豆粕蛋白质的质量测定方法非常重要_

豆粕营养成份及标准

豆粕营养成份及标准 [关键词]豆粕标准 植物蛋白类 植物性蛋白亦是提供饲料蛋白质的主要来源，其与鱼粉在饲料的关系中互为消长，而豆类及油实类等油脂含量丰富者，在采油后所得到的油粕类，通常蛋白质含量高，普通用来补给蛋白质，是极有用处的饲料来源。惟这些油粕类的饲料价值常视其成分、营养价，适口性、不良因子等而有差异。 豆粕 系指大豆采油过的残渣经过适度加热、干燥、粉碎者。大豆粕是鸡、猪、牛适口性良好的蛋白质源。黄豆粕之粗蛋白质含量约45％，其消化率高达 85-92％。黄豆内存在着非营养成分的urease等酵素，trypsin inhibiter，且活性很高，在生的情况下会阻碍消化率，雏鸡、子猪的发育。黄豆粕经过某种程度加热后，成长阻碍因子即失去活性，且饲料价值提高，但视其制造工程宫之加热条件面品质受到影响。其指标是使用水溶性氮素指数（NSI），ursease活性，trypsihn inhibiter含量，通常NSI 25％以下为一个指标。牛方面，加热不充分之urease活性高者不能使用于尿素配合饲料。 豆粕的自然属性 1、物理性质 颜色：浅黄色至浅褐色，颜色过深表示加热过度，太浅则表示加热不足。整批豆粕色泽应基本一致。 味道：具有烤大豆香味，没有酸败、霉败、焦化等异味，也没有生豆腥味。 质地：均匀流动性好，呈不规则碎片状、粉状或粒状，不含过量杂质。 比重：0.515?/FONT>0.65Kg/l 2、化学成份 豆粕中含蛋白质43％左右，赖氨酸2.5％～3.0％，色氨酸0.6％～0.7％，蛋氨酸0.5％～0.7％，胱氨酸 0.5％～0.8％；胡萝卜素较少，仅0.2～0.4mg/Kg，流胺素、核黄素各3～6mg/Kg，烟酸15～30mg/Kg，胆碱2200～2800mg/Kg。豆粕中较缺乏蛋氨酸，粗纤维 去皮与带皮豆粕组成比较 原蛋白 质Crude Protein Extract 以太纤 维Ether Fiber % 粗纤维 Crude % 能量 Energy (kcal/kg) 带皮豆 粕 44.0（8）0.5（10）7.0（7）2240（8）去皮豆 粕 48.5（10）1.0（7）3.0（10）2475（10） 带皮与去皮豆粕氨基酸组成比较 带皮豆粕去皮豆粕精氨酸 3.4 3.8 赖氨酸 2.9 3.2 蛋氨酸0.65 0.75 胱氨酸0.67 0.74 色氨酸0.6 0.7 组氨酸 1.1 1.3 亮氨酸 3.4 3.8 异亮氨酸 2.5 2.6 苯丙氨酸 2.2 2.7 苏氨酸 1.7 2 总价值 2.4 2.7

豆粕的质量指标以及验收指标

豆粕的质量指标以及验收指标 1主题内容与适用范围 本标准规定了饲料用大豆粕的质量指标,适用山东省明发同茂饲料有限公司所用的大豆粕（注：经预压-浸提法或浸提法提取油后的饲料用大豆粕）。 2 感官性状 浅黄色不规则碎片状，色泽一致，新鲜，有豆粕的特殊香味。无发酵、霉变、结块、虫蛀及异味异臭。不得掺入饲料用大豆粕以外的物质，若加入抗氧化剂、防霉剂等添加物时，应做相应的说明。 3 质量指标（暂行标准） 水分≤14.5% ； 粗灰分≤7.0%; 粗蛋白质≥42.0%； 65%≤蛋白质溶解度≤85% 0.03 Nmg/分钟·克≤脲酶活性≤0.3% Nmg/分钟·克 4 验收指标 感官性状，水分，粗灰分，粗蛋白，蛋白溶解度，脲酶活性。 5 卫生指标 滴滴涕（mg/kg）≤0.02 ，其余卫生指标应符合中华人民共和国《饲料卫生标准》GB 13078有关的规定。 6 检验 水分、粗蛋白质、粗纤维、粗灰分等指标按《饲料工业标准汇编》2002版执行。对公司不能检测的项目或有争议的检测结果，根据需要可送相应的检测机构进行检测。

饲料用花生粕 1主题内容与适用范围 本标准规定了饲料用花生粕的质量指标，用于明发同茂饲料公司所用的花生粕。 2 感官性状 碎屑状，色泽呈新鲜一致的黄褐色或浅褐色，无发酵、霉变、虫蛀、结块及异味异臭。不得掺入饲料用花生粕以外物质，若加入抗氧化剂，防霉剂等添加剂时，应做相应的说明。 4 质量指标 水分≤12.0% 粗蛋白质≥45.0% 粗纤维< 6.5% 粗脂肪≤2.0% 粗灰分< 8.0% 5 卫生指标 黄曲霉毒素B1（mg/kg）≤0.05，其它卫生指标应符合中华人民共和国《饲料卫生标准》GB 13078的有关规定 6 检验 水分、粗蛋白质、粗纤维、粗灰分等指标按《饲料工业标准汇编》2002版执行。对公司不能检测的项目或有争议的检测结果，根据需要可送相应的检测机构进行检测。

