中国第一只克隆警犬等4则
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中国第一只克隆警犬等4则
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来源：《派出所工作》2019年第06期
中国第一只克隆警犬
2019年3月，一只名叫“昆勋”的小奶狗来到昆明警犬基地“入学”。“昆勋”于2018年12月在北京出生，它的供体犬是昆明警犬基地培育出的昆明犬“化煌马”。“化煌马”现年7岁，先后参与查破命案数十起，是一只战功赫赫的一级功勋犬。像“化煌马”这样的警犬可谓千里挑一。
昆明犬在我国警务工作中发挥了非常突出的作用，是由公安部昆明警犬基地培育定型的我国第一个优良工作犬品种，现已形成形状相似、遗传性能相对稳定的狼青、草黄、黑背三个品系。昆明犬具有嗅觉系统灵敏、扑咬凶猛、忠实主人等品质，适用于追踪、缉毒、护卫等工作，特别适合做警犬或军犬。传统的昆明犬繁育方式为有性繁殖。在“功勋昆明犬的克隆”项目的支持下，2018年9月北京的项目组成员通过“化煌马”的皮肤小样培养并提取了体细胞细胞核，选取另一头雌性犬的去核卵细胞，并由一只雌性比格犬代孕，最终产下了“昆勋”。這标志着我国首次实现了警用工作犬的克隆。
青少年防沉迷系统
青少年防沉迷系统是在国家互联网信息办公室的指导下，在短视频平台试点上线的软件系统。“青少年防沉迷系统”内置于短视频应用中，用户每日首次启动应用时，系统将进行弹窗提示，引导家长及青少年选择“青少年模式”。进入“青少年模式”后，用户使用时段受限、服务功能受限、在线时长受限，且只能访问青少年专属内容池。系统还将试点通过地理位置判定、用户行为分析等技术手段筛选甄别农村地区留守儿童用户，自动切换到“青少年模式”。2019年3月28日，国家网信办指导组织抖音、快手、火山小视频等短视频平台试点上线。该系统对呵护未成年人健康成长、行业履行社会责任、营造良好网络环境具有创新性意义。
第一张黑洞照片
2019年4月10日，天文学家召开全球新闻发布会，宣布首次直接拍摄到黑洞的照片。为了得到这张照片，天文学家动用了遍布全球的8个毫米/亚毫米波射电望远镜，组成了一个所
谓的“事件视界望远镜”（Event Horizon Telescope，缩写EHT）。自2017年4月5日起，这8个射电望远镜连续进行了数天的联合观测，随后又经过2年的数据分析才一睹黑洞的真容。这颗黑洞位于代号为M87的星系当中，距离地球5300万光年之遥，质量相当于60亿颗太阳。
数字游民
数字游民指无需办公室等固定工作地点，而是利用技术手段，尤其是无线网络技术完成工作的人。数字游民代表着远程办公领域的一个自然发展趋势。因特网让数百万的“线上”人士在
《南京农业大学学报》-论文撰写要求
论文撰写要求 1．题名 准确、精炼、清晰，充分反映论文的基本内涵与特色。中英文题名内容应一致，英文题名通常以名词短语为主要形式，整个题名只有第1个词的首字母大写，其余均小（专有名词除外）；禁止使用非公知公用的符号、缩写词、外来语、代号和商品名。 2．作者姓名及单位 中英文作者姓名顺序应一致，通信作者请用“*”标识，作者英文名为汉语拼音，姓在前，名在后，姓全大写，双名只首字母大写，如，WANG Dawei。作者单位请准确写出全称，不能简写。 3．摘要 中文摘要：摘要是对正文主要内容高度浓缩的简短论文，与论文具有同等的信息量，包含“研究目的、方法、结果、结论”4个要素。句首不要简单重复文章题名中的信息。目的、方法、结论要简炼，结果的内容要具体。方法部分须有试验材料和主要设计；结果部分应突出原创性工作，着重反映出文章的创新、独到之处，只叙述新信息和发现及主要数据。缩写或代号首次出现必须加以说明。摘要不宜太短，500字左右。 英文摘要：所有论文都必须有500词左右的英文摘要，包含“研究目的、方法、结果、结论”4个要素，与中文摘要对应，结果部分可以详细些。研究目的用一、两句话概括，写出论文的主要研究目的；方法、结果的内容尽可能详细，即解决问题的主要方法、过程（包括试验材料、试验设计、测定方法等），研究结果部分重点描述研究中的创新内容，尽量包括论文中的主要论点和重要的论证和数据；结论应明确。 中英文摘要的数据必须与正文的数据一致。 摘要模板： 摘要：[目的] ×××××××××××××。[方法] ×××××××××××××。 [结果] ×××××××××××××。[结论] ××××××××××× ××。 Abstract：[Objectives]×××××××××××××.[Methods]×××××××××××××.[Results]×××××××××××××.[Conclusions]××××× ××××××××. 4．关键词 尽量选用主题词，如果自由选词，选词的关键在于要精选能代表文章主要内容的词或词组；每篇论文可列出3～8个关键词；中英文关键词既要意思一致又要顺序一致。 5．中图分类号 从《中国图书馆分类法》（第四版）中查找，自查。 6．引言 内容包括研究意义、研究背景、提出问题即本研究与已有研究的不同之处及研究目的。
中国国内的七种警犬介绍
中国国内的七种警犬介绍 上周小编盘点了没有被选入警队的五种狗狗。今天我们就来看看，威风凛凛的警犬到底是何方神圣。目前来说能够成为警犬的品种比较固定，下面就跟着波奇小编一起来看看，国内的警犬有哪些品种吧。 1.德国牧羊犬(详情介绍) 当当当当，中国警犬犬种第一个介绍的就是大名鼎鼎的德国牧羊犬了。它是我们最常见的警犬之一。它行动敏捷，适应各种环境。而且它全球所有犬种中最受关注的一种，因为只有它有世界上有统一的标准和单独犬种的俱乐部。在德牧俱乐部（CSV）登记的犬只在世界上有唯一的、且在各国都承认的认证号码，一只好的德牧的价格也绝对不是其它犬种的赛级犬可以比拟的。 德国牧羊犬(详情介绍) 2.昆明犬 第二个要介绍的是我们国家的原生犬种——昆明犬。它是从云南民间的狼犬经近40年的精心培育而成的一个新的军、警用优良品种犬。它们能适应高原气候，擅长追踪和扑咬，目前，全国有数万头昆明犬在边防哨卡；公安刑侦、缉毒、防暴、巡逻、护卫及武警、海关、企业保卫系统及民居中被广泛运用。 昆明犬 3.拉布拉多犬 第三个介绍的狗狗我们应该最熟悉。它应该是是这些用作警
