基因检测你的个人健康说明书

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基因是DNA分子上的一个功能片段,是遗传信息的基本单位,是决定一切生物物种最基本的因子;基因决定人的生老病死,是健康、靓丽、长寿之因,是生命的操纵者和调控者。因此,哪里有生命,哪里就有基因,一切生命的存在与衰亡的形式都是由基因决定的,包括您的长相、身高、体重、肤色、性格等均与基因密不可分。

基因检测是通过血液、其他体液或细胞对DNA进行检测的技术,是取被检测者脱落的口腔黏膜细胞或其他组织细胞,扩增其基因信息后,通过特定设备对被检测者细胞中的DNA 分子信息作检测,预知身体患疾病的风险,分析它所含有的各种基因情况,从而使人们能了解自己的基因信息,从而通过改善自己的生活环境和生活习惯,避免或延缓疾病的发生。

基因检测有什么意义:1预测医学。在健康和亚健康时期就能够准确预测疾病的风险。2疾病预防。疾病=内因+外因。通过对内因的了解,可有效地避免外因的影响,从而可降低患病的风险。3健康管理。通过基因检测,知道自己有某方面的疾病易感基因,就可主动的改善环境和生活习惯,做好自己的健康管理。4个性化医疗服务。通过基因检测,提示我们哪些药物要慎用,不但大大地降低了不必要的医疗支

出,提高了疗效,更避免了对人体造成更大的伤害基因检测适合哪些人:01婴儿做基因检测可以找到婴儿遗传性和非遗传性疾病的相关遗传基因并积极做好预防工作;可以保存婴

儿基因,对以后基因突变所引起的癌症灯疾病进行基因治疗;婴儿的基因未受外界环境的的广泛影响,较好地保持着父母赐予的原始版本,基因具有高度的稳定性。婴儿基因保存的越早,基因就越原始,越纯正,越完整,保存的价值也就越大。婴儿基因的检测和保存,对他一生都有至关重要的作用,也有不可估量的意义。02儿童做基因检测不仅可以掌控疾病易感基因,为一生的健康提供保证,还能分析其性格、爱好、脾气秉性发展特长.可以根据孩子的未来,让孩子健康成长,定向发展。再也用不着逼着孩子今天学钢琴,明天学绘画,后天学舞蹈-------,不仅让孩子受累,家长操心,也浪费了钱财,耽误了时间,影响了孩子的科学发展。03青年期做基因检测可以根据你的性格、特点选择学科,确定学业方向;可以选择适合你的工作和岗位;可以在择偶中根据双方基因物质

选择最佳匹配自己的人选,为双方的幸福,也为自子孙后代负到责任。04中年人做基因检测就可以避免对重大疾病的担忧,更好地选择自己的工作岗位,更合理地安排自己的工作强度,更有效地防御外界污染,更轻松地干事业。05老年人做基因检测就可以有效地预防老年时较易感疾病,如老年性痴呆、老年高血压、心脏病等,可以积极做好保健,延长健

康年龄,提高生活质量,给家庭带来幸福。06夫妻共同做基因检测就可以开创了基因家谱(这可能是你们家庭从来没有

过的事情),不仅对自己健康有利,更为了子孙后代留下了最有价值的生命和健康信息,其意义无比巨大。07化学污染、物质污染接触者或病毒感染者做基因检测就可以采取有效

的预防措施,避免职业病的发生。如果居住或工作的地方有电磁发射塔,如在家具装饰材料地方工作的人,如果长期接触电脑,长期使用机器,长期看电视的人,还有如是有行业、煤炭行业、矿山行业的人等。08肥胖NA高血糖,高血脂性功能障碍者做基因检测我们就可以明辨真假,采取有效的施法措施,让你早日解除痛苦,恢复健康。09有吸烟、饮酒习惯的人做基因检测结果有两种,一是你身上没有烟酒能引爆的疾病易感基因,那就可以适当继续。第二种是如果有烟酒能引爆的疾病易感基因,那没什么说的,赶快戒掉,因为什么也不如生命和健康重要。10有疾病更应该做基因检测将会为医生诊断和治疗提供可靠的科学依据,医生将根据检测结果准确地诊断是原发病还是继发病,并根据检测结果准确的制定医疗方案,使你的病能够早期接受有针对性的治疗,尽早恢复健康。基因检测能够检测出这些遗传的易感基因型,检测准确率达到99.9999%。通过基因体检让具有癌症或多基因遗传病等高危人群可以知道自己是不是带有疾病基因,以便及早发现和及早预防,并做好饮食保健与生活习惯的调

整,来避免疾病发生的可能。

采集终端检测装置说明书

大用户用电信息采集终端 检测装置 使用说明书

郑州三晖电气股份有限公司 目录 1、概述 (3) 、说明 (3) 、系统组成 (3) 、产品特点 (3) 2、参考规程 (6) 3、技术指标 (7) 输出电压 (7) 输出电流 (7) 相位及对称度 (7) 输出频率 (7) 功率稳定度 (7) 4、结构组成 (8) 5、计算机软件 (9) 6、服务保证 (10) 注意事项 (10) 服务保证 (10) 联系方式 (10)

