乳酸菌的分离纯化毕业设计1解读

LUOYANG NORMAL UNIVERSITY

2015届毕业论文

乳酸菌的分离纯化及抑菌实验

院（系）名称生命科学学院

专业名称生物技术

学生姓名勾倩倩

学号111344045

指导老师易力副教授

完成时间2015年5月7日

乳酸菌的分离纯化及抑菌实验

勾倩倩

生命科学学院生物技术专业学号：111344045

指导教师：易立副教授

摘要：本文对乳酸菌的分离纯化，革兰氏染色以及抑菌实验进行阐述，从市售酸菜中分离纯化得到乳酸菌，革兰氏染色进行鉴定，最后进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌实验！实验主要是分离纯化，革兰氏染色，最后用抑菌实验比较单菌株的抑菌能力。

关键词：乳酸菌：分离纯化；革兰氏染色；抑菌

乳酸菌 (LA B ，Lactic acid bacteria)是指能使碳水化合物(主要为葡萄糖)发酵产生大量乳酸的细菌的通称，这类细菌生长在矿物质和有机营养丰富的微酸性环境中[1,2]。在自然界中比较常见，用途广泛，它可以改善食物的风味，并延长食品的货架期，作为保健食品和药品，可以改善和提高人的健康水平，延年益寿，还可以作为微生物学和微生态学领域研究的模式生物[3]。酸菜是世界性大众化蔬菜腌制品,在我国历史悠久[4]，其自然发酵的主要菌群是乳酸菌[5]。人体在摄人发酵酸菜时，也同时摄入了大量的乳酸菌体及其代谢产物[6]。乳酸菌是酸菜发酵过程中的有益菌，在发酵速度以及发酵产品品质等方面都起到至关重要的作用。因此在微生物学和食品科学的研究中，对酸菜中乳酸菌进行鉴定是必要的[7]。

本实验从酸菜中分离纯化得到6株乳酸菌（1,2,3,4,5,6），进行革兰氏染色，为紫色杆状，最后进行抑菌实验，比较6株乳酸菌的抑菌能力。

1 材料与仪器

1.1 菌种

乳酸菌

1.2 样品来源

市售新鲜酸菜

1.3 培养基

（1）乳酸菌分离培养基（固体MRS培养基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸铵1g，乙酸钠2.5g，硫酸镁0.29g，硫酸锰0.125g，吐温80 0.5 mL，琼脂8.5g，蒸馏水500mL，pH7.0

（2）乳酸菌纯化培养基：MRS培养基+1%的碳酸钙溶液（碳酸钙1g，蒸馏水100mL）（3）乳酸菌富集培养培养基（液体MRS培养基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸铵1g，乙酸钠2.5g，硫酸镁0.29g，硫酸锰0.125g，吐温80 0.5 mL，蒸馏水500mL，pH7.0

（4）抑菌实验培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl 2.5g，琼脂粉7.5g，水500mL，pH7.2

1.4 仪器及用具

恒温培养箱，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，培养皿，锥形瓶，移液枪，涂布棒，接种针

2 方法与过程

2.1 酸菜中菌种的分离培养（平板涂布法）

吸取汤汁0.1ml，加入9ml无菌水中进行100倍稀释，依次做5个梯度，每个梯度分别取0.2ml涂布于灭好菌MRS培养基中，并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，然后用封口膜封住培养皿，平放于试验台上20 min，然后倒置于37℃恒温箱中培养48h。

2.2 酸菜中菌种的纯化培养（平板划线法）

48h无菌条件下，从培养基中挑选不同的菌落，放入1.5ml无菌水中稀释，用接种环挑取菌液，用平板划线法接入含有1%碳酸钙的MRS培养基，用封口膜密封培养皿，倒置放在37℃恒温培养箱中培养48小时。

2.3 革兰氏染色

在洁净的载玻片上加蒸馏水一滴，然后用接种环分别挑选取少量培养基透明圈中的单菌落与水滴混匀，涂开，而后将此玻片在酒精灯火焰上通过3—4次，使细菌固定在载玻片上。然后，加草酸铵结晶紫液，染1—2min，水洗并除尽水滴。然后在涂片上滴

加碘液，染1—2min除尽水滴。而后在涂片上，滴加复红乙醇溶液，维持1min，水洗，用吸水纸轻轻吸干，最后进行油镜镜检。

2.4 抑菌实验

首先用打孔器制作药敏片并高温灭菌。然后把培养在液体培养基里的乳酸菌倒在灭过菌的培养皿上，做好的药敏片放在里边浸泡20分钟左右，拿出来沥干（药敏片仍然是湿的，但是没有水珠）。其次，倒平板，分别涂布金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。最后，每个培养皿放4个药敏片。用封口膜密封培养皿，倒置放在37℃恒温培养箱中培养24小时。

