常见细胞系

细胞株名称ATCC 编号细胞来源细胞种类生长状态使用培养基

293 CRL-1573 人胎肾贴壁、上皮样MEM/NEAA,10%FBS

2215 无人肝癌贴壁、上皮样DMEM,15%FBS

127TAg CRL-2817 小鼠多能胚胎干细胞胚胎型DMEM, 10% FBS

293/CHE-Fc CRL-2368 人肾上皮细胞、贴壁DMEM,10%FBS

3T3-L1 CL-173 小鼠胚胎成纤维成纤维DMEM,10%FBS

3T6 CCL-96 小鼠胚胎成纤维细胞、贴壁DMEM,10%FBS

A431 CRL-1555 人表皮细胞癌上皮细胞、贴壁DMEM,10%FBS

A549 CCL-185 人肺癌贴壁、上皮样F12,10%FBS

A9 CRL-6319 小鼠结缔组织成纤维细胞、贴壁DMEM,10% FBS+

AR42J CRL-1492 大鼠胰腺肿瘤贴壁、上皮样Ham'sF-12K, 20%FBS

AtT-20 CCL-89 小鼠垂体肿瘤上皮细胞、贴壁F-10, 15% HS和2.5% FBS

B95-8 CRL-2311 绒猴EB病毒感染的白血病细胞成淋样RPMI-1640, 10% FBS BALB/3T3 CCL-163 小鼠胚胎成纤维细胞、贴壁DMEM, 10% FBS

bel7402 无人肝癌贴壁、上皮样RPMI-1640,15%FBS

BeWo CCL-98 人绒毛癌上皮细胞、贴壁F-12K, 15%F12

BHK-21 CCL-10 仓鼠肾成纤维细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

BHL-100 无人乳房上皮细胞、贴壁McCoy'5A, 10% FBS

BRL 3A CRL-1442 大鼠肝上皮细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

BT CRL-1390 牛鼻甲骨细胞成纤维细胞、贴壁DMEM, 10% FBS

Caco-2 HTB-37 人结肠腺癌上皮细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

Chang 无人肝脏上皮细胞、贴壁BME, 10% FCS

CHO-K1 CRL-9618 仓鼠卵巢上皮细胞、贴壁F-12, 10%FBS

CL2 CRL-2514 小鼠B细胞淋巴细胞、悬浮RPMI-1640, 10% FBS

CL3 CRL-2515 小鼠B细胞淋巴细胞、悬浮RPMI-1640, 10% FBS

Clone 9 CRL-1439 大鼠肝脏上皮细胞、贴壁F-12K, 10%FBS

Clone M-3 CCL-53.1 小鼠黑素瘤上皮细胞、贴壁F-12, 15% HS和2.5% FBS COS-1 CRL-1650 猴肾成纤维细胞、贴壁DMEM, 10% FBS

COS-3 无猴肾成纤维细胞、贴壁MEM, 10% FBS

COS-7 CRL-1651 猴非洲绿猴肾成纤维细胞、贴壁DMEM, 10% FBS CRFK CCL-94 猫肾上皮细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

CV-1 CCL-70 猴非洲绿猴肾成纤维细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

D-17 CCL-183 狗骨肉瘤上皮细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

DAN CRL-2130 狗骨肉瘤上皮细胞、贴壁MEM/EBSS, 8% FBS

Daudi CCL-213 人淋巴瘤病人血液成淋巴细胞、悬浮RPMI-1640, 10% FBS DLD-1 CCL-221 人结肠直肠腺癌上皮细胞、贴壁RPMI-1640, 10% FBS DSDh CRL-2131 狗骨肉瘤上皮细胞、贴壁MEM/EBSS, 8% FBS

DSN CRL-9939 狗骨肉瘤上皮细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

Du145 HTB-81 人前列腺瘤贴壁、上皮样MEM/NEAA,10%FBS

EB-3 CCL-85 人Burkitt淋巴瘤淋巴样、悬浮RPMI-1640, 10% FBS

ES-D3 CRL-1934 小鼠多能胚胎干细胞胚胎型DMEM+ 15% FBS

F9 CRL-1720 小鼠睾丸畸胎癌胚胎型至内胚层DMEM, 15% FBS

GH1 CCL-82 大鼠垂体肿瘤上皮细胞、贴壁F-12, 15% HS和2.5% FBS

GH3 CCL-82.1 大鼠垂体肿瘤上皮细胞、贴壁F-12, 15% HS和2.5% FBS

H9 HTB-176 人T细胞淋巴瘤成淋巴细胞、悬浮RPMI-1640, 10% FBS

H9/HTLV-IIIB CRL-8543 人T细胞淋巴瘤成淋巴细胞、悬浮RPMI-1640, 10% FBS

HaK CCL-15 仓鼠肾上皮细胞、贴壁BME, 10%FCS

HCT-15 CCL-225 人结肠直肠腺癌上皮细胞、贴壁RPMI-1640, 10% FBS

Hela CCL-2 人宫颈癌贴壁、上皮样MEM/NEAA,10%FBS

Hela S3 CCL-2.2 人子宫颈癌贴壁、上皮样F12,10%FBS

Hep-2 无人喉癌上皮细胞、贴壁MEM, 10% FBS;或RPMI-1640, 10% FBS

Hep3B HB8064 人肝癌贴壁、上皮样MEM/NEAA,10%FBS

HepG2 HB-8065 人肝癌贴壁、上皮样MEM/NEAA,10%FBS

HK-2 CRL-2190 人肾皮质贴壁、上皮样Keratinocyte-Serum Free Medium + 5 ng/ml rhEGF HL-60 CCL-240 人急性早幼粒细胞白血病悬浮、粒细胞样RPMI-1640,20%FBS