1 概述 说明 大用户用电信息采集终端检测装置(简称:检测装置)是郑州三晖电气股份有限公司研制的技术领先的用电信息采集终端检测装置,它是根据国家电网公司企业标准《Q/GDW129-2005 电力负荷管理系统通用技术条件》、《Q/GDW130-2005 电力负荷管理系统数据传输规约》、《Q/GDW373~380电力用户用电信息采集系统》、《DL/T698-2010电能信息采集与管理系统》等技术规范研制开发的测试装置,可广泛应用于对采集终端的性能测试、评估,是电力部门对终端验收的有利保障。它美观实用,可靠性高、测量准确度高、长期稳定性好、自动化程度高、测试功能齐全。 该产品同时集成计量校验和功能校验两大系统,主要实现集中器、采集器和三相电能表的现场抄表。采集终端检测装置由:程控测试电源、标准电能表、总控中心、功能测试单元、误差计算器、挂表架、二次故障模拟板、网络交换机、铝合金台体、控制计算机等部分组成。通过计算机控制能够自动完成全部的检定项目,并且能够提供完整的自动校表、功能测试、误差数据处理、存储、查询、证书打印、报表输出等整套解决方案。 系统组成 大用户采集终端检测装置部分包括96个三相电能表,2个集中器。每块采集器可以带抄读12块三相电能表的电量数据。大用户采集终端检测装置共包括2个台体,每个台体分为8排,每排12表位,背靠背放置; 程控电源:其主要功能是给采集终端提供电压和电流,电压和电流的相位、幅值、频率是可调,可以让终端或电能表产生各种状态。 标准电能表:它用于检测电压和电流,并显示电压、电流的全部电参量。 总控中心:它通过网线与计算机相连接,实现总体控制整个装置。

人类K-ras基因突变检测试剂盒说明书

人类K-ras基因突变检测试剂盒(PCR-熔解曲线法)说明书 【产品名称】 通用名:人类K-ras基因突变检测试剂盒(PCR-熔解曲线法) 英文名:Diagnostic kit for Mutations of Human K-ras Gene (PCR-Melting Curve Analysis) 【包装规格】 20测试/盒 【预期用途】 K-ras基因位于12号染色体短臂上,是重要的癌基因之一,编码一种21kD 的kras蛋白,参与细胞内的信号传递,主要包括PI3K/PTEN/AKT 和 RAF/MEK/ERK信号转导途径,这些转导途径是当前肿瘤靶向药物研究的热点,靶向药物通过抑制这些途径发生药理作用。K-ras基因第12和13密码子发生突变,将导致kras蛋白变异并处于持续激活状态,使药物失效。。据中国2010版《肿瘤学临床实践指南》,在一项包含101例肺腺癌亚型细支气管肺泡癌患者的回顾性研究中,所有患者均接受厄洛替尼单药一线治疗。K-ras突变者无一例缓解(0/18),而无K-ras突变者则有20例缓解(20/62,32%),差别有统计学意义(P <0.01)。因此,指南建议,非小细胞肺癌和结直肠癌患者使用靶向药物前应进行K-ras基因突变状态的检测。 本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA为检测样本,用于检测肿瘤组织K-ras基因第12,13密码子的12种体细胞突变(表1),提供突变状态的定性结果。为临床肿瘤靶向药物的个体化用药提供辅助诊断依据,本品适用于进入个体化靶向治疗疗程前的患者使用。 【检验原理】 本试剂盒基于实时PCR平台,结合了特异引物、荧光探针和熔解曲线技术,定性检测DNA样品中K-ras基因12,13密码子是否存在突变。用一对K-ras基因特异引物,该引物可

双荧光素酶测试系统及海肾类对照报告基因载体

双荧光素酶测试系统及海肾类对照报告基因载体 1.什么是双荧光素酶报告基因测试系统(DLR)? DLR测试系统灵敏,方便,在一个系统中用于测量两个单独的荧光素酶报告基因,萤火虫荧光素酶及海洋海肾荧光素酶(Renilla reniformis),DLR测试系统可用于细胞裂解物及无细胞的翻译系统。 2.有哪些海肾荧光素酶载体? 海肾荧光素酶载体pRL用于在转染的哺乳细胞中组成性地表达海肾荧光素酶。这类载体还有T7启动子,可用T7RNA聚合物在体外合成海肾荧光素酶,有4个不同的载体: A pRL-SV40载体??? pRL-SV40载体含SV40增强子及早期启动子区域,可在多种细胞中组成性地高表达海肾荧光素酶。pRL-SV40载体还含有SV40的复制起始区,可在表达SV40大T抗原的细胞中,如COS-1,COS-7细胞中,瞬时及附加体似地复制。 B pRL-CMV载体pRL-CMV载体含有CMV极早增强子及启动子,可在多种细胞中组成性地高表达海肾荧光素酶。 a pRL-TK载体 pRL-TK载体含HSV胞嘧啶激酶启动子区域,在多种细胞中组成性地弱表达海肾荧光素酶。 b pRL-null载体 pRL-null载体缺真核启动子及增强子,在海肾荧光素酶基因的上游含有多克隆位点。 3.用双报告基因有何优点? 一般地说,实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达,而另一个报告基因作为内对照,以提供实验报告基因测试的归一化。将实验报告基因的活力与内对照报告基因的活力作归一化可消除实验中不同测试间所固有的变化,这些变化减弱实验准确度,其中包括培养细胞的数目及活力的差异,细胞转染及裂解的效率。海肾荧光素酶可用作对照报告基因及实验报告基因。在双荧光素酶报告基因测试中,将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因,海肾荧光素酶作为对照报告基因。 4.相比用CAT或β-半乳糖苷酶对表达数据作归一化,双荧光素酶报告基因测试系统有何优点?

