细胞凋亡论文

深圳大学生命科学学院创新实验论文

□基础生物学创新实验 1.0学分

课程名称：□细胞与遗传学创新实验 1.0学分

□生化与分子生物学创新实验□生物科学1.0学分

□生物技术1.5学分实验项目来源：

□创新实验课程指定实验项目

□课外科技创新实验项目：资助单位

项目编号

实验项目名称：凋亡细胞的诱导和检测

实验项目学分：0.5

指导教师：彭勇

姓名：学号：专业：生物技术

实验时间：2011年12月1日星期四

论文提交时间：2011年12月17日星期六

生物科学教学实验中心制

深圳大学生命科学学院创新实验论文

评分表

指导老师签字：

生物科学教学实验中心制

盐胁迫诱导的植物细胞凋亡

摘要：以洋葱内表皮细胞为材料，分别以0.1mol/L 0.6mol/L 1.1mol/L的NaCl溶液处理2,4,6 h后进行染色观察,以此来发现植物细胞在高盐环境下的抗逆性，并且观察细胞凋亡的典型特征。

关键词：碱性纤维素酶产生菌；分离；筛选；生长曲线

细胞凋亡或细胞程序性死亡是多细胞生物甚至单细胞生物体在内外因子的诱导下，由基因控制的一种细胞主动性死亡途径，是细胞生命活动的基本特征之一。近年来研究表明，植物的一些特定细胞除在正常生长发育的特定期间能发生细胞凋亡外，还能受理化或生物等因子所诱导发生类似细胞凋亡的典型形态和生化特征。[1]本实验旨在研究不同NaCl浓度对细胞凋亡的影响。

盐胁迫是植物的一种重要抗逆反应，对植物的生长具有重要的生理意义。盐浓度达一定值时,会破坏细胞的正常生命活动，部分细胞甚至死亡。[1]高盐胁迫下的洋葱内表皮细胞死亡也具有细胞凋亡典型的形态和生化特征。

细胞凋亡主要形态学特征有：细胞膜完整，细胞连接和微绒毛消失，细胞骨架紊乱，粘着力降低，单个细胞与临近细胞脱离；核纤层蛋白降解，染色质凝集和边缘化，裂解为碎块，细胞核最终裂解为由核膜包裹的碎块，细胞器基本保持完整，细胞皱缩，细胞膜收缩并内陷，将细胞自行分割为多个具有膜包围、内含各种细胞成分的凋亡小体。凋亡细胞不会发生细胞膜、溶酶体等膜结构的破裂，不会引起细胞内容物外溢。[2]

细胞凋亡可通过形态学观察鉴定：改良苯酚品红染色观察,可观察细胞核、染色体的形态，从而判断细胞是否凋亡。

1 材料与方法

1.1实验材料

普通洋葱1个

1.2 实验试剂

1.2.1改良苯酚品红染液：

95%乙醇、1%醋酸、Na2HPO4、Na2HPO4、1%NaOH溶液、1%HCl、甘油、苏木精、铵矾、碘酸钠（NaIO3）、冰醋酸、Hanks染液、丙醇、二甲苯、中性甲醛

1.2.2 NaCl诱导溶液：

0.1mol/L：0.2922g NaCl定容至50ml 0.6mol/L：1.7532g NaCl定容至50ml

1.1mol/L：3.2142g NaCl定容至50ml

1.3 实验预处理

取新鲜洋葱于室温下清水培养4小时，使其活化

1.4细胞诱导凋亡

1.4.1 鳞茎切取30cm2左右的内表皮，任取1进行观察记录

1.4.2将切片分成5组，每组6片，其中1、2组为对照组，1组放入去离子水中不做其他处理，2组则放入试管中煮沸5min 。3-5组为实验组，依次放入装有1mol/L 、 0.6mol/L 、 1.1mol/L 浓度的NaCl 溶液的培养皿中。 1.4.3 进行实验处理后的 2h 、4h 、6h 在各组中任取一片做改良苯酚品红的染色观察并记录。

