龙胆苦苷和龙胆碱的分离纯化及生物活性研究

中文摘要 (1)

ABSTRACT (3)

英文缩略词表 (4)

综述龙胆碱的制备方法及其生物活性研究进展 (8)

综述参考文献 (10)

前言 (14)

第一章HPLC测定龙胆中龙胆苦苷的含量 (15)

1概述 (15)

2实验仪器、药材与试剂 (15)

3实验条件与样品的制备 (16)

4分析方法学考察 (16)

5龙胆苦苷的含量测定 (19)

6小结与讨论 (19)

第二章龙胆中龙胆苦苷的分离纯化 (20)

1概述 (20)

2实验仪器、试药与试剂 (21)

3试验方法与结果 (23)

4小结与讨论 (24)

第三章龙胆碱的合成及提取、分离纯化 (25)

1概述 (25)

2实验仪器、试药与试剂 (25)

3试验方法与结果 (32)

4小结与讨论 (33)

第四章龙胆中相关成分的体外抑菌活性研究 (34)

1概述 (34)

2实验仪器、试药与试剂 (34)

3实验方法与结果 (41)

4小结与讨论 (42)

第五章龙胆中相关成分的抗炎活性研究 (44)

1概述 (44)

2实验仪器、试药与试剂 (44)

3实验方法与结果 (49)

4小结与讨论 (50)

第六章总结与讨论 (51)

参考文献 (55)

攻读学位期间发表论文情况 (56)

中文摘要

龙胆为龙胆科植物龙胆Gentiana scabra Bge、条叶龙胆G. manshurica Kitag、三花龙胆G. triflora Pal1、或滇龙胆G. rigescens Franch的干燥根和根茎。前三种习称“龙胆”，后一种习称“坚龙胆”。龙胆是著名的保肝药物，现代研究表明主要药用成分为龙胆苦苷，而后续文献则报道称龙胆苦苷经体内代谢后产生一种重要的生物活性成分龙胆碱。龙胆碱并非龙胆药材原生的化学成分，然而却与龙胆苦苷具有相似的药理作用。随后的药理研究还表明龙胆碱的某些生物活性强于龙胆苦苷，故一些研究者推测龙胆可能是通过龙胆苦苷在体内代谢产物——龙胆碱而发挥的生物活性，也可能是通过龙胆苦苷和龙胆碱在体内的相互协同作用而发挥的生物活性。所以，本课题在获得龙胆苦苷和龙胆碱的单体化合物后，对二者的药理作用进行了深入研究，探讨龙胆碱的药用价值，扩大龙胆的临床药用范围。主要内容如下：

1 本课题组以坚龙胆药材为原料，首先采用高效液相色谱法，测得龙胆中龙胆苦苷的平均含量为1.706%。其次利用大孔吸附树脂进行富集、粗分离，利用MCI GEL进行纯化，获得了纯度大于95%的龙胆苦苷。

2 以高效液相色谱（HPLC）法和薄层色谱（TLC）法为检测手段，对坚龙胆药材进行研究，加氨水浸泡、提取、萃取、浓缩，加倍量水混悬，然后用1%的盐酸水溶液溶解，经阳离子交换树脂色谱进行分离、富集龙胆碱，利用硅胶柱层析进行纯化，重结晶，得到纯度大于95%的龙胆碱。

3 利用经典的药物二倍稀释法和菌落计数法相结合的实验方法，考察龙胆药材醇提物、粗生物碱，龙胆苦苷及龙胆碱对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌（主要代表菌大肠埃希杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌）的抑菌活性并确定了各自的最低抑菌浓度（MIC）。

4 用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞，建立细胞炎症反应模型，选择一氧化氮（NO）为测定指标，探讨粗生物碱、龙胆苦苷、龙胆碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞一氧化氮（NO）释放量的影响，并对它们的活性进行比较，结果表明粗生物碱和龙胆碱单体化合物在一定的浓度范围内能明显减少LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞一氧化氮的（NO）释放量，可能有治疗内毒素炎症的作用。