液位检测实验装置操作说明

KPXJS-LRC系统实训步骤 液位实训装置是自动化及相关专业的教学及实训设备。通过本套实训装置,学生可熟练掌握常用液位仪表及装置的使用、安装、调试校准、维护,熟悉液位仪表控制装置信号回路及信号关系,培养学生液位仪表的专业基础技能,提高学生的实际操作能力,为将来走向工作岗位打下坚实基础。 一、液位检测系统实训装置组成 1-主水箱:试验装置中液体主盛装容器;2-1#水箱:试验装置中液体付盛装容器;3-2#水箱:试验装置中液体付盛装容器;4-3#水箱:试验装置中液体付盛装容器;5-4#水箱:试验装置中液体付盛装容器;6-5#水箱:试验装置中液体付盛装容器;7-电动调节阀:电动执行机构,通过智能数显控制仪来控制它,调节分容器液位的变化;8-玻璃管液位计:可视液位计,直观的显示出各容器的液位; 9-主水泵:实现试验中液体在主与付容器之间的切换,实现试验中液体的流动;10-副水泵:实现试验中液体各付容器之间的切换,实现试验中液体的流动;11-浮筒液位计:1#水箱液位显示;12-静压液位计:2#水箱液位显示;13-雷达液位计:3#水箱液位显示;14-电容液位计:4#水箱液位显示;15-磁翻板液位计:5#水箱液位显示;16-差压变送器:5#水箱液位液位显示,通过球阀Q6、Q7、Q8可以进行差压变送器的零点迁移试验;17-电磁阀:与主副水泵配合,实现液体在各容器间的变化; 18-仪表控制柜:试验所需仪器仪表控制箱;A1-闪光报警器;B1-B5智能数显表:1#-5#水箱液位;C1-智能数显控制仪:

控制调节阀,副操器;C2-智能数显表; C3-智能数显控制仪:控制调节阀,副操器;C4-智能数显表;C5-智能数显表:5#容器液位比较;ST11-15:1#-5#容器上电磁阀控制旋钮;ST16:副水泵液位旋钮;ST21-25:1#-5#容器下电磁阀控制旋钮;T26:主水泵液位旋钮;ST31:A1报警器声音消除按钮;ST32:A1报警器声音试验按钮;ST33:调节阀仪表控制柜与DCS切换旋钮;ST34:备用旋钮; Q1 ——Q9等球阀:通过球阀的开关来实现不同的试验。 二、实训准备步骤 1.仪表柜送电,观察仪表柜电源指示灯,如果不亮,请检查电源 2.将各数显仪表送电,观察数显表和现场仪表,如有异常请检查,排除故障 3.观察主水箱液位,如果主水箱液位低于1/2,请补充液位 4.通过与水箱连通的玻璃管液位计感知容器内的水位与实际数显控制仪显示液位比较,先校验零位和满度使数显控制仪显示零位、满量程 三、液位试验(无调节阀) 1.打开阀门Q1、Q3、Q4、Q5,关闭Q2、Q6 2.操作ST11旋钮,打开1#水箱上电磁阀LV101A,操作ST26旋钮,打开主水泵,开始上水 3.观察主泵出口压力表,观察视窗,观察1#水箱液位 4.通过调节实际水位依次调整满量程的0%、25%、50%、75%、

报告基因检测

荧光素酶报告基因 原理:转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合,这些特异性的序列被称为顺式作用元件,转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验(luciferase assay)是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。 其原理简述如下: (1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,如pGL3-basic等。 (2)将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。 (3)加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应,产生荧光,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性,从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。 步骤: (1) 铺细胞于24 孔板中,{选用48孔板(如果比较难做的系统可以选用24孔板甚至12孔板,细胞量越多表达的酶相应越多),铺板密度约为30%(如果比较着急做实验,密度可以提高)。}每孔细胞数为20 万细胞左右,待细胞融汇度达到70% (适合磷酸钙转染)、85% (适合脂质体转染)时进行转染。一般选用细胞密度为50-70%时进行转染(因为转染后要让质粒表达一定的时间,一般是18-24小时,故而这个细胞密度到加药时密度会差不多到100%)。转染体系的配置:目标蛋白的质粒(pBind-),luc质粒,fermentas转染试剂,(质粒:转染试剂=1:1-3(μg:μL)这个比例根据细胞、质粒转染难易程度而定,必要时需要自己摸条件)。——此步骤与与普通的细胞转染实验的要求相同。 脂质体法 (1)在细胞密度达到80%左右,于转染前1小时用基本培养基(常用无血清培养基Opti-MEM)为细胞换液。【对转染后易死的细胞可用不含双抗但含有10%FBS的DMEM或1640培养基】(2)根据细胞培养皿的大小,按下表配制转染试剂体系。将适量欲转染的质粒DNA与适量体积的Opti-MEM混匀。同时,将适量的脂质体【采用下表中所给量的一半】也和适量的Opti-MEM混合。室温静置5分钟【时间过长会降低脂质体活性】。 (3)将(2)中两溶液转移到同一EP管中,吹打使其混匀。静置20分钟。 (4)将质粒DNA和脂质体混合液加入到细胞培养皿中,置于CO2培养箱中37℃培养(5% CO2,37 ℃)4-6小时后更换正常培养基(含双抗和10%FBS)。 脂质体法各试剂用量 DNA(ug) opti培养基(μl)

制冷与空调检测实训装置使用说明书

目录 一、概述 (2) 二、技术参数 (2) 三、装置的特点 (2) 四、装置的组成与基本装备说明 (3) 五、装置的启动及运行 (7) 六、故障设置及分析 (8) 七、装置放置环境要求 (9) 八、装置放置空间要求 (13) 九、电源要求 (13) 十、装置的保养与维护 (13)

