一株高产淀粉酶红曲霉菌株的分离鉴定及其培养特性研究

收稿日期：２０１５‐０７‐０８

基金项目：国家自然科学基金项目（３１２７００６１）

作者简介：吴巧玉（１９９０－），女，河南商城人，硕士研究生，主要从事应用微生物研究．

通讯作者：蒋冬花（１９６４－），女，浙江东阳人，教授，硕士生导师，主要从事微生物分子生物学与应用微生物学研究．第３０卷第４期徐州工程学院学报（自然科学版）２０１５年１２月Ｖｏｌ．３０Ｎｏ．４ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｕｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄｉｔｉｏｎ）Ｄｅｃ畅２０１５

吴巧玉，莫一杰，汪燕利，蒋冬花

（浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华　３２１００４）

摘要：从全国各地收集的自然发酵红曲米中分离纯化获３８６株红曲霉菌株；经筛选获１株高产淀粉酶的Ｍｐ‐４２优质菌株，根据Ｍｐ‐４２菌株的形态、生理生化和ＩＴＳ基因序列，鉴定为紫色红曲霉（Ｍｏｎａｓｃｕｓｐｕｒｐｕｒｅｕｓ）．Ｍｐ‐４２菌株具有高产淀粉酶、生长速度快、产孢量多等优良特性，在发酵培养基初始ｐＨ为６．０，培养温度为３０℃条件下，Ｍｐ‐４２菌株淀粉酶酶活可达１６８１７８Ｕ／ｍＬ．

关键词：淀粉酶；紫色红曲霉；筛选；优化

中图分类号：Ｘ１７２　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７４‐３５８Ｘ（２０１５）０４‐００５４‐０７

目前能够满足工业应用需求的淀粉酶主要来源于细菌和丝状真菌［１］．红曲霉（Ｍｏｎａｓｃｕｓ）在生长过程中

能产生多种酶，如淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、脂肪酶等［２］．同时，它也是我国重要的食用、药用真菌，是传统中药

红曲的基原菌，也是制作传统饮品红曲酒的主要菌种，被广泛应用于食品发酵、食品着色、中药配伍等方面．

淀粉酶是一类广泛存在于动物、植物和微生物（主要是胞外酶）中的水解酶［３］．它可以将淀粉水解形成糊

精、低聚糖和葡萄糖等低分子物质，可改善制品的风味，生成的葡萄糖的产物又可以进一步异构化成果糖，得

到商品化的高果糖浆［４］．近年来，对淀粉酶的研究大力推动着淀粉深加工的发展，淀粉酶在造纸制浆、啤酒和

威士忌的生产，食品业，饲料，酒精的生产及医药都应用广泛，它占据了大约全国四分之一的酶市场［５‐７］．

本研究旨在从全国各地收集的自然发酵红曲米中筛选、分离、纯化获高产淀粉酶优质菌株，可用于淀粉酶的生产、食品加工、调味品生产、酒类酿造、酒精的生产等．

１　材料与方法

１．１　实验材料

１．１．１　菌株来源

从全国各地收集的自然发酵红曲米中分离纯化所获的３８６株红曲霉菌株．

１．１．２　培养基

１）ＰＤＡ培养基：马铃薯２０％，葡萄糖２％，琼脂粉２．０％，Ｈ２Ｏ１Ｌ，ｐＨ６．

０～６．５．用于红曲霉菌株的分离纯化．

２）淀粉分离培养基：蛋白胨，２０ｇ；Ｋ２ＨＰＯ４，２ｇ；ＭｇＳＯ４，０．５ｇ；ＫＣｌ，０．５ｇ；酵母粉，１ｇ；琼脂，１５ｇ；可溶性淀粉，５０ｇ；Ｈ２Ｏ，１Ｌ；ｐＨ４．

０～５．０．用于产淀粉酶红曲霉菌株的初筛．３）种子培养基：蛋白胨，１ｇ；ＮａＣｌ，１ｇ；可溶性淀粉，１ｇ；Ｈ２Ｏ，１Ｌ；ｐＨ，

７．０～７．２．它１∶１用于产淀粉酶红曲霉菌株的种子培养．

４）发酵培养基：蛋白胨，１０ｇ；ＮａＣｌ，５ｇ；牛肉膏，３ｇ；可溶性淀粉，２．５ｇ；Ｈ２Ｏ，１Ｌ；ｐＨ，

７．０～７．２．它１∶１用于产淀粉酶红曲霉菌株的复筛．

１．１．３　主要试剂和溶液的配制

ＤＮＳ试剂主要参照枟食品成分分析手册枠［８］上的方法：称取３，５‐二硝基水杨酸３．１５ｇ，加水５００ｍＬ．搅

拌５ｓ，水浴至４５℃．然后逐步加入１００ｍＬ０．２ｇ／ｍＬ的氢氧化钠溶液，同时不断搅拌．直到溶液清澈透明．?４５?