溶出度试验影响因素及溶出度方法开发

溶出度试验影响因素及溶出方法验证

1.溶出速率的定义

Noyes-whitney 方程：dW/dt=kS(Csat-Csol) 试中：dW/dt-溶出速率 K-溶出常数 S-固体的表面积

保持溶出介质的体积至少是饱和溶液体积的3倍。则基本可以满足漏槽条件。

2.表面积的影响

非崩解型固体和崩解型固体溶出试验中表面积S 随时间t 的变化 s

表面积

溶出度仪的影响因素

1.晃动的影响

A.与TIR值小于2.0mm的结果相比，晃动偏差TIR值为1.0～2.0mm，水杨

酸片和泼尼松片的溶出量分别增加约5%。

B.溶出度仪设计中需注意两个因素1.要求转轴必须垂直；2.转轴应有两个固

定点，仪器顶部到转轴卡盘的距离至少应不低于卡盘至转篮或桨叶的距离。

2.转轴的直线度

a.转轴的直线度是控制晃动的关键仪器指标，应确保其直线度

b.溶出度仪的涉及要求桨叶或篮体的顶端距卡盘的距离至少要6英寸

（15.2cm）。

3.其它搅拌装置的变动因素

A.篮杆和桨杆是精密部件，使用时应小心，这些精密仪器在实验室的抽屉中

存放时，会破坏不锈钢桨表面的。引起弯曲和变性。应有适当的支架供转轴存放。

B.桨叶应没有锐角。尖锐部分会引起涡流而不是层流。取用或放置篮时只能

接触篮的上部边框，随着时间的增加，特别是在酸性介质时，筛网的孔径会有变化。可用放大镜检，必要时需更换篮。

4.振动

4.1振动的来源

A实验室中能产生振动的仪器，包括通风橱和离心机，空调，风扇，离心机等。

B.人员走动，关门，开门。

C.早期水浴加热和溶出仪连在一起，目前的溶出度仪设计都采用外置循环泵与水浴连接。

4.2应将盛有溶出介质的溶出杯的各种来源的振动水平降低到0.1mil。

5.搅拌装置的准直度

转轴的轴线与溶出杯的中心轴线间的偏离和倾斜对溶出介质流体动力学影

响严重，可使溶出结果差异达到±25%。影响结果很明显。

6.溶出杯中转轴的中心度

7.搅拌速度

规定转速一般不得过4%，转速的变化对溶出速率的影响几乎是线性的。8.篮法的变动

由于表面张力的作用，有时会在标准转篮的顶部形成较大的气泡。当旋转的网篮下降进入溶出杯时，可能不会发生气泡，但这种操作不符合USP（711）的要求。

网篮底部的气泡在篮体转动后会自动消失。如果在试验过程中产生气泡或气泡消失，分析人员应注意观察记录。

9.溶出介质的影响

A.溶解气体的释放是影响溶出结果的主要变动因素之一。FDA的科学家们

在早期就提出，如果在溶出杯、转轴、篮或桨偶然出现闪亮现象，警示我们可能是溶解的气体释放，可能影响检测结果。泼尼松片在溶出介质不脱气的情况下，溶出速率的相对标准偏差增加10%。溶解的气体对溶出结果的影响程度没有一定的规律。

B.脱气的方式加热，通氦气，加热并通氦气，加热并超声，加热并抽真空，

超声并抽真空，超声。研究结论显示加热处理并通氦气是效果最好的脱气方式。经典的煮沸技术可以将饱和溶解氧降低55%。

C.介质的体积的影响；缓释迟释制剂需回补，应有防止溶媒挥发的装置。

D.温度的影响

10.吸附

在收集供试品前，让足够多的样本溶液通过滤器，是吸附点饱和，这样过滤后溶液中的药物没有损失。应选择吸附性质已知的过滤器。

溶出度试验方法的建立和验证

1.初步评估

1.1过滤的兼容性

过滤的作用是除去未溶解的制剂及辅料，如果不过滤样品会继续在溶剂中溶出，要求取样后立即过滤。

过滤器的选择：1.考虑孔径的大小，从0.20 to 70 μm均可，如果样品的粒径较小的话，可以调整使用孔径更小的滤膜。

滤膜的兼容性：

滤膜的吸收：滤膜的回收率，滤膜上样品的损失量和样品溶液的浓度有关，应考虑不同浓度下滤膜的吸收。滤膜对药物的吸附有饱和性，可以采用弃去初滤液的方式收集样品。

1.滤膜应提前用溶出介质润湿。

2.考虑滤膜中的提取物干扰样品的测定，可以采用比较过滤液和未过滤液的

样品。

3.滤膜孔径的选择应考虑需过滤的体积和粒径，使用大粒径的滤膜过滤少量

样品会引起样品的损失，使用粒径小的滤膜会增大压力和引起滤膜堵塞。

4.采用对照品溶液与过滤后对照品溶液；供试品溶液与过滤后供试品溶液进

行比较过滤的影响。

1.2在不同介质的溶解性和稳定性

1.2.1药物两个重要的性质，一个为溶解性以及在特定pH下的稳定性。选择溶出介质组成时，应考察缓冲盐、pH值以及表面活性剂对药物溶解性和稳定性的影响。

A建立溶出度方法时，应使其满足漏槽条件，

B不建议使用水相-有机相混合溶剂，但经过相关验证该类溶出介质亦可接受。C，纯化水作为溶出介质，并不理想，首先，水质决定于水源，pH不可控；其次，pH值的变化可能发生在日间，甚至在试验过程中受药物原辅料的影响发生改变，使用于溶出速率不受溶出介质影响的药物。