发酵豆粕各项指标检测方法与实用实用标准

发酵豆粕各项指标检测方法与标准 发酵工艺2010-12-31 15:16:17 阅读86 评论0 字号：大中小订阅 1、水份、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰份、钙和磷的分析方法全部采用国标法。 2、总有机酸测定采用氢氧化钠滴定的方法和乳酸测定采用气象色谱。 3、pH的测定采用玻璃电极pHS-3C型pH计测定。 4、可溶蛋白的测定方法 5、小肽含量的测定 水份的测定 水份测定直接参见国标 测定完水分后的样品需要测定其中的总有机酸的含量，其数值为A，并计算有机酸的挥发量。 水份含量的计算时应当扣除这部分有机酸的挥发量，否则会出现水分超标现象。 总有机酸检测 试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂 仪器:磁力搅拌器离心机 方法： （1）取发酵后鲜样品15g 置于150ml烧杯中加入溶于100ml去离子水，在磁力搅拌器上浸提30min。（2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。 （3）取上清液15ml, 加30ml去离子水稀释（以消除底色的影响），加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH 标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。（终点到溶液呈现粉红） 计算 乳酸（％）＝N(NaOH)×V(NaOH) ×0.09008/15×115/15g N(NaOH):NaOH标准溶液的浓度； V(NaOH) ：消耗NaOH标准溶液体积； 0.09008：乳酸的毫克当量。 0.1mol氢氧化钠的配制与标定 1、配制：称取9.6g氢氧化钠，溶于100ml水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。用塑料管虹吸5ml的上清液，注入2000ml无二氧化碳水中(将去离子水煮沸5分后冷却)，摇匀。 2、标定 称取0.67g于105~110℃烘至恒重的基准的邻苯二甲酸氢钾，准确至0.0001g，溶于50ml的无二氧化碳水中，加4滴酚酞指示剂（0.1％），用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。 3、计算 氢氧化钠标准溶液的浓度按下式计算 c（NaOH）=m/（V1-V2）×0.2042 式中c（NaOH）——氢氧化钠标准溶液之物质的量的浓度，mol/l； V1——滴定用邻苯二甲酸氢钾之用量，ml； V0——空白试验氢氧化钠溶液之用量，ml； m——邻苯二甲氢钾之质量，g； ? 0.2042——与1.00ml氢氧化钠标准液[c（NaOH）=1.000mol/l]相当的以克表示的邻苯二甲氢钾之用量。 0.1％酚酞指示剂的配制：称取1.000克酚酞，溶解与100ml95％的试剂酒精中，混匀即得。

几种测蛋白含量方法的比较

蛋白质含量测定方法的比较及肽含量的测定 （一）蛋白质测定方法的比较（原理、优缺点）蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry 法）和紫 外吸收法、考马斯亮蓝法。其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20 倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry 法）和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20 倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。 1 微量凯氏定氮法（GB 5009.5-2010） 1.1原理样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。 1.2操作方法样品经前处理、炭化、消化、蒸馏、滴定等主要步骤 1.3特点准确度较高，适用于0.2~ I.Omg氮，误差为土2%;操作复杂费时，整个过程需要耗时8~10h,试剂消耗量大。，测得结果为总氮含量，包括蛋白氮和非蛋白氮含 量;适用范围广，几乎所有样品均可用此方法。 2双缩脲比色法

豆粕质量

豆 粕 的 质 量 Soybean Meal Quality 作者Robert A.Swick博士 (美国大豆协会新加坡办事处) SW1--03

验室干物质数值例如一批豆粕购买时含粗蛋白48%和水分12%饲料厂的实验室对一份有代表性的样品所作分析的结果为含粗蛋白47.5%和水分13%计算方法即为47.58887 48结论是样品在分析前从空气中吸收了水分增加了重量但按购买时的干物质水 平来计算蛋白质水平是正确的 一批货的干物质总重量是极为重要的数据因为这一数据决定了所购的每一种养分的总 量饲料厂还应该在对原料称重之前对干物质含量进行测定应该对养分含量进行相应的调整 粗蛋白 可将饲料样品中的氮含量乘以系数6.25而推算粗蛋白含量该系数是根据大多数蛋白质都含16%的氮而推导出来的所以将饲料中氮的百分含量乘以10016或6.25就可算出粗蛋白的量虽然业已证明对于某些饲料来说这一换算系数并非6.25但这些饲料最终都按6.25的蛋白质系数进行饲料混合和计算就是在所有的动物饲料中采用这一系数的理由饲料业已经接受6.25为氮含量换算为粗蛋白含量换算系数 粗蛋白测定中的主要困难在于并非原料中所有的氮都来自蛋白质或氨基酸有时候会有相当大量核酸之类的非蛋白氮化合物在最终计算中被作为粗蛋白进行处理原料中可 能存在尿素之类的杂物从而增加了原料中的氮含量这样也就增加了原料中的粗蛋白 含量所以粗蛋白分析并不能真正告诉我们任何关于氨基酸含量的信息或者关于蛋白质的质和量的信息因此粗蛋白一词绝对适当的我们必须时刻牢记其来源和意义有若干种方法可用以测定原料的总氮含量最古老也是最常用的方法就是丹麦化学家Johan Kjeldahl在十九世纪中叶发明的凯氏定氮法测定时将饲料样品和一种金属催化剂铜锌硒和或汞一起在硫酸中煮沸这样样品就被完全消化其中所有的有机物 都被氧化蛋白质氨基酸和其它含氮化合物中的氮都被转化为铵离子然后将溶液冷却 在其中加入碱从而使铵转变为挥发性的氨氨从溶液中蒸馏出来又被捕捉入硼酸溶液中最后用标准盐酸溶液进行滴定以测定氨水平并以此表示氮水平最终就表示出了粗蛋白水 平样品消化不完全以及或者操作过程中发生氨气逃逸就会导致结果错误Dumas法或称燃烧法是另一种被认可的原料比如豆粕中氮含量测定法该法要采用LECO Hewlett Packard等公司生产的仪器其优点是可避免采用凯氏定氮法时会碰到的问题采用燃烧法时样品在高温环境中在氧的作用下蒸发然后以光谱法分析所产气体中 的氮这种方法非常精确但在设备上的初始投资很大由表1可见以燃烧法得出的数值常常高于用凯氏定氮法测得的数值这通常是由于采用凯氏定氮法时样品消化不完全的缘故有些环形氨基酸比如色氨酸和酪氨酸很难消化测得的读数很低建议用纯色氨酸或烟 酸作为标准来对凯氏定氮法进行标定 表1 用凯氏定氮法和Dumas燃烧法对豆粕粗蛋白含量测定的比较 样品 实验室1 实验室2 凯氏定氮法 凯氏定氮法 燃烧法 1 46. 2 45.00 46.07 2 46.0 45.88 46.56 3 45.8 45.45 46.55 4 46.0 45.71 47.13 5 46.1 46.38 46.73 平均 46.0 45.8 46.6 美国大豆协会于1998年检查了不同实验定之间的测定误差从亚洲当地的一家饲料厂获

