制药工艺复习题及大部分答案

1、我国药物的三大药源指的是化学药物、生物药物、中药。

2、现代生物药物已形成四大类型，包括基因重组多肽和蛋白质、基因药物、天然生化药物、合成与部分合成的生物药物。

3、请写出下列药物英文的中文全称：IFN（Interferon）干扰素、IL(Interleukin)白介素、CSF （Colony Stimulating Factor）集落刺激因子、EPO（Erythropoietin）促红细胞生成素、EGF （Epidermal Growth Factor）表皮生长因子、NGF（Nerve Growth Factor）神经生长因子、rhGH （Recombinant Human Growth Hormone）重组人生长激素、Ins（Insulin）胰岛素、HCG（Human Choriogonadotrophin）人绒毛膜促性腺激素、LH 促黄体生成素、SOD超氧化物歧化酶、tPA组织纤溶酶原激活物

4、从生物材料中提取天然大分子药物时，常采用的措施有采用缓冲系统、添加保护剂、抑制水解酶作用等。

5、生化活性物质浓缩可采用的方法有盐析浓缩、有机溶剂沉淀浓缩、超滤浓缩、真空减压浓缩或薄膜浓缩、用葡聚糖凝胶浓缩、用聚乙二醇浓缩

6、生物药物制备过程中，常用的灭菌及除菌方法有：加热灭菌、辐射灭菌（紫外杀菌）、介质过滤除菌、化学灭菌法。

7、大肠杆菌表达系统的缺点是不能进行翻译后加工（糖基化），因而像EPO等基因的表达需使用真核（酵母）表达系统。

8、确定生物材料的预处理方法的依据是生物活性物质存在方式与特点、后续操作的要求、

目的物稳定性。

9、常用的细胞破碎方法：机械法、物理法、化学法、生物法。物理法主要包括：干燥法、

反复冻融法、渗透压冲击法。生物法主要包括：酶解法、组织自溶法。

10、常规的固液分离技术主要有过滤和离心分离等。

11、氨基酸有水解法，水解法，发酵法，酶转化法，化学合成法四类生成方法。其中酶转化法法通用性好，是最有前途的方法。水解法中碱水解法解法会引起消旋作用，酶水解法解法不够彻底，故以酸水解法解法较为常用。

12、以动物的组织为原料提取纯化酶时常常需要对动物材料进行预处理，常用的预处理的方

法有机械处理，反复冻融和丙酮粉。

13、以下能用重组DNA技术生产的药物为（B ）

A、维生素

B、生长素

C、肝素

D、链霉素

14、下面哪一种药物属于多糖类生物药物（ C ）

A、洛伐他汀

B、干扰素

C、肝素

D、细胞色素C

15、能用于防治血栓的酶类药物有（D ）

A、SOD

B、胰岛素

C、L-天冬酰胺酶

D、尿激酶

16、如果想要从生物材料中提取辅酶Q10，应该选取下面哪一种动物脏器（D ）

A、胰脏

B、肝脏

C、小肠

D、心脏

17、目前分离的1000多种抗生素，约2/3产自（ B ）

A、真菌

B、放线菌

C、细菌

D、病毒

18、由于目的蛋白质和杂蛋白分子量差别较大，拟根据分子量大小分离纯化并获得目的蛋白质，可采用（ C ）

A、SDS凝胶电泳

B、盐析法

C、凝胶过滤

D、吸附层析

19、以下可用于生物大分子与杂质分离并纯化的方法有（D ）

A、蒸馏

B、冷冻干燥

C、气相色谱法

D、超滤

20、分离纯化早期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用（ A ）

A、分离量大分辨率低的方法

B、分离量小分辨率低的方法

C、分离量小分辨率高的方法

D、各种方法都试验一下，根据试验结果确定

21、以下可用于菌种纯化的方法有（ B ）

A、高温灭菌

B、平板划线

C、富集培养

D、诱变处理

22、能够实现微生物菌种定向改造的方法是（D ）

A、紫外诱变

B、自然选育

C、制备原生质体

D、基因工程

23、将四环素粗品溶于pH2的水中，用氨水调pH4.5—4.6，28－30℃保温，即有四环素沉淀结晶析出。此沉淀方法称为（B ）A．有机溶剂结晶法B．等电点法C．透析结晶法D．盐析结晶法

24、影响体大小的主要因素与下列哪些因素无关(D )