D 口服剂型的溶出特点应在1.2-6.8的pH范围内，稀盐酸、缓冲盐（磷酸盐和醋酸盐、水)进行考察（缓释制剂为1.2-7.5）。还应考察缓冲盐及酸浓度对溶解性等的影响。

E.溶出介质中个别含有一定比例的表面活性剂(十二烷基硫酸钠，聚山梨酯)以增加溶解性，表面活性剂的使用和浓度，应在多个浓度水平进行考察，一般应在其临界胶束浓度之上，常见的表面活性剂的浓度见下表：

在使用表面活性剂时需关注其级别和纯度，不同来源的吐温80可能影响HPLC 测定时的系统适用性。在钾盐0.5M和SDS合用时，会有沉淀产生。

溶出介质和装置的选择可参考FDA数据库中的溶出方法：FDA. Recommended dissolution

1.3体积和溶媒

根据溶出度测定法（711），当胶囊或糖胶片的溶出度因明胶交联引起检查结果不符合规定时，可在溶出介质中加入适量的酶，见胶囊溶出度测试及相关质量属性（1094）.

在溶出介质的选择过程中，需注意样品在测定过程中应稳定。在某些情况下可在溶出介质中加入抗氧剂等，如果样品很易降解，监控降解杂质或是同时监控

制剂是合适的。采用原位光谱技术优于HPLC法。

药典中的篮法和桨法一般采用溶出介质为500-1000ml，个别情况下可以采用2-4L；往复筒法（装置3），流通池法要求较低量的溶出介质100-200ml。二，方法开发

2.METHOD DEVELOPMENT

1. METHOD DEVELOPMENT

2.1 Deaeration

2.2 Sinkers

2.3 Agitation

2.4 Study Design

2.4.1 Time Points

2.4.2 Observations

2.4.3 Sampling

2.4.4 Cleaning

2.5 Data Handling

2.6 Dissolution Procedure Assessment

2. ANALYTICAL FINISH

3.1 Sample Processing

3.2 Filters

3.3 Centrifugation

3.4 Analytical Procedure

3.5 Spectrophotometric Analysis

3.6 HPLC

3.

4. AUTOMATION

4.1 Medium Preparation

4.2 Sample Introduction and Timing

4.3 Sampling and Filtration

4.4 Cleaning

4.5 Operating Software and Computation of Results

4.6 Common Deviations from the Compendia Procedures That May

Require Validation

三．方法验证

3.1专属性/空白干扰

应验证辅料、其它活性成分及降解产物对测定结果无显著干扰，空白包括除活性成分之外的辅料和包衣（还有油墨、沉降蓝及胶囊壳），空白干扰的测定可称取空白样品的混合粉末并溶解或分散在溶出介质中，空白干扰不得过2%。对于缓释制剂，空白干扰试验使用空白制剂优于混合粉末，因空白制剂比混合粉末更接近药品对各辅料的释放过程。

如空白辅料干扰大于2%，为避免干扰必须对方法进行改进：①选择其它波长；②使用更长的波长以扣除基线；③使用HPLC法。

3.2线性范围

应配制药物不同浓度的溶液，其浓度范围应涵盖药物释放时的最低和最高浓度。

对照溶液配制时，可使用有机溶剂以提高药物溶解性，待测溶液中有机溶剂不得过5%，否则应进行验证。

3.3准确度/回收率

准确度通常需制备不同的样品，应包含药物及制剂中其它所有成分（如辅料、包衣材料及胶囊壳），其浓度范围应涵盖释放过程中可能出现的最低和最高浓度。取对应量的对照贮备溶液而非药物粉末置溶出杯中。测得的回收率应在加入量的95%～105%。制备多个浓度梯度的溶液可有助于试验。迟释制剂在检查酸中释放量时存在特殊情况。不高于10%的限度应经过验证。

3.4精密度试验

重复性是指对对照溶液或样品溶液进行重复测定。

中间精密度：尽可能使用含量均匀度良好的药品进行测定，如无法获得，则可使用空白片和活性药物成分测定中间精密度。至少两个人员进行操作，分别配制不同的对照品溶液和溶出介质。通常操作人员应使用不同的溶出度仪，分光光度计或高效液相色谱仪。两组同浓度溶出度测定结果的平均值之间的应符合以下规定，溶出度低于85%的时间点，绝对误差应不高于10%，溶出度高于85%的时间点，绝对误差应不高于5%。