饲料原料质量鉴定方法

饲料原料质量鉴定方法 (一)感官坚定 感官鉴定又称经验鉴定，是凭借人的五官来鉴定饲料质量的方法。要求平时注意观察各种饲料，在充分了解和掌握各种饲料的基本特征基础上，才能做到快速、准确地判断原料的质量优劣。 1.眼观(视觉) 观察饲料原料的形状、色泽、有无霉变、虫蛀、有无异物、硬块、夹杂物等。花生饼、胡麻饼、芝麻饼很容易发霉，特别是饼粕裂缝中常有黄曲霉污染。豆饼掺假的很多，有的豆饼中掺入玉米、豆皮、沙子、其他饼类等，需要把饼掰开，细心观察就会发展 2.舌舔(味觉) 通过舌舔或牙咬来检查饲料有无刺激的恶味、苦味或其他异味。如发霉的豆饼、棉籽饼、胡麻饼、芝麻饼等，若把饼外的绿霉擦去，用眼不易看出，通过舌舔和牙咬就会尝到刺激性的恶味。 3.鼻闻(嗅觉) 用鼻子来嗅闻饲料是否具有原料物质的固有气味，并确定有无霉味、氨臭味、发酵酸味、焦糊味、腐败臭味或其他异味。特别是对鱼粉、肉骨粉、蚕蛹粉、骨粉及油脂类的鉴别，要注意利用嗅觉来鉴定是否腐败变质。鉴别时应避免环境中其他气味的干扰。 4.手摸(触觉) 将饲料放在手上，用指头捻，通过感触来觉察其粒度的大小、硬度、黏稠性、有无夹杂物及水分的多少等。 (二)物理鉴定 1.筛分法 利用各种大小的筛子(如10目、20目、30目等)将原料过筛，观察饲料原料的粒度、搀杂物的种类及比例等。用这种方法能分辩出用肉眼看不出来的异物。 2.容重法 各种饲料原料都有其固有的容重，通过测量容重并与标准容重相比较，可鉴别饲料原料是否含有杂质或搀杂物。常见饲料原料的容重见下表。 常见风干饲料原料容重（g/L） 饲料原料容重饲料原料容重饲料原料容重 玉米626 大豆737~769 血粉616 去皮玉米720 脱壳大豆642 羽毛粉546 玉米粉544~576 大豆皮粉320 奶粉320 玉米芯粉400 溶剂浸提大 豆粕44% 561~609 干燥乳清粉561~737 带芯玉米粉578 溶剂浸提大 豆粕50% 657~673 乳糖730 玉米麸质粉482 棉籽粕593~641 骨粉801~961 干燥玉米酒糟400~416 棉籽饼641~721 牡蛎壳粉（小 于1cm） 849 玉米胚芽粕56 棉籽壳193 贝壳粉1600 玉米蛋白粉512~688 脱壳花生240~304 石粉1300~1550 小麦610~626 带壳花生272~384 碳酸钙201 小麦麸176~256 花生饼粕466 脱氟磷554 小麦粉609~625 干燥甜菜粕176~256 脱氟磷酸氢 钙 1200 小麦标准粗 粉 288~400 干燥柠檬粕328 双飞粉1350

发酵豆粕检测方法

发酵豆粕检测方法 （参考）

目录 1.检测用仪器简介 (2) 2.变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳 (3) 3.Elisa 大豆球蛋白（酶联免疫法） (6) 4.小肽的检测（酸溶蛋白） (10) 5.寡糖的检测——薄板层析法（TLC） (11) 6.乳酸的检测 (12) 7.蛋白溶解度的检测（PS） (13) 8.发酵豆粕蛋白溶解度的检测（改良） (14) 9.水溶性蛋白的检测 (15) 10.挥发性盐基氮（VBN） (17) 11.PH 值测定 (19) 12.水苏糖含量的测定 (20) 13.水分、粗蛋白、粗灰分、粗纤维、尿素酶活性的检测 (20)