HP [HT1080 poly] CRL-12012 人纤维肉瘤上皮细胞、贴壁DMEM, 10% FBS

HT-1080 CCL-121 人纤维肉瘤上皮细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

HT-29 HTS-38 人腺癌贴壁、上皮样DMEM/F12(1:1),5%FBS

HTC ICLC 收录ATL95006 大鼠肝脏贴壁、上皮样MEM/EBSS,10%FBS

HuT 78 TIB-161 人T细胞淋巴瘤成淋巴细胞、悬浮IMDM, 20% FBS

HUVEC 无人脐带内皮细胞、贴壁F-12K, 10% FBS 和肝素盐100 ug/ml

HX [HT1080 xeno] CRL-12011 人纤维肉瘤上皮细胞、贴壁DMEM, 10% FBS

I-10 CCL-83 小鼠睾丸癌上皮细胞、贴壁F-10, 15% HS和2.5% FBS

IEC-6 CRL-1592 大鼠正常小肠上皮样、贴壁DMEM, 5% FBS,胰岛素0.1μg/ml

IM-9 CCL-159 人骨髓瘤病人骨髓成淋巴细胞、悬浮RPMI-1640, 10% FBS

IMR-90 CCL-186 人肺成纤维细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

JAA-F11 CRL-2381 小鼠B细胞淋巴样、悬浮DMEM,10% FBS和NEAA

JEG-3 HTB-36 人绒毛膜癌上皮细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

Jensen CCL-45 大鼠肉瘤成纤维细胞、贴壁McCoy's 5A, 5% FBS

Jurkat TIB-152 人急性T淋巴细胞白血病悬浮、淋巴细胞样RPMI-1640,10%FBS

K-562 CCL-243 人骨髓性的白血病成淋巴细胞、悬浮RPMI-1640, 10% FBS

KB CCL-17 人口腔癌上皮细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS

KG-1 CCL-246 人红白血病病人骨髓骨髓白细胞、悬浮IMDM, 20% FBS

KG-1a CCL-246.1 人红白血病病人骨髓骨髓白细胞、悬浮IMDM, 20% FBS

L2 CCL-149 大鼠肺上皮细胞、贴壁F-12K, 10%FBS

L6 CRL-1458 大鼠骨骼肌成肌细胞贴壁DMEM, 10% FBS

LLC-WRC 256 CCL-38 大鼠癌上皮细胞、贴壁199培养基, 5% HS

LnCap CRL-1740 人前列腺癌贴壁、上皮样RPMI-1640,10%FBS

LO2 无人正常肝细胞贴壁、上皮样DMEM,15%FBS

M. dunni (Clone III8C) CRL-2017 小鼠皮肤成纤维细胞、贴壁McCoy's 5a , 10% FBS

MARC S5 CRL-2507 小鼠B细胞悬浮、淋巴细胞样MEM/NEAA或DMEM, 20%FBS(灭活) MCF7 HTB-22 人乳腺癌上皮细胞、贴壁MEM/NEAA, 10% FBS10ug/ml 胰岛素

MHCC97 无人肝癌贴壁、上皮样DMEM,15%FBS

MOLT-4 CRL-1582 人T淋巴细胞、急性淋巴细胞白血病悬浮、淋巴细胞样RPMI-1640,10%FBS NIH3T3 CRL-1658 小鼠胚胎贴壁、成纤维细胞DMEM,15%FBS

NK-92 CRL-2407 人淋巴瘤成淋巴细胞、悬浮α-MEM,12.5% HS和12.5% FBS

NK-92MI CRL-2408 人淋巴瘤成淋巴细胞、悬浮α-MEM,12.5% HS和12.5% FBS

PANC-1 CRL-1469 人胰腺癌贴壁、上皮样DMEM,10%FBS

PC12 CRL-1721 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤多角型、松散贴壁、易结团生长F12 ,15% HS和2.5%FBS