犬的犬种里最为常见的一种家庭宠物犬了。也是它在中国成功刷下了金毛犬，让它进不了警队。拉布拉多性格极好，且外貌也和蔼可爱，所以很受大家的喜爱。现在在警犬中用于侦察毒品和爆炸品的警犬。 拉布拉多犬 4.杜伯文犬 就是我们通常所说的杜宾犬，它是属于中等体型的獒犬品种，身体很高。杜宾犬自然的耳朵是下垂的，这影响了杜宾高大威猛的形象，所以习惯上给杜宾犬作立耳。虽然过程很痛苦，但是立耳的杜宾帅气极了。 杜宾犬(详情介绍) 5.罗威纳犬 罗威纳犬也译作罗威拿犬或是罗特韦尔犬，是一种外表相当强悍的工作犬，肌肉十分结实，有着沉着和果敢的外貌。作为现在美国最知名的五个犬种之一，不过这种狗狗并没有看起来那么凶狠，甚至在一定程度上它们很温柔也比较容易相处。作为警犬的话它是要断尾的。 罗威纳犬(详情介绍) 6.比利时牧羊犬 比利时牧羊犬又叫马利诺斯犬或是类似的译音。它胸前的毛尤其帅气。比利时牧羊犬警戒心强，聪颖，非常机警，属户外形犬种。有意思的是，直到上个世纪末，随着这种狗的工作价值的降低，才重新引起了大家对于这种狗的兴趣，可能就是物以稀为贵的道理吧。
体细胞克隆牛的研究进展(综述)
体细胞克隆牛的研究进展 1997年，体细胞克隆绵羊多莉的诞生，改变了以往教科书中的哺乳动物已分化的体细胞不能重新去分化而重获全能性的概念。1998年，体细胞克隆牛获得成功。体细胞克隆动物的成功是几十年来生物学领域的重大突破之一，它引起了社会的广泛兴趣和关注。因为该技术可能对未来农业、医学和人类自身产生重大影响。 为了使我国科学家能抓住机遇，在体细胞动物克隆领域研究中尽快加入国际竞争的行列并走在国际前列，国家自然科学基金委员会于1998年不失时机地设立了“家畜体细胞无性繁殖的研究”的重点项目。这个项目，不仅可为发育生物学的基本理论研究提供很好模型，更重要的是在我国建立家畜克隆技术并在未来国民经济发展中发挥重要作用。因此，该项目既具有科学上的前沿性，又符合国家重大发展需求。 “家畜体细胞无性繁殖的研究”项目（批准号39830280）是国家自然科学基金委员会的重点科研项目。1999年、2000年和2002年，体细胞克隆山羊、转基因克隆山羊和克隆牛分别在我国降生。2002年2月27日同行专家在中国科学院动物研究所对该项目进行了验收与鉴定。专家们对项目成果给予了高度评价，一致认为，通过该项目的研究，我国的家畜克隆技术已迈入世界先进水平。 克隆牛研究是由中国科学院动物研究所生殖生物学国家实验室克隆动物研究组与山东五里墩中大动物胚胎工程中心合作完成的。通过成批体细胞克隆牛的研究，我国科学家已建立了从家畜体细胞培养、卵母细胞成熟、卵子去核、重构胚构建、胚胎体外培养、胚胎移植等成套的较成熟的操作方法和规程，标志着我国成为继英国、日本、新西兰和美国等国家之后，掌握体细胞克隆家畜关键技术的少数国家之一。体细胞克隆牛和克隆羊的成功，使我国在动物胚胎工程高科技领域已走在国际前沿。该项目的研究可能为未来畜牧业的发展提供一个新的增长点。特别是奶牛克隆胚胎应用技术，在我国奶牛业十分落后的条件下，一旦提高效率并投入生产应用，将对畜牧经济发展产生重要影响。因为供核样本牛的性别和生产性能可以人为选定，原料成本很低，取材方便利于工厂化生产。这些优点使我们可以选择经济价值最高的个体进行“复制”，而且可以大批量生产和大面推广。 （一）发展回顾 动物胚胎移植技术历时20年的发展，对牛来说，在无手术情况下，可一次冲卵30枚，平均可用胚胎数为5.5枚/头。超数排卵和胚胎移植（MOET）育种计划在至少8个国家得到全面实行，遗传改良进展比预期提高了10%。奶牛胚胎移植的总数正在逐年增加，全球1997年移植胚胎数接近460,000，现在每年大约500,000枚左右。在美国，奶牛生产群中有0.2%的母牛是通过胚胎移植获得，但95%以上的种公牛和优良种母牛是胚胎移植获得的。“七五”和“八五”期间，我国“863”计划、国家攻关计划、农业部重点攻关计划和部分省市的研究计划都重点支持了动物胚胎移植技术的研究与开发，包括胚胎分割、卵母细胞体外成熟、体外人工授精、核移植技术等，并利用体外受精和胚胎移植技术繁育了大量的优良种畜，如内蒙古共生产良种牛胚胎3万多枚，建立中试移植基地4处，几年来共移植受体1000余头（次），获得试管牛犊300余头；新疆与宁夏已建成700余头供体牛的牛胚胎移植产业化基地，生产良种牛胚胎1530余枚，进口安格斯肉牛胚胎1300余枚，移植受体牛300头，冻胚平均妊娠率40%以上；北京、河南、山东、黑龙江、广西等地也获得了较大数量的胚胎移植优
常用的克隆载体
第一章 概 论 第二章 基因疫苗工作 原理 第三章 基因疫苗抗原 基因的筛选和克隆 第四章 基因疫苗的构 建 第五章 基因疫苗制备 第六章 基因疫苗免疫方法 第七章 基因疫苗免疫 效果检测 第八章 影响基因疫苗免疫效果的因素 第九章 基因疫苗安全性 第十章 细菌病基因疫苗 第十一章 病毒病基因 疫苗 第十二章 寄生虫病基 因疫苗 第十三章 肿瘤基因疫 苗 第十四章 控制动物生 长性能的基因疫苗 四、常用的克隆载体 克隆载体就是将目的基因导入宿主细胞进行复制，从而获得大量克隆化片段的运载工具，常用的克隆载体种类很多，主要包括质粒、粘粒和噬菌体等。其中，质粒是目前应用最为广泛 的克隆载体。下面简要介绍作为克隆质粒的特性和结构。 （一）质粒特性 质粒是指在染色体外能够独立复制和稳定遗传的一类环状双链 DNA 分子。有的质粒处于染色体外的游离状态，可以随着染色体的复制而复制，并且通过细胞分裂传递到子代。有的质 粒在一定条件下能够可逆地整合到寄主染色体上。 质粒的表示常根据 1976 年提出质粒命名原则，用小写字母 p 代表质粒，在 p 字母后面 用两个大写字母代表发现这一质粒的作者或者实验室名称。例如质粒 pUCl8 ，字母 p 代表质粒， UC 是构建该质粒的研究人员的姓名代号， 18 代表构建的一系列质粒的编号。 质粒广泛地分布于原核生物细胞中，也存在于一些真核细胞中。质粒相对分子质量范围为10 6 -2 @ 10 8 。根据质粒在受体细胞内的数量将质粒分为严紧型质粒和松弛型质粒两种类 型。