2.5 保种

甘油和乳酸菌菌液1:1放在冻存管中，放在冰箱—20℃保存。

3 实验结果

3.1 分离培养结果

乳酸菌菌落大约1-3 mm，圆形隆起，表面光滑，呈乳白色、灰白色或暗黄色。

3.2 纯化培养结果

分离纯化放在一起，是一个统一的过程，需要看到的是单菌落照片，这几张照片没任何体现。

3.3 革兰氏染色结果

紫色棒状乳酸菌，证乳酸菌为革兰氏阳性菌3.4 抑菌实验结果

分离得到的6株乳酸菌

金黄色葡萄球菌抑菌效果

大肠杆菌抑菌效果

4 数据分析

表1 金黄色葡萄球菌抑菌圈直径长度

分组 1 2 3 4 5 6 直径长度

（cm）

17 22 19 15 19 16

14 15 18 14 18 16

15 15 15 10 15 13

18 14 13 12 11 15 平均值

（cm）16 16.5 16.25 12.75 15.75 15

关于乳酸菌的分离与发酵的实验

乳酸菌的分离与发酵实验生命科学学院2009级四班2组傅盛晟摘要：本文对乳酸菌的分离与发酵实验进行阐述，从市售酸乳中分离保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，并进行分离与鉴定，最后进行酸乳的发酵实验！实验主要是分离与纯化，鉴定与发酵，最后用分离的菌进行酸乳发酵在与市售酸乳混合菌种进行比较。关键词：酸奶，乳酸菌，分离鉴定，发酵微生物在厌氧条件下，分解己糖产生乳酸的作用，称为乳酸发酵。能够引起乳酸发酵的微生物种类很多，其中主要能利用可发酵糖生产乳酸的细菌，即乳酸细菌。常见的乳酸细菌属于链球菌属（Streptococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobaterium)和明串珠菌属(Leuconostoc)等。乳酸细菌多是耐氧菌，只在厌氧条件下才进行乳酸发酵，所以在筛选乳酸茵或需要进行乳酸发酵的情况下，应保证提供厌氧条件。酸奶是以全脂牛奶等为原料，经乳酸细菌发醇而成的一种具有较高营养价值和特殊风味的发醇制品，是具有一定保健作用的食品。酸奶发酵过程通常是由双菌或多菌的混合培养实现的。其中的杆菌先分解酪蛋白为氨基酸和小肽．由此促进了球菌的生长，而球菌产生的甲酸又刺激了杆菌产生大量乳酸和部分乙醛，此外球菌还产生了双乙酰这类风味物质，因此，达到了稳定状态的彻合发酵。酸乳发酵的基本原理是通过乳酸细菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，乳酸使牛奶中的酪

蛋白(在全乳中的质量分数为2．9％，在乳蛋白中的质量分数为85％)变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。同时，通过发酵还可以形成酸奶特有的风味和香味(与形成乙醛、丁二酮等有关)。酸奶发酵中的主要生物化学变化是：乳酸菌将牛奶中的乳糖发酵成乳酸使其PH降至酪蛋白等电点(4.6)附近(4.0~4.6)从而使牛奶形成凝胶状；其次，乳酸菌还会促使部分酷蛋内降解、形成乳酸钙和产生一些脂肪、乙醛、双乙酰和丁二酮等风味物质。这就是酸奶具有良好的保健作用和适合广大乳糖不耐症患者饮用的主要原因。按凝固状态可将酸奶分为搅拌型酸奶和凝固型酸奶，两者工艺过程基本相似，本实验主要是凝固型酸奶的制作方法。一，材料与方法 1.材料和用具 1）菌种，嗜热乳酸链球菌，保加利亚乳酸杆菌，这两类菌种可从市场销售的各种新鲜酸乳或酸乳饮料中分离。 2）培养基参照相关文献和老师的建议以及乳酸菌生长需要复杂营养物质和多种生长因子，我们选用如下培养基：分离纯化培养基：脱脂乳平板培养基鉴定培养基：脱脂乳试管其他：脱脂乳粉或脱脂牛奶，蔗糖等 3）仪器及用具恒温培养箱，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，培养皿，试管，三角瓶若干 2.培养条件培养温度：40℃ 厌氧条件：由于乳酸菌的发酵与分离纯化都需要厌氧条件，而实验室没有专门的厌氧培养箱，所以我们采用在培养皿和发酵杯上套上保鲜膜制造无氧环境。培养时间：在培养基上分离培养的时间为2天左右，酸乳发酵为12个小时左右方法和步骤 1）乳酸菌的分离纯化 101-~105-，取其中的 (1)分离。取市售新鲜酸乳或泡菜的酸液稀释 104-、105-2个稀释度的稀释液各0.1~0.2mL，分别接入脱脂乳琼脂培养基上，用无菌玻璃刮铲依次涂布，或者直接用接种环沾取原液，平板划线分离，置40℃下培养48h，如出现圆形稍扁平的淡黄色菌落及其周围培养基变为黄色者，可初步定为乳酸菌。 (2)鉴别。选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中，40℃培养8~24h。若牛乳出现凝固，无气泡，呈酸性，涂片镜检细胞呈杆状或链球状(两种形状的菌种均分别选入)，革兰氏染色阳性，则可将其接种到试管斜面上连续传代4~6次，最终选择出在3~6h能凝固的牛乳管，作菌种待用。 2）乳酸菌饮料—酸乳的发酵

乳酸菌菌种的分离筛选方法

乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。一.筛选方法： 1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养

乳酸菌菌种的分离筛选办法

精心整理乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。时，SL 培养基、MS 对乳酸菌无害。一.筛选方法： 1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH 。筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h →挑选产生溶

钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。 2.溴甲酚绿指示剂法：培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液）筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。二.菌种的分离筛选 1.培养基： ★1.1麦芽汁碳酸钙培养基：麦芽汁（10BX）1L预先灭菌碳酸钙5-10g/LPH自然（分离用） ★★1.2吐温 ★1.3 酵母膏（分离用） 1.4 1.5 MgSO 4 1.6 ★★1.7 蛋白胨葡萄糖、琼脂18.0g 酸钙, 1.8BCP 乳糖5.0g蛋白胨5.0g酵母膏3.0g0.5℅溴甲酚紫10ml自来水1000ml pH6.5-7.0（分离用） 1.9BCG牛乳营养琼脂：脱脂奶粉10g，溶于50ml水中，加入1.6℅溴甲酚绿酒精溶液0.07ml，0.075Mpa20min。另取琼脂2.0g，溶于50ml水中，加酵母膏 1.0g溶解后调pH6.5-6.8，0.1Mpa20min.趁热在无菌操作下两者混合均匀，倒平板，37℃培养24h，检查是否有杂菌。