3.5对照品和样品溶液的稳定性

对照溶液和供试溶液稳定性可接受的限度为98-102%。

3.6溶出曲线的制备

与原研药溶出曲线比较，采用四个pH范围的溶出介质，绘制溶出曲线

生物等效性和溶出特性

在FDA文件中发现的生物不等效的药品记录中，有80%的产品溶出度差。一个活性成分的溶出度特性并不表示其溶出结果与药品的生物利用度之间有严格的相关性。比如一个快速溶解的药物，可能其溶出度结果和生物利用度不具有相关性。只有当溶出速率与人体吸收速率相当或低于人体吸收速率时，溶出速率才能成为限速步骤。只有在这种情况下，溶出结果才与生物利用度之间有明确的秩序相关性。

溶出度试验是药品研发和批间质量控制的一种重要且很有价值的工具。

FDA指导原则：口服固体速释制剂豁免体内生物利用度和生物等效性研究。人体生物等效性试验豁免指导原则（国家食品药品监督管理局）

二、基于BCS（生物药剂分类系统）的生物等效豁免

根据BCS分类系统，药品被分为以下四类：

第一类：高溶解性、高渗透性(High Solubility- High Permeability)

第二类：低溶解性、高渗透性(Low Solubility-High Permeability)

第三类：高溶解性、低渗透性(High Solubility-Low Permeability)

第四类：低溶解性、低渗透性(Low Solubility-Low Permeability)

当口服固体常释制剂在体内的溶出相对于胃排空时间快或非常快，并且具有很高的水溶性和肠道渗透性时，药物的吸收速率和吸收程度就不会依赖于药物的溶出时间或在胃肠道的通过时间。因此，在这种情况下，对于BCS 分类1类和3类的药物，只要处方中的其他辅料成分不显著影响API的吸收，则不必证明该药物在体内生物等效的可能性，即生物等效性豁免。

（一）对于BCS 1类的药物需要证明以下几点：

1.药物具有高溶解性；

2.药物具有高渗透性；

3.快速溶出和相似性的数据以及不含有影响主药成分吸收速率和吸收

程度的辅料。

（二）对于BCS 3类的药物需要证明以下几点：

1.药物具有高溶解性；

2.制剂具有非常快速的溶出；

3.放大生产和批准后变更的制剂处方完全相同。

（三）对于处方相同，但规格不同的同种样品，高剂量规格已做过BE

试验的，低剂量规格可以免做BE试验。

（四）生物等效豁免申请的其他影响因素

当一个口服固体常释制剂申请基于BCS分类的生物等效性豁免时，应注意以下因素可能影响生物等效豁免：

1.辅料

BCS1类药物：辅料有时候可能会影响药物的吸收速率和吸收程度。一般来说使用国家食品药品监督管理总局已经批准的常释制剂常用辅料，对于BCS1类快速溶出的常释制剂的药物吸收速率和吸收程度不会有影响。为了支持生物等效豁免，常释制剂中辅料的用量应该和辅料在处方中对应的功能保持一致（比如说润滑剂）。

当使用新的辅料，或者非常规的大量使用常释制剂常用辅料，要补充提交该辅料的使用没有影响制剂生物利用度的证明资料。该信息可以利用以单一水溶液做参比制剂的生物利用度研究来提供。大量使用特定的辅料，例如表面活性剂（例如聚山梨醇酯80）和甜味剂（例如甘露醇或山梨醇），可能会有问题。

BCS3类药物：该类药物和BCS1类药物不同，如果想要申请生物等效豁免，必须有更充分的科学依据。BCS3类药物制剂必须与参比制剂含有相同的辅料组成。这主要是考虑辅料可能对低渗透性药物的吸收影响更显著。因此，仿制制剂与参比制剂必须有相同的辅料组成和用量。

2.前药（Prodrugs）

制剂的渗透性取决于原料药的转化机制和（解剖学上的）转化位置。若药物前体-药物的转化主要表现在肠道膜渗透之后，则应测定该药物前体的渗透性。若转化表现在肠道膜渗透之前，则应测定该药物的渗透性。药物前体和药物的溶出、pH溶解度数据也应与之相关。

3.基于BCS 的生物豁免对下列情况不适用：

（1）治疗范围狭窄的药品

受治疗药物浓度或药效监控的制约，按狭窄的治疗范围设计的制剂，不适用生物等效性豁免。如:地高辛、锂制剂、苯妥英、茶碱和华法林阻凝剂。

（2）口腔吸收制剂

由于BCS分类是基于胃肠粘膜的渗透和吸收，因此不适用于口腔吸收制剂，如：类似舌下片或颊下片的制剂。对于口含片，如果该制剂从口腔吸收也不适用。