PC3 CRL-1435 人前列腺腺癌早期、骨转移贴壁、上皮样F12,10%FBS

Raji CCL-86 人Burkitt淋巴瘤淋巴样、悬浮RPMI-1640, 10% FBS

Rat2 CRL-1764 大鼠Rat2(TK-)克隆衍生成纤维细胞样、贴壁DMEM, 5% FBS,30μg/ml BrdU

RS4;11 CRL-1873 人急性淋巴细胞白血病成淋巴细胞、悬浮RPMI-1640, 10% FBS

Saos-2 HTB-85 人骨肉瘤上皮细胞、贴壁McCoy'5A, 15% FBS

SMMC7721 无人肝癌贴壁、上皮样RPMI-1640,15%FBS

SP2/0 ACC146 小鼠杂交瘤悬浮IMDM,7.5%FBS

SW480 CCL-228 人结肠癌贴壁、上皮样10%FBS,L15

SW620 CCL-227 人结肠癌贴壁、上皮样10%FBS+2mM L-GLU+90%L15

THP-1 TIB-202 人急性单核系白血病、血液悬浮、单核细胞样RPMI-1640,10%FBS

U937 CRL-1593.2 人淋巴浆母细胞瘤悬浮、单核细胞样RPMI-1640,10%FBS

Vero CCL-81 非洲绿猴肾贴壁、上皮样DMEM,10%FBS

Vero-E6 CRL-1586 非洲绿猴肾贴壁、上皮样MEM/EBSS,10%FBS

WEHI-3 TIB-68 小鼠骨髓单核细胞白血病类巨噬细胞、悬浮IMDM, 10% FBS

WI-38 CCL-75 人胚胎肺上皮细胞、贴壁BME, 10% FBS

WISH CCL-25 人羊膜上皮细胞、贴壁BME, 10% FBS

WS1 CRL-1502 人胚胎皮肤上皮细胞、贴壁MEM/NEAA 10% FBS

WSS-1 [WS-1] CRL-2029 人肾上皮细胞、贴壁DMEM, 10% FBS

XC CCL-165 大鼠肉瘤上皮细胞、贴壁MEM, 10% FBS 和NEAA

Y-1 CCL-79 小鼠肾上腺瘤上皮细胞、贴壁F-10, 15% HS和2.5% FBS

说明：以上数据来源于ATCC,建议使用以上推荐的培养基。

如果不使用相应的培养基会产生几方面的后果：

1.细胞营养不良影响细胞生长；

2.细胞分化导致的基因表达变化；

3.细胞休克、死亡。

血液检查正常参考值1

血液检查一、血液一般检查： 1、红细胞计数(RBC) [正常参考值] 男：4.0×10 12-5.3×10 12个/L(400万-550万个/mm3)。女：3.5×10 12-5.0×10 12个/L(350万-500万个/mm3)。儿童：4.0×10 12-5.3×10 12个/L(400万-530万个/mm3)。 [临床意义] 红细胞减少多见于各种贫血，如急性、慢性再生障碍性贫血、缺铁性贫血等。红细胞增多常见于身体缺氧、血液浓缩、真性红细胞增多症、肺气肿等。 2、血红蛋白测定(Hb) [正常参考值] 男：120-160g/L(12-16g/dL)。女：110-150g/L(11-15g/dL)。儿童：120-140g/L(12-14g/dL)。 [临床意义] 血红蛋白减少多见于各种贫血，如急性、慢性再生障碍性贫血、缺铁性贫血等。血红蛋白增多常见于身体缺氧、血液浓缩、真性红细胞增多症、肺气肿等。 3、白细胞计数(WBC) [正常参考值] 成人：4×109-10×109/L(4000-10000/mm3)。新生儿：15×109-20×109/L(15000-20000/mm3)。 [临床意义] 生理性白细胞增高多见于剧烈运动、进食后、妊娠、新生儿。另外采血部位不同，也可使白细胞数有差异，如耳垂血比手指血的白细胞数平均要高一些。病理性白细胞增高多见于急性化脓性感染、尿毒症、白血病、组织损伤、急性出血等。病理性白细胞减少再生障碍性贫血、某些传染病、肝硬化、脾功能亢进、放疗化疗等。 4、白细胞分类计数(DC) [正常参考值] 中性秆状核粒细胞：0.01-0.05(1％-5％)。中性分叶核粒细胞：0.50-0.70(50％-70％)。嗜酸性粒细胞：0.005-0.05(0.5％-5％)。淋巴细胞：0.20-0.40(20％-40％)。单核细胞：0.03-0.08(3％-8％)。 [临床意义] 中性杆状核粒细胞增高见于急性化脓性感染、大出血、严重组织损伤、慢性粒细胞膜性白血病及安眠药中毒等。中性分叶核粒细胞减少多见于某些传染病、再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等。

常用细胞系所用培养液参考

常用细胞系所用培养液参考，其它详细参见ATCC细胞库(https://www.360docs.net/doc/6310696675.html,) 细胞系名称细胞类型物种来源组织培养液与血清 293成纤维细胞人胚胎肾 MEM, 10% 马血清 3T6成纤维细胞小鼠胚胎 DMEM, 10% FBS A549上皮样人肺癌 F-12K, 10% FBS A9成纤维细胞小鼠结缔组织 DMEM, 10% FBS AtT-20上皮样小鼠垂体肿瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS BALB/3T3成纤维细胞小鼠胚胎 DMEM, 10% FBS BHK-21成纤维细胞仓鼠肾 DMEM, 10% FBS or MEM, 10% FBS and NEAA BHL-100上皮样人乳腺 McCoy'5A, 10% FBS BT成纤维细胞牛鼻甲细胞 MEM, 10% FBS and NEAA Caco-2上皮样人结肠腺瘤 MEM, 20% FBS and NEAA Chang上皮样人肝 BME, 10% 牛血清 CHO-K1上皮样仓鼠卵巢 F-12, 10% FBS Clone 9上皮样大鼠肝 F-12K, 10% FBS Clone M-3上皮样小鼠黑色素瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS COS-1成纤维细胞猴肾 DMEM, 10% FBS COS-3成纤维细胞猴肾 DMEM, 10% FBS COS-7成纤维细胞猴肾 DMEM, 10% FBS CRFK上皮样猫肾 MEM, 10% FBS and NEAA CV-1成纤维细胞猴肾 MEM, 10% FBS D-17上皮样犬骨肉瘤 MEM, 10% FBS and NEAA Daudi淋巴样人淋巴瘤患者外周血 RPMI-1640, 10% FBS GH1上皮样大鼠垂体瘤 F-10, 15%马血清+2.5% FBS GH3上皮样大鼠垂体瘤 F-10, 15%马血清+ 2.5% FBS H9淋巴样人 T-细胞淋巴瘤 RPMI-1640, 20% FBS HaK上皮样人肾 BME, 10% 牛血清 HCT-15上皮样人结肠腺癌 RPMI-1640, 10% FBS HeLa上皮样人宫颈癌 MEM, 10% FBS and NEAA (in suspension, S-MEM) HEp-2上皮样人喉癌 MEM, 10% FBS HL-60淋巴样人早幼粒细胞白血病 RPMI-1640, 20% FBS HT-1080上皮样人纤维肉瘤 MEM, 10% HI FBS and NEAA HT-29上皮样人结肠腺癌 McCoy's 5A, 10% FBS HUVEC上皮样人脐带 F-12K, 10% FBS 肝素100 ug ml I-10上皮样小鼠睾丸肿瘤 F-10, 15%马血清+2.5% FBS IM-9淋巴样人骨髓瘤患者骨髓 RPMI-1640, 10% FBS JEG-2上皮样人绒毛膜癌 MEM, 10% FBS Jensen成纤维细胞大鼠肉瘤 McCoy's 5A, 5% FBS Jurkat淋巴样人淋巴瘤 RPMI-1640, 10% FBS