乳酸菌的分离纯化说课讲解

乳酸菌的分离纯化

乳酸菌的分离与纯化 1.实验目的 2.实验材料 2.1试验设备天平、牛角匙、电炉、 pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、试管、棉塞、培养基、吸管、牛皮纸、线绳、标签、 500mL 锥形瓶两个、 250mL锥形瓶两个、试管20只、 500mL烧杯两个、 250mL 烧杯两个、 100mL烧杯两个、酒精灯、石棉网、接种针（环）。 2.2实验仪器 50L的高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超镜台、光学显微镜、 75%酒精棉、冰箱。 2.3实验药品新鲜酸奶、脱脂奶粉或全脂奶粉、蔗糖、 1.6%溴甲酚绿乙醇溶液、酵母膏、琼脂、结晶紫染液、卢戈氏碘液、 95%乙醇、诗坛酸复红染液。 3.试验方法及操作过程 3.1BCG牛乳培养基配方及灭菌（A）液：脱脂奶粉10克，水50ml，加入1.6%溴甲酚绿乙醇溶液1ml，80℃灭菌20min。（B）液：酵母膏1克，水50克，琼脂2克，pH6.8，121℃灭菌2.min。按照配方正确称取所需药品放于烧杯中，在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解，用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照，加琼脂溶化，

加热过程要不断搅拌，可适当补水。琼脂完全溶解后倒入250mL的锥形瓶中，用纱布包扎好（注意不要污染纱布）再用牛皮纸包扎，贴上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。在高压锅中，在1kg/cm2压力下维持30min。 3.2倒BCG培养基平板的方法将灭好菌的A液和B液趁热充分混合，点燃酒精灯对周围的空气进行灭菌，并在酒精灯的附近用左手握着平板用拇指和小拇指打开一个小缝，趁热将培养液倒如平板内，倒入的量能使培养基刚要覆盖平板底部，倒好后把平板平放到实验台，轻轻晃动是培养基形成一个平面，等培养基冷却凝固后倒放并贴上标签。（注意：整个实验要在酒精灯附近做，以保证培养基不染菌） 3.3脱脂乳试管的配制与灭菌直接选用脱脂乳液或按脱脂奶粉10克与蔗糖5克，水95克（蔗糖与水的比例在1：10的范围内）的比例配制，装量以试管的1/3为宜，115℃灭菌15min。 3.4乳酸菌的分离纯化取市场销售的新鲜的酸奶，分别用接种针接入BCG牛培养基琼脂平板上，40℃培养48h，如出现圆形稍扁平的黄色菌落及其周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。选取乳酸菌典型菌落转致脱脂乳试管中，40℃培养8~24h若牛乳出现凝固，无气泡，显酸性，涂片镜检细胞杆状或链球状，革兰氏染色显阳性，则可将其连续传代3次，最终选择出在3~6h能凝固的牛乳管，作菌种待用。 3.5乳酸发酵及检查

乳酸菌得分离、纯化与鉴定

乳酸菌得分离、纯化与鉴定第一部分:乳酸菌得分离、纯化一、实验器材: 1、实验药品新鲜乳酸饮料(市售)、脱脂奶粉、蔗糖、1、6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄)、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙; 0、4gNaOH固体、4、2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g 香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g; 2、仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿(φ9或φ12)、试管、300ml三角瓶(带玻珠)、移液管、天平、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯。二、实验步骤: 1、培养基配制(BCG牛乳培养基): (A)溶液:取脱脂乳粉100g,水500ml,加入1、6%溴甲酚氯乙醇溶液1ml,混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅80℃灭菌20 min;(1、6%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液用1、6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中,再加水至100ml制成) (B)溶液:酵母膏10g,水500ml,CaCO3 10g,琼脂20g,加热溶解,用精密pH试纸调节pH到6、8,分装入三角瓶后在103kPa 121℃高压蒸汽灭菌20Min。以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均匀混合。 2、药品配制 2、1 结晶紫:结晶紫乙醇饱与液(结晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中)20ml,1%草酸氨水溶液80ml。将两液混匀,放置24小时后过滤即可。 2、2 卢哥氏碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加入蒸馏水300ml即成。 2、3 蕃红溶液:番红2、5g,95%乙醇100ml,溶解后存于密闭得棕色瓶中。用时取20ml与80ml蒸馏水混匀即可。 2、4 0、1%得吕氏美蓝染液:A液:美蓝0、3g,95%乙醇300ml;B液:0、01% KOH 100ml。混合A与B液即成,按1:100稀释即可。 2、4 生理盐水:称取9g氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到1000毫升。 3、菌悬液得配制

发酵实验报告三、乳酸菌的分离和酸奶的制作

发酵工程学实验报告实验三、乳酸菌的分离和酸奶的制作学院生命科学学院专业应用生物教育班级12应生A班姓名李顺昌学号124120218 实验课程乳酸菌的分离和酸奶的制作指导教师许波开课学期2014—2015学年下学期