严紧型质粒在每个细胞只有 1 个至几个拷贝；松弛型质粒在每个细胞中有 10-200 个拷贝。 质粒可以分为三种构型，一种是呈现超螺旋的 SC 构型（ scDNA ），一种是开环 DNA （ ocDNA ），另一种是呈线形分子的 L 构型。质粒 DNA 与一般 DNA 分子的理化性质相似，例如溶于水、不溶于乙醇等有机溶剂、能吸收紫外线、可嵌入溴乙锭染料等。实验室常利用这 些理化特性鉴定和纯化质粒。 质粒具有以下几项生物学特性： ? 寄生性：质粒可以在特定的宿主细胞内存在和复制。 ? 稳定性：每种质粒在特定的宿主细胞内保持着一定的拷贝数。 ? 重组性：两种不同的质粒处于同一宿主细胞中或者一种质粒处于一种宿主细胞中，有可能发生质粒与质粒之间或质粒与染色体之间的重组。 ? 不相容性：有相同复制始区的不同质粒不能共存于同一宿主细胞中，其分子基础主要是由于它们在复制功能之间的相互干扰造成的。 ? 传递性：有些质粒在细菌间能够传递，具有传递性的质粒带有一套与传递有关的基 因。
变形梯度凝胶电泳
变性梯度凝胶电泳 变性梯度凝胶电泳（denatured gradient gel electrophoresis，DGGE），是根据DNA在不同浓度的变性剂中解链行为的不同而导致电泳迁移率发生变化，从而将片段大小相同而碱基组成不同的DNA片段分开。具体而言，就是将特定的双链DNA片段在含有从低到高的线性变性剂梯度的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，随着电泳的进行，DNA片段向高浓度变性剂方向迁移，当它到达其变性要求的最低浓度变性剂处，双链DNA形成部分解链状态，这就导致其迁移速率变慢。由于这种变性具有序列特异性，因此DGGE能将同样大小的DNA片段很理想地分开，它是一种很有用的分子标记方法。 DGGE最初是Lerman 等人于20 世纪80 年代初期发明的，起初主要用来检测DNA 片段中的点突变。Muyzer 等人在1993 年首次将其应用于微生物群落结构研究，并证实了这种技术在研究自然界微生物群落的遗传多样性和种群差异方面具有明显的优越性。此后十年间，该技术被广泛用于微生物分子生态学研究的各个领域，现已广泛应用于生物多样性调查、亲缘关系鉴定、基因突变检测等多个领域。这一技术能够提供群落中优势种类信息，并同时分析多个样品，具有可重复和操作简单等特点，适合于调查种群的时空变化。而且可通过对条带的序列分析或与特异性探针杂交分析，鉴定群落组成。DGGE通过逐渐增加的化学变性剂线性浓度梯度，可以把长度相同但只有一个碱基不同的DNA片段分离。 作为一种突变检测技术，DGGE具有如下的优点：（1）突变检出率高。DGGE的突变检出率为99%以上。（2）检测片段长度可达1kb，尤其适用于100~500bp的片段。（3）非同位素性。DGGE不需同位素掺入，可避免同位素污染及对人体造成的伤害。（4）操作简便、快速。DGGE一般在24小时内即可获得结果。（5）重复性好。但是，该方法需要特殊的仪器，而且合成带GC夹的引物也比较昂贵。 DGGE的基本原理及方法： DGGE不是将分子量不同的DNA分开，而是通过聚丙烯酰胺凝胶中变性剂浓度梯度的不同，将序列不同的DNA分开。该方法的原理是根据DNA 的解链特性，不同碱基组成的DNA双螺旋发生变性所要求的变性剂浓度不同，混合双链DNA在变性剂浓度呈线性梯度增加的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，当泳动到与DNA变性所需变性剂浓度一致的凝胶位置时，相对应的DNA发生解链变性，导致电泳迁移速率降低。由于泳动受阻DNA分子在凝胶中
中国第一只克隆警犬等4则
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/723062945.html, 中国第一只克隆警犬等4则 作者： 来源：《派出所工作》2019年第06期 中国第一只克隆警犬 2019年3月，一只名叫“昆勋”的小奶狗来到昆明警犬基地“入学”。“昆勋”于2018年12月在北京出生，它的供体犬是昆明警犬基地培育出的昆明犬“化煌马”。“化煌马”现年7岁，先后参与查破命案数十起，是一只战功赫赫的一级功勋犬。像“化煌马”这样的警犬可谓千里挑一。 昆明犬在我国警务工作中发挥了非常突出的作用，是由公安部昆明警犬基地培育定型的我国第一个优良工作犬品种，现已形成形状相似、遗传性能相对稳定的狼青、草黄、黑背三个品系。昆明犬具有嗅觉系统灵敏、扑咬凶猛、忠实主人等品质，适用于追踪、缉毒、护卫等工作，特别适合做警犬或军犬。传统的昆明犬繁育方式为有性繁殖。在“功勋昆明犬的克隆”项目的支持下，2018年9月北京的项目组成员通过“化煌马”的皮肤小样培养并提取了体细胞细胞核，选取另一头雌性犬的去核卵细胞，并由一只雌性比格犬代孕，最终产下了“昆勋”。這标志着我国首次实现了警用工作犬的克隆。 青少年防沉迷系统 青少年防沉迷系统是在国家互联网信息办公室的指导下，在短视频平台试点上线的软件系统。“青少年防沉迷系统”内置于短视频应用中，用户每日首次启动应用时，系统将进行弹窗提示，引导家长及青少年选择“青少年模式”。进入“青少年模式”后，用户使用时段受限、服务功能受限、在线时长受限，且只能访问青少年专属内容池。系统还将试点通过地理位置判定、用户行为分析等技术手段筛选甄别农村地区留守儿童用户，自动切换到“青少年模式”。2019年3月28日，国家网信办指导组织抖音、快手、火山小视频等短视频平台试点上线。该系统对呵护未成年人健康成长、行业履行社会责任、营造良好网络环境具有创新性意义。 第一张黑洞照片 2019年4月10日，天文学家召开全球新闻发布会，宣布首次直接拍摄到黑洞的照片。为了得到这张照片，天文学家动用了遍布全球的8个毫米/亚毫米波射电望远镜，组成了一个所 谓的“事件视界望远镜”（Event Horizon Telescope，缩写EHT）。自2017年4月5日起，这8个射电望远镜连续进行了数天的联合观测，随后又经过2年的数据分析才一睹黑洞的真容。这颗黑洞位于代号为M87的星系当中，距离地球5300万光年之遥，质量相当于60亿颗太阳。 数字游民 数字游民指无需办公室等固定工作地点，而是利用技术手段，尤其是无线网络技术完成工作的人。数字游民代表着远程办公领域的一个自然发展趋势。因特网让数百万的“线上”人士在