1、检测用仪器简介

2、变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳 聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速而且可重复的方法。通过对电泳条带的观察和分析，可以很明显的看出发酵前后或不同产品的抗原蛋白含量。 一、原理 SDS—聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳主要依据蛋白质的分子量对豆粕中的抗原蛋白进行分离。SDS 与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折迭结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。SDS—蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。由于在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。SDS—PAGE 因易于操作和用途广泛，成为许多研究领域中一种重要的分析技术。 二、仪器 1、电泳仪及电泳槽 2、振荡器 3、离心机（10000 转） 4、移液枪（大、中、小） 5、离心管（7ml、5ml 或 1.5ml、1ml） 三、试剂： 1、单体母液：100ml 丙烯酰胺（ACR）30g 甲叉双丙烯酰胺0.8g 去离子水定容至100ml，棕色瓶4℃下存放。可保存 3 个月。 2、分离胶缓冲液（4×）（PH=8.8）100ml Tris-base（1.5mol/L）18.17g SDS 0.4g 浓 HCL 调节 PH 至 8.8，定容至 100ml，过滤，4℃存放。 3、浓缩胶缓冲液（4×）（PH=6.8）100ml Tris-base（0.50mol/L） 6.06g SDS 0.4g 浓 HCL 调节 PH 至 6.8，定容至 100ml，过滤，4℃存放。 4、10%（w/v）过硫酸铵1ml 过硫酸铵0.1g

蛋白质的测定方法比较

蛋白质的测定方法比较 一、分光光度法 1、测定原理： 食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，在pH 4.8 的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。在波长400 nm 下测定吸光度值，与标准系列比较定量，结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。 2、测定步骤： ①试样消解：称取经粉碎混匀过40目筛的固体试样0.1g～0.5g（精确0.001g）、半固体试样0.2g～1g（精确至0.001g）或液体试样1g～5g（精确0.001g），移入干燥的100 mL 或250 mL 定氮瓶中，加入0.1 g硫酸铜、1 g 硫酸钾及5 mL 硫酸，摇匀后于瓶口放一小漏斗，将定氮瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。缓慢加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热半小时。取下放冷，慢慢加入20 mL 水，放冷后移入50 mL 或100 mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。按同一方法做试剂空白试验。 ②试样溶液的制备：吸取2.00 mL～5.00 mL 试样或试剂空白消化液于50 mL 或100 mL 容量瓶内，加1 滴～2 滴对硝基苯酚指示剂溶液，摇匀后滴加氢氧化钠溶液中和至黄色，再滴加乙酸溶液至溶液无色，用水稀释至刻度，混匀。 ③标准曲线的绘制：吸取0.00 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL 和1.00 mL 氨氮标准使用溶液（相当于0.00μg、5.00μg、10.0μg 、20.0μg、40.0μg、60.0μg、80.0μg 和100.0μg 氮），分别置于10 mL 比色管中。加4.0 mL 乙酸钠-乙酸缓冲溶液及4.0 mL 显色剂，加水稀释至刻度，混匀。置于100 ℃水浴中加热15 min。取出用水冷却至室温后，移入1 cm 比色杯内，以零管为参比，于波长400 nm 处测量吸光度值，根据标准各点吸光度值绘制标准曲线或计算线性回归方程。 ④试样测定：吸取0.50 mL～2.00 mL（约相当于氮＜100μg）试样溶液和同量的试剂空白溶液，分别于10 mL 比色管中。以下按上述中“加4 mL 乙酸钠-乙酸

蛋白质含量测定方法比较

蛋白质含量测定主要有五种方法，分别是凯式定氮法、双缩脲法、紫外吸收法、酚试剂法和考马斯亮蓝法。这五种方法各有特点，优缺点明确。 凯氏定氮法 蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。 优点：重现性好，是目前分析有机化合物含氮量常用的方法,是一种蛋白质测定的经典方法, ,测试结果准确。 缺点：操作比较繁复，费时,试剂消耗量大。且此法测定的蛋白质含量实际上包括了核酸，生物碱，含氮类脂，卟啉，含氮色素等非蛋白质含氮化合物。双缩脲定氮法 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。 优点：较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋

白质测定。 缺点：不太灵敏；不同蛋白质显色相似。 紫外吸收定氮法 双缩脲法是传统的分光光度法测定蛋白质的方法,当含有两个或者两个以上肽键的物质和碱性的硫酸铜反应时,形成紫色的络合物,这个颜色产物是肽键中的氮原子和铜离子配价结合的结果。蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。形成颜色产物的量取决于蛋白质的浓度。实际测定时,必须预先用标准蛋白质溶液制作一个标准校正曲线,通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白质标准溶液。不同浓度的标准蛋白质溶液加入双缩脲试剂后,反应生成的颜色产物用紫外-可见分光光度计在540nm 波长下测定吸光度,以双缩脲试剂加缓冲或水作空白对照。然后将测得的值分别对蛋白浓度(mg/ ml) 作图,得标准曲线。未知蛋白样品用双缩脲试剂做同样处理,根据测得吸光度值在标准曲线上直接查得未知蛋白质样品中得蛋白质浓度。 优点：对各种蛋白质呈色基本相同;特异性和准确度好,精密度好;呈色稳定性好,试剂单一,方法简便。快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用。 缺点：准确度较差，干扰物质多，在用标准曲线法测定蛋白质含量时，对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差。故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质，会出现较大的干扰。核酸的干扰可以通过查校正表，再进行计算的方法，加以适当的校正。但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的，虽然经过校正，测定的结果还是存在一定的误差。此外，进行紫外