实验室常用细胞株

ATCC? Number: CRL-2865? Price: $329.00 Designations: T47D-KBluc Depositors: VS Wilson Biosafety Level: 1 Shipped: frozen Medium & Serum: See Propagation Growth Properties: adherent Organism: Hom o sapi ens (human) Morpholog y: epithelial Source: Organ: mammar y gland; breas t Tissue: duct Disease: ductal carcinoma Derived from metastatic site: pleural effusion Cell T y p e: epithelialtransfected with reporter plas mid Permits/F orms: In addition to the MTA menti oned above, other ATCC and/or regulatory per mits may be required for the transfer of this ATCC material. Any one purchasing ATCC material is ultimatel y r esponsible for obtaining the permits. Please click here for information regarding the s pecific requirements for shipment to your loc ation. Reverse Transcript: N Age: 54 years adult HeLa Mar kers: N

昆虫sf9细胞培养

Sf9培养要点：温度：27-28摄氏度 pH：，sf9最适的pH6.2，随培养时间的延长，Ph值会增加传代时间：72h（三天左右）细胞来源：Sf9（货号B825-01）和Sf21（货号B821-01）细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于InsectSelect系统。这两株细（以上来自invitrogen）胞衍生于IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫（草地夜蛾）蛹的卵巢组织。细胞特点：规则的带有颗粒球形。贴壁紧。标准条件的定义：培养最低密度：0.6×106/ml（健康对数生长期细胞活率至少应不低于90％。活率低于90％细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验）1×106/mL将出现对数生长状态传代培养：传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。贴壁培养: 贴壁细胞传代需在细胞长成单层（如下定义）然后1：5（细胞体积：最后培养基体积）稀释维持对数生长。形成单层细胞可以传代培养悬浮培养：在细胞密度达到2.0×106-2.5×106细胞/mL后将密度调整至0.7×106-1.0×106细胞/mL进行悬浮传代。确保传代细胞密度不高于4×106个/mL或保持密度高于1×106个/mL以达到对数生长状态。 Sf9悬浮培养所需要的细胞数培养基：sf-900 ⅢSFM（添加2%的血清减小感染过程中蛋白水解量）培养瓶与培养体积：冻存：一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存。细胞需达到90％活率和80-90％融合的要求（如：低代次）推荐冻存几管。当融解细胞，它将会达到最佳使用状态。

1. 用细胞计数板计数细胞。需要足够的如上表所示密度的细胞冻存2-4管。细胞可是悬浮或贴壁培养； 2. 将无菌冻存管立于冰上，做好标记； 3. 室温400-600×g离心10min。移除上清。 4. 以给定的密度在冻存液中重悬细胞； 5. 移取1mL细胞悬液置于无菌冻存管中； 6. 置于-20℃1h，然后移至-80℃24-48h； 7. 储存于液氮中。转染的细胞：需要的是对数期的细胞＞95%发育能力，可以完成成功的转染。载氧：对于最优生长条件和蛋白的表达，昆虫细胞要求被动的通氧。积极的通氧系统要求溶氧饱和在10%-50% Sf900II和sf900Ⅲ的区别：一般推荐Sf900II来大量表达蛋白 Sf900II含有表面活性剂（剪切力保护剂（保护细胞在转瓶中培养时不会受到剪切力伤害））当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的计划时，注意无血清培养基不能直接用于螯合树脂，因为培养基的成分会除去树脂中的镍离子。

血常规正常值

血常规是最一般，最基本的血液检验。血液由液体和有形细胞两大部分组成，血常规检验的是血液的细胞部分。血液有三种不同功能的细胞--红细胞(俗称红血球)，白细胞(俗称白血球)、血小板。通过观察数量变化及形态分布，判断疾病。是医生诊断病情的常用辅助检查手段之一。 1.红细胞计数（RBC）是指单位体积血液中所含的红细胞数目。【正常参考范围】新生儿：（6.0～7.0）×1012/L 婴儿：（5.2～7.0）×1012/L 儿童：（4.2～5.2）×1012/L 成人男：（4.0～5.5）×1012/L 成人女：（3.5～5.0）×1012/L 2.血红蛋白（Hb）是红细胞的主要组成部分，承担着机体向器官、组织运输氧气和运出二氧化碳的功能。其增减的临床意义基本上与红细胞增减的意义相同，但血红蛋白能更好地反映贫血的程度。贫血按严重程度可分为：极重度贫血，HbL<30g/L；重度贫血，Hb在31～60g/L；中度贫血，Hb在>61～90g/L；轻度贫血，Hb在>90g/L与低于正常参考的下限之间。【正常参考范围】男性120～160g/L 女性110～150g/L 新生儿170～200g/L 3.血细胞比容（HCT）是指抗凝血液在一定条件下离心沉淀，而测出红细胞在全血中所占体积的百分比。【正常参考范围】男40%～50%；女35%～45%。 4.白细胞计数：指计数单位体积血液中含的白细胞数目。正常的外周血液中常见的白细胞有中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。【正常参考范围】成人（4.0～10.0）×109/L 新生儿（15.0～20.0）×109/L 5.白细胞分类计数（DC）是指对不同类型的白细胞分别计数并计算其百分比。【正常参考范围】中性粒细胞N0.5～0.7（50%～70%）嗜酸性粒细胞E0.01～0.05（1%～5%）嗜碱性粒细胞B0～0.0l（0～1%）淋巴细胞L0.20～0.40（20%～40%）单核细胞M0.03～0.08（3%～8%）