《克隆技术》检测题
《克隆技术》检测题 1.如图是多莉羊克隆过程示意图，分析图示回答下列问题： 5. 从黑鼠的体细胞中取出细胞核，注入到白鼠的去核卵细胞中，融合后的细胞形成早期胚胎后植入灰鼠的子宫，出生后的小鼠体色为（）A．黑色B．白色C．灰色D黑白相间 6. 将一只黑色蛙的受精卵A的细胞核去掉，再将一只灰色蛙的受精卵B的细胞核抽出，注入黑色蛙的去核受精卵中，形成受精卵C，在适宜环境下进行培育，受精卵发育成了一只小蝌蚪，再过一段时间长成一只成体蛙．问： （1）在受精卵C中细胞质来自______，细胞核来自______． （2）在受精卵C发育成的蛙的体色是______（灰色、黑色），这说明控制受精卵发育的
信息储存在______中． （3）将去掉细胞核的受精卵A继续培育，其结果是______． （4）如果将受精卵A的细胞质去掉，注入灰色蛙细胞的细胞质，继续培育，其结果是______ A．发育成黑色蛙 B．发育成灰色蛙 C．一定会死亡 D．发育成的蛙一半是黑色，一半是灰色． 7. 英国科学家利用克隆技术培养了克隆羊多莉．其主要过程是（） ①将A母羊卵细胞的细胞核抽出②将B母羊乳腺细胞的细胞核取出③将乳腺细胞核注入无核卵细胞中④将融合细胞在体外培养成初期胚胎⑤将胚胎移人C母羊子宫中发育为小羊多莉． A．④①③②⑤ B．①②③④⑤ C．⑤④③②① D．③②⑤①④ 8. 采用“克隆”技术造出生物新个体的生殖方式属于（） A．有性生殖B．无性生殖C．单性结实D．A和B 9. 下列不能创造出新物种的现代生物技术是（） A．基因工程B．克隆技术C．转基因技术D．细胞工程技术 10. 如图是克隆牛的培育过程示意图，请据图回答下列问题． （1）根据图可以知道，“小牛”的性状和______的性状最相似． （2）图中“代孕母亲”的作用是为“小牛”的______发育提供______．“基因母亲”为“小牛”提供______． （3）如果“基因母亲”产生的生殖细胞内有30条染色体，那么，“小牛”的体细胞中具有的染色体数为______条． （4）与“小牛”克隆成功有关的三头牛，都必须是母牛吗？______．你认为有可能是雄性的是______． （5）图中矩形框内新细胞形成的过程被称为______． （6）通过克隆牛的成功，可以证明高度分化的动物细胞的细胞核仍然具有______．11. 据报道：曾经参与培育克隆羊多莉的英国PPL公司克隆出了5只转基因小猪，对异种器官移植的研究又迈进了一步．未来将猪细胞或器官移植给人的临床试验可能于4年内开始．下列关于遗传工程的叙述中，正确的是（） A．克隆动物有生育自己的“母亲”，所以它应该是一种有性生殖方式
第四章 人工染色体载体
第4章 人工染色体载体
黏粒载体 酵母人工染色体载体 细菌人工染色体载体 P1噬菌体载体和P1人工染色体载体
表4-1 5种常见高容量克隆载体及其基本特性
载体
黏粒 P1 PAC BAC YAC
容量（kb） 复制子
30-45 70-100 130-150 120-300 250-400 ColE1 P1 P1 F ARS
宿主
拷贝数
重组DNA导入 宿主的方式
转导 转导 电转化 电转化 转化
筛选标记
— sacB sacB α-互补 ade2
克隆DNA 获取方法 碱抽提
大肠杆菌 高 大肠杆菌 1 大肠杆菌 1 大肠杆菌 1 酵母菌 1
脉冲场电 泳
1
4.1 黏粒载体
4.1.1 黏粒的结构特征和用途
o 黏粒（cosmid）是质粒的衍生物，是带有cos序 列的质粒。cos序列是λ噬菌体DNA中将DNA包装 到噬菌体颗粒中所需的DNA序列。 o 黏粒的组成包括质粒复制起点（ColE1）、抗性 标记（ampr）、cos位点，因而能像质粒一样转 化和增殖。 o 它的大小一般5-7kb左右，用来克隆大片段 DNA，克隆的最大DNA片段可达45kb。
4.1.2 黏粒载体的 工作原理
图4-1 黏粒载体 克隆 DNA的 一般原 理和步 骤
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4.1.3 黏粒克隆载体
1．黏粒pJB8
o 大小为5.4kb，由 ampr，ColE1复制 起点（ori）， cos位点，多克隆 位点组成，可容 纳33-46.5kb外源 DNA片段，主要用 来在细菌中克隆 真核DNA。
2．含双cos位点的黏粒载体
o c2RB和 Supercos-1是 含双cos位点的 黏粒载体， c2RB大小为 6.8kb，含两个 cos位点，在 cos位点之间有 Kanr（图4-3）。 o 装载容量3346.5kb
图4-3 黏粒载体c2RB图谱
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分子生物学课程教学大纲
分子生物学课程教学大纲 课程名称：分子生物学（Molecular Biology） 课程编号：1313072215 课程类别：专业课 总学时数：68 课内实验时数：18 学分：3.5 开课单位：生命科学学院生物技术教研室 适用专业：生物技术 适用对象：本科（四年） 一、课程的性质、类型、目的和任务 分子生物学为高等学校生物技术专业学生必修的一门专业基础课，是从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科，主要研究核酸、蛋白质等生物大分子的功能、形态结构特征及其重要性和规律性的科学，是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘，由被动地适应自然界转向主动地改造和重组自然界的基础学科。 通过分子生物学的教学，应使学生了解分子生物学的发展历史以及最新研究成果；熟练掌握DNA的结构与功能、RNA在蛋白质合成中的功能、蛋白质的结构与功能、遗传密码及基因表达调控的本质；了解现代分子生物学基本研究方法，并能运用分子生物学的理论知识分析、研究和解决问题，为进一步学习有关专业课程及从事基因工程领域的研究工作奠定基础。 二、本课程与其它课程的联系与分工 从学科角度来讲，分子生物学涵盖面非常广，与生物学、生物化学和细胞生物学、遗传学等生命科学课程有交叉，《生物化学》是先修课程。 三、教学内容及教学基本要求 [1]表示“了解”；[2]表示“理解”或“熟悉”；[3]表示“掌握”；△表示自学内容；○表示略讲内容； 第一章绪论 第一节引言 创世说与进化论[1]；细胞学说[2]；经典的生物化学和遗传学[3]；DNA的发现[2] 第二节分子生物学简史[1] 第三节分子生物学研究的主要内容 分子生物学的含义[3]；DNA重组技术、基因工程技术概念[3]；分子生物学研究的主要内容[3] 第四节展望 分子生物学的一些分支学科[1]；分子生物学发展的趋势[1] 重点：分子生物学的含义和研究内容