A．过饱和度B．温度C．搅拌速度D．饱和度

25、下列沉淀试剂不属于表面活性剂的是（D ）

A．CTAB B．CPC C．SDS D．PEG

26、凝胶层析中，有时溶质的Kd>1，其原因是（ B ）

A.凝胶排斥

B.凝胶吸附

C.柱床过长

D.流速过低

27、凝胶层析中，有时小分子溶质的Kd<1，其原因是（ A ）

A.水合作用

B.凝胶吸附

C.柱床过长

D.流速过低

28、在凝胶层析中样品各组分最先淋出的是（B ）

A.分子量最大的

B.体积最大的

C.分子量最小的

D.体积最小的

29、完善SOD 生产工艺。 洗净红细胞

[溶血]

上清[ ]冻干酶粉

沉淀物[ ]

上清液[ ]SOD粗酶液A B C D E F G 洗脱液溶血液[脱盐浓缩]

[沉淀][溶解]pH7.6的PBS [超滤]浓缩浓缩液水离心离心℃

[柱层析]DEAE-Sephadex A 50吸附柱冻干A 去血红蛋白 B 乙醇 C 氯仿 D 丙酮 E 冷冻离心 F4 G 洗脱

30、名词解释：固定化酶、生物制品、生物药物、iRNA 、盐析、洗脱、粘多糖

1）、生物药物（biopharmaceutics ）：是以生物体、生物组织或其成份为原料（包括组织、细胞、细胞器、细胞成分、代谢、排泄物）综合应用生物学、物理化学与现代药学的原理与方法加工制成的药物

2）、生物制品（biologics ）：是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品

3）、siRNA (small interfering RNA) ：是一种小RNA 分子（~21-25核苷酸），由Dicer （RNAase Ⅲ家族中对双链RNA 具有特异性的酶）加工而成。siRNA 是siRISC (RNA-induced silencing complex 由核酸内切酶、核酸外切酶、解旋酶等构成，作用是对靶mRNA 进行识别和切割）的主要成员，激发与之互补的目标mRNA 的沉默

4）、固定化酶（immobilized enzyme ）：是指借助于物理和化学的方法把酶束缚在一定空间内并具有催化活性的酶制剂，酶经固定化以后稳定性有所提高，而且可以反复使用，并能实现反应连续化、自动化，简化产品的纯化工艺

5）、 盐析法：是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法。

6）、粘多糖：由动物来源的含有氨基己糖的多糖统称为粘多糖，又称糖胺聚糖。

7）、洗脱：利用洗脱液中的物质与待分离物质或与配体的亲和特性而将待分离物质从亲和吸附剂上洗脱下来。

31.简述中药有效成分常用的提取、分离方法。

答：传统中草药提取方法有：溶剂提取法、水蒸汽蒸馏法两种。溶剂提取法有浸渍法、渗源法、煎煮法、回流提取法、连续提取等。分离纯化方法有，系统溶剂分离法、两相溶剂举取法、沉淀法、盐析法、透析法、结晶法、分馏法等。

32. 简述单克隆抗体的制备原理。

答：B 细胞群受抗原刺激后能产生针对抗原决定簇的特异性抗体，一个集体可产生多达100万种特异性不同的抗体，但一个B 细胞却只能分泌一种特异性抗体。将B 细胞与小鼠骨髓

瘤细胞融合后，用有限稀释法把产生不同抗体的杂交瘤细胞分开，挑选出单个杂交瘤细胞，每个杂交瘤细胞只分泌一种特异性抗体。培养单个杂交瘤细胞，使之无性繁殖形成细胞集落（称之为克隆），同一个克隆的杂交瘤基因相同，合成并分泌的特异性抗体质地均一，这种抗体称为单克隆抗体

33. 简述凝胶色谱的分离原理？

答：一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出。

34. 生化药物的特点？

答：（1).分子量不是定值生化药物除氨基酸、核苷酸、辅酶及甾体激素等属化学结构明确的小分子化合物外，大部分为大分子的物质（如蛋白质、多肽、核酸、多糖类等），其分子量一般几千至几十万。对大分子的生化药物而言，即使组分相同，往往由于分子量不同而产生不同的生理活性。例如肝素是由D-硫酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸组成的酸性粘多糖，能明显延长血凝时间，有抗凝血作用；而低分子量肝素，其抗凝活性低于肝素。所以，生化药物常需进行分子量的测定。

（2）.需检查生物活性在制备多肽或蛋白质类药物时，有时因工艺条件的变化，导致蛋白质失活。因此，对这些生化药物，除了用通常采用的理化法检验外：尚需用生物检定法进行检定，以证实其生物活性。

（3）.需做安全性检查由于生化药物的性质特殊，生产工艺复杂，易引入特殊杂质，故生化药物常需做安全性检查，如热原检查、过敏试验、异常毒性试验等。

（4）.需做效价测定生化药物多数可通过含量测定，以表明其主药的含量。但对酶类药物需进行效价测定或酶活力测定，以表明其有效成分含量的高低。

（5）.结构确证难在大分子生化药物中，由于有效结构或分子量不确定，其结构的确证很难沿用元素分析、红外、紫外、核磁、质谱等方法加以证实，往往还要用生化法如氨基酸序列等法加以证实。