豆粕品质的检测方法

豆粕品质的检测方法 一、评定指标 1、1：抗胰蛋白酶的活性：Trypsin Inhibitor Activity TIA大豆粕在0。01mol/LnaOH 浸泡1h过滤,滤液用PBPA水解.测胰蛋白酶活性TIU. 1、2：尿酶活性（Urease Activity UA）国际标准法（ISO）、PH增值法（ΔPH法）、扩 散法、酚红法。CHINA规定ΔPH《0。4 在0.02-0.2之间是优质豆粕.UA与TAI几 乎同步失活.在加热过度以前,TIA以全部失活. 1、3:蛋白质溶解度:(Protein Solubility)美国乔治大学:Dale & Araba (1987)以检 测豆粕是否加热过度.一定量的豆粕与0.2%NaOH溶液混合离心过滤,滤液凯氏测 氮.PS<70%,则加热过度,70-80%为适宜,测时其灵敏度不够,粒度影响,当粒度在 60-80目时方稳定. 1、4：有效赖氨酸:赖与精氨酸属热敏性AA,高温时Lys与还原糖发生Maillard反应. 测定法有:A染料结合法(DBL):二硝基氟苯(FDNB),三硝基磺酸(TNBS),酸性橙-12, 茚三酮发生特异性呈色反应.B 高效液相色谱法(HPLC) 1、5：蛋白质的水溶解度和氮的水溶解度：蛋的质的水溶解度（PDI）与氮的水溶解度 （NSI），二者只是与水混合后的搅拌强度不一样。PDI是8500r/min的速度搅拌 10min，NDI是120r/min搅拌30min。PDI测定豆粕的加热程度比UA和PS（NaOH） 灵敏，NSI在7-27.8%是可以接受。NSI低于10%则为加热过度。Balloun & Hgymard(1959):加热时间延长，NSI降低，加热过度，则大大降低，鸡的增重与饲 料报酬降低。 1、6考马氏亮蓝法：Kratzer(1989): 考马氏亮蓝对蛋白质考马氏亮蓝考马氏亮蓝显色 对AA不显色并与PS相关度好但考法测的实际值大大低于凯氏法测的蛋白质溶解 度。这可能与凯氏法将全部AA包括在蛋白质内的缘故。但考法较PS法测的时间短 的多，故考法更适合评价经受不同热处理时间后饲料中可溶性蛋白质的含量。 1、7：其它方法：橙黄G染色法（只能有限鉴定过分加热处理的大豆粕）、甲醛滴定法、 甲酚红染色法(每克豆粕吸收甲酚红的毫克数2-3mg为生豆粕,3.3-3.7mg为加工不 足,3.8-4mg为适当,4.3mg为加热过度)、颜色亨特色值。（Smith1981：颜色与蛋白 质有较高的相关性） 二、豆粕质量与生产性能

发酵豆粕各项指标检测方法与标准

发酵豆粕各项指标检测方法与标准 发酵豆粕各项指标检测方法与标准 1、水份、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰份、钙和磷的分析方法全部采用国标法。 2、总有机酸测定采用氢氧化钠滴定的方法和乳酸测定采用气象色谱。 3、pH的测定采用玻璃电极pHS-3C型pH计测定。 4、可溶蛋白的测定方法 5、小肽含量的测定 水份的测定 水份测定直接参见国标 测定完水分后的样品需要测定其中的总有机酸的含量，其数值为A，并计算有机酸的挥发量。 水份含量的计算时应当扣除这部分有机酸的挥发量，否则会出现水分超标现象。 总有机酸检测 试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂 仪器:磁力搅拌器离心机 方法： （1）取发酵后鲜样品15g 置于150ml烧杯中加入溶于100ml去离子水，在磁力搅拌器上浸提30min。 （2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。 （3）取上清液15ml, 加30ml去离子水稀释（以消除底色的影响），加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。（终点到溶液呈现粉红） 计算 乳酸（％）＝N(NaOH)×V(NaOH) ×0.09008/15×115/15g N(NaOH):NaOH标准溶液的浓度； V(NaOH) ：消耗NaOH标准溶液体积； 0.09008：乳酸的毫克当量。 0.1mol氢氧化钠的配制与标定 1、配制：称取9.6g氢氧化钠，溶于100ml水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。用塑料管虹吸5ml的上清液，注入2000ml无二氧化碳水中(将去离子水煮沸5分后冷却)，摇匀。 2、标定 称取0.67g于105~110℃烘至恒重的基准的邻苯二甲酸氢钾，准确至0.0001g，溶于50ml的无二氧化碳水中，加4滴酚酞指示剂（0.1％），用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。 3、计算 氢氧化钠标准溶液的浓度按下式计算 c（NaOH）=m/（V1-V2）×0.2042 式中c（NaOH）——氢氧化钠标准溶液之物质的量的浓度，mol/l； V1——滴定用邻苯二甲酸氢钾之用量，ml； V0——空白试验氢氧化钠溶液之用量，ml； m——邻苯二甲氢钾之质量，g； ?0.2042——与1.00ml氢氧化钠标准液[c（NaOH）=1.000mol/l]相当的以克表示的邻苯二甲氢钾之用量。 0.1％酚酞指示剂的配制：称取1.000克酚酞，溶解与100ml95％的试剂酒精中，混匀即得。

豆粕质量与尿酶活性和蛋白质溶解度(1)