转基因动植物生物反应器 综述
转基因动植物生物反应器 生物技术1002 摘要:生物反应器，指以活细胞或酶为生物催化剂进行细胞增殖或生化反应提供适宜环境的设备，它是生物反应过程中的关键设备。随着转基因技术问世,生物反应器不再局限于传统“冷冰冰”的设备，而是富有生命特性的动植物。动植物生物反应器指的是通过基因工程途径以常见的农作物或者活体动物，高效表达某种器官或组织，进行工业化生产功能蛋白等生物制剂。本文为大家阐述了转基因动植物反应器的优缺点，研究进展及其应用。 关键词:转基因动物反应器，转基因植物反应器，优缺点，研究进展，应用 一、转基因动植物生物反应器的优缺点 1.1转基因动物生物反应器的优点 1易养殖，实现大规模制备。 2通过乳腺和血液制备活性物质简单易行。 3可以通过动物细胞培养实现大量制备。 4产量高，转基因动物在每升乳汁中可得几十克产物，而转基因植物，微生物在每升培养液中只能获得几毫克。 5成本低，用细菌、酵母菌或动物细胞生产基因工程药物，反应条件要求严格，而转 基因动物只需要正常饲养。 6用于转基因动物制药的受体牛、羊、猪等哺乳动物，与人类亲缘关系比细菌、酵母 菌要近的多，所以其产品具有与人体自身产生的蛋白相同的生物学活性川。 7用转基因动物培植活体器官和组织，用于更替人体患病的器官和组织。 1.2转基因动物生物反应器的缺点 1细胞培养需要昂贵的培养基和设备。 2转基因动物制备成本昂贵。 3转基因动物易产生一些伦理问题。 4目前转基因动物的研究存在理论基础薄弱、技术不完善等问题"使得转入的基因在受体动物基因组中存在着随机整合、调节失控、遗传不稳定、表达率不高等问题。为确保转入的基因能得到高效表达并完全整合，关键是基因构建和位点整合。 5转基因表达产物的分离与纯化也存在问题，可能会出现要纯化的产物含量低的现象，还要确保去除引起人类变态反应的非人类蛋白。 6转基因表达产物的结构和生物活性是否与人体蛋白相似#转基因产品必须与人体产生的蛋白高度相似，以免人体对它产生免疫反应。 2.1转基因植物生物反应器的优点 1 比较廉价利用植物生产系统容易大规模生产来自动物、人类、细菌、病毒等的外源蛋白，成本低廉。植物是最经济的蛋白质生产系统 2 合成外源蛋白相对比较安全细菌作为生物反应器时，不能对真核生物的蛋白进行有效的翻译后加工，而且本身可能是人类病原物。植物生物反应器的表达产物具有无毒性和副作用,安全可靠,无残存DNA和潜在致病致癌性 3 植物转基因操作和克隆技术比较成熟在克隆技术方面，转基因动物的克隆还处于起步阶段，然而植物的克隆技术如组织培养、器官培养、细胞培养等已相当成熟。 4植物可以大规模种植,而且产物贮藏在种子、果实、块茎中便于贮运 5植物具有完整的真核细胞表达系统 6转基因植物自交后可得到稳定遗传的遗传性状。
中国警犬犬种
中国警犬犬种有七种，它们是：德国牧羊犬、比利时牧羊犬、杜宾犬、罗威纳犬、昆明犬、拉布拉多犬和史宾格犬。英国激飞,昆明犬,拉布拉多,比利时牧羊犬都长什么样子呢，起源哪里，又有什么故事呢？ 首先来介绍一下选用的这些警犬犬种里起源于德国的犬种：德国牧羊犬、杜宾犬和罗威拿犬。一、德国牧羊犬（俗称黑背，后面简称德牧）(German Shepherd Dog)最近几年，大家对德牧的认识越来越多了，也逐渐知道德牧是一种很聪明和威猛的犬种。我个人认为德牧是三四百个犬种中最受重视的，因为只有德牧有世界上有统一的标准和单独这个犬种的俱乐部。在德牧俱乐部（CSV）登记的犬只在世界上有唯一的、且在各国都承认的认证号码，一只好的德牧的价格也绝对不是其它犬种的赛级犬可以比拟的。不过这两年随着中国繁殖德牧的人逐渐多起来，犬只的质量有很大程度的下降，很让人揪心。二、杜伯文犬（杜宾）(Dobermann)杜伯文犬（也有译作多伯曼犬），就是我们通常所说的杜宾犬，它是属于中等体型的獒犬品种，身体很高有65-69cm。杜宾犬自然的耳朵是下垂的，可能是许多人觉得下垂的耳朵有些影响它整体上威猛的感觉，所以习惯上给杜宾犬作立耳，这是一种外科手术，会让狗狗很痛苦，我一直不理解为什么会为了人的审美观让狗受这个罪。不过作了立耳的杜宾犬的确帅得一塌糊涂。三、罗威纳犬( Rottweiler)罗威纳犬也译作罗威拿犬或是罗特韦尔犬，是一种外表相当强悍的工作犬，肌肉十分结实，有着沉着和果敢的外貌。不过就我所接触的罗威纳犬，让我感觉似乎在它很强悍的外貌下却是和人很亲近的本性，不太清楚是我接触的那个狗狗的个体如此，还是犬种的特点。不过作为现在美国最知名的五个犬种之一，它应该不会很一种很凶猛的狗狗。我倒觉得它是一种很man的狗，估计有不少女孩子会喜欢。
新版青岛版四年级下册数学第七单元《奇异的克隆牛小数加减法》单元教案(新版教材)
第七单元奇异的克隆牛 ————小数的加法和减法 信息窗一 一、教学内容： 课本78----82页信息窗1：小数的加减法及练习。 二、教学目标： 1、结合具体情境，理解小数加、减法的意义。 2、掌握小数加、减法的计算方法，并能较熟练地进行小数加、减法的笔算和口算。 培养学生良好的计算习惯，提高计算能力。 3、感受学习数学的乐趣，增强学习数学的自信心和成功感，逐步养成迁移类推的 好习惯。 三、教学重难点： 重点：掌握小数加减法的竖式计算方法和验算方法，理解小数加减法的竖式对位 其实就是小数点对齐。 难点：理解在小数加减的竖式计算中相同数位对齐其实就是小数点对齐。 四、教法与学法指导： 根据情景提出问题和解决问题，在解决问题的过程中让学生独立尝试和探索，归 纳出小数加减法的竖式计算方法和验算方法。 教学过程： 第1课时 一、创设情境激趣导入 1、学生交流课前收集的有关“克隆”的信息。 2、师：今天我们就一起来了解两头可爱的克隆牛的情况，看他们身上有哪些有趣的数 学问题。 二、自主合作探索新知 1、提出问题 课件出示：情境图健健、壮壮出生时情况记录。 体长身高体重 健健0、72 米0、76 米38千克 壮壮0、76米0、79米38、04千克 师：同学们观察信息窗1，看看克隆牛健健和壮壮出生时的情况记录，你都获得哪 些信息？ 通过获取的信息，你能提出什么问题？（根据学生提出的问题，先来了解“壮壮”