常见细胞株中文名称及缩写

人类组织正常及永生化细胞英文名中文名称 293E E转化人胚肾293细胞（B类） 293ET ET转化人胚肾293细胞（B类） 293KB KB转化人胚肾293细胞（B类） 293T人胚肾T细胞 A7d野生型人 C-KIT受体细胞株（B类）AMS3(SCF3)人干细胞因子单克隆抗体细胞株(B类) APP-PS1人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293)(B类) FC33ASP2人胚胎肾细胞转化细胞 FIP293FIP293(来源于HEK293)(B类) HEK-293人胚肾细胞 CCC-HPF-1人胚肺二倍体细胞 CCC-ESF-1人胚胎皮肤成纤维细胞HFF(ATCC? SCRC-1041?)人前皮肤成纤维细胞 HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞 HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞 HK-2人肾小球上皮细胞 HKC人胚肾上皮细胞 HSF人皮肤成纤维细胞 MRC-5人胚肺成纤维细胞 WISH人羊膜细胞 CCC-HEL-1人胚胎肝正常细胞 CCC-HEK-1人胚胎肾正常细胞 CCC-HHM-2人胚胎心肌组织来源细胞 CCC-HPE-2人胚胎胰腺组织来源细胞 CCC-HB-2人胚胎膀胱组织来源细胞 CCC-HIE-2人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HBE-2人胚胎气管细胞动物组织正常及永生化细胞 3T3swiss swiss鼠胚胎成纤维细胞 3T3L1小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪) 3T6swiss小鼠胚胎成纤维细胞 7WCY1.0人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WD10人APP基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WML6.0人APP-PSI（M146L)双基因转染细胞株（CHO)(B类） 7WPS1APP-PS1双基因转染细胞株（CHO）（B类） BaF3小鼠原B细胞（B类） BHK-21金黄地鼠肾 BS-C-1非注洲绿猴肾 C2C12小鼠成肌细胞 C3H10T1/22A6小鼠成纤维细胞 CH0dhfr二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1中国仓鼠卵巢细胞

昆虫的血液

昆虫的血液由血细胞和血浆组成，除双翅目摇蚊幼虫等少数昆虫因含有血红素而呈红色外，大多数昆虫的血液为无色、黄色、绿色、蓝色或淡琥珀色，比重为1.01～1.05，多为微酸性。由于昆虫体内只有一种细胞外体液即血液循环于体内和浸浴着所有组织和器官，并兼具哺乳动物的血液和淋巴液的特点，故又称血淋巴。昆虫体内的血液量因昆虫种类、虫期及生理状态的不同而有很大差异。 1 血细胞（Hemocyte）是指在昆虫血淋巴中流动着的游离细胞，来源于中胚层，约占血液的2.5%。但当昆虫被外物侵入或变态脱皮时，血细胞即行大量裂殖，数量增多。昆虫血细胞的形状常因观察时间与处理方法的不同而有较大差异，命名也颇不统一。最常见的血细胞有下面6种类型。 1.1 原血细胞（Prohemocyte）是普遍存在的小圆形血细胞，大小均一，核大并位于细胞中央，胞质嗜强碱性，是形成其他血细胞的干细胞。 1.2 浆血细胞（Plasmatocyte）是形态多样的吞噬细胞，有圆形、卵圆形、纺锤形、星形和不规则形等，核大并位于细胞中央，嗜碱性的细胞质中富含核糖体、线粒体、液泡等。在很多昆虫中，浆细胞是优势的血细胞，在昆虫免疫中起重要作用。 1.3 粒血细胞（Granulocyte）有吞噬作用的血细胞，核较小且常位于细胞中央，细胞质含有嗜酸性颗粒和粗面内质网。 1.4 囊血细胞（Cystocyte）又叫凝血细胞（coagulocyte），有一个小而圆形的车轮状的细胞核，破裂后使

周围体液发生沉积，起着凝结或愈伤作用。 1.5 珠血细胞（Spherulocyte）是一种小圆形或椭圆形的血细胞，核小且常偏离细胞中央，细胞质含嗜酸性内含物和许多液泡，在脂肪形成和中间代谢中起作用。 1.6 类绛色细胞（Oenocytoide）是一类形状和大小多变的血细胞，核小且偏离细胞中央，细胞质内含有酪氨酸酶、糖蛋白和中性黏多糖等，主要功能是参与物质代谢和分泌作用。 2 血浆（Plasma）是指体腔内浸浴着所有组织和器官的稍带粘滞性的循环液体，是胚胎时就充满体腔内的一种组织液，约占血液总量97.5%，比重在1.012～1.070之间。血浆的化学组成因昆虫的种类和龄期而有差异，但主要含有水分、无机盐、氨基酸、蛋白质、脂肪和糖类等物质，另外还有少许的气体、有机酸和激素。 2.1 水分约占血淋巴量85%左右。但因昆虫种类和发育期而有不同。例如，胃蝇Gastrophillus sp.幼虫血淋巴含水84%，牙甲Hydrophilus sp.幼虫含水92%。 2.2 无机盐类血浆中含有钠、钾、钙、镁、锰、铁、铜等以氟化物、硫酸盐、硝酸盐以及磷酸盐等形式组成的无机盐类，阳离子与阴离子常保持一定的离子平衡。一般来说，低等昆虫的渗透压主要由Na+和Cl－构成；有翅亚纲全变态的脉翅目、毛翅目、长翅目和双翅目血淋巴的渗透压有一半由无机离子构成，且以Na+为主，Cl－的作用很小，而全变态的鞘翅目、鳞翅目和膜翅目血淋巴的Na+含量低，而K+和Mg2+含量很高。另外，血淋巴中无机离子的含量和组配比率似与昆虫食性有一定的相关性。一般植食性昆虫血淋巴内含有较高浓度的K+和Mg2+，Na+/K+比率常小于1；肉食性昆虫常含有较高浓度的Na+，Na+/K+比率大于1；杂食性昆虫的Na+/K+ 比率常介于两者之间。昆虫血浆中无机盐离子的主要作用是参与物质运输，调节神经活动、酶活力、pH值和渗透压。 2.3 含氮化合物可分为蛋白质、氨基酸、尿酸、尿囊素、尿囊酸、尿素和氨等。昆虫血浆中蛋白质的含量，除少数昆虫外，普遍比脊椎动物血浆中的含量低，但一般比其他无脊椎动物血浆中的蛋白质的含量高。例如，膜翅目昆虫血浆中蛋白质的平均含量为5g/100ml，鞘翅目为3～4g/100ml，鳞翅目为2g/100ml，直翅目为1g/100ml，而人血浆中蛋白质含量为7.2g/100ml，甲壳动物为2～3g/100ml。昆虫血浆中的蛋白质主要是以酶的形式存在，如蛋白酶、淀粉酶、转化酶、酪氨酸酶和酯酶等，参与着物质的新陈代谢。