35.以生物组织为原料提取纯化多肽和蛋白质，在选择分离纯化方法时应注意哪些问题？答：（1）根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质；

（2）根据蛋白质分子形状和大小的不同来纯化蛋白质；

（3）根据蛋白质溶解度的不同来纯化蛋白质；

（4）根据蛋白质电离性质的不同来纯化蛋白质；

（5）根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质；

（6）根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质；

（7）根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋白质；

（8）根据蛋白质选择性吸附性质来纯化蛋白质；

（9）根据蛋白质的某些特殊性质进行纯化。

36.请说明蛋清中溶菌酶提取的过程与操作要点。

答：见P127

37. 生物药物在生产制备中的特殊性有哪些?主要有哪些制造方法?

答：特殊性：（1）、原料中的有效物质含量低

激素、酶在体内含量极低。

（2）、稳定性差

生物药物的分子结构中具有特定的活性部位，该部位有严格的空间结构，一旦结构破坏，生物活性也就随着消失。酶，很多理化因素使其失活。

（3）、易腐败

生物药物营养价值高，易染菌、腐败。生产过程中应低温、无菌。

（4）、注射用药有特殊要求

生物药物易被肠道中的酶所分解所以多采用注射给药，注射药比口服药要求更严格，均一性、安全性、稳定性、有效性。理化性质、检验方法、剂型、剂量、处方、储存方式。

制造方法：基因工程制药，微生物发酵制药，酶工程制药，动物细胞工程制药，植物细胞工程制药，生物化学制药

38. 利用凝胶层析如何测定蛋白质的分子量？

答：当具有一定分子量分布的高聚物溶液从柱中通过时，较小的分子在柱中停留时间比大分子停留的时间要长，于是样品各组分即按分子大小顺序而分开，最先淋出的是最大的分子（2分）。

对于一个特定体系（凝胶柱），待测定物质的洗脱体积与分子量的关系符合公式V e=-K log M +C

先以3个以上（最好更多些）的已知分子量的标准蛋白过柱，测取各自的V e值。以V e作纵坐标，log M作横坐标制作标准曲线（2分）。在同一测定系统中测取未知物质的V e值便可由标准曲线求得分子量（2分）。

39.如何进行动物细胞大规模培养？

答；1、细胞分离

2、细胞计数

3、细胞传代

4、细胞的冻存与复苏

40.用不同原料生产SOD的工艺流程和操作要点有何异同？

答：实训的是时候大家都做过从大蒜猪血中提取SOD酶，大家请自行归纳总结出来。

洗脱可以分为两种：一种是选择与配体有亲和力的物质进行洗脱，另一种是选择与待分离物质有亲和力的物质进行洗脱。前者在洗脱时，选择一种和配体亲和力较强的物质加入洗脱液，这种物质与待分离物质竞争对配体的结合，在适当的条件下，如这种物质与配体的亲和力强或浓度较大，配体就会基本被这种物质占据，原来与配体结合的待分离物质被取代而脱离配体，从而被洗脱下来。例如用凝集素作为配体分离糖蛋白时，可以用适当的单糖洗脱，单糖与糖蛋白竞争对凝集素的结合，可以将糖蛋白从凝集素上置换下来。后一种方法洗脱时，选择一种与待分离物质有较强亲和力的物质加入洗脱液，这种物质与配体竞争对待分离物质的结合，在在适当的条件下，如这种物质与待分离物质的亲和力强或浓度较大，待分离物质就会基本被这种物质结合而脱离配体，从而被洗脱下来。例如用染料作为配体分离脱氢酶时，可以选择NAD+进行洗脱，NAD+是脱氢酶的辅酶，它与脱氢酶的亲和力要强于染料，所以脱氢酶就会与NAD+结合而从配体上脱离。特异性洗脱方法的优点是特异性强，可以进一步消除非特异性吸附的影响，从而得到较高的分辨率。另外对于待分离物质与配体亲和力很强的情况，使用非特异性洗脱方法需要较强烈的洗脱条件，很可能使蛋白质等生物大分子变性，有时甚至只能使待分离的生物大分子变性才能够洗脱下来，使用特异性洗脱则可以避免这种情况。由于亲和吸附达到平衡比较慢，所以特异性洗脱往往需要较常的时间和较大的洗脱条件，可以通过适当的改变其它条件，如选择亲和力强的物质洗脱、加大洗脱液浓度等等，来缩小洗脱时间和洗脱体积。[2]