实验三、乳酸菌的分离和酸奶的制作小组合作：是小组成员：李顺昌、李媛媛、方淑萍、周玉坤一、实验目的 1.掌握分离纯化微生物的基本方法 2.掌握酸奶制作的基本原理 3.学会酸奶的制作方法二、实验设备与材料 1、仪器设备：三角瓶、平皿、试管、移液管、玻璃涂布棒、灭菌锅、超净工作台、培养箱、恒温摇床、冰箱等。 2、材料：市售酸奶、奶粉、白糖、棉花、酸奶瓶（自备，1个/人）等。 3、培养基：乳酸菌分离用乳酸菌分离用培养基：牛肉膏：0.5％；酵母膏：0.5％；蛋白胨：1％；葡萄糖：1％；乳糖：0.5％；NaCl：0.5％；琼脂：2.5％；pH6.8。配制250mL/组，装于2个三角瓶三、实验原理 1、酸奶制作的基本原理（1）酸奶：以牛奶为主要原料，接入一定量乳酸菌，经发酵后制成的一种乳制品饮料。（2）生理生化原理牛奶（乳糖）→接种乳酸菌→β-D-半乳糖苷酶→乳糖（半乳糖和葡萄糖）→乳酸发酵（葡萄糖）→乳酸→破坏钙-酪蛋白-磷酸复合物的稳定性→蛋白质凝结→酸奶 2、提供适宜的生长条件、采用一定的微生物分离纯化方法，就能够从酸奶中分离出乳酸菌。 3、酸奶中含有乳酸菌的菌体及代谢产物，因而对人体的肠胃消化道疾病有良好的治疗效果。四、实验方法步骤

（一）乳酸菌的分离纯化——稀释涂布平板法 1、倒平板（约6块/100ml） 2、制备酸奶稀释液（1）将0.5mL酸奶吸入4.5mL无菌水（自备）中，摇动5min；（2）用无菌吸管吸出0.5mL酸奶悬液，加入盛有4.5mL无菌水的试管中，充分混匀，制备得到10-2稀释液；（3）再从中吸出0.5mL加入盛有4.5mL无菌水的大试管中，混匀后得到10-3稀释液；（4）以此类推，分别制备得到10-4、10-5、10-6酸奶稀释液。 3、涂布用无菌吸管分别吸取10-3、10-4和10-5稀释液各0.1mL，对号放入已经写好记号的平板中央，用无菌玻璃涂棒涂匀（每个稀释度涂2块平板）。 4、培养：37℃倒置培养2-3d 5、观察菌落特征（周二中午）扁平型菌落：大小为2-3mm，边缘不整齐，很薄，近似透明状，染色镜检为细杆状；半球状隆起菌落：大小为1-2mm隆起成半球状，高约0.5mm，边缘整齐且四周可见酪蛋白水解透明圈，染色镜检为链球状；礼帽形突起菌落：大小为1-2mm，边缘基本整齐，菌落中央呈隆起状，四周较薄，有酪蛋白水解透明圈，染色镜检亦为链球状。 6、分离纯化：（周二）挑取符合上述特征的单菌落，划线于平板，37℃倒置培养约2d（下周四中午）；如发现杂菌需重复上述步骤（纯化）直到获得纯培养。（二）酸奶的制作 1、菌种的制备（1）将分离纯化所得到的乳酸菌分别接种于LB培养基中（30ml/瓶）（下周4早上）；（2）37℃、200r/min摇瓶培养约48h （下周5晚）。 2、牛奶的配制

酸奶制作及乳酸菌的分离计数

酸奶制作及乳酸菌的分离计数一、实验目的 1、学习自制酸奶的方法。 2、熟悉从酸奶中分离和纯化乳酸菌的一般方法。 3、掌握用浇注平板法分离微生物纯种。 4、了解简便、快速厌氧菌菌落计数法的基本原理。 5、学习用简便、快速厌氧菌菌落计数法对乳酸菌进行活菌计数。二、实验原理酸奶又称酸乳，是以牛奶为主要原料，经乳酸菌发酵而制成的一种营养丰富、风味独特、国际流行的保健饮料。酸奶发酵中的主要生物化学变化是：乳酸菌将牛奶中的乳糖发酵成乳酸使其pH降至酪蛋白等电点附件从而使牛奶形成凝固状；其次，乳酸菌还会触使部分酪蛋白降解、形成乳酸钙和产生一些脂肪、乙醛、双乙酰和定二酮等风味物质。酸奶发酵过程通常是由双菌或多菌的混合培养实现的。其中的杆菌先分解酪蛋白为氨基酸和小肽，由此促进球菌的生长，而球菌产生的甲酸又刺激了杆菌产生大量的乳酸和部分乙醛，由此链球菌还产生了双乙酰这类风味的物质，因此，达到了稳定状态的混合发酵。根据高层半固体培养基具有良好厌氧性能的原理，我们设计了一种适用于乳酸菌等不产气的厌氧菌进行简便快速菌落计数的方法。此法把稀释（在半固体培养基凝固前）和（在半固体培养基凝固后）集中在同一支试管中内，以不易透氧、装有高层半固体培养基的试管代替常规的培养皿平板进行菌落计数，从而使活菌计数操作简化成“试样分散----逐级稀释+常规培养---菌落计数”3步，而传统的方法则需“试样分散----逐级稀释---涂布或浇注平板---厌氧培养---菌落计数”5步。因此，本法不仅有简化操作步骤的优点，还有省略专用厌氧培养装置、缩短培养时间以及节约试剂和材料等优点。三、实验器材 1、菌种：德氏乳杆菌保加利亚亚种、唾液链球菌嗜热亚菌（可从品牌酸奶商品中自行分离） 2、培养基：（1）LAB半固体培养基100ml （2）MRS琼脂培养基200ml (3)MRS液体培养基10ml 3、材料：优质全脂牛奶或奶粉（内含脂肪28%，蛋白石27%，乳糖37%，矿物质6%，水分2%），蔗糖：市售优质酸奶（1瓶） 4、器皿：锥形瓶（3个）、空试管（14支）、无菌移液管（1ml*15根，10ml*2根）、培养皿（6套）、涂布棒、量筒、酒精灯、恒温水浴锅，恒温箱，冰箱