万方数据

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豆粕质量与尿酶活性和蛋白质溶解度(1) 作者：沈慧乐， 杨秀文， Shen Huile， Yang Xiuwen 作者单位：沈慧乐,Shen Huile(美国大豆协会)， 杨秀文,Yang Xiuwen(北京奶牛研究所) 刊名： 饲料广角 英文刊名：FEED CHINA 年，卷(期)：2005(16) 被引用次数：8次 本文读者也读过(10条) 1.乔自强蛋白质分解的影响因素[期刊论文]-啤酒科技2011(3) 2.康玉凡.李德发.邢建军.王燕华68个去皮和带皮豆粕的常规营养、脲酶活性及蛋白质溶解度比较研究[期刊论文]-黑龙江畜牧兽医2005(11) 3.周伟.黄小春.姚文海不同加热时间对大豆粉蛋白质溶解度影响的研究[期刊论文]-江西畜牧兽医杂志2008(2) 4.李铁军.贺建华.陈孝珊脱毒桐饼(粕)蛋白质溶解度测定的适宜条件[期刊论文]-农业现代化研究2002,23(2) 5.周兵.李树文.张宏玲.简丽.程宗佳不同膨化温度下膨化大豆中脲酶活性和蛋白质溶解度变化趋势浅析[期刊论文]-饲料广角2006(6) 6.谭宝玲.冯建文.陈丽.Tan Baoling.Feng Jianwen.Chen Li豆粕中尿素酶活性检测方法的应用推广[期刊论文]-饲料工业2007,28(9) 7.蒋爱民.郭善广.白福玉.邵晓明.王志江.何文新.何瑞奇.JIANG Aimin.GUO Shanguang.BAI Fuyu.SHAO Xiaoming .WANG Zhijiang.HE Wenxin.HE Ruiqi广式腊肠加工及贮藏过程中蛋白质降解动态研究[期刊论文]-肉类研究2008(11) 8.周妍蕾豆粕中尿素酶活性检测的意义及检测方法探讨[期刊论文]-科技创新导报2010(19) 9.左青.孙维众.戴劲松论豆粕质量鉴定方法[期刊论文]-中国油脂2002,27(2) 10.初雷.李爱科.高玉鹏.栾霞菜籽粕品质指标变化规律及相互关系研究[期刊论文]-中国油脂2009,34(11) 引证文献(8条) 1.何余勇.许赛英不同加热时间对大豆蛋白质溶解度影响的研究[期刊论文]-江西饲料 2011(5) 2.裴成江.杨正德饲料粉碎粒度研究[期刊论文]-饲料博览 2009(6) 3.周伟.黄小春.姚文海不同加热时间对大豆粉蛋白质溶解度影响的研究[期刊论文]-江西畜牧兽医杂志 2008(2) 4.刘玉兰.李燕.汪学德霉变大豆对豆粕质量的影响[期刊论文]-中国油脂 2006(12) 5.刘玉兰.汪学德对品质受损大豆加工产品质量的研究及评价[期刊论文]-中国粮油学报 2007(6) 6.刘玉兰.吴卫忠.张百川大豆膨化工艺技术对其产品质量的影响[期刊论文]-粮油加工 2007(2) 7.刘玉兰影响大豆产品质量因素的研究[学位论文]硕士 2006 8.豆洪启.秦飞.耿超.张玉良.王毅敏.安红周全脂大豆挤压膨化调质工艺的优化[期刊论文]-中国油脂 2013(4) 引用本文格式：沈慧乐.杨秀文.Shen Huile.Yang Xiuwen豆粕质量与尿酶活性和蛋白质溶解度(1)[期刊论文]-饲料广角 2005(16)

几种蛋白质含量测定方法的比较

几种蛋白质含量测定方法的比较 【摘要】：蛋白质含量测定方法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析之一。目前常 用的方法有凯氏定氮法、双缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯亮蓝法（Bradford），Folin —酚试剂法（Lowry）杜马斯燃烧法。其中Bradford 法灵敏度颇高，比紫外吸收法灵敏10～20 倍,比Biuret法灵敏100 倍以上。凯氏定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。过去Folin—酚试剂法法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以在本公司订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。测定农产品中全氮的凯氏定氮法在许多国家已被杜马斯然烧定氮法所代替，杜马斯燃烧法是基于在高温下(大约 900 ℃），通过控制进氧量、氧化消解样品的原理而进行氮测定的。这6种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，每种方法都有其优缺点，在选择方法时应考虑：⑴实验对测定所要求的灵敏度和精确度；⑵蛋白质的性质；⑶溶液中存在的干扰物质；⑷测定所要花费的时间 【关键词】：凯氏定氮法双缩脲法紫外吸收法考马斯亮蓝法 Folin—酚试剂法杜马斯燃烧法 一、凯氏定氮法 1.1原理 凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定4 个过程。其原理是样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化，含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨, 氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。 1.2特点 凯氏定氮法是目前分析有机化合物含氮量常用的方法，是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一，被国际国内作为法定的标准检验方法。凯氏定氮法样品的最佳消化条件为硫酸铜2.50 g, 硫酸钾0.10 g,浓硫酸4.00 mL；硫酸铜的用量为影响消化时间的主要因素,硫酸钾和浓硫酸用量为第二和第三主要因素；用此最佳条件做实验, 消化时间仅为12 min；与其他硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸用量方法对比,该法所需消化时间最短,试剂用量减少,可降低实验成本,也降低了对环境的污染。 凯氏定氮法适用范围广泛，测定结果准确,重现性好，但操作复杂费时,试剂消耗量大。若采用模块式消化炉代替传统的消化装置, 可同时测定几份样品，节省时间,提高了工作效率，适用于批量蛋白质的测定,具有准确、快速、简便、低耗、稳定的优点。 二、双缩脲法(Biuret ) 2.1原理 双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180 ℃左右加热,放出1 个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4 形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能够以1 个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。

