transwell实验步骤及方法

Transwell实验具体步骤及方法

1.取对数生长期的细胞，常规消化（可以无血清饥饿12~24h，去除血清对cell

侵袭能力的影响）

2.用含1%FBS的培养基重悬细胞，调整细胞密度为（2~5）*10 5/ml，细胞要

多一点

3.取100ul细胞悬液接种于transwell小室的上室，下室加入600ul含10%FBS

的培养基（避免小室下面产生气泡）

4.培养细胞24h/48h，后取出小室置烧杯内涮洗；24孔板中加入800ul甲醇/孔。

5.吸干上室液体，4%多聚甲醛室温固定10~30min，

另一24孔板中加入800ul染色液/孔

涮洗后，吸干上室固定液，移入0.1%结晶紫染色液，室温染色20min （结晶紫：常规工作液浓度0.1%）

6.小室用流动水轻轻冲洗浸泡3次进行脱色染色

7.吸干上室液体，用棉签（棉花扯松一点再擦）轻轻擦掉上室底部膜表面未迁

移细胞

8.显微镜下随机观察5个视野细胞，并进行照相

9.数据处理