乳酸菌分离制作酸奶的实验报告

实习报告实习名称微生物课程实习系另生物与化学工程系年级专业2018级生物工程学生姓名乐一鸣1040903054指导老师蒋盛岩王瑶琼

邵阳学院 2018 年09月19 日一．实习时间、实习地点和实习单位：2018年9月3日—9月16日邵阳学院李子园校区3栋104室二．实习过程概述：<一）实习动员会2018年9月3日上午<二）实习工作准备1. 时间：2 天2. 内容<1）分组制订详细地实习方案. <2）分组选择和使用所需地仪器. <3）分组配制各种试剂、培养基并进行正确地消毒与灭菌. <三）乳酸菌地分离纯化1. 时间：7 天2．内容<1）无菌操作倒平板、十倍稀释法、划线分离或涂布平板法, 恒温培养<2）菌落观察与镜检<3）筛选生产用菌株⑷菌种传代培养<菌种活化与扩大化）<四）乳酸菌饮料地制作 1.时间：3 天 2. 内容<1）制备发酵液<2）接种发酵菌剂并发酵生产<3）观察发酵情况＜4）品尝发酵产品, 进行质量评价＜5）记录结果＜五）书写实习报告时间：1天三．主要实习岗位和实习内容： 1、实验药品新鲜乳酸饮料＜市售）、脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液（溴甲酚绿、无水乙醇＞、酵母膏、琼脂、革兰氏染液＜结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl 、碳酸钙；b5E2RGbCAP 0.4gNaOH 固体、 4.2ml 浓 HCL（分析纯＞、 20gCaCO3 固体、酵母膏 20g 、琼脂 30g p1EanqFDPw 香柏油、脱脂奶粉 100g 、蔗糖 10g； 2、仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿＜? 9或? 12）、试管、300ml三角瓶＜带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针＜环）、擦镜纸DXDiTa9E3d

乳酸菌的分离及酸奶的制作

乳酸菌的分离及酸奶的制作 -CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN

乳酸菌的分离及酸奶的制作生物科学091 研究背景及意义乳酸菌是指一群通过发酵糖类，产生大量乳酸的细菌总称。乳酸从形态上可分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。目前，对乳酸菌的应用研究，着重于食品（如发酵乳制品、发酵肉制品和泡菜）和医药工业等人类生活密切相关的领域。近几年由于广谱和强力的抗菌素的广泛应用，使人体肠道内以乳酸菌为主的益生菌遭受到严重破坏，抵抗力逐步下降，导致疾病越治越多，健康受到极大的威胁。所以，有意增加人体肠道内乳酸菌的数量就显得非常重要。随着人们生活水平的提高和消费观念的转变，在我国生产销售的酸乳及酸乳饮品数量直线上升, 品种花样繁多, 很受消费者的青睐。酸奶是以新鲜牛乳经有效杀菌, 用不同乳酸菌发酵剂制成的乳制品, 味酸甜细腻, 营养丰富, 深受人们喜爱, 专家称它是“21 世纪的绿色食品”, 是一种“功能独特的营养品”。它对人体有较多的好处, 可以维持肠道正常菌群平衡, 调节肠道有益菌群到正常水平等。因此，从发酵乳制品中分离性能优良的乳酸菌，制作真正的健康、绿色的食品，对促进我国发酵乳制品工业的发展具有重要的意义。目前市售的各种酸奶制品中, 作为发酵剂的乳酸菌, 通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌这两株菌。用嗜热链球菌和保加利亚乳酸杆菌混合培养发酵的乳酸饮品能补充人体肠道内的有益菌，维持肠道的微生态平衡，且含有易于吸收的营养素，具有抑制腐败菌、提高消化率、防癌及预防一些传染病等功效，并能为食品提供芳香风味，使食品拥有良好的质地。保加利亚乳杆菌（）:长杆形，直径1-3mm左右,能产生大量的乳酸。酸碱度方面,为耐酸或嗜酸性,因低 pH能防止一些微生物的生长;温度方面,为嗜温至少许嗜热,最适生长温度在37-45℃之间,对低温非常敏感。嗜热链球菌（）：卵圆形，直径－微米，呈对或链状排列，无运动性。为健康人肠道正常菌群，可在人体肠道中生长、繁殖。可直接补充人体正常生理细菌，调整肠道菌群平衡，抑制并清除肠道中对人具有潜在危害的细菌。本研究对市售主要品牌酸奶中乳酸菌进行了分离鉴定，并进一步探讨制备酸奶条件（温度、时间等），以达到最佳的天然酸奶质量效果，为广大消费者选购高品质酸奶提供理论支撑。

乳酸菌的分离培养

乳酸菌的分离培养保加利亚乳杆菌组长：组员：实验目的： 1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术及微生物形态观察； 2.学习微生物制片、染色的基本技术，掌握乳酸菌的简单染色法及无菌操作接种技术； 3.通过对培养基的配制，了解配制培养基的一般步骤和方法，掌握微生物实验常用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。 4.了解各种灭菌的基本原理和应用范围，以及实验室中常用的灭菌方法。 5.了解酸奶中乳酸菌分离原理, 观察乳酸菌的基本形态,掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目的测定的方法。 6.了解稀释平板计数的原理，熟练掌握混合平板培养法。明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。 7．初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法，掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 8.了解并掌握微生物菌种保藏的常用方法及其优缺点，并了解不同微生物对不同的生物大分子的分解利用情况，认识微生物代谢类型的多样性。实验原理：乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+和G-菌。通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳杆菌和乳球菌的混合体。酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售的酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。细菌及其它一些微生物的大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计；培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组份的营养物质调制而成的营养基质；灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包括芽孢；自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。实验器材：样品：含乳酸菌的酸奶 ①培养基：改良MRS固体培养基蛋白胨5g 牛肉膏5g 酵母提取物 2.5g 柠檬酸二铵1g 水500mL 乙酸钠2.5g K2HPO4 1g MnSO4·4H2O 0.125 吐温80 0.5mL 琼脂12.5g MgSO4·7H2O 0.29g CaCO3 5g 葡萄糖10g 。仪器用品：500ml烧杯一个100ml量筒一个无菌培养皿12个 250ml容量三角瓶2个5ml无菌移液管1ml无菌移液管6只 15ml试管7只高压灭菌锅天平