细胞培养标准流程

精品文档细胞间基本规定每次操作结束后开启超净台紫外（30 min）和房间大紫外（30 min）。显微镜开启使用后将光调暗，最后一个操作者将显微镜关闭。超净台用完收拾干净，移液器、盒子等摆放整齐。带走空盒子、细胞圆盘以及封口膜等任何因你而产生的垃圾。细胞培养盘至少需备注：所属者，细胞系名称细胞间冰箱内物品至少需备注：所属者，物品名称。基培需写上开启时间。细胞培养标准流程 1、细胞换液、传代（以圆盘培养为例） Note：所有用于培养细胞的液体均需提取20-30分钟从冰箱取出恢复到室温或置于37℃的水浴箱内。所有物品（包括双手）进入安全柜之前要酒精消毒。步骤：1.观察：高倍镜下观察细胞状态、密度以及是否染菌 2.弃旧：细胞生长融合达90%时，吸出培养基 3.漂洗：PBS（2mL）漂洗1-2次 4.消化：加入1ml 0.25%胰蛋白酶，轻轻晃动圆盘让所有细胞接触到胰酶，后吸去胰酶计时CO放置40s-1min,，轻轻拍打圆盘侧壁促使细胞2 脱壁。 5.终止：吸弃胰酶后加入2ml含10?S的完全培养基终止消化。 6.吹悬：轻轻吹打混匀，(倒置显微镜下观察细胞完全脱壁，呈卵圆形)，吹打成单细胞悬液后按1：2 或1：3 比例传代接种于新培养皿。再加入10ml全培。（大盘10ml全培，小盘6ml全培）（细胞生长快留30%，慢40%-50%；其余细胞可提取蛋白或RNA） 7.培养：每天或每两天更换一次培养基，直至细胞生长至融合时再次进行传代，每日在倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况。 PS:六孔板一般加培养基2300μL/孔。 . 精品文档 2、细胞转染 TurboFect 转染试剂转染（用于质粒的转染，说明书附后）细胞接板24 h 后转染。转染时细胞密度需达到70-90%。

细胞培养基本方法

1.操作台基本要求： 2.随着传代次数的增加，连续培养细胞系遗传物质不稳定，不得将细胞存放于-20℃或-80℃冰柜中，因为细胞存在次低温条件下活力迅速降低。 3.细胞污染：（1）细菌污染

（2）酵母污染（3）霉菌污染初期PH值维持稳定，污染严重后PH值迅速升高，导致培养基浑浊。（4）病毒污染一般不会对与其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响，通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色，ELISA实验或者采用适当病毒引物的PCR技术可以检测出细胞为病毒污染。（5）支原体污染唯一检测支原体污染的方法是采用荧光染色、ELISE、PCR、免疫染色、放射自显影 4.抗生素只能作为对付污染的最后手段而且只能短期使用，并应尽快撤出 5．适合贴壁的细胞和悬浮的细胞

6.基础培养基，减血清培养基，无血清培养基 7.PH值：大多数正常哺乳动物细胞系PH为7.4；成纤维细胞系适合轻度偏碱（pH7.4-7.7） Sf9和sf21等昆虫细胞系最适合在PH值为6.2的环境中生长8.温度：大多数人和哺乳动物细胞系在36℃至37℃最佳昆虫细胞在27℃为最佳禽类细胞在38.5℃最佳冷血动物（15℃-26℃） 9.动物细胞形态划分： ●成纤维细胞，贴附生长 ●上皮样细胞呈多角形，贴附 ●淋巴母细胞样细胞呈球形，不贴附 ●特殊形态： ?I型有长突触 ?Ⅱ型没有轴突 10.细胞增长模式

11.何时传代？ ●哺乳动物：生长的PH值通常表示乳酸储积，且有毒性，当PH迅速降低（） 0.1-0.2PH单位），同时细胞浓度增大，则应对细胞进行传代。 ●昆虫细胞PH值会上升但不超过6.4 12．贴壁细胞的解离