一、概述 THPKT-1A 型制冷与空调检测实训装置是根据教育部“振兴21世纪职业教育课程改革和教材建设规划”要求,按照职业教育的教学和实训要求研发的产品。适合高职院校、技工学校、职教中心、鉴定站/所制冷类专业的制冷技术、《热泵技术教学》、《家用制冷设备原理与维修》、《制冷空调装置操作安装与维修》、《小型制冷与空调装置》、《制冷空调机器设备》、《空气调节技术与运用》、《冷库制冷工艺》、《制冷空调自动化及机电一体化》、《制冷与低温工程》等的实训教学及相关专业《制冷工中、高级》实训考核。 该智能考核系统装置培养掌握空调与制冷技术专业理论知识和专业实践技能,从事空调、制冷设备及系统的技术升级、改造设计、安装、调试、维护、维修、技术管理等方面的技能应用型人才。 该智能考核装置在实训室管理、考核管理方面更加科学化、更加贴近实际教学,可供学生学习锻炼,通过模拟故障设置,有利于开展技能鉴定、考核工作,是适合高职院校、职业学校制冷技术、热泵技术教学的实训装置,更是制冷与空调设备维修专业技能考核的理想设备。 二、技术参数 1.输入电源:单相三线 AC220V ±10% 50Hz 2.装置容量:<1kVA 3.外形尺寸:1000mm×590mm×1610mm 4.制冷剂类型:R22 5.安全保护:具有漏电流保护装置,安全符合国家标准 三、装置的特点 1.系统采用真实的制冷机组,与实际教学接轨。整个空调系统真实完整,与市场上的遥控分体热泵落地式空调的总体结构、性能完全相同。具有制冷、制热、通风、除湿、温度、风速选择、定时、扫风控制、睡眠、自动、灯光等功能 2.整套实训装置集制冷系统、电气控制系统、故障模拟系统于一体,系统真实完整,结构清晰、紧凑,与实际空调制冷系统、电气系统一致,满足对实训的要求 3.实训装置直观展示了柜式空调的系统结构、工作原理,可清楚的看到制冷循环系统结构及主要部件的实物,系统还配置有交流电压表、交流电流表、温度表、真空压力表、发光二极管使整个空调系统的实时工作状态一目了然;便于教学演示讲解及学生对课本知识的理解掌握。 4.装置设有室外机部件电气控制线路接线区域,可完成对电气连接、压缩机绕组、室外风机绕组判断等,有利于学生将理论应用于实际,并培养学生实际操作动手能力。 5.可模拟故障设置,学生根据故障现象分析故障可能产生的原因,确定故障发生的范围,并进行排故。有利于开展技能鉴定、考核工作

B-raf基因突变检测试剂盒(PCR-毛细管电泳法)标准化操作流程

B-raf基因突变检测试剂盒(荧光PCR-毛细管电泳法) 标准化操作流程 1、预期用途 该产品用于定性检测确诊的结直肠癌患者石蜡包埋病理组织切片DNA的B-rafV600E 基因突变。B-raf 基因是一种癌基因,编码一种丝/ 苏氨酸特异性激酶,是RAS/RAF/MEK/ERK/MAPK 通路重要的转导因子,参与调控细胞内多种生物学事件,如细胞生长、分化和凋亡等。B-raf 基因位于7p34,长约190kb,转录mRNA 长2.5kb,编码783 氨基酸的蛋白,相对分子质量为94000-95000 Da。 研究表明,在多种人类恶性肿瘤中,如恶性黑色素瘤、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、肝癌及胰腺癌等均存在不同比例的B-raf 突变,B-raf 突变主要发生在Exon15 上的激活区的第1799 氨基酸上(T 突变为A),导致编码的氨基酸由谷氨酸变成缬氨酸(V600E),该突变能使B-raf 激酶活性提高,V600E 突变能模拟T598 和S601 两个位点磷酸化作用,使BRAF 蛋白激活。近来研究表明,对于野生型Kras、但存在B-raf 基因V600E 突变患者,抗EGFR 单抗治疗无效。2010 年版《NCCN 结直肠癌临床实践指南》中已明确指出“如K-ras 基因无突变时,需检测B-raf 基因突变,如果后者存在V600E突变,则不应该给予抗EGFR 单抗治疗。” 2、仪器配置要求 移液器,振荡器,微型离心机,生物安全柜,高速冷冻离心机,定性PCR仪,荧光定量PCR仪(ABI7500,LightCycler? 480,MX3000P,CFX-96等),微量紫外分光光度计,基因分析仪(ABI3130,ABI3500DX)。 3、耗材要求 无菌带滤芯吸头、吸水纸,离心管(1.5ml,0.5ml,0.2ml)、PCR反应管(配套荧光定量PCR仪型号)及无粉一次性乳胶手套,基因分析板。 4、责任人 基因扩增实验室室长负责技术指导和质量监督。 5、执行人 操作人员应经过专业培训,具有合格的操作技能的检验专业技术人员。 6、检测原理 本产品选取人类基因组B-raf 基因Exon 15 上设计特异性引物和探针,对扩增后的PCR 产物片段进行测序分析。使用尿苷酶(UNG)防污染体系,经加热可以选择性地降解U-DNA,以防止先前PCR 扩增产物的污染。 7、试剂来源 北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司 8、样本要求 8.1用量:每例标本切5张(10μm)白片,连续切片,不漂洗脱蜡,直接封存于1.5ml EP管中; 8.2质量:为确保DNA提取成功率,必须选择2年以内的石蜡标本; 8.3标本收集方法:石蜡包埋病理切片样品应确定含有肿瘤病变细胞,为了保证切片组织中