乳酸菌的分离、纯化与鉴定

乳酸菌的分离、纯化与鉴定第一部分：乳酸菌的分离、纯化一、实验器材： 1. 实验药品新鲜乳酸饮料（市售）、脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液（溴甲酚绿、无水乙醇）、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、 95%L 醇、沙黄）、15/乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCI、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml浓HCL（分析纯）、20gCaCO3固体、酵母膏20g、琼脂30g 香柏油、脱脂奶粉100g、蔗糖10g ； 2. 仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培养箱、 pH试纸、酸乳瓶、培养皿（?9或? 12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、500ml 锥形瓶、250ml 锥形瓶、250ml烧杯。二、实验步骤： 1. 培养基配制（BCG牛乳培养基）：（A）溶液：取脱脂乳粉100g,水500ml,加入1.6%溴甲酚氯乙醇溶液1ml, 混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅 80C灭菌20 min ; （1.6%溴甲苯酚绿（BCG 乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中，再加水至100ml制成）（B）溶液：酵母膏10g，水500ml, CaCO3 10g琼脂20g,加热溶解，用精密pH 试纸调节pH到6.8，分装入三角瓶后在103kPa 121 T高压蒸汽灭菌 20Mi n。以无菌操作趁热将（A）（B）溶液均匀混合。 2. 药品配制 2.1结晶紫：结晶紫乙醇饱和液（结晶紫 2g溶于20ml 95%^醇中）20ml, 1%莊酸氨水溶液80ml。将两液混匀，放置24小时后过滤即可。 2.2卢哥氏碘液：碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加入蒸馏水300ml即成。 2.3蕃红溶液：番红2.5g , 95%^醇100ml，溶解后存于密闭的棕色瓶中。用时取20ml 与80ml蒸馏水混匀即可。 2.4 0.1%的吕氏美蓝染液：A液：美蓝0.3g ,95%^醇300ml; B液：0.01% K0H100ml。混合A和B液即成，按1： 100稀释即可。 2.4生理盐水：称取9g氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到 1000毫升。

乳酸菌的分离纯化毕业设计1解读

LUOYANG NORMAL UNIVERSITY 2015届毕业论文乳酸菌的分离纯化及抑菌实验院（系）名称生命科学学院专业名称生物技术学生姓名勾倩倩学号111344045 指导老师易力副教授完成时间2015年5月7日

乳酸菌的分离纯化及抑菌实验勾倩倩生命科学学院生物技术专业学号：111344045 指导教师：易立副教授摘要：本文对乳酸菌的分离纯化，革兰氏染色以及抑菌实验进行阐述，从市售酸菜中分离纯化得到乳酸菌，革兰氏染色进行鉴定，最后进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌实验！实验主要是分离纯化，革兰氏染色，最后用抑菌实验比较单菌株的抑菌能力。关键词：乳酸菌：分离纯化；革兰氏染色；抑菌乳酸菌 (LA B ，Lactic acid bacteria)是指能使碳水化合物(主要为葡萄糖)发酵产生大量乳酸的细菌的通称，这类细菌生长在矿物质和有机营养丰富的微酸性环境中[1,2]。在自然界中比较常见，用途广泛，它可以改善食物的风味，并延长食品的货架期，作为保健食品和药品，可以改善和提高人的健康水平，延年益寿，还可以作为微生物学和微生态学领域研究的模式生物[3]。酸菜是世界性大众化蔬菜腌制品,在我国历史悠久[4]，其自然发酵的主要菌群是乳酸菌[5]。人体在摄人发酵酸菜时，也同时摄入了大量的乳酸菌体及其代谢产物[6]。乳酸菌是酸菜发酵过程中的有益菌，在发酵速度以及发酵产品品质等方面都起到至关重要的作用。因此在微生物学和食品科学的研究中，对酸菜中乳酸菌进行鉴定是必要的[7]。本实验从酸菜中分离纯化得到6株乳酸菌（1,2,3,4,5,6），进行革兰氏染色，为紫色杆状，最后进行抑菌实验，比较6株乳酸菌的抑菌能力。 1 材料与仪器 1.1 菌种乳酸菌 1.2 样品来源市售新鲜酸菜

