免疫学实验

免疫学检验备考版

辛酸/硫酸铵法提纯IgG

在酸性条件下( pH4.5)，血清或腹水中非IgG的蛋白成份(包括白蛋白，部分Ig)，能被辛酸等短链脂肪酸沉淀，上清中剩余的蛋白主要为IgG，再用硫酸铵沉淀上清，即可获得纯度较高的IgG。辛酸/硫酸铵法比硫酸铵法能够获得更高纯度的IgG。

50%溶血试验（CH50）测定补体实验

绵羊红细胞（SRBC），与相应抗体（溶血素）结合后，可激活待检血清中的补体而导致SRBC 溶血。其溶血程度与血清中补体的含量和功能有关。由于补体含量与溶血程度之间呈正相关，但不是直线关系，而呈S曲线关系，故通常取反应曲线中间部位即50％溶血（CH50）为判定终点。由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径，C1～9任何一种成分缺陷都可使CH50降低，所以此实验反映了总补体的活性。

补体结合试验的基本原理

抗原抗体复合物可以结合补体，这是补体结合试验的依据。绵羊红细胞和其相应抗体（溶血素）的复合物结合补体后出现溶血现象。因此，绵羊红细胞和溶血素被作为补体结合试验中判断待测系统中有无抗原抗体反应的复合物系统。如待测系统产生抗原抗体复合物，则可结合一定量补体，此时加入溶血系统则不出现溶血。如待测系统中只有抗原或抗体，不能结合补体，加入溶血系统则与游离补体结合而发生溶血，这就是补体结合试验的基本原理。

补体结合试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或

抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即SRBC与相应溶血素，

试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。反应系统与指示系统争夺补体系统，

先加入反应系统给其以优先结合补体的机会。

如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加

入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。

如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当

加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性。因此补体结合试验可用已知抗原

来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。

单向免疫扩散实验

(1)原理：待测抗原从局部含有定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环的大小与抗原的浓度呈正相关。

(2)技术要点：将抗体和热融化琼脂(约50%)混合，倾注成平板。待凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入已稀释的抗原液，和不同浓度的抗原标准品，置37～12℃温箱，24～48h后观察孔周围沉淀环。量取沉淀环直径，通过抗原标准品，计算待测抗原的浓度。

酶联免疫吸附试验的基本原理

酶联免疫吸附实验（ELISA）属固相酶免疫测定方法，其基本原理：在固相载体（如聚苯乙烯反应板）上包被抗原或抗体后。通过抗原抗体反应使酶标抗体（或酶标抗原）结合到载体上。经洗涤使结合的酶标抗体和游离的酶标抗体分离，洗去游离的酶标抗体（或酶标抗原），加入底物显色。根据颜色深浅进行定性或定量分析。

小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察

巨噬细胞起源于骨髓，经血液进入组织中而成，分布于全身各处。当机体受到某些损伤因素时（如微生物或其它病原体或异物侵入），能招引巨噬细胞，同时巨噬细胞有趋化性，主动向病原体或异物游走，在接触到病原体或异物时，细胞膜凹陷伸出伪足包围异物，并发生胞吞作用形成吞噬泡，继而巨噬细胞质中的溶酶体与吞噬泡融合，消化分解异物。

含台盼蓝的淀粉肉汤，可使腹腔中有较多的巨噬细胞，以供观察吞噬活动。

淋巴细胞分离与E玫瑰花环形成实验

淋巴细胞成功分离后，便于在体外对机体免疫细胞进行鉴定、计数或功能测定；还可以用于E花环试验、淋巴细胞转化试验及淋巴细胞培养（需无菌操作）。

淋巴细胞的方便来源是外周血，分离的原则是收率较高，纯度较好，失活较低。无论采用哪种方法，应最大可能保持细胞应有活性。

分离的技术可根据细胞的物理性状和表面标志设计，根据不同实验目的可采用密度梯度离心法、吸附分离法和其它特殊分离法。

本实验采用的是密度梯度离心法。该方法是根据各类血细胞比重的差异（外周血中各种细胞的密度不同，人红细胞密度为1.093，粒细胞为1.092，淋巴细胞为1.074±0.001），利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心，使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带，从而达到分离的目的。

人 T淋巴细胞表面的CD2分子即绵羊红细胞受体（ER），在一定的实验条件下，可与绵羊红细胞（SRBC）结合，形成玫瑰花结，称为E玫瑰花环试验(erythrocyte-roseette formation test)。

该试验常用于临床检测人外周血T淋巴细胞的数量和比例，由此可间接反映机体的细胞免疫功能状况。