出生时的胸围是多少。） 2、解决问题 学生列式，说明意义。师板书：0.77+0、03= （米） 师：用你喜欢的方法计算。 请用不同方法的同学板演计算过程。 3、优化算法 0、7 7 + 0、0 3 这个0可以去掉吗？ 0、8 0 答：“壮壮”出生时的胸围是0、8米。 师：他们的方法你喜欢哪个？为什么？（用竖式计算比较简便。）4、探究算理 （1）自主探究，尝试计算。 师：你能用竖式计算17.05+2.83吗？ （2）组织交流，理解算理。 a.组织学生交流计算的算理、方法和结果。 b.典型错误纠正，在交流中，理解算理。 c.你会验算吗？ （3）抓出重点，总结算理。 师：计算竖式时，应该注意什么？（强调数位对齐） 师：得数末尾的0能不能够去掉？为什么？ 5、迁移算理 （1）解决问题：壮壮出生时的体长比健健长多少？ 分析数量关系，列出算式。 0、76-0、72= （米） 0、7 6 -0、7 2 0、0 4 答：“壮壮”出生时的体长比“健健”长0、04米（2）竖式计算。 师：为什么要用减法计算？得出减法的意义，让学生进行计算。
分子生物学实验教学大纲
分子生物学实验教学大纲 一、说明 1、课程类别 专业课 2、教学目的 通过实验教学使学生了解、验证、巩固和加深所学理论知识，掌握分子生物学研究的基本实验技能，如：质粒（植物/动物）DNA的分离及纯化、植物总RNA的提取，琼脂糖凝胶电泳等技术。培养科学、严谨、实事求是的学风，提高动手能力、分析问题解决问题的能力以及创新性思维。 3、教学内容 本门课教学主要以某一基因为主线，从基因的分离、纯化、克隆、及鉴定等方面入手，帮助学生掌握分子生物学基本的实验方法和技能，在此基础上对分子生物学方法的应用和意义有一个整体的把握，在可能的情况下同时提供多种实验材料让学生自行设计和准备实验，培养其独立科研能力。 4、教学方式 以实验操作为主，配合原理教授、实践性教学、多媒体教学和学生实验报告、撰写论文、自学等方法进行学习。 5、考核内容及方式 实验操作 30％，实验结果 30％，实验报告 30％，考勤 10％。参照以下几个方面评定成绩。 （一）认真预习实验并书写实验预习报告； （二）实验态度认真，操作规范，遵守实验室管理规定； （三）按规定步骤进行实验，实验结果准确； （四）认真撰写实验报告。 6、本课程授课时间（学期），总学时数。 本课程在三年级开设，总计36学时，学时分配见下表: 教学时数分配表
二、教学内容 1、教学目标（课程） 通过本课程的教学使学生了解和掌握现代分子生物学研究的基本原理、方法、技术和技能，包括DNA 提取、PCR 扩增等。通过学生的独立实验设计和实践，训练学生分析问题和解决问题的能力及实际动手能力，同时培养学生的创新思维以及对生命科学探索的兴趣和爱好。 2、教学内容（分章节描述） 实验一质粒DNA的提取 1．主要内容碱裂解法提取载体质粒。 2．教学要求学习和掌握碱裂解法提取质粒的方法和技术。 实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA 1．主要内容（1）电泳基本知识介绍（2）琼脂糖凝胶的制备（3）质粒的定量。 2．教学要求掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。 实验三植物总RNA的提取及检测 1．主要内容（1）RNA的提取（2）核酸的琼脂糖凝胶电泳（3）紫外分光光度法测定核酸的含量和纯度。 2．教学要求掌握植物组织中提取RNA的基本原理和实验技术方法。 实验四动物总DNA的提取 1．主要内容（1）总DNA的提取（2）核酸的琼脂糖凝胶电泳（3）紫外分光光度法测定核酸的含量和纯度。 2．教学要求掌握动物组织中提取总DNA的基本原理和实验技术方法。 实验五 PCR基因扩增 1．主要内容（1）PCR基本原理（2）PCR溶液体系的制备（3）PCR仪使用 2．教学要求掌握聚合酶链式反应的基本原理和实验技术方法。 （二）重点和难点
转基因克隆牛的研究进展
摘要：转基因动物在畜牧业生产以及生物医学上具有广阔和诱人的应用前景，生产转基因的方法也很多，本文就体细胞核移植生产转基因牛的供体细胞种类、转染方法和转基因牛的应用作一综述，同时也指出了转基因牛存在的不足，并展望了其发展前景。 关键词：牛；转基因；体细胞核移植 中图分类号：Ｓ８５２．１文献标识码：Ａ 文章编号：１００３－４８８９（２００８）０２－００１４－０５ 转基因动物实验可追溯到１９７４年，Ｂｒａｃｋｅｔｓ等将兔的精子与ＳＶ４０病毒ＤＮＡ孵育后，进行体外受精获得转基因兔。同年Ｊａｅｎｉｓｃｈ等将ＳＶ４０病毒ＤＮＡ注射到小鼠胚胎囊腔中，获得携带外源基因的嵌合体小鼠。１９８０年，Ｇｏｒｄｏｎ等首次报道用原核注射获得了转基因小鼠。此后，世界各国相继开展转基因动物的研究，美国科学家Ｐａｌｍｉｔｅｒ等（１９８２）将大鼠生长激素（ＧＨ）基因导入小鼠受精卵中获得转基因“超级鼠”，被认为是世界上首批转基因动物。在１９９１年第１次国际基因定位会议上被公认是遗传学中继连锁分析、体细胞遗传和基因克隆之后的第４代技术，被列为生物学发展史１２６年中１４个转折点之一。１９９７年２月，Ｗｉｌｍｕｔ研究小组在英国《自然》杂志上报告第１例克隆绵羊“多莉”后，转基因动物和克隆技术取得了前所未有的进展，转基因兔、转基因猪、转基因牛、转基因猴、转基因鱼等都陆续被研制成功。利用转基因技术建立疾病动物模型与基因治疗动物模型业已成为转基因动物研究的热点，有的已经进入应用阶段。