探究酵母菌种群数量变化实验

探究培养液中酵母菌种群数量的变化

一、实验目的：

1．通过探究培养液中酵母菌种群数量的变化，尝试建构种群增长的数学模型。

2．用数学模型解释种群数量的变化。

3．学会使用血细胞计数板进行计数。

二、实验原理：

1．在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。2．等是影响种群数量持续增长的限制因素。

3．酵母菌计数方法：抽样检测法。

先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。多余培养液用滤纸吸去。稍待片刻，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。注意：从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。

仪器介绍：血细胞计数板

血细胞计数板的构造

血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面，刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室其中共有400个小格，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3。血细胞计数板的使用

以计数酵母菌为例

(1)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.

(2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.

(3)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内.

(4)计数；

计算公式：酵母细胞数/ml=每个小格酵母菌数目×400×104×稀释倍数

注释：1. 1ml=1000mm3，每一大方格的体积为0.1mm3，即相当于1×104ml

2. 培养的时间不同取样酵母菌的稀释倍数是不同的。

三．方法步骤：

（一）提出问题：

（二）作出假设：

（三）设计实验：

1、实验原理

种群的数量变化有一定的规律。在理想条件下，种群呈“J”型增长，在有限的环境下，种群呈“S”型增长。

酵母菌生长周期短，增殖速度快，在实验室条件下，用液体培养基培养酵母菌，可以观察酵母菌种群数量随时间变化的情况

2、方法步骤

（1）取相同试管若干支，分别加入5ml肉汤培养液，塞上棉塞。

（2）用高压锅进行___________灭菌后冷却至室温，标记甲、乙、丙、丁等。

（3）将酵母菌母液分别加入试管各5ml，摇匀后用计数起始酵母液个数，做好记录。

（4）将各试管送进恒温箱，________℃下培养7天。

（5）用观察，每天同一时间，各组取出本组的试管，用计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。

3、设计记录表

4、分析结果，得出结论：将所得的数值用曲线图表示出来：

（1）根据表格平均值作出培养液中酵母菌种群数量7天中的变化曲线。

（2）培养液酵母菌种

群数量随时间呈__________型增长变化。

四、问题分析：

1.从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。这是为什么？

2. 如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？

3. 对于压在小方格线上的酵母菌，应当怎样计数？（参考样方法调查种群密度时的处理方法。）

五、练习：

某同学进行了实验探究：培养液中酵母菌种群数量的动态变化

实验材料：

酵母菌菌种、无菌肉汤培养液、试管、血球计数板（1mm

×1mm，16×25型如右图）、滴管、显微镜等。

实验步骤：第1次实验：

⑴将一定量的酵母菌种置于无菌肉汤培养液中，搅拌

均匀。

⑵取血球计数板，在计数室上盖上盖玻片，用滴管滴

适量含有酵母菌的肉汤滴于盖玻片的边缘，用吸水纸

吸去多余的培养液。

⑶立即将上述计数板置于显微镜下进行观察。

⑷将数据填于事先设计好的表格中。

⑸实验结束对血球计数板进行清洗。

以后每天相同时间进行相同步骤的实验，只到实验结束。

该同学使用的计数板如右上图，为16个中方格。16个中方格中的酵母菌数目如下表：

分析以上材料，回答下列问题：

⑴实验步骤上看，有多处不足，如计数板在使用之前应

、吸去多余培养液后还要＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，及进行重复实验等。

⑵用血球计数板计数，应将培养液进行适当的稀释，使计数板的每一小方格内的酵母菌数在5－10个为宜，从表格中数据看，该同学存在的问题是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

⑶从记录表格看，该同学对血球计数板的计数规则不清楚。事实上没有必要将16个中方格中的数据全部进行统计，只需统计4个中方格即可，即图中的＿＿＿＿＿号中方格。

⑷该同学在计数每一小方格内的酵母菌时，发现很多小方格的四条边上也有酵母菌，他就看菌体的大半还是小半在计数方格内，若菌体超过一半的体积在该方格内就计数，否则不计数。你觉得该同学的计数方法正确吗？。请加以分析。

。

⑸若血球计数板的每个小方格中的酵母菌数平均为21个（原液被稀释了20倍），则10mL 培养液中的酵母菌数为个。

参考答案：

二、2.养分、空间、温度和有毒排泄物

三、（一）酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？

（二）酵母菌种群的数量随时间呈S型增长变化。

（2）高压蒸汽（3）血球计数板（4）25°（5）显微镜血球计数板

4. （1）（根据实际实验数据作出曲线）（2）S

四、1. 使培养液中的酵母菌均匀分布，便于随机取样，减少误差

2. 可以先稀释，再计数。但是最后计算时应乘以稀释倍数。

3. 顶边、左边和左角处的计算在内，其余不计。即计上不计下，计左不计右原则。

五、练习：（1）应将试管轻轻振荡几次，再吸取酵母菌培养液进行计数

将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养

（2）没有稀释（3）1、4、13、16

（4）不正确，显微镜计数时，对于压在小方格界线上的酵母菌，应遵循“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则计数。（5）1.68×1010