集前） 1、孕妇18-35周岁 2、孕周34周以上 3、母婴无并发症（孕高症等） 4、单胎 5、产前临床检测的原始单据或复印件完整 6、《胎盘采集信息表》填写完整、内容真实 7、产妇血红蛋白90g/L以上 8、孕妇健康调查表各项指标正常 9、孕期各项检查指标正常，包括但不限于以下8项： 谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、疱疹病毒、巨细胞病毒（CMV）、艾滋病毒（HIV）、梅毒螺旋体（TP）、乙肝病毒（HBV）、丙肝病毒（HCV） 10、胎儿父母无遗传性疾病： 地中海贫血、G-6-PD缺乏症等 11、外阴无活动性疱疹病毒感染的阴道分娩 12、产前3天未使用抗生素 13、破膜时间不超过12小时 14、新生儿Apgar评分大于8分 15、新生儿体重大于等于2500克 16、胎儿未出现呼吸窘迫 17、新生儿无先天性畸形 18、脐带胎盘无异常、无病变（无绒毛异常、绒毛血管异常、脐带血管异常、帆状脐带、胎盘绒毛膜羊膜炎、胎盘 绒毛血管瘤、绒毛膜囊肿、胎盘实质囊肿、脐带囊肿、胎盘梗死、胎盘颜色苍白等） 19、胎盘提前老化：孕周37周之前III级胎盘成熟度 【胎盘捐献冻存标准】（采集后） 1、胎盘重量在500-600g之间 2、胎盘造血干细胞冻存前有核细胞数≥2×109 3、胎盘造血干细胞活性、CFU-E、BFU-E、CFU-GM集落水平高
骨髓干细胞的临床应用研究新进展
在20世纪末和21世纪初干细胞的研究取得了突破性进展,主要进展包括两个方面:一是成功建立了可以分化为人体任何组织类型的成熟细胞的人类胚胎干细胞(embryonicstemcells,ES)系,这是干细胞研究的重大里程碑和生命科学的重大技术突破[1];二是发现成人各种组织中均有未分化成熟的干细胞分布,这类干细胞的基本功能是在生理条件下更新正常衰老死亡的细胞,维护组织或器官的结构完整和正常功能,而在组织损伤等病理条件下可动员、增殖和分化为成熟的功能细胞,修复损伤[2]。传统认为,特定组织中的干细胞只能向它所存在组织类型的成熟细胞分化,而这一观点目前受到挑战。许多研究结果证明,一种组织中的干细胞不但可以分化为它所在组织类型的成熟细胞,而且在特定的条件下或移植到其他组织中,还可以被诱导分化为其它无关组织类型的成熟细胞,有的还可打破胚层限制,分化为不同胚层的成熟细胞[3,4]。比如骨髓组织中的干细胞不但可分化为各种血液细胞,还可分化为脑神经细胞,脑组织中的干细胞可以分化为神经细胞,移植到受致死量放射线照射的小鼠骨髓组织中,也可以重建造血免疫功能。最近还有人从骨髓、神经等组织获得具有与ES细胞特性相似的成体干细胞,这类细胞可以在特定条件下分化为三个胚层的多种类型的成熟细胞。成人体内的干细胞虽然数量稀少,但由于其可塑性强,取材容易,可实现自体化治疗,避免了ES细胞或异体细胞治疗的免疫排斥、伦理和未知病源感染等问题。干细胞的研究进展极大地促进了生命科学研究和生物技术产业的发展,同时也预示着一些目前难以治愈的疾病可能由于干细胞的研究与应用而得到有效治疗,因此在最近几年受到相关研究者和社会各阶层的广泛重视。 1干细胞研究技术的新进展 干细胞是一类未分化的细胞或原始细胞,是具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定的条件下,干细胞可以分化成机体内的多种功能细胞,形成任何类型的组织和器官,以实现机体内部建构和自我康复能力。根据细胞的发育阶段,干细胞可分为来源于早期胚胎的胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESCs)和存在于成人各组织中的成体干细胞(adultstemcell,ASCs)。人类ESCs可来源于桑椹球细胞、囊胚内细胞团或拟胚体细胞等[5,6],还有发现从流产胎儿生殖脊分离获得的生殖原基细胞(embryonicgermcell,EGCs)和从畸胎瘤组织分离获得的多能干细胞也具有与ESCs类似的生物学特性,即具备分化为成人所有组织类型的成熟细胞的潜能[7,8]。