昆虫免疫

昆虫免疫与信号传导摘要对于无脊椎动物抵御外来物质和病原体来说，先天免疫是迅速和唯一的免疫反应。昆虫依靠体液和细胞通过识别受体和激活免疫通路发挥免疫效应。脂肪体和血细胞产生以及分泌抗菌因子，但是在昆虫里血细胞才参与细胞免疫。近年来，研究集中在微生物识别机理以及对抗外来物质时细胞内信号分子的激活。这篇综述总结了昆虫先天免疫的机理，结合信号通路和它们的交叉反应涉及到了细胞免疫与体液免疫的潜在关联。关键字：昆虫先天免疫信号通路 Abstract The innate immunity is the immediate and sole response of invertebrates for the protection against foreign substances and pathogens. In insects, it relies on both humoral and cellular responses that are mediated via certain recognizing receptors and activation of several signalling pathways. Fat body and hemocytes are the origins for the production and secretion of antimicrobial agents and activators/regulators of cellular response, while cell mediated immunity in insects is performed by hemocytes. In the last years, research has focused on the mechanisms of microbial recognition and activation of intracellular signalling molecules in response to invaders. In this review, I summarize the mechanisms of the innate immunity in insects and refer to potential interactions between humoral and cellular responses, combined with the involving signalling pathways and their cross talk. Key Words: insects innate immunity signalling pathways

昆虫细胞表达系统

昆虫细胞表达系统昆虫细胞表达系统是四大表达系统（昆虫细胞、细菌、酵母、哺乳动物细胞表达系统）之一。昆虫细胞表达系统原理是通过转座作用将转移载体中的表达组件定点转座到能在大肠杆菌中增殖的杆状病毒穿梭载体（Bacmid）上，通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒，提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后，得到的子代病毒即为重组病毒。将病毒上清浸染昆虫细胞，获得表达的重组蛋白。杆状病毒是一类闭合环状双链病毒，病毒粒子呈杆状，以昆虫为主要宿主。杆状病毒还是一种出芽型分泌性病毒粒子，在感染细胞后能迅速在培养细胞中水平传播而保持细胞在相当长的时间内不裂解，从而最大限度地保持了外源蛋白的稳定，昆虫细胞表达系统又被称为昆虫杆状病毒系统。昆虫细胞表达系统本身是一个蛋白裂解性系统，在杆状病毒感染昆虫细胞的过程中，杆状病毒可以编码一些蛋白酶如木瓜蛋白酶等导致蛋白的降解。因此，收集细胞后，在裂解细胞之前要加入蛋白酶抑制剂防止蛋白的降解。昆虫细胞表达系统属于真核细胞表达系统，但又不同于酵母及哺乳动物细胞表达系统，酵母表达的蛋白易纯化但也易降解，而哺乳动物细胞表达系统表达的蛋白具有生物活性但成本高。细菌表达系统属于原核表达系统，操作简单、周期短收益大、表达产物稳定，但是表达基因的相对分子量有限，且不能对表达产物进行翻译后加工修饰。而昆虫细胞表达系统具有很多优点： (1)具有糖基化作用、乙酰化作用、磷酸化作用等一系列蛋白质翻译加工修饰系统； (2)正确的蛋白折叠、二硫键形成，使重组蛋白在结构和功能上更接近天然蛋白，有利于表达产物形成天然的高级结构； (3)具有对重组蛋白进行定位的功能，如将核蛋白转送到细胞核上，膜蛋白则定位在膜上，分泌蛋白则可分泌到细胞外等；

细胞培养基本条件培训讲学

细胞培养基本条件

细胞培养基本条件 1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。 3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。 4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。 5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基

两类。干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。 1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。无机盐培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg ～320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES 时需按以下方法调节钠离子浓度。

细胞培养与病毒培养实验步骤..

实验二传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养一、实验目的了解倒置显微镜的构造与使用，了解不同传代细胞的形态及接毒后的病变特征，掌握细胞的传代培养方法、病毒接种方法及收毒方法。二、常用细胞的种类 BHK-21：仓鼠肾传代细胞 PK-15：猪肾传代细胞 IBRS-2：猪肾传代细胞 Hela：人的子宫瘤细胞 Vero：非洲绿猴肾细胞 Marc-145：来源于Vero细胞 TK-143：人的胸苷激酶阴性细胞 Sf9：昆虫细胞三、材料 1、100ml细胞瓶、吸管、吸球、96孔细胞培养板、加样器、枪头 2、BHK-21（baby hamster kidney）细胞 3、0.25%胰酶 4、生长液：含10%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM 维持液：含2-5%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM

5、伪狂犬病病毒液（PRV）四、传代细胞培养的条件要求 1）细胞密度：2-3×105个/ml 2）pH范围最适pH7.0-7.4，耐受pH6.6-7.8 3）培养温度哺乳动物细胞一般为37℃ 昆虫细胞28-30℃ 五、常用细胞分散剂与作用原理 1、胰酶使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解，导致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。 2、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：与二价钙、镁离子结合，从而使细胞分散。 3、灰色链丝菌酶：由灰色链丝菌提取的一种酶制剂，是蛋白酶、氨肽酶和羧肽酶的混合物。六、营养液 1、人工综合营养液氨基酸、糖类、无机盐类、维生素、辅酶、嘌呤、嘧啶、辅助生长因子。 2、血清 1）血清的种类胎牛血清、新生犊牛血清、成年牛血清、马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清，其中以新生犊牛血清使用最为广泛。 2）血清的处理