饲料用大豆粕国家标准

饲料用大豆粕国家标准 一、主题内容与适用范围 本标准规定了饲料用大豆粕的质量指标及分级标准。 本标准适用于以大豆为原料以预压—浸提或浸提法取油后所得饲料用大豆粕。 二、引用标准 GB 5490-5539 粮食、油料及植物油检验 GB 6432-6439 饲料粗蛋白、粗脂肪、粗纤维等项测定方法 GB 8622 大豆制品中尿素酶的活性测定 三、感官性状 本品呈浅黄褐色或淡黄色不规则的碎片状，色泽一致，无发酵、霉变、结块、虫蛀及异味异嗅。 四、水分 水分含量不得超过13.0% 五、夹杂物 不得掺入饲料用大豆粕以外的物质，若加入抗氧化剂、防霉剂等添加剂时，应做相应的说明。 六、质量指标及分级标准 1.以粗蛋白质、粗纤维、粗灰分为质量控制指标，按含量分为三级，见下表。 表1 配合饲料、浓缩饲料和预混合料产量(万吨) 年份配合饲料浓缩饲料预混合料 1990 3122 50.82 21.01 1999 5600 1000 160 3.三项质量指标必须全部符合相应等级的规定。

4.二级饲料用大豆粕为中等质量标准，低于三级者为等外品。 七、脲酶活性允许指标 1.脲酶活性定义为在30?5?和pH值等于7的条件下，每分钟每克大豆粕分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。 2.饲料用大豆粕的脲酶活性不得超过0.4。 八、检验 1.水分、粗蛋白质、粗纤维、粗灰分的检验，按照GB6432-6439的有关规定执行。 2.脲酶活性的检验按GB 8622执行。 九、卫生标准 应符合中华人民共和国有关饲料卫生标准的规定。 十、包装、运输和储存 饲料用大豆粕的包装、运输和储存，必须符合保质、保量、运输安全和分类，分级储存的要求，严防污染。 中华人民共和国农业部1998-10-11批准，1989-09-01实施。

常见蛋白质测定方法的总结与比较

分析化学 结课作业 常见蛋白质测定方法的总结与比较 材料科学与技术学院 林化13-1班 刘旺衢 130534106

常见蛋白质测定方法的总结与比较 刘旺衢 （北京林业大学材料科学与技术学院林化13-1班 130534106，10083） 蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分。食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源。具有糖类和脂肪不可替代的作用。蛋白质与营养代谢、细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转、遗传等密切相关,是对人类最重要的物质之一。准确精密的测定蛋白质，关乎人类的生产、生活、生存。目前测定蛋白质含量的方法有多种,如凯氏定氮法、紫外吸收法、双缩脲法、考马斯亮蓝染色法、酚试剂法等几种方法,下面本文将总结比较这五种蛋白质的测定方法。 一、凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数计算蛋白质含量，即含氮量*6.25=蛋白含量。 凯氏定氮法具有灵敏度高, 样品用量少，最低可检出0.05mg氮；精密度、准确度高,平行误差一般小于0.5%；应用范围广,适用于一切形态的食品与生物样品；仪器装置简单,试剂廉价的优点。 但也存在操作比较繁琐费时,特别是蒸馏定氮过程的效率低,不利于大批样品的测定；定氮的结果既包括有机氮,也包括无机氮,有机氮中除蛋白氮外,还包括非蛋白氮,测定的结果只能是粗蛋白质的含量；在蛋白质氨基酸构成有差异的

豆粕营养成份及标准

豆粕营养成份及标准 [关键词]豆粕 标准 植物蛋白类 植物性蛋白亦是提供饲料蛋白质的主要来源，其与鱼粉在饲料的关系中互为消长，而豆类及油实类等油脂含量丰富者，在采油后所得到的油粕类，通常蛋白质含量高，普通用来补给蛋白质，是极有用处的饲料来源。惟这些油粕类的饲料价值常视其成分、营养价，适口性、不良因子等而有差异。 豆粕 系指大豆采油过的残渣 经过适度加热、干燥、粉碎者。大豆粕是鸡、猪、牛适口性良好的蛋白质源。黄豆粕之粗蛋白质含量约45％，其消化率高达85-92％。黄豆内存在着非营养成分的urease trypsin inhibiter ，且活性很高，在生的情况下会阻碍消化率，雏鸡、子猪的发育。黄豆粕经过某种程度加热后，成长阻碍因子即失去活性，且饲料价值提高，但视其制造工程宫之加热条件面品质受到影响。其指标是使用水溶性氮素指数（NSI ），ursease 活性，trypsihn inhibiter 含量，通常NSI 25％以下为一个指标。牛方面，加热不充分之urease 活性高者不能使用于尿素配合饲料。 豆粕的自然属性 1、物理性质 颜色：浅黄色至浅褐色，颜色过深表示加热过度，太浅则表示加热不足。整批豆粕色泽应基本一致。 味道：具有烤大豆香味，没有酸败、霉败、焦化等异味，也没有生豆腥味。 质地：均匀流动性好，呈不规则碎片状、粉状或粒状， 不含过量杂质。 比重：0.515?/FONT>0.65Kg/l 2、化学成份 豆粕中含蛋白质43％左右，赖氨酸2.5％～3.0％，色氨酸0.6％～0.7％，蛋氨酸0.5％～0.7％，胱氨酸0.5％～0.8％；胡萝卜素较少，仅0.2～0.4mg/Kg ，流胺素、核黄素各3～6mg/Kg ，烟酸15～30mg/Kg ，胆碱2200～2800mg/Kg 。豆粕中较缺乏蛋氨酸，粗纤维 去皮与带皮豆粕组成比较 原蛋白质Crude Protein Extract 以太纤维Ether Fiber % 粗纤维Crude % 能量 Energy (kcal/kg) 带皮豆粕 44.0（8） 0.5（10） 7.0（7） 2240（8） 去皮豆 粕 48.5（10） 1.0（7） 3.0（10） 2475（10）