1998年,美国科学家从人囊胚内细胞群分离培养胚胎干细胞(embryonicStemCells)并建立细胞系,与此同时,美国的另一研究小组从妊娠5~9周的胎儿生殖脊组织中也分离获得胚胎干细胞样细胞,此后,科学家从畸胎瘤组织、成人骨髓、胎盘,甚至外周血中均分离获得胚胎干细胞样细胞,这些进展为人类认识和利用干细胞前进了一大步[9,10]。当受精卵分裂发育成囊胚时,将内细胞团(innercellmass)分离出来进行培养,在一定条件下,这些细胞可在体外“无限期”地增殖传代,同时还保持其全能性,因此被称为胚胎干细胞。胚胎干细胞在培养条件下,若加入白血病抑制因子LIF(leukaemiainhibitoryfactor),则能保持在未分化状态,若去掉LIF,胚胎干细胞迅速分化,最终产生多种细胞系,如肌肉细胞、血细胞、神经细胞或发育成“胚胎体”。 1997年,英国科学家利用核移植技术已发育成熟的体细胞移植到去核卵母细胞中,在体外条件下成功将成体细胞的发育时钟拨回到最原始状态,然后启动其发育和分化机制,再历经了像天然受精卵发育那样的胚胎干细胞的发育和分化,胚胎形成和组织器官的发育,最终诞生一个新的生命体,表明成体细胞在合适的条件下可以返老还童,关键在于如何创造这种适于细胞返老还童的条件和土壤。依据上述原理,科学家怀疑成人组织细胞的更新与修复可能源于其中存在具有多向分化潜能的干细胞或逆向分化机制,于是对成体干细胞进行了深入研究。1999年,美国科学家MargarelGoodell发现小鼠肌肉组织干细胞可以“横向分化”(transdifferentiation,转分化)成血液细胞,这一发现很快被世界各地的科学家证实,并且发现其他组织来源的人成体干细胞同样具有“横向分化”的功能[11,12]。现在已证明人的骨髓干细胞可以分化为肝脏细胞、肌肉细胞、神经细胞等。这种横向分化具有相当的普遍性,
胎盘干细胞和脐带血干细胞是否需要都保存
胎盘干细胞和脐带血干细胞是否需要都保存？ 近来,保存胎盘干细胞热潮在京城悄然兴起，引起了人们对于保存胎盘干细胞和脐带血干细胞的一番讨论，即究竟该保存哪个更有价值呢？是否需要都保存呢？针对这一问题，记者特意查找了大量专业性新闻报导及相关信息，并就该问题咨询了北京博雅干细胞库技术人员，以求寻获一个明确的答案。 记者了解到，在保存胎盘干细胞热潮兴起之前，保存脐带血干细胞或捐献 脐带血干细胞的观念早已深入人心，而且已经占据了一定的市场。并且大多数人都已知晓利用脐带血干细胞能够治愈血液系统疾病等等诸多好处。但是对于胎盘干细胞在生物医学领域的重大用途却知之甚少。 现如今，胎盘干细胞同脐带血干细胞一样被人们所熟知，可是面临的问题 却使得人们不知该如何选择，那就是胎盘干细胞和脐带血干细胞是否应该都保存呢? 针对此问题,记者经过一番周折终于可以比较专业的为大家解答这个问题了。其实，保存胎盘主要是保存从胎盘中提取的间充质干细胞，而保存脐带血是保存脐带血中的造血干细胞。那么，胎盘间充质干细胞和脐带血造血干细胞有何区别呢？首先，胎盘中含有的间充质干细胞非常丰富，这种间充质干细胞属于多能干细胞，具有强大的增殖能力和多向分化潜能，能培养发育成人体的各个组织器官与神经系统。而脐带血中的造血干细胞含量较少，这种造血干细胞属于单能干细胞，不能进行体外扩增，不能分化成为其他的干细胞。其次，胎盘间充质干细胞治疗疾病范围比较广泛，如对于治疗心、脑血管疾病、神经系统疾病、肝脏疾病、骨组织病、角膜损伤、烧伤烫伤、肌病等多种疾病都有不错的疗效。造血干细胞主要针对治疗血液系统疾病和免疫系统疾病具有较好的疗效。最后，记者想告诉大家的是，胎盘间充质干细胞和脐带血造血干细胞两者同样都具有很高的医学价值，都能治疗多种疾病，虽然造血干细胞治疗疾病范围有限且不能进行体外扩增，导致干细胞数量仅可供30公斤以下儿童一次使用，但是胎盘间充质干细胞可以和造血干细胞共移植治疗血液系统疾病，并可供成人使用。另外，两者在采集的时候都不会给产妇和新生儿带来任何不适的感觉和产生任何不良的影响，并且在未来生物医学研究发展过程中，都将起到不可或缺的作用，并将推动再生医学的发展。那么，人们更应该保存哪个呢？记者建议，如果经济条件许可的话，建议人们将两者一起保存起来，以备将来不时之需。