乳酸菌的分离培养

乳酸菌得分离培养保加利亚乳杆菌组长：组员：实验目得：1、学习并掌握普通光学显微镜油镜得使用技术及微生物形态观察； 2、学习微生物制片、染色得基本技术，掌握乳酸菌得简单染色法及无菌操作接种技术； 3、通过对培养基得配制，了解配制培养基得一般步骤与方法，掌握微生物实验常用得器皿得清洗与包扎、培养基得制备、消毒灭菌。 4、了解各种灭菌得基本原理与应用范围，以及实验室中常用得灭菌方法。 5、了解酸奶中乳酸菌分离原理, 观察乳酸菌得基本形态,掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目得测定得方法。 6、了解稀释平板计数得原理，熟练掌握混合平板培养法。明确显微镜计数得原理并学习使用血球计数板进行微生物计数得方法。 7．初步学会乳酸菌培养得基本技术，了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应得原理与方法，掌握进行微生物大分子水解试验得原理与方法。 8、了解并掌握微生物菌种保藏得常用方法及其优缺点，并了解不同微生物对不同得生物大分子得分解利用情况，认识微生物代谢类型得多样性。实验原理：乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸得一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌得总称，本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法就是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+与G-菌。通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳杆菌与乳球菌得混合体。酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售得酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。细菌及其它一些微生物得大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计；培养基就是按照微生物生长发育得需要，用不同组份得营养物质调制而成得营养基质；灭菌就是用物理或化学得方法来杀死或除去物品上或环境中得所有微生物，包括芽孢；自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往就是不同种类微生物得混合体，为了研究某种微生物得特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂得微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养得方法称为微生物得分离与纯化。用生化试验得方法检测细菌对各种基质得代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌得种属，称之为细菌得生化反应。实验器材：样品：含乳酸菌得酸奶 ①培养基：改良MRS固体培养基蛋白胨5g 牛肉膏5g 酵母提取物2、5g 柠檬酸二铵1g 水500mL 乙酸钠2、5g K2HPO4 1g MnSO4·4H2O 0、125 吐温80 0、5mL 琼脂12、5g MgSO4·7H2O 0、29g CaCO3 5g 葡萄糖10g 。仪器用品：500ml烧杯一个100ml量筒一个无菌培养皿12个 250ml容量三角瓶2个5ml无菌移液管1ml无菌移液管6只 15ml试管7只高压灭菌锅天平

乳酸菌的分离纯化与鉴定

乳酸菌的分离、纯化与鉴定第一部分:乳酸菌的分离、纯化一、实验器材: 1、实验药品新鲜乳酸饮料(市售)、脱脂奶粉、蔗糖、1、6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄)、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙; 0、4gNaOH固体、4、2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g 香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g; 2、仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿(φ9或φ12)、试管、300ml三角瓶(带玻珠)、移液管、天平、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯。二、实验步骤: 1、培养基配制(BCG牛乳培养基): (A)溶液:取脱脂乳粉100g,水500ml,加入1、6%溴甲酚氯乙醇溶液1ml,混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅80℃灭菌20 min;(1、6%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液用1、6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中,再加水至100ml制成) (B)溶液:酵母膏10g,水500ml,CaCO3 10g,琼脂20g,加热溶解,用精密pH试纸调节pH到6、8,分装入三角瓶后在103kPa 121℃高压蒸汽灭菌20Min。以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均匀混合。 2、药品配制 2、1 结晶紫:结晶紫乙醇饱与液(结晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中)20ml,1%草酸氨水溶液80ml。将两液混匀,放置24小时后过滤即可。 2、2 卢哥氏碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加入蒸馏水300ml即成。 2、3 蕃红溶液:番红2、5g,95%乙醇100ml,溶解后存于密闭的棕色瓶中。用时取20ml与80ml蒸馏水混匀即可。 2、4 0、1%的吕氏美蓝染液:A液:美蓝0、3g,95%乙醇300ml;B液:0、01% KOH 100ml。混合A与B液即成,按1:100稀释即可。

酸奶中乳酸菌的分离与纯化

酸奶中乳酸菌的分离与纯化一、实验目的 1.掌握分离乳酸菌的基本原理和操作技术； 2.学习并掌握稀释法和微生物纯培养操作。二、实验设备及材料培养基材料：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、番茄汁、葡萄糖、吐温、溴甲酚绿、琼脂。实验材料：无菌水、培养皿、电热套、高压蒸汽灭菌锅、电子分析天平、涂布棒、酒精灯、无菌试管、移液枪、无菌吸管。三、实验原理乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。大多数不运动，少数以周毛运动。菌体常排列成链。根据细胞形态分为球状或杆状，可分为两大类，即乳酸链球菌和乳酸杆菌。在乳酸菌培养基平板上，乳酸菌菌落大约1～3mm，圆形隆起，表面光滑，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸周围还能产生CaCO3溶解圈。乳酸菌革兰氏染色后呈蓝色，为革兰氏阳性菌。

四、实验步骤 1.乳酸菌培养基的制作配方牛肉膏 2.0g 蛋白胨 2.0g 酵母膏 2.0g 番茄汁40g 葡萄糖 2.0g 吐温0.10mL 碳酸钙 3.4g 溴甲酚绿0.02g 琼脂2～4g 水200mL ①称量：按照培养基配方依次称取药品放入烧杯中。 ②熔化：在烧杯中加入略少于200mL水，加热至沸腾。依次加入药品，用玻璃棒不断搅拌，待其完全溶解后，加入琼脂，搅拌至完全熔化，最后补足所损失的水分。 ③分装：将配置的乳酸菌培养基装入三角瓶中。 ④加棉塞、包扎 ⑤灭菌：将乳酸菌培养基在压力0.11MPa，温度121℃条件下灭菌20min。 ⑥无菌检查

2.倒平板将乳酸菌培养基熔化，待冷却至55～60℃时，倒平板，倒好后，在室温下培养2～3d，或37℃培养24h，检查无菌落及皿盖无冷凝水后再使用。 3.制备稀释液量取酸奶10mL，放入盛有90 mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，震摇约20min，使酸奶与无菌水充分混合，将酸奶分散。用一只1 mL无菌吸管从中吸取1 mL酸奶悬浊液注入盛有9 mL无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀。然后再用一支1 mL无菌吸管从此试管中吸取1 mL注入另一盛有9 mL无菌水的试管中，以此类推，制成10?3、10?4、10?5各种稀释度的酸奶稀释液。 4.涂布将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10?3、10?4、10?5三种稀释度，然后用三支1mL无菌吸管分别由10?3、10?4、10?5三管酸奶稀释液中吸取0.2mL对号放入写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂布棒轻轻地涂布均匀。 5.培养将接种后的平板后倒置于37℃培养3～5 d。 6.纯化待菌落长出后，选中目标菌落。用接种钩或无菌牙签挑取菌落边缘，并移植于新的乳酸菌培养基。注意每一个平皿只能用于纯化1个菌。将重新接种后的平皿置于37℃环境下培养3～5d。然后，用显微

