人脑血管平滑肌细胞培养

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Human Brain Vascular Smooth Muscle Cells

人脑血管平滑肌细胞

血管平滑肌细胞是许多动脉疾病的细胞水平的根源。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素。最新研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1 和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关.人血管平滑肌细胞的体外培养是血管研究中的重要模型，并将对血管疾病的药理学和治疗研究提供大量信息.

细胞培养说明

注意：冷冻保存的细胞非常脆弱。将小瓶置于37°C水浴，然后尽快移入培养物中，尽量减少操作。

经过以下步骤后开始培养细胞

1.准备多聚赖氨酸包被的培养瓶(2μg/cm2，推荐用T-75的培养瓶)。向T-75瓶内加入10ml 无菌水，然后加入15μl多聚赖氨酸原液(10mg/ml,ScienCell cat. no. 0413).将培养瓶放入培养箱中过夜(至少在37°C中过一小时)

2.准备完全培养基：用70%的酒精为培养基和添加物的外表面消毒，然后放到无菌的地方。在无菌环境下打开每一个添加物小管并用吸管加入到基本培养基中。用培养基冲洗每一个小管以保证添加物全部加入基本培养基中。

3.用无菌水冲洗多聚赖氨酸包被的培养瓶两次并向瓶内加入20 ml完全培养基。将培养瓶放入超净台中，然后融化细胞。

4. .将小瓶放入37°C水浴中，轻轻地握住并旋转小瓶直到完全融化。将小瓶立刻移出水浴，擦干，用70%的酒精冲洗小瓶，然后放到无菌环境中。小心地打开盖子，注意手指不要碰到里面。用1ml eppendorf吸管轻轻重悬管内容物。

5.将管中内含物放入均匀的，多聚赖氨酸包被的培养瓶中。推荐接种密度为5,000 cells/cm2。注意：细胞融化后不推荐稀释和离心，因为这些操作比培养基中DMSO残留物对细胞的伤害大。血管平滑肌细胞接种在多聚赖氨酸包被的培养瓶中能促进细胞帖壁。

6.盖好盖子，轻轻地摇晃培养瓶以使细胞分布均匀，如需气体交换则打开瓶盖。

7.将培养容器放入培养箱中。

8.为了得到良好的结果，在培养开始后至少16个小时内不要动培养物。第天天更换培养基以去除残留的DMSO和未贴壁的细胞，然后每隔一天进行如上操作。培养良好的细胞将呈现纺锤体形，通常细胞呈均匀的丛状或板状而不是单个分散的细胞，并且细胞数量在培养2-3天后会加倍。

维持培养

1.从冰冻的细胞构建培养物后，第二天早晨更换新鲜的含有添加物的培养基。随后的传代培养中，每隔48小时更换一次培养基。

2.每隔一天更换一次培养基，直到细胞有50%融合。

3.一旦细胞达到50%融合，则要每天更换培养基直到细胞大约达到90%融合。

传代培养：

1.细胞达到90%融合时需传代培养。

2.准备多聚赖氨酸包被的培养瓶(2 μg/cm2)。

3.加执培养基，胰酶/EDTA消化液，胰酶中和液和DPBS(磷酸盐缓冲液)到室温。我们不推荐在使用前用37°C水浴加热试剂和培养基。

4.用DPBS冲洗细胞。

5.用10 ml胰酶/EDTA消化液消化细胞(以T-75 培养瓶为例)。直到80%细胞呈圆形(在显微镜下观察)。立刻加入10 ml 胰酶中和液并轻轻摇晃培养瓶。

注意：使用ScienCell实验室的胰酶/EDTA消化液，会把胰酶消化对细胞的损害减少到最低。

6.收取细胞并将其移入50ml离心管中。另外用10ml生长培养基冲洗培养瓶以收集残留的细胞。在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功。剩余细胞数应小于5%。

7.以1000转离心收取的细胞5分钟，然后在生长培养基中重悬细胞。

8.细胞计数然后将它们接种到新的，多聚赖氨酸包被过的培养瓶中，细胞密度以推荐数值为准。

注意：处理人类来源的产品存在潜在的风险。尽管每一株细胞都经检测艾滋病毒，乙肝病毒，丙肝病毒呈阴性，检测不能达到100%准确，因此，必须采取适当的保护措施避免无意的暴露。操作这些产品时要带手套和安全镜。不要用嘴吸。我们推荐以下通用的程序来处理人类来源的产品，从而以最小的预防来对抗污染。

以上由北京裕恒丰科技有限公司提供

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