荧光素酶报告基因检测

荧光素酶报告基因检测 ●原则 荧光素酶检测系统,可用裂解液来温和而快速地提取真核细胞中的荧光素酶,用其底物来检测荧光素酶活性。检测步骤如下: 1)加裂解缓冲液裂解转染的细胞。 2)将上述裂解物转移入微孔板或者试管中(根据检测的需要选择所用器材类型)。 3)加入含有所有酶反应成分(必须包括底物荧光素),使化学发光反应开始。 4)用荧光仪或者液闪计数仪检测所发射的荧光。 ●特点 ◆敏感度和检测范围:5 fg荧光素酶 ◆发射光的线性范围:10 fg—10 ng ◆确切的检测限依检测仪器而定。 ◆特异性:本文介绍的荧光素酶报告基因系统的操作步骤,通常用来检测转染了萤火虫荧光素酶 基因的真核细胞中荧光素酶表达的活性。不适用于对细菌荧光素酶进行检测。 ●器材和试剂 ◆器材 在微孔板或试管中,用自动或手动荧光仪、液闪计数仪或者摄影胶片都可以检测到荧光素酶活性,而且高度敏感。当用微孔板时可以是白色,也可为黑色。 ◆试剂 1)荧光素酶检测试剂:荧光素酶检测试剂包括荧光素、ATP、CoA、以及一些添加剂,这些 试剂可以启动酶反应。这种荧光酶检测试剂的混合物可稳定保存在在-60℃以下12个月,- 15℃~- 25℃一个月,2℃~8℃只能保存一周。避免反复冻融。应避光保存,因为荧光素在 光照下会发生氧化。 2)裂解缓冲液:下面将加以介绍。 ●基本操作步骤 下面的操作步骤适用于培养的真核细胞。提取物必须立刻检测,否则必须在-15~-25℃储存大约一个月。不要反复冻融以避免酶活性的降低。 1)将荧光素酶报告基因与β-gal对细胞进行共转染,按实验计划进行处理。 2)彻底吸去培养皿(60mm)中的细胞培养液,用冰预冷的磷酸盐缓冲液(PBS,无钙和镁离子) 小心冲洗细胞3次,彻底去除剩余的PBS。10×PBS缓冲液:NaCl 100g,KCl 2.5g,Na2HPO4 14.4g,KH2PO42.5g,用三蒸水定容至1000 ml。 3)加入最小体积的Triton/甘氨酰甘氨酸裂解缓冲液盖过细胞,例如60 mm的培养皿用360 μl裂 解液,35毫米的培养板用150 μl裂解液。用橡皮刮将细胞刮离培养皿。将裂解物转移到微量离 心管中。Triton/甘氨酰甘氨酸裂解缓冲液:1%(v/v)Triton X-100,25mmol/L甘氨酰甘氨酸(p H7.8),15mmol/L MgSO4,4mmol/L EGTA,1mmol/L DTT(临用前加入) 4)在漩涡混合器上轻轻振荡细胞裂解液,以最大速度4℃离心以去除细胞碎片。将上清转移到另 一个微量离心管中,置于冰上以备分析。 5)在开始化学发光反应之前,将100 μl的细胞提取物转移到荧光仪或者液闪计数仪所用的检测 器皿中(我们建议用96孔板)。加入360 μl荧光素酶分析缓冲液。荧光素酶分析缓冲液:25m

大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号:DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围: 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,如果不 能完全溶解,也不影响使用效果,直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍: 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点: 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定,产量高(典型的产量10ml全血可提取出150-500μg),OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9,长度可达50kb-150kb,可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2,500 x g,并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70%乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA(不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异也可能非常大)。 4.本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 (20μl-10ml),请联系我们索取其它处理量的操作手册。

Braf基因突变检测试剂盒说明书

人类B-raf基因V600E突变检测试剂盒(荧光PCR法)说明书 【产品名称】 通用名:人类B-raf基因V600E突变检测试剂盒(荧光PCR法) 英文名:Diagnostic kit for V600E Mutation of Human B-raf Gene(Fluorescence PCR Analysis) 【包装规格】 20测试/盒 【预期用途】 B-raf基因位于7号染色体长臂上,是一种癌基因,属RAF基因家族,有18个外显子,编码一种含783个氨基酸的B-raf蛋白,是EGFR通路RAS/RAF/MEK/MRK/MAPK中重要的转导因子,参与调控细胞生长、分化和凋亡等多种生理过程。 针对EGFR的肿瘤靶向药物通过抑制该途径发生药理作用。研究表明在非小细胞肺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中存在B-raf基因突变,其中第15外显子上V600E点突变最常见,约占所有突变的90%以上,该突变导致B-raf蛋白被异常激活,从而使患者接受EGFR-TKI药物和EGFR单抗类药物治疗失效。据中国2010版《肿瘤学临床实践指南》建议,对K-raf基因检测正常的非小细胞肺癌和结直肠癌患者,应进一步检查B-raf基因的突变状态,以指导靶向药物治疗方案。 本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA为检测样本,用于肿瘤组织B-raf 基因V600E点突变的定性检测,为临床肿瘤靶向药物的个体化用药提供依据。本公司尚无临床实例证实B-raf 基因突变与靶向药物的相关性,其相关性主要来自文献报道,因此本试剂盒检测结果仅用于辅助临床医生对肿瘤患者制定用药方案。 【检验原理】 本试剂盒基于实时荧光PCR平台,结合等位基因特异性扩增(ARMS)技术、野生型基因扩增抑制技术和多重PCR技术检测B-raf基因V600E突变。ARMS技术是指PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增,通过设计特异性ARMS引物,对存在V600E突变的B-raf基因靶序列进行PCR扩增放大,并利用FAM基团标记的Taqman 探针对扩增产物进行检测。因为采用了野生型基因扩增抑制剂,使ARMS体系能够耐受更高浓度的背景野生型B-raf基因,降低了试剂盒对基因组样本的DNA浓度要求,提高了检测灵敏度。 为质控扩增体系的有效性,试剂盒设置了内质控和外质控,内质控基因是人类基因组的一个保守片段,长