用转基因技术进行疫苗研究［１］和利用体细胞核移植技术在反刍动物身上进行 转基因克隆牛的研究进展 邓守龙１，２，吕自力２，陆东林３，王安江１，２ （１．新疆农业大学动物科学学院，乌鲁木齐８３００２６；２．新疆金牛生物有限公司， 乌鲁木齐８３００２６；３．新疆奶业协会，乌鲁木齐８３００１７） 作者简介：邓守龙（１９８２－），男，黑龙江人，在读研究生，从事 动物繁殖与胚胎工程方面的研究。 收稿日期：２００８－０１－２１ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 经济效益有着重大的影响。合理地使用含钾、镁和硫的饲料来满足奶牛对这些元素的需要，不仅能预防由于忽视钾、镁和硫常量矿物元素给奶牛带来的各种代谢性疾病，还能够通过合理的搭配和使用来满足奶牛对这些元素的生长生产需要，帮助我们取得良好的经济收益。 参考文献： ［１］ＭｃＤｏｗｅｌｌ，Ｌ．Ｒ．．ＭｉｎｅｒａｌｓｉｎＡｎｉｍａｌａｎｄＨｕｍａｎＮｕ－ｔｒｉｔｉｏｎ．ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ．１． ［２］Ｗｉｌｓｏｎ，Ｇ．Ｆ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＭａｇｎｅｓｉｕｍＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓｏｎｔｈｅＤｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆＦｏｒａｇｅｓａｎｄＭｉｌｋＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＣｏｗｓｗｉｔｈＨｙｐｏｍａｇｎｅｓｅｍｉａ．Ａｎｉｍ．Ｐｒｏｄ．３１：１５３． ［３］Ｂｅｅｄｅ，Ｄ．Ｋ．ＰｏｔａｓｓｉｕｍＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｎｄｔｈｅＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈＨｅａｔＳｔｒｅｓｓｉｎＬａｃｔａｔｉｎｇＤａｉｒｙＣａｔｔｌｅ．Ｐｒｏｃ．３ｒｄＡｎｎｕａｌ．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＭｉｎｅｒａｌｓＣｏｎｆ． ［４］ＮＲＣ．ＮｕｔｒｉｅｎｔＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｏｆＢｅｅｆＣａｔｔｌｅＮａｔｉｏｎａｌＡ－ｃａｄｅｍｙＰｒｅｓｓ． ［５］刘庆平，ＤＩＲＫＥ．ＡＸＥ．镁离子（Ｍｇ）营养及其在饲料中的添加．美国Ｍｏｓａｉｃ饲料原料公司． ［６］刘庆平，ＤＩＲＫＥ．ＡＸＥ．应激奶牛需要提高日粮钾，镁和钠水平．美国Ｍｏｓａｉｃ饲料原料公司． ［７］刘庆平，ＤＩＲＫＥ．ＡＸＥ．镁离子（Ｍｇ）在围产期奶牛营养中的作用．美国Ｍｏｓａｉｃ饲料原料公司． ［８］刁其玉．奶牛规模养殖技术．北京：中国农业科学技术出版社［Ｊ］，２００３． ［９］李有观．饲料成份与牛奶质量的关系．北京：饲料研究，２０００，（８）：３６～３７．
转基因克隆技术
转基因克隆技术研究进展 摘要：转基因克隆技术是最近发展起来的利用细胞核移植技术生产转基因动物的方法，它是以动物体细胞为受体，将目的基因以DNA转染的方式导入能进行传代培养的动物体细胞，再以这些体细胞为核供体，进行动物克隆。与传统转基因方法相比具有明显的优势。本文概述了传统转基因技术的缺陷、转基因克隆技术的优越性、研究概况以及目前存在的问题等。 关键词：转基因动物克隆转基因克隆 引言： 转基因动物( transgenic animal)是指用人工方法将外源基因导入动物受精卵或早期胚胎细胞，使外源基因与动物本身的基因组整合，并随细胞的分裂而增殖，从而将外源基因稳定地遗传给下一代的工程化动物。[ 1 ]在转基因动物作为当今生命科学中一个发展最快、最热门的领域正在改变着生物医药、农业生产、环境保护、生物材料，甚至是整个生命科学的研究与发展面貌的时代背景下，如何高效率低成本的生产出所期望的转基因动物已成为科学界甚至商界关注的热点。 克隆(cloning)是英语“clone”音译，来源于希腊语“klon”[2]，原意是扦插枝条，即无性繁殖。动物克隆指不通过精子和卵子受精过程而获得与亲本具有相同遗传物质后代的过程。由于细胞核移植是产生克隆动物的有效方法，所以在一般情况下人们往往把它称为动物克隆技术。克隆技术的发展为转基因动物的研究应用带来了契机，两者的结合既有迫切性又有必然性。而且，这种结合不仅仅是简单的技术叠加，而是技术的重组、综合和优化[3]。 转基因克隆动物技术是转基因动物技术与克隆动物技术的有机结合，它是以动物体细胞(包括动物成体体细胞、胎儿成纤维细胞等)为受体，将目的基因以DNA转染的方式导入能进行传代培养的动物体细胞，再以这些体细胞为核供体，进行动物克隆。[3]转基因技术与克隆技术结合，创建转基因克隆动物，已经成为本世纪培育遗传工程动物的主导性技术途径。转基因克隆技术作为一种高效而低成本生产转基因动物的技术已经为转基因动物的生产带来了新的契机。本文概述了传统转基因技术的缺陷、转基因克隆技术的优越性、研究概况以及目前存在的问题等。 1.动物传统的转基因技术概述 现代转基因动物研究始于20 世纪80年代初。1980年， Gordon等首次报道用显微注射法获得转基因小鼠。1982年， Palmiter等将大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵的雄性原核中，获得了个体比对照鼠增大一倍的“超级小鼠”，从此揭开了转基因动物研究的新篇章[1，4]。先后出现了显微注射法、反转录病毒载体法、胚胎干细胞介导法、精子载体法等转
感受态细胞转化操作步骤12.8