乳酸菌菌种的分离筛选方法

乳酸菌的分离和初步鉴定

乳酸菌的分离和初步鉴定刘海音张超 (长春师范学院生物系，长春，130032) 摘要：本文采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选乳酸菌，经过连续6次以上的传代，以达到分离提纯，镜检时观察到链球状和杆状两种形状。为了鉴定分离出的菌种，做了一系列的生理生化反应实验，如吲哚试验的反应结果为阴性，糖发酵试验的反应结果为阳性。此外还进一步做了小型发酵实验，检测出了乳酸的存在⑴。以上实验结果符合乳酸菌的特征，从而证实该分离出的菌种为乳酸菌，杆状的叫做短乳杆菌，链球状的叫做乳链球菌。关键词：乳酸菌分离鉴定乳酸菌为一群可发酵碳水化合物以获取能量，并生成大量乳酸的一类细菌的总称。利用发酵技术保藏食品，最典型的是通过乳酸菌的发酵。这在发酵乳工业中已经得到广泛的应用。利用天然的或经筛选的乳酸菌发酵，已经生产出多种不同类型的发酵乳。因而分离和鉴定乳酸菌对人类的生产和生活都具有非常重要的意义。本报告采用BCG牛乳培养基琼脂平板筛选和分离乳酸菌，利用镜检观察到了链球状和杆状两种形状。通过吲哚试验和糖发酵试验以及小型发酵实验证明该菌种为乳酸菌，杆状的叫做短乳杆菌，链球状的叫做乳链球菌 1. 材料和方法 1.1材料 1.1.1 选用沈阳乳业有限责任公司乳品一厂生产的辉山纯酸奶 1.1.2 培养基 BCG牛乳培养基 A(溶液)：脱脂奶粉100g, 水500 ml, 加入1.6%溴甲酚绿（B.C.G）乙醇溶液1 ml, 80 摄氏度灭菌20 min. B(溶液)：酵母膏10 g, 水500 ml, 琼脂20 g, PH : 6.8 121摄氏度灭菌20 min 以无菌操作趁热将A ,B 溶液混合均匀后倒平板。乳酸菌培养基牛肉膏 5 g , 酵母膏5 g , 蛋白胨10 g ,葡萄糖10 g , 乳糖5 g , 氯化钠 5 g , 水1000 ml , PH : 6.8 121摄氏度湿热灭菌20 min 蛋白胨水培养基蛋白胨10 g , 氯化钠5 g , 水1000 ml , PH : 7.2 ~ 7.4 121 摄氏度湿热灭菌20 min

乳酸菌的分离及酸奶的制作

乳酸菌的分离及酸奶的制作生物科学091 曹梦洁许莘婕潘莎莎郑笑笑一、研究背景及意义乳酸菌是指一群通过发酵糖类，产生大量乳酸的细菌总称。乳酸从形态上可分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。目前，对乳酸菌的应用研究，着重于食品（如发酵乳制品、发酵肉制品和泡菜）和医药工业等人类生活密切相关的领域。近几年由于广谱和强力的抗菌素的广泛应用，使人体肠道内以乳酸菌为主的益生菌遭受到严重破坏，抵抗力逐步下降，导致疾病越治越多，健康受到极大的威胁。所以，有意增加人体肠道内乳酸菌的数量就显得非常重要。随着人们生活水平的提高和消费观念的转变，在我国生产销售的酸乳及酸乳饮品数量直线上升, 品种花样繁多, 很受消费者的青睐。酸奶是以新鲜牛乳经有效杀菌, 用不同乳酸菌发酵剂制成的乳制品, 味酸甜细腻, 营养丰富, 深受人们喜爱, 专家称它是“21 世纪的绿色食品”, 是一种“功能独特的营养品”。它对人体有较多的好处, 可以维持肠道正常菌群平衡, 调节肠道有益菌群到正常水平等。因此，从发酵乳制品中分离性能优良的乳酸菌，制作真正的健康、绿色的食品，对促进我国发酵乳制品工业的发展具有重要的意义。目前市售的各种酸奶制品中, 作为发酵剂的乳酸菌, 通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌这两株菌。用嗜热链球菌和保加利亚乳酸杆菌混合培养发酵的乳酸饮品能补充人体肠道内的有益菌，维持肠道的微生态平衡，且含有易于吸收的营养素，具有抑制腐败菌、提高消化率、防癌及预防一些传染病等功效，并能为食品提供芳香风味，使食品拥有良好的质地。保加利亚乳杆菌（L.Bulgarius）:长杆形，直径1-3mm左右,能产生大量的乳酸。酸碱度方面,为耐酸或嗜酸性,因低 pH能防止一些微生物的生长;温度方面,为嗜温至少许嗜热,最适生长温度在37-45℃之间,对低温非常敏感。嗜热链球菌（S.thermophilus）：卵圆形，直径0.7－0.9微米，呈对或链状排列，无运动性。为健康人肠道正常菌群，可在人体肠道中生长、繁殖。可直接补充人体正常生理细菌，调整肠道菌群平衡，抑制并清除肠道中对人具有潜在危害的细菌。本研究对市售主要品牌酸奶中乳酸菌进行了分离鉴定，并进一步探讨制备酸奶条件（温度、时间等），以达到最佳的天然酸奶质量效果，为广大消费者选购高品质酸奶提供理论支撑。二、实验内容（1）乳酸菌的分离纯化