双荧光素酶测试系统及海肾类对照报告基因载体

双荧光素酶测试系统及海肾类对照报告基因载 体 Company Document number:WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998

双荧光素酶测试系统及海肾类对照报告基因载体 1.什么是双荧光素酶报告基因测试系统(DLR)? DLR测试系统灵敏,方便,在一个系统中用于测量两个单独的荧光素酶报告基因,萤火虫荧光素酶及海洋海肾荧光素酶(Renilla reniformis),DLR测试系统可用于细胞裂解物及无细胞的翻译系统。 2.有哪些海肾荧光素酶载体? 海肾荧光素酶载体pRL用于在转染的哺乳细胞中组成性地表达海肾荧光素酶。这类载体还有T7启动子,可用T7RNA聚合物在体外合成海肾荧光素酶,有4个不同的载体: A pRL-SV40载体pRL-SV40载体含SV40增强子及早期启动子区域,可在多种细胞中组成性地高表达海肾荧光素酶。pRL-SV40载体还含有SV40的复制起始区,可在表达SV40大T抗原的细胞中,如COS-1,COS-7细胞中,瞬时及附加体似地复制。 B pRL-CMV载体pRL-CMV载体含有CMV极早增强子及启动子,可在多种细胞中组成性地高表达海肾荧光素酶。 a pRL-TK载体 pRL-TK载体含HSV胞嘧啶激酶启动子区域,在多种细胞中组成性地弱表达海肾荧光素酶。 b pRL-null载体 pRL-null载体缺真核启动子及增强子,在海肾荧光素酶基因的上游含有多克隆位点。 3.用双报告基因有何优点? 一般地说,实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达,而另一个报告基因作为内对照,以提供实验报告基因测试的归一化。将实验报告基因的活力与内对照报告基因的活力作归一化可消除实验中不同测试间所固有的变化,这些变化减弱实验准确度,其中包括培养细胞的数目及活力的差异,细胞转染及裂解的效率。海肾荧光素酶可用作对照报告基因及实验报告基因。在双荧光素酶报告基因测试中,将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因,海肾荧光素酶作为对照报告基因。 4.相比用CAT或β-半乳糖苷酶对表达数据作归一化,双荧光素酶报告基因测试系统有何优点

组织基因组DNA提取试剂盒磁珠法

组织基因组DNA提取试剂盒(磁珠法) 使用说明书(Cat#Yu-TD02-1) 【产品介绍】 组织基因组DNA提取试剂采用国内领先的专利技术合成的纳米磁珠颗粒和多次实验优化的缓冲液体系,能从样品中分离纯化高质量DNA。在一定条件下,磁珠表面修饰的基团高效吸附目的DNA,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程安全、无毒、便利,提取的DNA质量稳定、纯度高。纯化后的DNA适用于多种后续实验。本试剂盒可以从少量动物组织中分离纯化出高质量、高浓度的DNA。 【产品特点】 1. 效率高:DNA提取得率高,操作简便。 2. 安全、无毒害:整个操作过程无需使用苯酚、氯仿等有毒物质,提取环境更加安全。 3. 高纯度:OD260/230在1.5左右,OD260/280在2.0左右。可直接用于各种分子生物学实验。 【试剂盒组成】 【规格】50T/盒 【自备试剂】无水乙醇,异丙醇 【贮藏与有效期】 裂解吸附液和Buffer AW1必须室温(15-25℃)避光保存;磁珠室温保存;其他所有试剂室温保存,有效期为1年。 【注意事项】

1、Buffer AW1使用前,加入18mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为60%。★ 2、Buffer AW2使用前,加入21mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为70%。★ 3、磁珠使用前必须充分混匀。★ 4、组织最好置于组织核酸(DNA/RNA)保存液(Cat#Yu-TP01)或液氮中保存。【操作步骤】 1、样本的处理 1.1、液氮中保存的组织将组织在液氮中磨成粉末后,使液氮充分挥发。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。以下进入步骤2。 1.2、组织保存液中保存的样本取出在组织保存液中保存的组织,加入1mL无水乙醇洗涤组织两次。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。以下进入步骤2。 2、吸取400μL研磨后的裂解吸附液转入1.5mL的EP管中,加入5μL蛋白酶K,60℃1500rpm10分钟。 3、取出EP管,加入250μL异丙醇和10μL混匀的磁珠,闭盖,充分混匀。室温1500rpm振荡10min。 4、取出EP管,瞬时离心,将EP管放于磁力架上,吸附磁珠4分钟。 5、在磁力架上,打开EP管盖,吸弃液体,保留磁珠。 6、加入600μL Buffer AW1,闭盖。从磁力架上取下EP管,充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注:可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒,使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。 7、将EP管放回磁力架,吸附磁珠3分钟至液体清澈(吸附磁珠2分钟后,颠倒磁力架3次,使EP管盖上残留的磁珠被充分回收)。打开EP管盖子,吸弃液体,保留磁珠(需吸干EP管底和管盖中的残留液体)。 注:由于各个实验室磁力架磁力不尽相同,吸附时间可以延长,直至液体清澈。 8、加入600μL Buffer AW2,闭盖。从磁力架上取下EP管,充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注:可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒,使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。