感受态细胞转化 （一）实验准备： 1.Amp母液： 称取氨苄青霉素100mg溶于1ml dd H2O中。0.22μm滤器过滤除菌，用EP管分装后储存于-20℃冰箱. 2.X-Gal溶液（2%，m/v） 称取20mg X-Gal溶于1ml二甲基甲酰胺（DMF）中。用玻璃试管或聚丙烯管分装后储存于-20℃冰箱,装有X-Gal溶液的试管须用铝箔包裹以防因光照而被破坏.（无须过滤） 3.IPTG（20%,m/v,0.8mol/L） 称取IPTG2g溶于8ml dd H2O中。用蒸馏水定容至10mL。0.22μm 滤器过滤除菌，用EP管分装成1mL一小份后储存于-20℃冰箱. （二）操作步骤“ 质粒pBS SK(-)的转化 1.取感受态细胞置于冰浴中，待感受态细胞融化后，分别在100μl 感受态细胞悬液中加入下列DNA质粒或水，轻轻摇匀后冰上放置30分钟。 感受态细胞+pBS SK(-)质粒2μl (含量不超过50ng,体积不超过10μl) 感受态细胞+无菌水2μl （阴性对照） 2. 热击：42℃水浴中热击90秒（注：精确计算时间，过长将对细胞造成伤害）,热击后立即置于冰上冷2-5分钟（禁止摇动）。
3. 复苏：向每管中加入400μl LB液体培养基(注：不含Amp),混匀后37℃轻摇培养1~1.5小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Ampr )。 涂布平板筛选转化质粒 方法一（《分子克隆实验指南》标准方法） 1.将溶化的顶层琼脂分装于17*100mm试管，将试管置于45℃的加 热块槽内备用。 （90mm培养板用3mL顶层琼脂；150mm培养板用7mL顶层琼脂）2．从加热块取出一支试管，快速加入活菌含量不多于3000（90培养基）或10000（150培养基）的细菌悬液0.1mL。盖紧试管盖颠倒数次。以使细菌在琼脂中混匀。 3.按下表加入： 4. 快速将溶化的顶层琼脂倾入含有适当抗生素的凝固琼脂板的中部，旋转培养板使琼脂散匀。 .注：含Amp的LB固体培养基倒板 (1)配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 (2)抗生素的加入：高压灭菌后，应使培养基降温至50℃，方可加入Amp，按每100ml培养基加10mg/ml Amp溶液1ml，使其终浓度为
基因工程与克隆技术讲义答案
基因工程与克隆技术 考点1 基因工程 1.(2015·10月选考,节选)答案:限制性核酸切酶 2.(2016·4月选考,节选) 答案:(1)逆转录重组DNA分子农杆菌 B (2)摇床维持渗透压 3.(2018·4月选考,节选)回答与基因工程和植物克隆有关的 问题: (1)将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121均用限制性核酸切酶EcoRⅠ酶切,在切口处形 成。选取含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121用DNA连接酶连接,在两个片段相邻处形 成,获得重组质粒。 (2)已知用CaCl2处理细菌,会改变其某些生理状态。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管进行混合等操作,使重组质粒进入农杆菌,完成实验。在离心管中加入液体培养基,置于摇床慢速培养一段时间,其目的 是, 从而表达卡那霉素抗性基因,并大量增殖。 解析:(1)EcoRⅠ酶切目的基因和载体,在切口处形成粘性末端;DNA连接酶使具有相同粘性末端的两个片段形成磷酸二酯键,能获得重组 质粒。 (2)目的基因进入受体细胞并在受体细胞维持稳定和表达的过程,称为转化。经转化的农杆菌,在离心管中加入液体培养基,置于摇床慢速培养一段时间,以使CaCl2处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态。 答案:(1)粘性末端磷酸二酯键 (2)转化使CaCl2处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态 1.基因工程的工具 2.基因工程的原理与操作步骤 (1)基因工程的原理 ①基本原理:让人们感兴趣的基因(即目的基因)在宿主细胞中稳定和高效地表达。 ②基本要素:多种工具酶、目的基因、载体和宿主细胞等。 (2)基因工程的基本操作步骤 3.形成重组DNA分子 (1)单酶切法
RNA干扰载体的构建的实验流程图
RNA干扰载体的构建的实验流程 RNA干扰载体主要用来研究基因表达调控，RNA干扰技术已已被广泛用于基因结构功能研究和传染性疾病及基因治疗领域，进行RNA干扰实验首先是构建RNA干扰载体，本文以pRI系列载体为例论述了干扰载体的构建的实验流程。 产品技术背景 pRI系列载体是基于III类rna聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA 经过RISC剪切后形成有2个U突出末端的成熟siRNA。由于H1启动子对转录产物长度的严格限制，基本上杜绝了非特异性干扰片段的产生，将载体转染细胞后对其它基因的影响降到最低。 pRI系列载体已经成功用于多种哺乳动物细胞进行基因的RNA干扰。本系列中含有新霉素抗性基因的载体用于稳定表达siRNA，可以在更长时间对基因表达抑制后的细胞功能和生理现象进行观察和分析。插入寡核苷酸设计
pRI系列载体的使用需要将人工设计的寡核苷酸片段插入pRI系列载体中特定的酶切位点之间，寡核苷酸片段中包含了针对目标基因的mRNA设计的长度为19nt的干扰片段。 合成时需要化学合成正向和反向两条寡核苷酸。正、反向寡核苷酸退火后与载体连接，插入载体XhoI，BglII位点之间，位于载体上H1启动子下游正确的位置上。连接后的载体转入哺乳动物细胞在H1启动子作用下转录产生shRNA。 1. 选择干扰序列 在RNA干扰实验中，RNA干扰序列的选择会显著影响RNA干扰效果。我们建议您按照以下几点指导原则选择RNA干扰序列： 推荐长度为19 nt，采用21 nt序列也可以取得良好效果。 RNA干扰序列中不包含大于3 nt的连续相同碱基。 RNA干扰序列的GC含量为低到中等水平(推荐GC含量在35%到50%之间)。 不要将RNA干扰序列设计在已知的RNA-蛋白质结合位置附近。 确保RNA干扰序列与其它基因没有较高的同源性。 方向：在编码mRNA的正义链上选择RNA干扰序列。