细胞培养的常用术语及解释

细胞培养的常用术语及解释体外培养(in virto)：原意为在试管中，现常与组织培养一词通用，译为体外培养。组织培养(tissue culture)：维持组织在体外生长、与泛指体外培养。器官培养(organ culture)：在体外维持器官、器官的部分或器官的原基生存和生长的方法。 * 细胞培养(cell culture)：细胞（包括单个细胞）在体外条件下的生长称为细胞培养，在细胞培养中，细胞不再形成组织。细胞融合(cell fusion)：两个独立的细胞融合成一个细胞。可用聚乙二醇（PEG）或仙台病毒诱发。 * 细胞杂交(cell hybridization)：两个或多个不同的细胞融合。导致一个含核体（aynkaryon）的形成。体外培养转化(in vitro transformation)：细胞在体外培养中发生与原细胞遗传性状不同的变化，但不一定具有致癌性。单倍体(haploid)：正常细胞染色体基本数（每一染色体只有一种）。整倍体(euploid)：具有两个以上单倍体数目的细胞。非整倍体(aneuploid)：细胞核内染色体数为单倍染色体数的非整倍数时，称非整倍体。二倍体(diploid)：具有两套染色单体数目的细胞（2n） * 原代培养(primary culure)：从体内取出细胞或组织的第一次培养。再培养(subculture)：同传代。 * 传代(passage)：无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到

另一个培养瓶即称为传代或传代培养。也称再培养。单层培养(monolayer culture)：培养细胞在底物上长成单层。悬浮培养(suspension culture)：细胞在培养液中呈悬浮状态生长。 * 贴壁依赖性(anchorage-dependent)：为细胞需贴附于底物或支持物上才能生长的性质。贴壁依赖性细胞(anchorage dependent cell)：由它们繁衍出来的细胞（或培养物）只有贴附于不起化学作用的物体（如玻璃或塑料等无活物体）的表面时，才能生长，生存或维持其功能。无贴壁性(anchorage-independent)：不依赖于贴附底物或支持物上生长的性质。汇合(confluent)：细胞相互连接成片占据所有底物面积。近汇合(sub-confluent)：细胞在底物上生长接近，但尚未完全汇合。超汇合(super confluent)：单层培养细胞附在底物上生长，汇合后发展成多层状态。接触抑制(contact inhibition)：细胞汇合相互接触后失去运动的现象。密度抑制(density inhibition)：细胞数量到一定数量后引起抑制增殖的现象。群体密度(population density)：培养底物单位面积上单层细胞数目。饱和密度（saturation density）：在特殊培养条件下，每平方厘米（单层培养）或每毫升细胞悬浮液内可达到的最大细胞数。

昆虫天然免疫的研究进展

昆虫天然免疫的研究进展摘要：昆虫是目前地球陆地上最繁盛的物种类群，是人类取之不尽的资源宝库。近年来，昆虫的免疫在其基础和应用研究方面受到极大关注，通过实验来研究与昆虫免疫相关的机制、信号等问题，对害虫防治、益虫防病、开发利用抗菌物、研究人类免疫机制等有着非常重要的现实意义。关键词: 昆虫；天然免疫；体液免疫；细胞免疫 Abstract：At present, insect is the most blooming species on the earth. And it is also a treasure-house of kinds of resources for humanity. For the past few years, the fundamental researches and application researches of insect immunity have been paid close attention to. Many scientific researchers study the mechanism and signal that related to insect’s immunity by doing experiments. It is of significance for pest control, preventing disease of beneficial insect, developing and using antibacterial material, studying humanity immunity and so on. Key words: Insect；Innate immunity；Humeral immunity；Cellular immunity 昆虫作为生物界分布最广、数量众多的一类群体, 在长期的进化过程中具备了高度的适应能力和独特的免疫体系。虽然昆虫没有像人一样的获得性免疫反应能力，但是昆虫拥有高效的先天性免疫反应系统。昆虫的先天性免疫系统包括体液免疫和细胞免疫两部分, 它们协同作用吞噬和清除血淋巴中的外源入侵物。[冯从经，陆剑锋，黄建华，等，2009]本文主要基于目前对昆虫天然免疫的研究进展做一简介。 1．体液免疫 1.1抗菌肽抗菌肽（AMPs），具有广谱抗菌活性和高效杀菌性，一直以来都承载着人类的一个梦想——取代抗生素。人类已经发现多种抗菌肽，测定出其结构，并获得抗菌肽基因，如Mdatta2基因[柳峰松，孙玲玲，唐婷，等，2011]、MdDpt基因[柳峰松，王丽娜，唐婷，等，2009]。根据氨基酸组成和结构特征, 一般可以把昆虫抗细菌肽分为 4类：即形成两性分子α-螺旋的抗细菌肽类、有分子内二硫桥的抗细菌肽类、富含脯氨酸的抗细菌肽类及富含甘氨酸的抗细菌多肽类。[柳峰松，王丽娜，唐婷，李伟，2009]昆虫抗菌肽中除绝大多数对细菌具有广谱高效的抑杀作用外, 近 10 年来也陆续发现了10多种抗真菌肽。昆虫抗真菌肽可分成两类: 昆虫组成性抗真菌肽、经免疫诱导在血淋巴中产生的抗真菌肽, 即昆虫免疫诱导型抗真菌肽[谢咸升，董建臻，李静，等，2011]。 AMPs 的产生主要由以下两个不同信号转导途径的活化而产生的: Toll途径和Imd途径，这两种途径通过激活不同的转录因子来调控不同AMPs 的基因表达。[王英，黄复生，2008]昆虫抗菌肽既具有种的差异性,又具有一定的同源性,抗菌物质在昆虫中普遍存在,可能是昆虫—植物—病原菌长期协同进化在免疫学上的体现,可以作为抗性资源利用[谢咸升，李静，董建臻，等，2009]。但是目前对抗菌肽作用机制仍需进一步研究，面对病原菌抗药性的升级, 抗菌肽及其基

细胞培养中的注意事项

细胞培养中的注意事项 1 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS(horseserum)则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 %或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5%CO2培养细胞。 7 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 8 培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。 9附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。 10 悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。 11 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。 12 细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。 13 细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 -95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可

细胞培养各种培养基简介

DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。二、血清细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5~20%。特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。然而，很多人也将胎牛血清