流量检测装置说明书

流量检测装置设计说明书 一、装置需求: 1. 100点流量差压信号的采集。用键盘输入流量系数,输入时可显示; 2.围0-1000l/min,采集周期0.5s,信号4-20mA,分辨力0.1%; 3.要求运用数字滤波(方法自选); 4.计算瞬时流量(l/min)、累计流量(m3/h),并显示; 5.操作人员可随时修改流量系数和切换显示容(瞬时/累计流量)。 二、设计说明书要求: 1.系统构成框图及构成说明,包括主要部件的选型及依据; 2.DSP与A/D转换芯片连接的电原理图; 3.程序框图,包括主要流程; 4.采集、数字滤波、流量计算程序清单。 三、差压式流量计基本理论 1.节流装置工作原理 差压式流量计是根据伯努力方程和流体连续性原理用差压法测量流量的,其节流装置工作原理如图1所示,在横截面H处:流体的平均流速是v 1 ,密度是ρ 1,横截面积是A 1 ;在横截面L处:流体的平均流速是v 2 ,密度是ρ 2 ,横截面积 是A 2 。 图1 差压流量计工作原理图根据流体流动连续性原理有如下关系式: v 1·A 1 ·ρ 1 =v 2 ·A 2 ·ρ 2 (1) 如果流体是液体,可认为在收缩前、后其密度不变: ρ 1=ρ 2 =ρ(2) 根据瞬时流量的定义,即单位时间流体流经管道或明渠某横截面的数量,所

以液体的体积瞬时流量: 2211A v A v q v ?=?= (3) 根据伯努利方程(能量守恒定律),在水平管道上Z1=Z2,则有如下关系式: 2 2 2 2 222 111v P v P ρρ+ =+ (4) 应用伯努利方程和流动连续性原理,在两个横截面上压力差则有如下关系式: )(2 212 221v v P P P -= -=?ρ (5) 将(3)代入(5)式,并整理,则得: 2221 2])( 1[2 v A A P -= ?ρ (6) 由于4 2 1D A ?= π, 4 2 2d A ?= π, 定义直径比D d = β, 其中d 为工作状况下节流件的等效开孔直径,D 为管道直径,则得到: 222 4 )1(2A q P v βρ -=? (7) 这样可推导出以下的理论流量公式: 1 2 4 24 11ρπ β P d q v ??-= (8) 又由于流量系数C 的定义是:C= 实际流量/理论流量,可得出节流式差压流 量计普遍适用的测量体积流量的实际流量公式: ρ π β εP d C q v ??-?= 24 12 4 (9) 其中,ε为被测介质的可膨胀性系数:对于液体=1; 对气体、蒸气等可压缩流体<1 。 根据累计流量的定义,即在某一段时间流过某横截面流体的总量,所以液体的体积累计流量为: dt q Q t v v ?= (10) 因此,我们只要检测出差压即可分别计算出瞬时流量和累计流量的大小。 2. 差压变送器工作原理 在采用差压方式进行流量测量时,其流量 v Q 与差压P ?呈非线性关系,即差 压信号与流量之间存在一个开方关系。为了线性的表达流量,需要对测量系统总

人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒说明书

人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒说明书 【产品名称】 通用名称:人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒 英文名称:Shuwen? Human EGFR Gene Mutation Detection Kit for Real-Time PCR 【包装规格】 7测试/盒 【预期用途】 EGFR是一种细胞膜表面的糖蛋白受体,具有酪氨酸激酶(Tyrosine Kinase,TK)活性,是原癌基因c-erbB-1(HER-1)的表达产物。EGFR 的主要信号转导途径有:PI3K-PDK 通路,RAS-RAF-MEK-ERK-MAPK 通路,PLC-γ 通路,JAK-STAT 通路。通过这些途径,将胞外信号转化为胞内信号,从而有效应对外界的信号刺激,调节细胞的生长、增殖、分化,抑制细胞的凋亡。EGFR异常调节通过多种机制促进细胞恶性转化,包括受体的过度表达、突变、生长因子-受体自分泌环的活化以及特定的磷酸酶失活,其中涉及肿瘤发生和进展的机制中最常见的是EGFR的基因突变和过度表达。 EGFR基因位于7号染色体短臂7pl2-14区,由28个外显子组成。其突变主要发生在EGFR酪氨酸激酶的ATP结合位点的编码区(第18-20外显子),研究表明,EGFR酪氨酸激酶抑制剂(例如吉非替尼、厄洛替尼和埃可替尼等)疗效与EGFR基因的突变有密切的相关性。目前已经报道大约有30种突变与吉非替尼的药物反应相关,主要是19外显子上的缺失突变和21外显子上的L858R的点突变。外显子19上747-750位氨基酸的大约20种缺失约占所有突变的45%,其中以两种delE746-A750(2235_2249del15和 2236_2250del15)最为常见,占到外显子19缺失总数的75%;外显子21上L858R的点突变占所有突变的45%左右;外显子18的3种点突变(G719X)约占5%;外显子20的突变占1%左右。另外研究发现外显子20上的T790M突变与酪氨酸激酶抑制剂药物的耐药性相关。 本试剂盒以肿瘤DNA为检测样本,提供EGFR基因突变的定性检测。本试剂盒仅为临床医生肿瘤靶向治疗药物的选择提供参考,具体临床应用时须结合实际情况进行判断,不能以本试剂盒检测结果作为临床诊断的唯一依据。 【检测原理】 本试剂盒结合特异性引物和TaqMan探针技术,用实时荧光PCR方法检测DNA样品中的EGFR突变基因。利用特异性引物对突变靶序列进行扩增,同时阻滞野生型的扩增,通过TaqMan探针对扩增产物进行检测,使得突变基因得到扩增而野生型基本不扩增,从而达到高检测特异性和高灵敏度。 【主要组成成分】 本试剂盒具体包含组分如表1 表1