发酵豆粕质量鉴定

发酵豆粕 教槽料是指猪出生5天后开始补料时至断奶后10天内所使用的饲料。在这期间乳猪的营养生理特点是：消化系统发育不完善，大部分消化酶的活性低，对植物性蛋白和淀粉的消化率低，主要依靠母乳的营养。为达到提早... 教槽料是指猪出生5天后开始补料时至断奶后10天内所使用的饲料。在这期间乳猪的营养生理特点是：消化系统发育不完善，大部分消化酶的活性低，对植物性蛋白和淀粉的消化率低，主要依靠母乳的营养。为达到提早乳猪猪诱食的目的，又能够克服乳猪断奶营养应激的效果，营养全面、适口性好、消化利用率高和降低腹泻的高品质的乳猪教槽料一直是科研人员研究的热点。 乳猪出生时胃内仅有凝乳酶，胃蛋白酶很少，由于胃底腺部缺乏游离盐酸，胃蛋白酶没有活性，不能很好地消化蛋白质，特别是植物性蛋白质。这就要求在蛋白原料选择上，既要考虑原料的营养成分，又要考虑其适口性和乳猪的营养生理特点。不能仅凭简单的实验室分析和资料的说明，应根据以往的经验和实际生产数据来进行选择。 1蛋白质原料的选择 蛋白质原料的选择应从消化率、氨基酸比例、降解产生小肽的速度、蛋白质含量和成本等多方面考虑。在乳猪教槽料配方中，常用的蛋白

质原料有血浆（球）蛋白粉、高蛋白的乳清粉、鱼粉、膨化大豆（豆粕）、发酵豆粕（大豆）和啤酒（核酸）酵母等等。植物性蛋白中含有许多抗营养因子。例如大豆抗原（主要以大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白为主）是一种致敏因子，是导致仔猪营养性腹泻的主要原因。因此大家一直尽量少用植物蛋白，多选用动物蛋白。 动物性蛋白质也有一定的劣势，价格比较昂贵，一些动物性蛋白加工或储存不当容易携带或滋生病原体，鱼粉容易氧化产生过氧化物、组胺和肌胃糜烂素等，同时还有同源性比较近等生物安全问题。这些问题常常困扰一些配方师，左右为难，难以取舍。 2发酵豆粕的特点与优势 发酵豆粕是利用现代生物技术将植物蛋白源同微生态技术完美结合在一起，是微生态制剂在饲料中原料化的一个体现。发酵豆粕采用优质多菌种协同发酵，利用微生物丰富的酶系，将植物大分子蛋白降解为寡肽，并将植物蛋白中的抗营养物质如胰蛋白酶抑制因子、脲酶、血凝素、抗原蛋白等彻底分解，植物细胞壁100%破裂，蛋白质消化率大于95%，显著改善了适口性和消化率。同时通过工艺条件的控制，将大量有益菌及其产物（乳酸菌、酵母菌、小分子蛋白、乳酸、维生素和未知促生长因子（UGFs）都保留了下来，使得产品既具有优质蛋白饲料的特性，又具有微生态制剂的功能。

蛋白质各种定量方法的优缺点的比较

1．蛋白质的常规检测方法 凯氏（Kjeldahl ）定氮法 一种最经典的蛋白质检测方法。 原理：样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化, 含氮有机物分解产生氨, 氨又与硫酸作用变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨, 氨用过量的硼酸溶液吸收, 再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。 优点：范围广泛、测定结果准确、重现性好 缺点：操作复杂费时、试剂消耗量大 双缩脲法 常用于需要快速但并不需要十分精确的蛋白质检测。 原理：双缩脲（NHCONHCONH是3分子的脲经180C左右加热，放出1分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与硫酸铜形成紫色络合物（肽键中的氮原子和铜离子配价结合），称为双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，因此可用来测定蛋白质含量。 测定范围：1~10mg（有的文献记载为1~20mg） 优点：较快速，干扰物质少，不同蛋白质产生的颜色深浅相近 缺点：①灵敏度差； ② 三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等会干扰该反应。 Folin- 酚试剂法 原理：Folin- 酚法的原理与双缩脲法大体相同，利用蛋白质中的肽键与铜结合产生双缩脲反应。同时也由于Folin- 酚试剂中的磷钼酸- 磷钨酸试剂被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色的钼蓝和钨蓝的混合物。在一定的条件下, 蓝色深度与蛋白的量成正比，由此可测定蛋白质的含量。

测定范围：20~250ug 优点：灵敏度高，对水溶性蛋白质含量的测定很有效 缺点：①费时，要精确控制操作时间； ②Folin -酚法试剂的配制比较繁琐，且酚类和柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨 酸、糖类、甘油、还原剂（二硫代苏糖醇、巯基乙醇）、EDTA和脲素均会干扰反应。 紫外吸收法 原理：蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基使其在280nm 处具有紫外吸收，其吸光度与蛋白质含量成正比）。此外，蛋白质溶液在280nm的吸光度值与肽键含量成正比，利用一定波长下蛋白质溶液的吸光度值与蛋白质浓度的正比关系可以测定蛋白质含量。 优点：简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后能回收。 缺点：①测定蛋白质含量的准确度较差，专一性差； ②干扰物质多，若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物质，会出现较 大的干扰。 定氮法、双缩脲法、Filon- 酚试剂法和紫外吸收法为常用的 4 种古老的经典方法。 1.5 考马斯亮蓝法 原理：染料考马斯亮蓝G-250 在酸性溶液中与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）及芳香族氨基酸残基相结合，使染料最大吸收峰的位置由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色，在595nm下测定的吸光度值与蛋白质浓度呈正比。 优点：灵敏度高，测定快速、简便，干扰物质少，不受酚类、游离氨基酸和缓冲剂、络合剂的影响，适合大量样品的测定。 缺点：由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同有较大的偏 ，因此用于不同蛋白质测定时 差。