2 结果与分析

2.1 诱导前染色观察结果

细胞膜完整,细胞核呈球形,染色均匀,细胞质均匀透明,从细胞核倚靠边缘可推断液泡依然完整。

图1 诱导前改良苯酚品红染色观察图

2.2 煮沸的细胞观察结果

细胞坏死,细胞膜破碎，细胞核破裂，内容物外溢。

图2 经煮沸处理细胞改良苯酚品红染色观察图

400X 1000X 400X 1000X

2.3 诱导2h后的观察结果

2.3.1去离子水（图3）：与诱导处理前大致相同，细胞膜完整,细胞核呈球形,染色均匀,细胞

质均匀透明,

从细胞核倚靠边缘可推断液泡依然完整。

图3 2h去离子水改良苯酚品红染色观察图

2.3.20.1mol/L（图4）：部分细胞出现轻度质壁分离，部分细胞核有轻微皱缩。

图4 2h 0.1mol/L改良苯酚品红染色观察图

2.3.30.6mol/L（图5）：质壁分离较为明显，细胞膜皱缩，细胞核内出现泡状结构。

400X 1000X

1000X

400X

图5 2h 0.6mol/L 改良苯酚品红染色观察图

2.3.4 1.1mol/L （图6）：质壁分离明显，细胞核明显皱缩，染色质与细胞质包裹在一起形成较多的凋亡小体

图6 2h 1.1 mol/L 改良苯酚品红染色观察图

2.4 诱导4h 后的观察结果 2.4.1 去离子水（图7）：与诱导处理前大致相同，细胞膜完整,细胞核呈球形,染色均匀。

图7 4h 去离子水改良苯酚品红染色观察图

400X

1000X

400X 1000X 400X

1000X

2.4.2 0.1mol/L （图8）：质壁分离程度加强，细胞核开始出现泡状结构。

图8 4h 0.1mol/L 改良苯酚品红染色观察图 2.4.3 0.6mol/L （图9）：质壁分离明显,细胞膜严重皱缩,细胞核聚缩,出现少量凋亡小体

图

9 4h 0.6 mol/L 改良苯酚品红染色观察图

2.4.4 1.1mol/L(图10):质壁分离明显,细胞膜、细胞核明显皱缩,形成大量凋亡小体

图10 4h 1.1 mol/L 改良苯酚品红染色观察图

400X

1000X

400X

1000X

400X 1000X

2.5 诱导6h后的观察结果

2.5.1去离子水（图11）

：与诱导处理前大致相同，细胞膜完整

,

细胞核呈球形

,

染色均匀。

图11 6h 去离子水改良苯酚品红染色观察图

2.5.20.1mol/L （图12）：质壁分离程度继续加强，细胞核泡状结构增多，出现凋亡小体。

图12 6h 0.1mol/L改良苯酚品红染色观察图

2.5.30.6mol/L（图13）：细胞膜严重皱缩,部分细胞破裂，细胞核聚缩,出现较多凋亡小体。

图13 6h 0.6 mol/L改良苯酚品红染色观察图

400X 1000X

400X 1000X

400X 1000X

2.5.4 1.1mol/L(图14):细胞膜萎缩成长条形,细胞核严重皱缩,部分细胞细胞核消失。

图14 6h 1.1 mol/L 改良苯酚品红染色观察图

2.6分析

2.6.1 实验观察结果汇总

表1 诱导细胞凋亡染色观察结果汇总表

处理时间

2h

4h

6h

去离子

细胞膜完整，细胞核呈球形,染色均匀，细胞质均匀透明 细胞膜完整，细胞核呈球形,染色均匀,细胞质均匀透明 细胞膜完整，细胞核呈球形，染色均匀，细胞质均匀透明 0.1mol/L NaCl

部分细胞出现轻度质壁分离，部分细胞核有轻微皱缩 质壁分离程度加强，细胞核开始出现泡状结构 质壁分离程度继续加强，细胞核泡状结构增多，出现凋亡小体

0.6 mol/L NaCl

质壁分离较明显，细胞膜皱缩，细胞核内出现泡状结构 质壁分离明显,细胞膜严重皱缩,细胞核聚缩,出现少量凋亡小体

细胞膜严重皱缩,部分细胞破裂，细胞核聚缩,出现较多凋亡小体

1.1 mol/L NaCl

质壁分离明显，细胞核明显皱

缩，染色质与细胞质包裹在一起形成较多的凋亡小体

质壁分离明显,细胞膜、细胞核明显皱缩,形成大量凋亡小体

细胞膜萎缩成长条形,细胞核严重皱缩,部分细胞细胞核消失

2.6.2 从实验观察结果来看，使用去离子水处理的洋葱内表皮细胞没有出现细胞凋亡的迹象；经0.1mol/L NaCl 诱导处理的洋葱内表皮细胞可被诱导凋亡，但是过程较慢，现象不是十分明显，直至6h 后才能发现凋亡小体，说明洋葱在0.1mol/L NaCl 的情况下具有一定的抗逆性不会很快的凋亡，只要及时补水就能避免植株死亡；经0.6mol/L NaCl 诱导处理的洋葱内表皮细胞较快的出现细胞凋亡的特征，在4h 第二次检测时就出现了凋亡小体，说明0.6mol/L NaCl 能够较快的引起洋葱的凋亡，进而使植株死亡；经1.1mol/L NaCl 诱导处理的洋葱内表皮细胞细胞凋亡特征出现的很早，在6h 的检测中部分细胞的细胞核都已经消失了，说明1.1mol/L NaCl 对于洋葱内表皮细胞来说浓度太高将会快速导致洋葱的死亡。

400X

1000X

3.讨论

3.1本次实验在染色观察的方法中其实可以加入台盼蓝染色，来观察细胞是否已经死亡，为

说明细胞已经凋亡提供更好的证明。

3.2在实验取的检测时间间隔中，可以增加个12h的检测时间，这样进一步检验0.1mol/L

NaCl对洋葱内表皮细胞的影响。

4.结论

结论自己写,前面的描述也大致修改一下,不要太雷同了,图的编排可以尝试把观察描述加在侧边.

5.参考文献

[1] 宁顺斌宋运淳王玲李霞盐胁迫诱导的植物细胞凋亡《实验生物学报》第33卷第3期 2000年9月

[2] 张广智胡长敏陈颖钰刘颖李帅细胞凋亡的主要检测方法研究进展《动物医学进展》，2011，32(8)：89—92

[3] 程志斌王晓明唐璐过氧化氢及硫酸亚铁诱导洋葱表皮细胞凋亡《安徽农业科学》, Journal ofAnhuiAgr.i Sc.i 2009, 37( 11): 4898- 4899