DNAzol基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

DNAzol 基因组DNA快速提取试剂 目录号:DN26 DN2601 50ml DN2602 100ml 产品介绍: DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂,简单高效,结果可靠,可快速提取基因组DNA,适用于多种大量或少量样品。DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA,经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。整个过程只需10-30 分钟,DNA 回收率可达70-100%,得到的DNA 不需再纯化,可直接用于Southern 杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。 产品储存: 室温保存至少一年。 注意事项: DNAzol 有毒害性,应避免直接接触皮肤和眼睛。 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项) 1.裂解,匀浆 a.组织:25-50mg 组织加1ml DNAzol ,使用匀浆仪处理5-10 次。少量 (5-10mg)柔软组织,如脾或脑组织,可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打

混匀,室温放置5-10 分钟。 b.细胞:单层培养的细胞应直接裂解,倒出培养基,加入DNAzol 用取样器吹 打几次混匀。每10cm2 细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。 c.细胞沉淀或悬浮液:每1-3×107细胞(体积小于0.1ml)加1ml DNAzol,反复 吹打混匀。 以上均要使用大口径枪头吹打,以免过度剪切断基因组。 2.离心 4 -25℃,10000g 离心10 分钟。将得到的上清转入新管。 此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品,如肝、肌肉和大部分植物组织等,或要提取不含RNA 的DNA 时,可加此步骤。其他样品可省略此步。 3.沉淀 每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇,颠倒离心管5-8 次,混匀样品至出现DNA 沉淀,室温放置1-3分钟。可以看见DNA 絮状沉淀,让沉淀自然沉降到管底,尽可能吸弃上清。用枪头搅绕DNA贴附在离心管上端壁上,仔细吸弃剩下的在管底和管壁的上清。如果因为剪切太厉害导致形成小片段或者量少的DNA(少于15ug),无法缠绕到枪头上,可在4 -25℃,4000g 离心1-2分钟沉淀DNA,弃上清。 4.漂洗 用0.8-1ml 75%乙醇漂洗DNA 两次。漂洗时,将DNA 悬浮在乙醇中,颠倒离心管3-6 次,然后静置0.5-1 分钟使DNA 沉降到管底,尽可能吸弃上清。 如果需要,可在4 -25℃,1000g 离心1-2 分钟沉淀DNA。从组织中提取DNA 时,如需去除其他内含物,第一次漂洗可用70%DNAzol 和30%乙醇的溶液代替75%乙醇。

双荧光报告系统

报告基因 Promega中文通讯第2期 2002 荧光素酶 双荧光素酶报告基因测试∶ 结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术 在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不够便利,因为各自的测试化学,处理要求,检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,简便。系统还提供PLB裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品。对于正在使用萤火虫荧光素酶报告基因载体的研究人员。双荧光素酶报告基因测试系统将使他们立即体会到该系统的便利。 介绍 双报告基因用于实验系统中作相关的或成比例的检测, 通常一个报告基因作为内对照, 使另一个报告基因的检测均一化。检测基因表达时双报告基因通常用来瞬时转染培养细胞,带有实验报告基因的载体共转染带有不同的报告基因作为对照的第二个载体。通常实验报告基因偶联到调控的启动子, 研究调控基因的结构和生理基础。报告基因表达活力的相对改变与偶联调控启动子转录活力的改变相关,偶联到组成型启动子的第二个报告基因,提供转录活力的内对照, 使测试不被实验条件变化所干扰。 通过这种方法, 可减少内在的变化因素所削弱的实验准确性, 比如, 培养细胞的数目和活力的差别, 细胞转染和裂解的效率。 使用萤火虫荧光素酶,结合氯霉素乙酰转移酶(CAT), β-半乳糖苷酶(β-Gal), 或葡萄醛酸糖苷酶(GUS)的双报告基因,近几年已普遍使用。但这些双报告基因组合削弱了荧光素酶操作的优势 , 比如荧光素酶测试和定量可在几秒钟内进行, 但CAT, β-Gal和GUS测试法, 则在定量前需要长时间的保温。另外,这些报告基因受限于它们的灵敏度和线性应答范围, 必须注意不要超过这些范围, 内源性细胞活力也会干扰这类报告基因的使用。许多类型的细胞有内源β-Gal 或GUS表达, 不利于准确定量报告基因表达, 胞内去乙酰酶活力干扰CAT活力测试。尽管在高温

通用基因组DNA提取试剂盒使用说明

通用基因组DNA提取试剂盒使用说明 货号:D2100 规格:50T/100T 保存:室温(15℃-25℃)干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。开封后请将RNase A,蛋白酶K于-20℃保存。 试剂盒内容:D2100-50T D2100-100T RNase A1ml1ml×2 蛋白酶K1ml1ml×2 溶液A25ml50ml 溶液B25ml50ml 漂洗液15ml15ml×2 洗脱液15ml30ml 吸附柱50个100个 收集管50个100个 说明书1份1份 产品简介: 本试剂盒为通用型,适合于从土壤,粪便,昆虫,以及其他样本中提取基因组DNA。对细菌,真菌,昆虫等样本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多态性。 使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤: 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1、样品的处理: 1)土壤:称取0.1-0.3g(根据干湿)土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使土壤颗粒研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 2)粪便:称取0.1-0.3g(根据干湿)粪便,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 3)昆虫:称取0.1-0.3g昆虫,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使昆虫研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 4)未知样品,如为细未状,可直接称取0.1-0.3g(根据干湿)加500ul 溶液A,如为块状,可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未,再加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。 2、向悬浮液中加入20ul10mg/ml的RNase A,55℃放置10min。 3、加入20ul10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,55℃水浴消化,30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次,12000转离心10min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。 4、加入500ul溶液B,充分混匀。如出现白色沉淀,于55℃放置5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。

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