尿素酶活性定性检测

尿素酶的测定（定性）

1.试剂:

1.10.62%苯酚红乙醇溶液

2、测定方法:

将试样粉碎,称0.2g试样转入试管中,加入0.2g结晶尿素,3-5滴苯酚红指示剂，加20-30mL蒸馏水摇动10秒钟，于30度水浴中观察溶液颜色，记录呈现粉红色时的时间。

3、尿素酶活性的结果表示：

1min内呈粉红为:活性很强;区

1-5 min内呈粉红为:活性强;

5-15 min内呈粉红为:有点活性;

15--30 min内呈粉红为: 无活性;

美国大豆协会方法：

1、原理：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕中的尿素酶活性可按尿素转变成氨

的方法定性测定。

2、试剂：

2.1 稀硫酸（H2SO4）0.2N或更稀些，带滴管。

2.2 尿素—酚红试剂：

a、将1.2克酚红溶解于30毫升0.2N的NaOH中；

b、用蒸馏水将之稀释至300毫升；

c、加入90克尿素并溶解之，用蒸馏水稀释至2升；

d、加入14毫升1.0N的H2SO4（或0.2N的H2SO4），用蒸馏水稀释至3升；

e、溶液应具明亮的琥珀色。

3、测定步骤：

3.1在一个150毫升的烧杯中到入少量试剂，注意溶液必须呈明亮的琥珀色。若溶液

已转为深橘红色，滴入稀硫酸溶液并搅拌之，直至溶液再度呈琥珀色。

3.2量一汤匙粉碎好的豆粕粉，放置于培养皿中，在样品上加入两汤匙试剂，轻轻搅

拌，将样品平铺于培养皿中。若仍有干豆粕斑点，则再加入试剂，直至将豆粕浸湿。

3.3放置5分钟后观察：

No.1 没有任何红点出现：再任其放置25分钟，若仍无红点出现，说明豆粕过熟。

No.2 有少数红点：少量尿素酶活性，豆粕可用。

No.3 豆粕表面约有25%为红点覆盖：少量尿素酶活性，豆粕可用。

No.4 豆粕表面约有50%为红点覆盖：有尿素酶活性。

No.5 豆粕表面约有75-100%为红点覆盖：尿素酶活性很高，不应该接受这种原料，因为豆粕过生。